Məqalə
Metilen mavisi ilə boyama: mikroskopiya üsulları və real təsvirlər atlası
Metilen mavisi ilə boyama parlaq sahə mikroskopiyasında başqa halda zəif görünən hüceyrə xüsusiyyətlərini ayırd etməyi asanlaşdırır. Bu, şagird və tələbələrə yanaq hüceyrəsinin nüvəsini tapmağa və ya mikroorqanizmlərin konturlarını və düzülüşünü araşdırmağa kömək edə bilər. Lakin mavi obyekt yalnız bir müşahidədir. Orqanizmin adını müəyyənləşdirmək, onu ölçmək və xəstəliyə işarə edib-etmədiyinə qərar vermək ayrı-ayrı vəzifələrdir.
Üz qabığındakı təsvir kontrast prinsipini nümayiş etdirir. Aşağıdakı atlasda müstəqil şəkildə sənədləşdirilmiş nümunələrin real fotoşəkilləri ilkin mənbə məlumatları ilə birlikdə təqdim olunur.
Metilen mavisi nəyi üzə çıxarır?
Metilen mavisi əsas xarakterli boyadır: onun rəngli ionu müsbət yük daşıyır. OpenStax-ın nümunələrin boyanmasına dair izahında göstərildiyi kimi, əsas xarakterli boyalar mənfi yüklü hüceyrə materialı ilə qarşılıqlı təsirə girir və hüceyrələri daha açıq fon üzərində nəzərəçarpan edə bilir. Uyğun preparatlarda metilen mavisi nuklein turşuları ilə zəngin sahələri və boyanı bağlayan digər strukturları daha aydın göstərir.
Sadə boyamada kontrastı bir boya təmin edir. Buna görə müxtəlif orqanizmlər eyni orqanizm olmadan da mavi görünə bilər. Başlanğıcda faydalı suallar təsviri xarakter daşıyır: obyektlər yuvarlaqdır, yoxsa uzunsov; ayrı-ayrıdır, yoxsa qruplaşıb; bərabər boyanıb, yoxsa daxili fərqlər görünür? Rəngi təsnifat nəticəsi kimi şərh etməzdən əvvəl sadə boyama ilə Qram boyaması arasındakı fərqə baxın.
Kontrast və ayırdetmə qabiliyyəti fərqli anlayışlardır. Kontrast obyekti ətrafından fərqləndirməyə kömək edir; ayırdetmə qabiliyyəti isə bir-birinə yaxın detalları ayrı göstərir. Daha tünd təsvir daha çox strukturun ayırd ediləcəyinə zəmanət vermir. Hər tünd dənəciyi də orqanoid adlandırmaq olmaz.
Nativ preparatlar, boyanmış yaş preparatlar və yaxmalar
Boyanmamış, yəni nativ yaş preparat əlavə boya olmadan müşahidə imkanı verir, baxmayaraq ki, nümunənin ilkin mühitindən çıxarılması onu yenə də dəyişir. Boyanmış yaş preparatda material örtük şüşəsinin altında maye içində qalarkən reaktiv əlavə olunur. Fiksasiya olunmuş yaxma hazırlamaq üçün material əşya şüşəsi üzərinə yayılır və sonrakı işlənmədən əvvəl müəyyən edilmiş fiksasiya üsulu tətbiq olunur. OpenStax-ın preparat hazırlanmasına dair icmalı yaş preparatları fiksasiyadan fərqləndirir və fiksasiya olunmuş orqanizmlərdə normal hərəkəti və ya maddələr mübadiləsini müşahidə etməyin niyə artıq mümkün olmadığını izah edir.
Bu preparatlar müxtəlif suallara cavab verir:
| Preparat | Faydalı müşahidə | Təsvirin təkbaşına müəyyən edə bilmədiyi |
|---|---|---|
| Nativ yaş preparat | Hərəkət, konturlar, təbii olaraq görünən material | Yalnız hərəkət və ya forma əsasında kimliyin müəyyənləşdirilməsi |
| Boyanmış yaş preparat | Boyanı bağlayan strukturlarla ətraf mühit arasındakı kontrast | Reaktivin normal fiziologiyanı dəyişmədən saxlayıb-saxlamadığı |
| Fiksasiya olunmuş, boyanmış yaxma | Müəyyən edilmiş hazırlama prosesindən sonra qorunmuş morfologiya | İlkin canlı nümunənin necə davrandığı |
| Konkret diferensial boyama üsulu | Müvafiq nəzarət nümunələri ilə müəyyən edilmiş boyama reaksiyası | Üsulun daha geniş sübut bazası olmadan növün müəyyənləşdirilməsi və ya diaqnoz |
Dərsdə müqayisə aparmaq üçün tədris protokoluna uyğun ayrıca hazırlanmış boyanmış preparatı araşdırmazdan əvvəl boyanmamış preparatı qeydə alın. İşıqlandırma və təsvirin çəkilmə parametrlərini müqayisə edilə bilən səviyyədə saxlayın. İki müxtəlif hüceyrənin fotoşəkli çəkilibsə, onları bir hüceyrənin əvvəlki və sonrakı vəziyyətinin qeydi kimi deyil, nümunələr kimi təqdim edin.
