Test redukcije metilenskog plavila u tečnosti buraga

Mlada veterinarka zove s farme, držeći plavu epruvetu u ruci. Dodala je metilensko plavilo u tečnost buraga prije deset minuta, a plava boja je još prisutna. Pita treba li kravi dati još boje.

To pitanje otkriva pogrešno razumijevanje testa. U testu redukcije metilenskog plavila u tečnosti buraga boja se dodaje u epruvetu, nikada u životinju. Cijeli test odvija se u epruveti. Mjerenje brzine nestajanja plave boje govori nešto o mikrobima u tom uzorku, a ne o liječenju koje je životinji potrebno.

Zabuna je razumljiva jer se metilensko plavilo pojavljuje u tri odvojena veterinarska konteksta. Ovaj članak ih razgraničava i pokazuje kako tumačiti vrijeme redukcije zajedno s pH, protozoama, kvalitetom uzorkovanja i kliničkim znakovima.

Šta test zapravo mjeri

Metilensko plavilo je plavo u oksidiranom obliku, a gotovo bezbojno u reduciranom obliku. Svježa tečnost buraga zdrave životinje ima snažnu redukcijsku sposobnost jer anaerobne bakterije aktivno fermentiraju hranu. Kada se mala količina boje umiješa u takvu tečnost, bakterijski metabolizam uklanja boju za nekoliko minuta.

Princip rada je, dakle, jednostavan: aktivna anaerobna flora brzo uklanja plavu boju, a neaktivna ili oštećena flora uklanja je sporo. Kratko vrijeme znači veću redukcijsku sposobnost tog uzorka. Produženo vrijeme ukazuje na smanjenu mikrobnu aktivnost, pod uslovom da je uzorak pravilno prikupljen i obrađen.

Test ne mjeri direktno redoks potencijal buraga. Istraživanje metoda kod goveda, u kojem je test redukcije upoređen s direktnim mjerenjima u milivoltima, nije utvrdilo linearnu korelaciju između vremena redukcije i izmjerenog redoks potencijala. Zaključeno je da se ta dva rezultata ne trebaju smatrati međusobno zamjenjivim mjerenjima iste varijable. Cjelovito poređenje sažeto je na PubMedu. Test redukcije posmatrajte kao funkcionalni test mikrobne populacije, a ne kao jeftinu elektrodu.

Merck/MSD opis jednostavne indigestije kod preživara svrstava produženo vrijeme redukcije u isti obrazac nalaza kao abnormalan pH buraga i smanjen broj protozoa. Nijedna pojedinačna vrijednost ne postavlja dijagnozu. Dijagnoza se zasniva na obrascu nalaza.

Standardni postupak uz životinju

Protokoli se neznatno razlikuju među školama, zato zabilježite tačne zapremine i temperaturu koje koristite te upoređujte rezultate samo unutar tog protokola. Jedna često podučavana verzija je:

1. Prikupite najmanje 10 do 20 mL svježe tečnosti buraga uz minimalnu primjesu pljuvačke, izlaganje zraku i hlađenje. Testirajte bez odlaganja.
2. Pripremite 0.03 posto metilensko plavilo, što je 0.3 mg po mL.
3. Dodajte boju u količini koja odgovara 5 posto zapremine tečnosti. To je 1.0 mL boje na 20 mL tečnosti ili 0.5 mL boje na 10 mL tečnosti. U oba slučaja odnos tečnosti i boje iznosi 20 prema 1.
4. Sačuvajte drugu epruvetu s netretiranom tečnošću iz istog uzorka kao kontrolu boje.
5. Lagano promiješajte, odmah pokrenite mjerač vremena i držite epruvetu na temperaturi bliskoj tjelesnoj, oko 37 do 39 stepeni Celzijusa, zavisno od lokalnog protokola.
6. Zabilježite vrijeme do trenutka kada se boja tečnosti u testnoj epruveti izjednači s kontrolom. Tanak plavi prsten na površini u dodiru sa zrakom može se zadržati jer kisik na tom mjestu ponovo oksidira boju. Nemojte čekati da taj prsten nestane.

Redoks hemija metilenskog plavila objašnjava zašto je kisik ovdje važan. Snažno mućkanje, široko otvorena epruveta ili dugo odlaganje omogućavaju ulazak kisika i održavaju boju plavom duže nego što bi bila u samom buragu. Detalji o pravilnoj tehnici prikupljanja tečnosti buraga važni su iz istog razloga. Pljuvačka razrjeđuje uzorak i povisuje pH, pa pri uzorkovanju želučanom sondom mnogi kliničari odbacuju prvu porciju ako dostupna zapremina to dopušta.

Šta mjere različita opažanja

Vrijeme redukcije odgovara samo na jedno pitanje. Procjena buraga u nastavku pokazuje šta doprinosi svako opažanje uz životinju. Koristite cijeli red, a ne samo jednu ćeliju.

Suština je u tabeli. Produženo vrijeme redukcije uz slabo pokretne protozoe, abnormalan pH i slabe kontrakcije ukazuje na stvarno smanjenje mikrobne aktivnosti. Izolirano produženo vrijeme kod živahne životinje koja preživa i ima živahne protozoe ukazuje na problem s uzorkom, a ne s buragom. Ponovite prikupljanje prije poduzimanja mjera.

