Da li metilensko plavo uzrokuje rak? Toksikološki dokazi

Metilensko plavo je u dugotrajnim eksperimentima na životinjama pokazalo signale pojave tumora i pozitivne rezultate u nekoliko laboratorijskih testova genetskog oštećenja. Ti nalazi zaslužuju pažnju. Oni ne utvrđuju vjerovatnoću da će osoba razviti rak nakon određene izloženosti.

IARC procjena objavljena 2016. godine svrstala je metilensko plavo u Grupu 3, što znači da se njegova kancerogenost za ljude nije mogla klasificirati. Radna grupa nije imala podatke o raku kod ljudi i ocijenila je dokaze na životinjama kao ograničene. Grupa 3 ne znači da je supstanca dokazano bezopasna. Isto tako, nalaz kod životinja ne znači da je svaka izloženost ljudi dokazani uzrok raka.

Tri pitanja koja zahtijevaju odvojene odgovore

Kancerogenost se odnosi na razvoj tumora. Dugotrajna studija na životinjama može otkriti obrasce pojave tumora nakon definisane izloženosti. Genotoksičnost se odnosi na oštećenje genetskog materijala ili povezane ćelijske događaje. Pozitivan test mutacija predstavlja signal upozorenja, ali ne mjeri direktno broj slučajeva raka kod ljudi. Rizik za ljude odnosi se na vjerovatnoću štete u stvarnim uslovima izloženosti.

Ova pitanja zahtijevaju različita mjerenja. Brojanje bakterijskih mutanata, ispitivanje krvnih ćelija miševa i dijagnosticiranje tumora pri obdukciji nisu međusobno zamjenjive krajnje tačke. Niti eksperiment liječenja koji pokazuje da neka supstanca oštećuje ćelije raka utvrđuje da li ponovljena izloženost može pokrenuti nastanak tumora u zdravom tkivu. Odvojeni tekst o metilenskom plavom u istraživanjima raka obrađuje tvrdnje o liječenju.

Poređenje studija: stvarne hronične izloženosti

U glavnom eksperimentu korišten je trihidrat metilenskog plavog, primijenjen u 0.5% vodenoj metilcelulozi oralnom gavažom, odnosno odmjerenom primjenom kroz sondu u želudac. Svaka grupa doza u hroničnoj studiji sadržavala je 50 mužjaka i 50 ženki svake vrste. Primjena je vršena pet dana sedmično tokom dvije godine, prema izvještaju o studiji Auerbacha i saradnika.

Tabela zadržava NTP zaključke specifične za pojedine vrste. Količine su miligrami ispitivanog materijala po kilogramu tjelesne mase životinje na dane doziranja, a ne preporuke za ljude. Životinje koje su primale nultu dozu dobijale su nosač.

Model	Grupe doza, mg/kg	Put primjene i trajanje	NTP zaključak i relevantni nalaz
Mužjaci F344/N pacova	0, 5, 25, 50	Oralna gavaža; pet dana/sedmica; dvije godine	Određeni dokazi: povećan broj adenoma ćelija otočića pankreasa i kombinovanih adenoma/karcinoma.
Ženke F344/N pacova	0, 5, 25, 50	Isti raspored	Nema dokaza o kancerogenoj aktivnosti u ovim uslovima.
Mužjaci B6C3F1 miševa	0, 2.5, 12.5, 25	Oralna gavaža; pet dana/sedmica; dvije godine	Određeni dokazi: povećan broj karcinoma tankog crijeva i kombinovanih adenoma/karcinoma. Maligni limfom je također mogao biti povezan.
Ženke B6C3F1 miševa	0, 2.5, 12.5, 25	Isti raspored	Dvosmisleni dokazi: granično povećanje malignog limfoma.

„Određeni dokazi” su NTP kategorija za pozitivan eksperimentalni nalaz manje snage od kategorije „jasni dokazi”. „Dvosmisleni” opisuje neizvjestan nalaz. Ove kategorije izražavaju snagu dokaza, a ne procenat rizika niti rang potentnosti kancerogena.

Rezultat kod mužjaka pacova nije pokazivao postepeni porast sa svakom većom dozom. Adenom ili karcinom otočića pankreasa javio se kod 4/50 kontrolnih životinja te kod 9/50, 14/50 i 8/50 životinja pri rastućim dozama. Objavljeni rad navodi statističku značajnost samo za srednju dozu. Zbog toga je jednostavna priča o pravolinijskom porastu netačna; to ne dokazuje da je najviša doza bila zaštitna. Adenom je benigni tumor, dok je karcinom maligni. Kombinovana krajnja tačka ne smije se opisivati kao da je svaki izbrojani tumor bio rak.

Zašto različiti sažeci zvuče proturječno

Trenutne informacije za propisivanje lijeka PROVAYBLUE navode nalaze na pankreasu mužjaka pacova, ali ne opisuju neoplastične nalaze povezane s lijekom kod miševa. Istraživački rad navodi da povećanja neoplazmi kod miševa nisu bila statistički značajna, uz napomenu da su postojali pozitivni trendovi. NTP je ipak miševima dodijelio gore prikazane kategorije.