Mikroskopiya atlası: üç real boyanmış nümunə
Bu atlas açıq lisenziyalı üç mikrofotoşəklin müəllif tərəfindən seçilmiş toplusunu və şərhini təqdim edir. Mənbə müəllifləri nümunələri və boyaları müəyyənləşdirirlər. Biz onların nümunələrinin kimliyini müstəqil şəkildə təsdiqləməmişik. Təsvirlər kəsilmədən, əlavə detallar və rəng dəyişiklikləri olmadan, itkisiz WebP çevirmələri şəklində təqdim olunur.
Lövhə 1: insanın yanaq hüceyrələri
Nümunə: insanın yanaq hüceyrələri. Boya: metilen mavisi. Böyütmə: 400×, fotoqrafın bildirdiyinə görə. Miqyas çubuğu: mövcud deyil; mənbədə kalibrlənmiş piksel ölçüsü verilməyib. Fritzmann2002 tərəfindən çəkilmiş fotoşəkil, 2017, mənbə: İnsanın yanaq hüceyrələri (metilen mavisi ilə boyama), lisenziya: CC BY-SA 4.0. Bu reproduksiya həmin lisenziyanı saxlayır.
.jpg){kind=link}
Ayrıca yerləşən bir hüceyrədən başlayın: onun daha tünd nüvəsini ətrafındakı mavi sitoplazmadan ayırd etmək daha asandır. Sonra onun altındakı üst-üstə düşən hüceyrələri araşdırın. Üst-üstə düşmə sərhədi izləməyi çətinləşdirir və müəyyən sahədə daha tünd zona yarada bilər. Bu lövhədən hər tünd ləkəni nüvə kimi saymaq üçün deyil, konturları izləməyi məşq etmək üçün istifadə edin. Yanaq hüceyrələrinin müşahidəsi üzrə bələdçi bu nümunəyə uyğun çalışmanı daha ətraflı təqdim edir.
Lövhə 2: soğan hüceyrələri
Nümunə: mənbədə soğan hüceyrələri kimi müəyyənləşdirilib. Boya: metilen mavisi. Böyütmə: ilkin fayl adında “200x” göstərilib; müstəqil şəkildə təsdiqlənməyib. Miqyas çubuğu: mövcud deyil; kalibrləmə məlumatı verilməyib. Alvy16 tərəfindən çəkilmiş fotoşəkil, 2019, mənbə: Soğan hüceyrəsi 200x, lisenziya: CC BY 4.0.
Uzunsov bölmələr nizamlı bir təbəqə əmələ gətirir. Onların uzun ortaq sərhədlərini Lövhə 1-dəki qeyri-müntəzəm konturlarla müqayisə edin. Həmçinin nəzərəçarpan tünd materiala və görüntü sahəsinin qeyri-bərabər parlaqlığına diqqət yetirin. Fotoşəkil hər tünd çöküntünün nə olduğunu müəyyən etmir. O, faydalı müşahidə qeydində rəng alan hər şeyə ad vermək əvəzinə artefaktların və qeyri-müəyyənliyin də göstərilməsinin vacibliyini nümayiş etdirir.
Lövhə 3: mənbədə Candida spp. kimi müəyyənləşdirilmiş maya
Nümunə: fotoqrafın məlumatına görə, Candida spp. Boya: metilen mavisi ilə sadə pozitiv boyama. Böyütmə: məlumat yoxdur. Miqyas çubuğu: mövcud deyil; kalibrlənmiş piksel ölçüsü verilməyib. Wikimedia istifadəçisi Martunia.g olan Marta tərəfindən çəkilmiş fotoşəkil, 2021, mənbə: Metilen mavisi ilə pozitiv boyama 2, lisenziya: CC BY 4.0.
