ሜቲሊን ብሉ እና መልቲፕል ስክሌሮሲስ፦ በእንስሳት ላይ የተደረገው ምርምር ምን ፈተነ?

ሜቲሊን ብሉን ለMS ስለመጠቀም ሲፈልጉ፣ አንድ ዓይነት ጥያቄ የሚመልሱ የሚመስሉ የምርምር ጽሑፎችን ያገኛሉ። ግን የሚመልሱት አንድ ዓይነት ጥያቄ አይደለም። አንዱ ጥናት ለታመሙ አይጦች ሜቲሊን ብሉን እንደ ሕክምና ሰጥቷል። ሌላው ግን ምንም እንስሳ በዚህ ንጥረ ነገር አላከመም። የፓቶሎጂ ባለሙያ ሚኤሊንን በማይክሮስኮፕ ማየት እንዲችል፣ ሜቲሊን ብሉን ቀጫጭን የአከርካሪ ገመድ ቁርጥራጮችን በሰማያዊ ቀለም ለማቅለም ተጠቅሟል።

የዚህ ጽሑፍ በሙሉ መሠረታዊ ሐሳብ ይህ ነው። ይህ ማቅለሚያ በባዮሎጂ ሁለት ሚናዎች አሉት፤ ሁለቱም ከሚቀመጥበት ጠርሙስ በስተቀር የጋራ ነገር የላቸውም። እንደ መድኃኒት እጩ፣ በተወሰነ መጠን ለሕያው እንስሳ ይሰጣል፤ ጥያቄውም የበሽታው ሁኔታ ይለወጣል ወይ የሚል ነው። እንደ ማቅለሚያ ደግሞ፣ ሙከራው ካለቀ በኋላ ኬሚካላዊ ጥበቃ በተደረገለት የሞተ ሕብረ ሕዋስ ላይ ይቀባል፤ ጥያቄውም ሕብረ ሕዋሱ ምን ይመስል ነበር የሚል ነው። ይህን ልዩነት ካላስተዋሉ፣ የፓቶሎጂ ጥናት ዘዴዎች ክፍልን የሕክምና ውጤት እንደሆነ አድርገው ያነባሉ።

EAE ምንድን ነው? በቀላል አገላለጽ

በሙከራ የሚነሳ ራስን የሚያጠቃ የበሽታ መከላከያ ሥርዓት ምላሽ የአንጎልና የአከርካሪ ገመድ እብጠት፣ ብዙውን ጊዜ EAE ተብሎ የሚያጥረው፣ የመልቲፕል ስክሌሮሲስን አንዳንድ ገጽታዎች ለማጥናት የሚጠቀሙበት መደበኛ የእንስሳት ሞዴል ነው። ተመራማሪው ለበሽታው ተጋላጭ የሆነ አይጥ የሚኤሊን ፕሮቲን ቁራጭና ኃይለኛ የበሽታ መከላከያ ምላሽ አጠናካሪ ንጥረ ነገር በመስጠት ምላሽ ያስነሳል። ከዚያም የበሽታ መከላከያ ሥርዓቱ የእንስሳውን የራሱን ማዕከላዊ የነርቭ ሥርዓት ያጠቃል። አይጡ ከታች ወደ ላይ የሚስፋፋ ድክመት ያዳብራል፤ ይህም ከላላ ጅራት እስከ የኋላ እግሮች ሽባነት፣ ከ0 እስከ 5 ባለው መለኪያ በቀላሉ ነጥብ ሊሰጠው ይችላል።

እንዲህ በቀላሉ ነጥብ መስጠት መቻሉ EAE ለምን በስፋት እንደሚጠቀም እና ለምንም የተሳሳተ ግንዛቤ ሊፈጥር እንደሚችል ያብራራል። በሰው ላይ ያለው MS በራሱ ይነሳል፣ ሰፊና በግልጽ ያልተወሰኑ ኢላማዎችን ያካትታል፣ እንዲሁም እየተመለሰ በሚከሰት ወይም ቀስ በቀስ በሚባባስ ሂደት የእይታ፣ የስሜት ሕዋሳት፣ የአእምሮ ግንዛቤ፣ የትንሹ አንጎል እና የእንቅስቃሴ ምልክቶችን ያስከትላል። EAE እንደ እብጠት፣ የሚኤሊን መጥፋት እና የአክሶን ጉዳት ያሉ የተመረጡ ሂደቶችን ቁጥጥር በተደረገባቸው ሁኔታዎች ይደግማል። MSን በትንሽ መጠን እንዳለ አይደግመውም። አጠቃላይ ማዕቀፉን ማወቅ የሚፈልጉ አንባቢዎች፣ ስለ ማንኛውም አንድ በሽታ የሚቀርብ አባባል ከመገምገማቸው በፊት፣ ሜቲሊን ብሉ በሕዋስ ደረጃ እንዴት እንደሚሠራ ይታሰባል የሚለውን ሊመለከቱ ይችላሉ።

