Metilen ko‘ki va tarqoq skleroz: hayvonlardagi tadqiqotlarda nima tekshirilgan

Tarqoq skleroz (MS) uchun metilen ko‘ki haqida qidirsangiz, bir xil savolga javob berayotgandek ko‘rinadigan maqolalarni topasiz. Ammo ular bir xil savolga javob bermaydi. Bir maqolada kasal sichqonlarga davolash maqsadida metilen ko‘ki berilgan. Ikkinchisida esa hech bir hayvon u bilan davolanmagan. Unda patolog mikroskop ostida miyelinni ko‘ra olishi uchun orqa miyaning yupqa kesmalari metilen ko‘ki bilan ko‘k rangga bo‘yalgan.

Butun maqolaning asosiy g‘oyasi shu. Bu bo‘yoq biologiyada ikki xil vazifani bajaradi va bu vazifalarni bitta idishdan boshqa hech narsa birlashtirmaydi. Dori vositasi nomzodi sifatida u tirik hayvonga ma’lum dozada beriladi va kasallik o‘zgaradimi, degan savol tekshiriladi. Bo‘yoq sifatida esa tajribadan keyin jonsiz, fiksatsiya qilingan to‘qimaga qo‘llanadi va to‘qima qanday ko‘ringani o‘rganiladi. Bu farqni e’tibordan qochirsangiz, patologiya usullari bo‘limini davolash natijasi kabi o‘qib qolasiz.

EAE nima: sodda izoh

Eksperimental autoimmun ensefalomiyelit, odatda EAE deb qisqartiriladi, tarqoq sklerozning ayrim jihatlarini o‘rganish uchun ishlatiladigan standart hayvon modelidir. Tadqiqotchi moyil sichqonni miyelin oqsilining bir bo‘lagi va kuchli ad’yuvant bilan immunizatsiya qiladi. Shundan so‘ng immun tizimi hayvonning o‘z markaziy asab tizimiga hujum qiladi. Sichqonda pastdan yuqoriga tarqaluvchi kuchsizlik rivojlanadi; uni 0 dan 5 gacha bo‘lgan shkalada, dumning bo‘shashishidan orqa oyoqlar falajigacha, oson baholash mumkin.

Baholashning bunday qulayligi EAE nima uchun ommalashganini ham, nima uchun chalg‘itishi mumkinligini ham tushuntiradi. Odamdagi MS o‘z-o‘zidan yuzaga keladi, kengroq va kamroq aniq belgilangan nishonlarni qamrab oladi hamda qaytalanuvchi yoki tobora kuchayib boruvchi kechishda ko‘rish, sezgi, kognitiv faoliyat, miyacha va harakat bilan bog‘liq alomatlarni keltirib chiqaradi. EAE nazorat qilinadigan sharoitlarda yallig‘lanish, demiyelinizatsiya va akson shikastlanishi kabi ayrim mexanizmlarni takrorlaydi. U MSning kichraytirilgan nusxasi emas. Umumiy asoslarni tushunmoqchi bo‘lgan o‘quvchilar muayyan kasallikka oid da’voni baholashdan oldin metilen ko‘kining hujayra darajasida qanday ta’sir qilishi taxmin qilinishini ko‘rib chiqishlari mumkin.

Quyidagi ikki maqolada EAE uchun turli antigenlar ishlatilgan va bu muhim. Davolash tadqiqotida kasallik miyelin oligodendrosit glikoproteinidan olingan qisqa peptid — MOG35-55 bilan chaqirilgan. Patologiya tadqiqotida esa miyelinning asosiy oqsili va proteolipid oqsili segmentlarining birikmasi bo‘lgan MP4 ishlatilgan. Sichqon liniyasi va antigen tanlovi shikastlanish o‘choqlari qayerda paydo bo‘lishiga hamda yallig‘lanish qanday kechishiga ta’sir qiladi. Shu sababli bu ikki tadqiqot bitta tajribaning ikki marta o‘tkazilishi emas.

Yo‘l xaritasi: model, savol va chegaralar

Bu jadvalni ko‘z oldingizda tuting. U ushbu maqola uchun asosiy ma’lumotnomadir. Har bir qatorda model qaysi klinik savolga javob bera olishi, amalda nima o‘lchangani va natijalarni odamlarga tatbiq etish qayerda to‘xtashi ko‘rsatilgan.

