Staenio â glas methylen: dulliau microsgopeg ac atlas o ddelweddau go iawn

Mae staenio â glas methylen yn ei gwneud yn haws gwahaniaethu nodweddion cellog sydd fel arall yn aneglur mewn microsgopeg maes llachar. Gall helpu myfyrwyr i leoli cnewyllyn cell boch neu archwilio amlinell a threfniant micro-organebau. Fodd bynnag, arsylwad yw gwrthrych glas. Mae enwi'r organeb, ei mesur, a phenderfynu a yw'n dynodi clefyd yn dasgau ar wahân.

Mae'r clawr yn darlunio egwyddor cyferbyniad. Mae'r atlas isod yn cynnwys ffotograffau go iawn o sbesimenau sydd wedi'u dogfennu'n annibynnol, ynghyd â gwybodaeth eu ffynonellau gwreiddiol.

Beth mae glas methylen yn ei ddatgelu?

Llifyn basig yw glas methylen: mae ei ïon lliw yn cario gwefr bositif. Fel y mae OpenStax yn esbonio yn ei drafodaeth ar staenio sbesimenau, mae llifynnau basig yn rhyngweithio â deunydd cellog sydd â gwefr negatif a gallant wneud i gelloedd sefyll allan yn erbyn cefndir goleuach. Mewn paratoadau addas, mae glas methylen yn amlygu rhanbarthau sy'n gyfoethog mewn asidau niwclëig a strwythurau eraill sy'n rhwymo'r staen.

Mewn staeniad syml, un llifyn sy'n darparu cyferbyniad. O ganlyniad, gall sawl organeb edrych yn las heb fod yr un organeb. Mae'r cwestiynau defnyddiol yn ddisgrifiadol i ddechrau: a yw'r gwrthrychau'n grwn neu'n hirgul, ar wahân neu mewn clystyrau, wedi'u staenio'n unffurf neu'n dangos gwahaniaethau mewnol? Gweler y gwahaniaeth rhwng staenio syml a staenio Gram cyn dehongli lliw fel canlyniad dosbarthu.

Mae cyferbyniad a chydraniad yn wahanol. Mae cyferbyniad yn helpu i wahaniaethu gwrthrych oddi wrth ei amgylchoedd; mae cydraniad yn gwahanu manylion sydd yn agos at ei gilydd. Nid yw delwedd dywyllach yn gwarantu bod modd gwahaniaethu mwy o strwythurau. Nid yw pob gronyn tywyll ychwaith yn haeddu cael ei labelu'n organyn.

Paratoadau naturiol, paratoadau gwlyb wedi'u staenio, a thaeniadau

Mae paratoad gwlyb heb ei staenio, neu baratoad naturiol, yn cadw golwg heb lifyn ychwanegol, er bod tynnu'r sbesimen o'i amgylchedd gwreiddiol yn dal i'w newid. Mae paratoad gwlyb wedi'i staenio yn ychwanegu adweithydd tra bo'r deunydd yn aros mewn hylif o dan wydr gorchudd. Mae taeniad wedi'i sefydlogi yn taenu deunydd ar sleid ac yn defnyddio dull sefydlogi penodol cyn prosesu pellach. Mae trosolwg OpenStax o baratoi sbesimenau yn gwahaniaethu rhwng paratoadau gwlyb a sefydlogi ac yn esbonio pam nad yw organebau wedi'u sefydlogi bellach yn dangos symudiad na metaboledd arferol.

Mae'r paratoadau hyn yn ateb cwestiynau gwahanol:

Ar gyfer cymhariaeth yn yr ystafell ddosbarth, cofnodwch baratoad heb ei staenio cyn archwilio paratoad wedi'i staenio ar wahân a wnaed yn unol â'r protocol addysgu. Cadwch y gosodiadau goleuo a chofnodi delweddau yn gymaradwy. Os tynnir ffotograffau o ddwy gell wahanol, disgrifiwch nhw fel enghreifftiau, nid fel cofnod cyn ac ar ôl o un gell.