Tumačenje vremena uz pH i anamnezu

Ishrana određuje polazne vrijednosti. Obroci bogati koncentratima brzo fermentiraju i mogu ukloniti boju za otprilike jednu minutu, dok kod ishrane sijenom to može trajati nekoliko minuta, čak i kod zdravih životinja. Zato kratko vrijeme samo po sebi ne dokazuje bolje zdravlje. Ono pokazuje da je više fermentabilnog supstrata bilo dostupno aktivnim mikrobima.

Teško preopterećenje žitaricama narušava taj jednostavni obrazac. Rana fermentacija ugljikohidrata može biti intenzivna, zatim oštećenje kiselinom potiskuje normalnu floru i protozoe, a redukcija se produžava. Zbog toga jedno pravilo koje se podučava navodi da test nije valjan kada je pH buraga ispod približno 5.5. Tada se flora koja se testira već promijenila.

Praktični vodič za obrasce nalaza:

• Normalan pH uz redukciju unutar približno 6 minuta ukazuje na funkcionalno aktivnu floru.
• Normalan pH uz izrazito produženu redukciju ukazuje na neaktivnost zbog anoreksije, djelovanja antimikrobnih lijekova ili neodgovarajućeg uzorka.
• Visok pH uz produženu redukciju često slijedi nakon produžene anoreksije s malo supstrata, ali treba razmotriti i kontaminaciju pljuvačkom pri uzorkovanju sondom.
• Nizak pH uz smanjenu aktivnost protozoa upućuje na sumnju na disbiozu povezanu s ugljikohidratima. Ovdje pomažu smjernice za tumačenje pH buraga. Vrijednosti ispod 5.5 uz opću klonulost ukazuju na preopterećenje žitaricama i tešku acidozu, umjesto na jednostavnu indigestiju.

Uvijek zabilježite nedavnu oralnu primjenu tetraciklina, ionofore u hrani, produženu primjenu sistemskih antimikrobnih lijekova, nagle promjene obroka, trajanje anoreksije i unos vode. Priručnik MSD posebno upozorava da oralni tetraciklini mogu znatno smanjiti aktivnost mikroflore buraga. Ionofori namjerno mijenjaju bakterijske populacije. Bez tih anamnestičkih podataka produženo vrijeme ne može se protumačiti.

Kvalitet uzorkovanja zaslužuje jednaku pažnju. Kontrolirano istraživanje pokazalo je da uzorci uzeti želučanom sondom imaju viši pH i niže koncentracije hlapljivih masnih kiselina od uzoraka uzetih kanilom kod istih životinja, uglavnom zbog pljuvačke. Vrijeme redukcije značajno se produžilo do 60 minuta nakon prikupljanja za svaku testiranu zapreminu, pri čemu su mali uzorci bili najviše pogođeni. Prikupite najmanje 10 mL, testirajte unutar 30 minuta, obavite test redukcije rano, održavajte uzorak toplim i svedite kontakt sa zrakom na minimum.

Tri primjene koje se ne smiju zamijeniti

Ista boja, tri različita sistema.

Prva je ovdje opisani test tečnosti buraga. Uzorak je prikupljena tečnost buraga. Boja se dodaje in vitro u koncentraciji od 0.03 posto. Krajnji rezultat je vrijeme do obezbojenja. Svrha je procjena mikrobne redukcijske aktivnosti.

Druga je primjena metilenskog plavila kod živog preživara. Ustanovljeni primjer je intravenska terapija trovanja nitratima ili nitritima uz methemoglobinemiju, pri kojoj lijek vraća funkcionalnost hemoglobinu. Primjenjuju se pravila o dozi, formulaciji, reziduama i karenci. Ta odluka nema nikakve veze s mjerenjem vremena u epruveti. Ako se boja u određenom postupku koristi kao traser in vivo, prati se kuda boja putuje, a ne koliko je brzo mikrobi buraga reduciraju.

Treća je test redukcije u mlijeku. Uzorak je mlijeko. Boja se dodaje uzorku mlijeka. Brz nestanak plave boje općenito ukazuje na veću mikrobnu aktivnost i slabiju održivost mlijeka pri čuvanju, dok spora redukcija ukazuje na bolji kvalitet. Test pripada mikrobiologiji hrane i ispitivanju kvaliteta mlijeka, a ne medicini buraga, i ne predstavlja brojanje bakterija.

Jasno navođenje naziva sprečava greške: vrijeme redukcije u tečnosti buraga, sistemska terapija metilenskim plavilom ili njegova upotreba kao trasera te test redukcije u mlijeku. Sigurnosno pravilo staje u jednu rečenicu. Boja za test buraga ostaje u laboratorijskoj epruveti, a ta epruveta se odbacuje. Boja se nikada ne daje životinji radi izvođenja testa.

Sažeto pravilo za poziv s farme

Standardizirajte boju na 0.03 posto i odnos 1 dijela boje prema 20 dijelova tečnosti, testirajte svježu tečnost na temperaturi bliskoj tjelesnoj uz netretiranu kontrolu i tumačite vrijeme u minutama zajedno s pH, pokretljivošću protozoa, kvalitetom prikupljanja, ishranom, lijekovima, kontrakcijama, apetitom, izmetom i hidratacijom. Izoliran broj nikada ne postavlja dijagnozu indigestije. Dijagnozu postavlja usklađen obrazac nalaza.