ከታች ያሉት ሁለት ጥናቶችም የተለያዩ EAE አንቲጂኖችን ተጠቅመዋል፤ ይህም አስፈላጊ ልዩነት ነው። የሕክምናው ጥናት በሚኤሊን ኦሊጎዴንድሮሳይት ግላይኮፕሮቲን ውስጥ በሚገኝ አጭር ፔፕታይድ፣ MOG35-55፣ በሽታውን አስነስቷል። የፓቶሎጂው ጥናት ደግሞ የሚኤሊን መሠረታዊ ፕሮቲን እና የፕሮቲዮሊፒድ ፕሮቲን ክፍሎች ጥምረት በሆነው MP4 በሽታውን አስነስቷል። የአይጥ ዘርና የአንቲጂን ምርጫ ጉዳቶች የሚከሰቱበትን ቦታ እና እብጠቱ የሚከተለውን ሂደት ይለውጣሉ። ስለዚህ ሁለቱ ጥናቶች አንድ ሙከራ ሁለት ጊዜ የተደገመባቸው አይደሉም።

ማዕቀፉ፦ ከሞዴል ወደ ጥያቄ፣ ከዚያም ወደ ገደቦች

ይህን ሰንጠረዥ ክፍት አድርገው ያቆዩት። ለዚህ ጽሑፍ ዋናው ማጣቀሻ ነው። እያንዳንዱ ረድፍ ሞዴሉ የትኛውን የሕክምና ጥያቄ ሊመልስ እንደሚችል፣ በእውነት ምን እንደተለካ እና ግኝቱን ወደ ሰው ሕክምና ማሸጋገር የሚያበቃበትን ድንበር ያሳያል።

የሚቀጥለውን አርዕስተ ዜና የሚያጣራ ማንኛውም ሰው፣ ከሰው ላይ ሙከራ በፊት የሚደረጉ ጥናቶችን እንዴት ማንበብ እንደሚገባ ከሚያብራራው ጽሑፍ እገዛ በማግኘት፣ እነዚህን አምዶች እንደገና ሊጠቀም ይችላል፦ የእንስሳውን ዝርያና አንቲጂን፣ የውህዱን ሚና፣ የውጤት መለኪያዎች እና ውጤቱ የበሽታውን ሂደት ወይስ በአንድ ወቅት ያለውን የሕብረ ሕዋስ ሁኔታ እንደሚያሳይ ይጠይቁ።

የሕክምናው ውጤት፦ ሜቲሊን ብሉን መስጠት ምን ለወጠ?

በ2016 በJournal of Neuroimmunology የታተመው የሕክምና ጥናት ከ8 እስከ 10 ሳምንታት ገደማ ዕድሜ ያላቸውን ሴት C57BL/6 አይጦች ተጠቅሟል፤ ለእያንዳንዱ አይጥ 250 micrograms MOG35-55 በመስጠት የበሽታ መከላከያ ምላሽ አስነስቷል። በሽታው ከተነሳ በኋላ፣ EAE ያላቸው እንስሳት በዘፈቀደ ሜቲሊን ብሉ ወደሚያገኝ ቡድን ወይም ሕክምና ወደማያገኝ የEAE ቡድን ተመድበዋል። የክሊኒካዊ ሁኔታ ነጥቦቻቸውም እስከ 30ኛው ቀን ገደማ ተከታትለዋል።

ከ15ኛው እስከ 30ኛው ቀን፣ ሕክምና በተሰጣቸው አይጦች የክሊኒካዊ ሁኔታ ነጥቦች ከEAE መቆጣጠሪያ ቡድኑ ያነሱ ነበሩ፤ ልዩነቱም P ከ0.01 በታች በሆነ የስታቲስቲክስ ጠቀሜታ ተደግፏል። የአከርካሪ ገመድ ትንተናውም ተመሳሳይ አቅጣጫ አሳይቷል፤ ሕክምና ባገኙት እንስሳት የእብጠት ሕዋሳት ወደ ሕብረ ሕዋስ መግባት፣ የሚኤሊን መጥፋት እና የአክሶን መጥፋት ያነሱ ነበሩ።