Atlas microsgopeg: tri sbesimen go iawn wedi'u staenio

Detholiad a dehongliad gwreiddiol o dri micrograff sydd â thrwyddedau agored yw'r atlas hwn. Mae awduron y ffynonellau yn nodi'r sbesimenau a'r staeniau. Nid ydym wedi dilysu eu sbesimenau'n annibynnol. Atgynhyrchir y delweddau heb eu tocio fel trosiadau WebP di-golled, heb ychwanegu nodweddion na newid lliwiau.

Plât 1: celloedd boch dynol

Sbesimen: celloedd boch dynol. Staen: glas methylen. Chwyddhad: 400×, yn ôl y ffotograffydd. Bar graddfa: ddim ar gael; nid yw'r ffynhonnell yn darparu maint picsel wedi'i galibro. Ffotograff gan Fritzmann2002, 2017, o Gelloedd Boch Dynol (Staen Glas Methylen), dan drwydded CC BY-SA 4.0. Mae'r atgynhyrchiad hwn yn cadw'r drwydded honno.

Dechreuwch gyda chell ar wahân: mae'n haws gwahaniaethu ei chnewyllyn tywyllach oddi wrth y cytoplasm glas o'i amgylch. Yna archwiliwch y celloedd sy'n gorgyffwrdd oddi tani. Mae gorgyffwrdd yn ei gwneud yn anoddach dilyn ffin a gall greu rhanbarth tywyllach yn lleol. Defnyddiwch y plât hwn i ymarfer olrhain amlinellau, nid i gyfrif pob darn tywyll fel cnewyllyn. Mae'r canllaw arsylwi celloedd boch yn datblygu'r ymarfer sy'n benodol i'r sampl.

Plât 2: celloedd nionyn

Sbesimen: celloedd nionyn, fel y'u nodwyd gan y ffynhonnell. Staen: glas methylen. Chwyddhad: mae “200x” yn ymddangos yn enw'r ffeil wreiddiol; nid yw wedi'i ddilysu'n annibynnol. Bar graddfa: ddim ar gael; ni ddarperir unrhyw galibrad. Ffotograff gan Alvy16, 2019, o Gell nionyn 200x, dan drwydded CC BY 4.0.

Mae'r adrannau hirgul yn ffurfio haen drefnus. Cymharwch eu ffiniau hir a rennir â'r amlinellau afreolaidd ym Mhlât 1. Sylwch hefyd ar y deunydd tywyll amlwg a disgleirdeb anwastad y maes. Nid yw'r ffotograff yn sefydlu hunaniaeth pob dyddodyn tywyll. Mae'n dangos pam mae cofnod arsylwi defnyddiol yn cynnwys arteffactau ac ansicrwydd yn hytrach na labelu popeth sy'n amsugno lliw.

Plât 3: burum a nodwyd gan y ffynhonnell fel Candida spp.

Sbesimen: Candida spp., yn ôl y ffotograffydd. Staen: staenio positif syml â glas methylen. Chwyddhad: ddim ar gael. Bar graddfa: ddim ar gael; ni ddarperir maint picsel wedi'i galibro. Ffotograff gan Marta, y defnyddiwr Wikimedia Martunia.g, 2021, o Staenio positif â glas methylen 2, dan drwydded CC BY 4.0.

Cymharwch y clystyrau glas trwchus â'r ymylon llai gorlawn. Mae'n haws dilyn amlinellau unigol lle mae llai o orgyffwrdd rhwng gwrthrychau. Daw'r enw Candida o gofnod y ffynhonnell, nid o broses adnabod rhywogaeth a gyflawnwyd ar y ffotograff hwn. Nid yw'r plât hwn ychwaith yn darparu canlyniad hyfywedd. Mae profion hyfywedd a resbiradaeth burum yn gofyn am eu hamodau, eu rheolyddion a'u dehongliad eu hunain.