Sıx mavi qrupları obyektlərin daha seyrək olduğu kənar sahələrlə müqayisə edin. Obyektlərin daha az üst-üstə düşdüyü yerlərdə ayrı-ayrı konturları izləmək daha asandır. Candida adı bu fotoşəkil əsasında aparılmış növ təyinindən deyil, mənbə qeydindən götürülüb. Bu lövhə həmçinin canlılıq haqqında heç bir nəticə vermir. Mayanın canlılığının və tənəffüsünün qiymətləndirilməsi sınaqları özünəməxsus şərait, nəzarət nümunələri və şərh tələb edir.
Miqyası düzgün oxumaq
Bu lövhələr vizual müqayisə üçün yararlıdır, mikrometrlə ölçmə aparmaq və ya lövhələr arasında hüceyrələrin mütləq ölçülərini müqayisə etmək üçün deyil. Bildirilən böyütmə çatışmayan kamera kalibrləməsini əvəz etmir. Təsvirin ekranda göstərilən ölçüsünün dəyişdirilməsi onun görünən böyütməsini dəyişir.
Öz təsvirləriniz üçün məlum etalondan və müvafiq optik quruluşdan istifadə etməklə ölçmə kalibrləməsi aparın. Nikon-un mikrometriya bələdçisi obyekt mikrometrinin təsvirin və ya ölçü torunun şərti bölgülərini fiziki uzunluqlara necə çevirdiyini izah edir. Obyektivi, kamera konfiqurasiyasını və kalibrləməni qeydə alın, sonra həmin məlumatlar əsasında miqyas çubuğu əlavə edin. Dərslikdə verilmiş orta hüceyrə ölçüsünə əsaslanaraq miqyas çubuğu yaratmayın.
Flakondakı reaktiv üsula uyğundurmu?
Üzərində metilen mavisi yazılmış flakon tam laboratoriya spesifikasiyası deyil. Onun konsentrasiyasını və vahidlərini, həlledicisini, əlavə inqrediyentlərini, nəzərdə tutulan tətbiqini, partiya sənədlərini və təlimatlarını yoxlayın. Reaktivin təhlükəsizlik məlumat vərəqi təhlükələri təsvir edir; üsulun təlimatları isə nəzərdə tutulan preparat üçün ondan necə istifadə olunacağını müəyyənləşdirir.
Konkret nümunə Merck-in Löffler metilen mavisi məhluludur. İstehsalçı onu mikroskopiya reaktivi kimi təqdim edir və turşuyadavamlı boyamada əks boya kimi rolunu təsvir edir. Sənədlərdə göstərilən alışqanlıq xüsusiyyəti də işləmə və ya qızdırma prosesini planlaşdırmaq üçün “mavi maye” məlumatının niyə kifayət etmədiyini göstərir. Bu xüsusiyyətlər həmin tərkibə aiddir və avtomatik olaraq hər sulu metilen mavisi məhluluna şamil edilmir.
Eynilə, eozin-metilen mavisi aqarı xüsusi tərkibli qidalı mühitdir. O, nümunəyə sadəcə metilen mavisi əlavə etməklə hazırlanan əşya şüşəsi boyası deyil. Fərqli görüntüləmə məqsədi üçün mikroskopiyada metilen mavisinə alternativləri müqayisə edin.
Başlanğıc səviyyəli mikroskop dəsti üçün onun sənədləşdirilmiş tədris üsulundan, məlum hazır preparatlarından və göstərilən reaktivdən başlayın. Flakonun etiketi yoxdursa və ya tərkibini müəyyən etmək mümkün deyilsə, onu müvafiq sənədləşdirilmiş reaktivlə əvəz edin. Göz qoruyucusundan istifadə edin və faktiki tərkib üçün verilmiş işləmə təlimatlarına əməl edin. İnsan mənşəli material və naməlum ətraf mühit nümunələri ilə işləyərkən tədris laboratoriyasının nümunələrlə işləmə və utilizasiya prosedurlarına riayət edilməlidir; boyama bu prosedurları əvəz etmir.
Nəticədən əvvəl müşahidəni yazın
“Qruplar şəklində yerləşən mavi oval obyektlər” təsvirin əsaslandırıla bilən ifadəsidir. “Konkret bir infeksiya” isə təsvirin təqdim etmədiyi sübutları tələb edir. Qeyd dəftərində nümunənin mənşəyini, hazırlanmasını, boyama reaksiyasını və identifikasiya üsulunu ayrı-ayrılıqda göstərin. Bu fərqləndirmə sadə dərs təsvirini faydalı edir və cəlbedici mikrofotoşəklin əsaslandıra bilmədiyi bir iddiaya dəlil kimi təqdim olunmasının qarşısını alır.