ልዩ የነበረው ክፍል የምልክት ስርጭት መለኪያዎች ስብስብ ነበር። ሕክምናው የAMPK ማንቃትን እና የSIRT1 መገለጥን ጨምሯል፤ ለእብጠት ምላሽ ዋና መቆጣጠሪያ የሆነውን የNF-kB ማንቃት ደግሞ አፍኗል። በተላማጅ የበሽታ መከላከያ ሥርዓት በኩል፣ የTh17 ምላሽን ቀንሶ የTreg ምላሽን አጠናክሯል። ስለዚህ የቀረበው የሂደት ሰንሰለት፣ ከሜቲሊን ብሉ ወደ AMPK እና SIRT1፣ ከዚያ ወደ ዝቅተኛ የNF-kB ምልክት ስርጭት፣ ከዚያ እብጠትን ከሚያበረታታው Th17 ወደ ተቆጣጣሪው Treg ሚዛን መዛወር፣ ከዚያ ወደ ቀለል ያለ የሕብረ ሕዋስ ጉዳት፣ በመጨረሻም ወደ ዝቅተኛ ነጥቦች የሚያመራ ነው።

ይህ ሰንሰለት የግኝቶቹ ትርጓሜ ነው እንጂ የተረጋገጠ የምክንያትና ውጤት ቅደም ተከተል አይደለም። ጥናቱ መድኃኒቱ፣ የምልክት ስርጭት ለውጦቹ እና የበሽታው መሻሻል አብረው እንደተከሰቱ ያሳያል። AMPK እና SIRT1 ሙሉ ጥቅሙን እንደሚያስገኙ አያረጋግጥም። በሕዝብ የሚፈለገው የጽሑፉ መረጃም፣ ከአህጽሮቱ ብቻ የሕክምና አሰጣጥ እቅዱን እንደገና ለመተግበር በሚያስችል ግልጽነት፣ ትክክለኛውን milligram በkilogram የሚሰጥ መጠን፣ የአሰጣጥ መንገድ፣ የመጀመሪያ ቀን ወይም ቆይታ አያሳይም። ስለዚህ በሽያጭ ገጽ ላይ ይህን ጥናት በተመለከተ የሚጠቀስ ማንኛውንም የአሰጣጥ መጠን፣ የሙሉ ጽሑፉን ዘዴዎች ክፍል ካላጣቀሰ በስተቀር፣ እንዳልተረጋገጠ ይቁጠሩት። ይህ የመጀመሪያ የበሽታ መከላከያ ምልክት ግኝት ወደ ክሊኒካዊ መረጃ ደርሶ እንደሆነ ለማጣራት፣ በሜቲሊን ብሉ ላይ ያለውን ሰፊ የሰው ጥናት ማስረጃ መመልከት ያስፈልጋል።

የፓቶሎጂው ውጤት፦ የስድስት ወራት ሕብረ ሕዋስ ምርመራ ምን አሳየ?

በ2015 በPLoS ONE የታተመው የMP4 ጥናት ሴት C57BL/6 አይጦችን ተጠቅሟል። ምላሽ ለማስነሳት፣ በሙሉ የፍሮይንድ ምላሽ አጠናካሪ ንጥረ ነገር ውስጥ ያለ 200 micrograms MP4 ተሰጥቷቸዋል፤ በምላሽ ማስነሻው ቀንና ከ48 ሰዓታት በኋላም የፐርቱሲስ መርዝ ተሰጥቷል። ምንም እንስሳ ሜቲሊን ብሉን እንደ መድኃኒት አልተቀበለም። ሕብረ ሕዋሱ በኬሚካል ከተጠበቀና በመደገፊያ ቁሳቁስ ውስጥ ከተካተተ በኋላ፣ one micrometer ውፍረት ያላቸው በአቋራጭ የተቆረጡ የአከርካሪ ገመድ ቁርጥራጮች በብርሃን ማይክሮስኮፕ ለመመርመር በሜቲሊን ብሉ ተቀልመዋል። ይበልጥ ዝርዝር መረጃ ለማግኘትም የፊትና የጎን የነርቭ ቃጫ መንገድ በኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ ተመርምሯል።