Darllen graddfa'n gywir

Mae'r platiau hyn yn cefnogi cymhariaeth weledol, nid mesuriadau mewn micrometrau na chymariaethau o faint absoliwt celloedd rhwng platiau. Nid yw chwyddhad a gofnodwyd yn adfer calibrad camera sydd ar goll. Mae newid maint arddangos delwedd yn newid ei chwyddhad ymddangosiadol.

Ar gyfer eich delweddau eich hun, sefydlwch galibrad mesur gan ddefnyddio safon hysbys a'r gosodiad optegol perthnasol. Mae canllaw Nikon i ficrometreg yn esbonio sut mae micromedr llwyfan yn trosi rhaniadau mympwyol mewn delwedd neu reticl yn hydoedd ffisegol. Cofnodwch y lens wrthrychol, ffurfweddiad y camera a'r calibrad, ac ychwanegwch far graddfa o'r data hynny. Peidiwch â chasglu bar graddfa o faint cell cyfartalog mewn gwerslyfr.

A yw'r botel yn cyfateb i'r dull?

Nid yw potel wedi'i labelu'n glas methylen yn fanyleb labordy gyflawn. Gwiriwch ei chrynodiad a'i hunedau, y toddydd, cynhwysion ychwanegol, y defnydd bwriadedig, dogfennaeth y swp, a'r cyfarwyddiadau. Mae taflen ddata diogelwch adweithydd yn disgrifio peryglon; mae cyfarwyddiadau'r dull yn sefydlu sut i'w ddefnyddio ar gyfer y paratoad bwriadedig.

Enghraifft benodol yw hydoddiant glas methylen Löffler gan Merck. Mae'r gwneuthurwr yn ei nodi fel adweithydd microsgopeg ac yn disgrifio ei rôl fel gwrthstaen mewn staenio asid-wrthsefyll. Mae ei fflamadwyedd rhestredig hefyd yn dangos pam nad yw “hylif glas” yn ddigon o wybodaeth i gynllunio ei drin neu ei wresogi. Mae'r priodweddau hynny'n berthnasol i'r fformiwleiddiad hwnnw, nid yn awtomatig i bob hydoddiant dyfrllyd o las methylen.

Yn yr un modd, cyfrwng meithrin wedi'i fformiwleiddio yw agar eosin glas methylen. Nid yw'n staen sleid a wneir drwy ychwanegu glas methylen plaen at sbesimen. Ar gyfer nod delweddu gwahanol, cymharwch ddewisiadau amgen i las methylen ar gyfer microsgopeg.

Ar gyfer pecyn microsgop i ddechreuwyr, dechreuwch gyda'i ddull addysgol dogfenedig, sleidiau parod hysbys, a'r adweithydd penodedig. Os yw potel wedi colli ei label neu os na ellir sefydlu ei chyfansoddiad, rhowch yr adweithydd dogfenedig priodol yn ei lle. Defnyddiwch amddiffyniad llygaid a'r cyfarwyddiadau trin a ddarperir ar gyfer y fformiwleiddiad gwirioneddol. Mae deunydd dynol a samplau amgylcheddol anhysbys yn gofyn am weithdrefnau trin a gwaredu samplau'r labordy addysgu; nid yw staenio'n cymryd lle'r gweithdrefnau hynny.

Ysgrifennwch yr arsylwad cyn y casgliad

Mae “Gwrthrychau glas hirgrwn mewn clystyrau” yn ddisgrifiad o ddelwedd y gellir ei gyfiawnhau. Mae “Haint penodol” yn gofyn am dystiolaeth nad yw'r ddelwedd wedi'i darparu. Cadwch darddiad y sbesimen, y paratoad, yr adwaith staenio a'r dull adnabod ar wahân yn y llyfr nodiadau. Mae'r gwahaniaeth hwnnw'n gwneud delwedd ystafell ddosbarth syml yn ddefnyddiol ac yn atal micrograff deniadol rhag cael ei ddefnyddio i wneud honiad na all ei gefnogi.