IARC analiza studija na životinjama pojašnjava važnu statističku razliku: nalazi na crijevima mužjaka miševa pokazivali su značajne trendove povezane s dozom, ali pojedinačne grupe koje su primale dozu nisu bile značajne u parnim poređenjima s kontrolnim grupama. Testiranje ukupnog obrasca kroz više doza razlikuje se od zasebnog testiranja svake grupe. Čitaoci bi trebali zadržati izvor i njegovo formuliranje umjesto da sve ove nalaze sažmu na „miševi su razvili rak” ili „studija na miševima bila je negativna”. Nijedan od ovih nalaza ne daje izmjerenu stopu raka kod ljudi.

Poređenje studija: krajnje tačke genetskog oštećenja

Odjeljak o genetskoj toksikologiji u NTP Tehničkom izvještaju 540 opisuje drugačiji skup eksperimenata. S9 je laboratorijska mješavina koja sadrži jetrene enzime i koristi se za modeliranje metaboličke aktivacije. Njeno prisustvo ne pretvara ćelijski test u studiju izloženosti cijelog organizma.

Sistem ispitivanja	Stvarni uslovi izloženosti	Mjerena krajnja tačka i rezultat
Testovi bakterijskih mutacija, druga ispitana serija	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; sa i bez S9 iz jetre pacova	Povećan broj mutacija u ispitivanim sojevima.
Kultivisane ćelije jajnika kineskog hrčka	Ispitivanje razmjene sestrinskih hromatida uključivalo je 0.17–2.5 µg/mL bez S9, do 5 µg/mL sa S9; ispitivanje hromozomskih aberacija koristilo je 4.7–22 µg/mL	Pozitivni rezultati za razmjenu i hromozomske aberacije.
Mužjaci miševa, akutni eksperiment	Jedna intraperitonealna injekcija: 25, 50 ili 150 mg/kg; uzorci nakon 48 sati	Nije utvrđeno povećanje mikronukleiranih eritrocita u koštanoj srži ili krvi.
Mužjaci i ženke miševa, ponovljeni eksperiment	Oralna gavaža: 25, 50, 100 ili 200 mg/kg; pet dana/sedmica tokom tri mjeseca	Nije utvrđeno povećanje mikronukleiranih eritrocita u perifernoj krvi.

Mikronukleus je malo dodatno jedarno tijelo koje može odražavati lom hromozoma ili gubitak hromozoma tokom diobe ćelije. Negativan test krvnih ćelija daje odgovor na to određeno pitanje u uzorkovanim ćelijama. Ne može isključiti svaku vrstu oštećenja DNK u svakom organu. Obrnuto, pozitivan test na kultivisanim ćelijama ne govori nam koju su koncentraciju dostigla tkiva određene osobe.

Informacije za propisivanje također bilježe ovaj opšti obrazac: pozitivni bakterijski testovi i testovi na kultivisanim ćelijama, uz negativne testove mikronukleusa kod miševa. Jednostavno nazivanje metilenskog plavog „genotoksičnim” ili „negenotoksičnim” odbacuje informacije koje su važne za tumačenje.

Šta ovo znači za izloženost kod ljudi

Studije ne daju validirani dnevni prag koji je siguran u pogledu raka za ljude. Dijeljenje doze za pacove faktorom tjelesne mase ne bi riješilo razlike u apsorpciji, metabolizmu, putu primjene, učestalosti izloženosti ili trajanju tokom života. Time bi se dobila preračunata količina, a ne dokaz sigurnosti.

Dvogodišnji eksperiment oralne gavaže i kratkotrajno intravensko liječenje pod medicinskim nadzorom postavljaju različita pitanja. Ta razlika sprečava direktnu numeričku ekstrapolaciju; ne poništava nalaze kod životinja. Korisna procjena počinje tačnim spojem i formulacijom, količinom, putem primjene, učestalošću, trajanjem i razlogom upotrebe. „Nekoliko kapi” ne navodi ni koncentraciju ni izmjereni volumen.

Ako je metilensko plavo primijenjeno iz medicinskog razloga, sami nalazi tumora ne mogu utvrditi da li su koristi tog liječenja nadmašile njegove rizike. Ako se razmatra ponovljena izborna upotreba, neizmjereni dugoročni rizik od raka ne treba opisivati kao nula. Neposrednija pitanja, uključujući interakcije lijekova i sklonost hemolizi, obrađena su u tekstu o nuspojavama i kontraindikacijama.

Za dodatno čitanje koristite biblioteku istraživanja kako biste razlikovali studije na ljudima od eksperimenata na životinjama i ćelijama. Ključno pitanje za svaki rad jeste kakvu je izloženost ispitivao i koji je ishod zapravo mjerio.