የሕብረ ሕዋስ ናሙናዎች በሦስት ደረጃዎች ተወስደዋል፦ በበሽታው አጣዳፊ ከፍተኛ ደረጃ ከ7 አይጦች፣ በሽታው ከጀመረ ከሦስት ወራት በኋላ ከ5 አይጦች፣ እና ከጀመረ ከስድስት ወራት በኋላ ከ10 አይጦች። በእነዚህ ደረጃዎች ያሉት አማካይ የክሊኒካዊ ሁኔታ ነጥቦች ከ0 እስከ 5 ባለው መለኪያ በ1.7 እና 1.8 አካባቢ ነበሩ፤ ማለት ይቻላል ተመሳሳይ ይመስሉ ነበር። ሕብረ ሕዋሱ ግን ሌላ ነገር አሳየ። በሚኤሊን ላይ ብቻ ጉዳት ያላቸው ቃጫዎች በአጣዳፊው ከፍተኛ ደረጃ በsquare millimeter ከ569,000 ገደማ ወደ ስድስተኛው ወር 1,496,000 ገደማ ጨምረዋል። የአጣዳፊውና የረጅም ጊዜው ደረጃ ንጽጽርም P ከ0.027 ጋር እኩል በሆነ የስታቲስቲክስ ጠቀሜታ ተደግፏል። ሚኤሊንና አክሶን በጋራ የተጎዱበት ሁኔታ በስድስተኛው ወር በግምት እጥፍ ሆኗል። ሚኤሊን እንደገና እየተፈጠረባቸው ያሉ ቃጫዎች በሁሉም ደረጃ ከአንድ በመቶ በታች ቀርተዋል፤ ይህም ስለ ጥገና ያሉ ተስፋዎችን በጥንቃቄ እንዲታዩ የሚያደርግ ዝርዝር ነው።

የአክሶን ጉዳት የU ቅርጽ ያለውን አዝማሚያ ተከትሏል፦ በአጣዳፊው ከፍተኛ ደረጃ ከፍ ያለ፣ በሦስተኛው ወር ዝቅ ያለ፣ በስድስተኛው ወር ደግሞ ከሁሉ ከፍ ያለ ነበር። ከማይቶኮንድሪያ እብጠትና በኒውሮፊላመንቶች መካከል ካለው የርቀት መቀነስ ጋርም ግንኙነት ነበረው። ገምጋሚዎቹ ነጥቡንና ደረጃውን እንዳያውቁ ተደርጎ ምርመራው ተካሂዷል። ይህም የክሊኒካዊ ሁኔታ ነጥቦች እየቀጠለ ያለውን መዋቅራዊ ጉዳት በቂ እንዳላሳዩ የሚለውን ትርጓሜ ያጠናክራል።

ይህ አለመጣጣም ጥናቱ ስለ MS ለሚያነብ ሰው የሚያበረክተው እውነተኛ አስተዋጽኦ ነው። የአካል ችሎታ ጉድለት ነጥብ መረጋጋት የሕብረ ሕዋስ ሁኔታ መረጋጋት ማለት አልነበረም። እንዲሁም ይህ ጥናት ሜቲሊን ብሉ ለMS ሕክምና ይጠቅማል የሚል ማንኛውንም አባባል ለምን ሊደግፍ እንደማይችል ያሳያል። የፈተነው ጊዜን እንጂ ሕክምናን አልነበረም።

ለምን ሁለቱም ጥናቶች በታካሚዎች ላይ ጥቅም እንዳለ አያረጋግጡም?

እያንዳንዱ ጥናት ጠባብ ጥያቄን በጥሩ ሁኔታ እንደሚመልስ፣ ስለ ታካሚዎች ያለውን ጥያቄ ግን ፈጽሞ እንደማይመልስ አድርገው ያስቡ።

በመጀመሪያ፣ መንስኤው የተለየ ነው። EAE በተወሰነ አንቲጂንና ምላሽ አጠናካሪ ንጥረ ነገር ሆን ተብሎ ይነሳል። በሰው ላይ ያለው MS ግን በራሱ ይከሰታል፤ የT ሕዋሳት፣ የB ሕዋሳት፣ ተፈጥሯዊ የበሽታ መከላከያ ሥርዓት እና በነርቭ ሕብረ ሕዋስ ውስጥ ያሉ ግሊያ ሕዋሳትን የሚያካትት ሰፊ የመከላከያ ምላሽ አለው። በአይጥ ውስጥ ወደ MOG ያዘነበለ ምላሽን የሚቀይር ውህድ፣ ያንን ሰፊ የሰው ምላሽ ሊቀይር የግድ አይደለም።

ሁለተኛ፣ የበሽታው መገለጫ የተለየ ነው። በአይጥ ላይ ከጅራት ወደ ኋላ እግሮች የሚስፋፋ ድክመት በቀላሉ የሚለካ ውጤት ነው። የሰው MSን ልዩ ልዩ መገለጫዎች በአንድ የእንቅስቃሴ ነጥብ ውስጥ ይጨምቃል። መድኃኒቶች የሰው በሽታ ሂደትን ሳይቀይሩ የአጭር ጊዜ EAE ነጥቦችን መቀየራቸው ብዙ ጊዜ ይታያል። ለዚህ ነው EAE እጩዎችን የመለየትና የአሠራር ሂደቶችን የማጥናት መሣሪያ እንጂ፣ በትንሽ መጠን የተዘጋጀ ክሊኒክ ያልሆነው።

ሦስተኛ፣ የመድኃኒት ተጋላጭነትና የአሰጣጥ ጊዜ ገና ግልጽ አይደሉም። በ30 ቀናት የአይጥ ሙከራ ውስጥ ከመጀመሪያው ጀምሮ በተከታታይ መስጠት፣ በሽታው ቀድሞውኑ በተቋቋመበት ሰው ላይ ለረጅም ጊዜ በአፍ ከመውሰድ ጋር አንድ አይደለም። ሁለቱም ጥናቶች በነርቭ ሥርዓት ውስጥ ያለውን የመድኃኒት መጠን አልለኩም። ያ ግንኙነት ከሌለ፣ በላቦራቶሪ ሳህን ውስጥ ካለ ክምችት ወይም ለአይጥ ከተሰጠ መጠን ወደ ሰው የሕክምና አሰጣጥ እቅድ የሚያገናኝ ድልድይ የለም።

አራተኛ፣ ሁለቱ ጥናቶች እርስ በርሳቸው አልተደጋገሙም። የተለያዩ አንቲጂኖች፣ የተለያዩ ጥያቄዎች፣ የተለያዩ የውጤት መለኪያዎች ነበሯቸው፤ በአንዱ ውስጥ ደግሞ ሕክምና ፈጽሞ አልነበረም። ሁለቱን አንድ ላይ አዎንታዊ ውጤት ያሳዩ ሁለት የMS ሕክምና ጥናቶች ብሎ መጥቀስ የምድብ ስህተት ነው።

ማስረጃውን ለሚመዝኑ አንባቢዎች ይህ ምን ማለት ነው?

በእነዚህ ጥናቶች ውስጥ ለMS የተረጋገጠ የሜቲሊን ብሉ ሕክምና አሰጣጥ ፕሮቶኮል የለም። የሕክምናው ጥናት በMOG EAE ውስጥ ስለ AMPK፣ SIRT1፣ NF-kB እና የTh17 ከTreg ጋር ያለው ሚዛን ተጨማሪ ምርምር እንዲደረግ ድጋፍ ይሰጣል። የፓቶሎጂው ጥናት ደግሞ፣ ነጥቦች ሳይለወጡ ቢታዩም የሕብረ ሕዋስ ጉዳት ሊቀጥል እንደሚችል እና በዘዴዎች ክፍል ውስጥ ሜቲሊን ብሉ መጠቀስ አንዳንድ ጊዜ የማቅለሚያ ዕቃን እንጂ የመድኃኒት ማስቀመጫን እንደማያመለክት ያስታውሳል። ቀጣይ የመልቲፕል ስክሌሮሲስ ምርምርን የሚከታተሉ አንባቢዎች ይህን በማቅለሚያና በመድኃኒት መካከል ያለ ልዩነት በአእምሯቸው ሊያስቀምጡ ይገባል። ማንም ሰው በላቦራቶሪ ግኝቶች አርዕስተ ዜናዎች ተነሳስቶ እርምጃ ከመውሰዱ በፊት፣ ከደም ጋር የተያያዙና የመድኃኒት መስተጋብር አደጋዎችን ጨምሮ የደህንነት ጥያቄዎች፣ ከአጠቃላይ የሜቲሊን ብሉ ደህንነት መረጃ ጋር በሕክምና ባለሙያ ውይይት ውስጥ ሊታዩ ይገባል።

ዋናው መደምደሚያ በአንድ ዓረፍተ ነገር ሊገለጽ ይችላል። ከተጠቀሱት ጥናቶች አንዱ MOG EAE ላላቸው አይጦች ሜቲሊን ብሉን በተወሰነ መጠን ሰጥቶ፣ እብጠትን ከሚቀንስ የበሽታ መከላከያ ምላሽ ለውጥ ጋር ቀለል ያለ በሽታ እንዳየ ሲዘግብ፣ ሌላው ምንም ሕክምና ሳይሰጥ በስድስት ወራት ውስጥ የተጠራቀመ የሚኤሊንና የአክሶን ጉዳትን እየመዘገበ ሜቲሊን ብሉን የአከርካሪ ገመድ ሕብረ ሕዋስ ለማቅለም ብቻ ተጠቅሟል፤ ስለዚህ ሁለቱ ጥናቶች ሜቲሊን ብሉ በሰው ላይ ላለው MS እንደሚጠቅም አያረጋግጡም።