Navbatdagi sarlavhani tekshirayotgan har kim klinikagacha bo‘lgan tadqiqotlarni qanday o‘qish kerak haqidagi qo‘llanma yordamida shu ustunlardan yana foydalanishi mumkin: hayvon turi va antigenni, moddaning vazifasini, baholash ko‘rsatkichlarini hamda natija kasallik kechishini yoki to‘qimaning muayyan paytdagi holatini aks ettirishini aniqlang.

Davolash natijasi: vosita berilishi nimani o‘zgartirdi

Journal of Neuroimmunology jurnalidagi 2016 yilgi davolash tadqiqotida taxminan 8 dan 10 haftalik urg‘ochi C57BL/6 sichqonlari ishlatilgan; har bir sichqon 250 mikrogramm MOG35-55 bilan immunizatsiya qilingan. EAE chaqirilgach, hayvonlar tasodifiy ravishda metilen ko‘ki oladigan guruhga yoki davolanmaydigan EAE guruhiga ajratilgan, klinik ballar esa taxminan 30-kungacha kuzatilgan.

15-kundan 30-kungacha davolangan sichqonlarning klinik ballari EAE nazorat guruhidagidan statistik jihatdan sezilarli darajada past bo‘lgan, P 0.01 dan kichik bo‘lgan. Orqa miya tahlili ham shu yo‘nalishdagi natijalarni ko‘rsatgan: davolangan hayvonlarda yallig‘lanish hujayralari infiltratsiyasi, demiyelinizatsiya va akson yo‘qotilishi kamroq bo‘lgan.

Tadqiqotning o‘ziga xos qismi signal uzatilishiga oid ko‘rsatkichlar majmuasi edi. Davolash AMPK faollashuvini va SIRT1 ekspressiyasini oshirgan hamda yallig‘lanishning markaziy boshqaruvchilaridan biri bo‘lgan NF-kB faollashuvini susaytirgan. Adaptiv immunitet jihatidan u Th17 javobini kamaytirib, Treg javobini kuchaytirgan. Shunday qilib, taklif qilingan zanjir quyidagicha: metilen ko‘ki → AMPK va SIRT1 → NF-kB signal uzatilishining pasayishi → yallig‘lanishga moyil Th17 dan boshqaruvchi Treg tomon siljish → to‘qima shikastlanishining yengillashishi → klinik ballarning pasayishi.

Bu zanjir isbotlangan sabab-oqibat ketma-ketligi emas, balki talqindir. Tadqiqot dori vositasi, signallardagi o‘zgarishlar va kasallikning yengillashishi birgalikda kuzatilganini ko‘rsatadi. U foydaning barchasi AMPK va SIRT1 orqali yuzaga kelganini isbotlamaydi. Ochiq indekslangan matnda esa kilogrammga milligramm hisobidagi aniq doza, yuborish yo‘li, boshlash kuni yoki davomiylik faqat annotatsiyaning o‘zidan qo‘llash tartibini takrorlash uchun yetarlicha ravshan bayon qilinmagan. Savdo sahifasida ushbu maqolaga oid keltirilgan har qanday doza miqdorini, agar u to‘liq matndagi usullar bo‘limiga havola bermasa, tasdiqlanmagan deb hisoblang. Immun tizimiga oid bu dastlabki signal keyinchalik klinik ma’lumotlar bilan mustahkamlanganmi, degan savolni metilen ko‘ki bo‘yicha odamlarda o‘tkazilgan tadqiqotlarning kengroq dalillar bazasidan tekshirish kerak.

Patologiya natijasi: olti oylik to‘qima kuzatuvlari nimani ko‘rsatdi

PLoS ONE jurnalidagi 2015 yilgi MP4 tadqiqotida 200 mikrogramm MP4 va to‘liq Freynd ad’yuvanti bilan immunizatsiya qilingan urg‘ochi C57BL/6 sichqonlari ishlatilgan; immunizatsiya kuni va yana 48 soat o‘tib ko‘kyo‘tal toksini ham berilgan. Hech bir hayvon metilen ko‘kini dori vositasi sifatida olmagan. Fiksatsiya va maxsus muhitga joylashtirishdan keyin orqa miyaning bir mikrometrli ko‘ndalang kesmalari yorug‘lik mikroskopiyasi uchun metilen ko‘ki bilan bo‘yalgan, mayda tafsilotlarni ko‘rish uchun esa ventrolateral yo‘l elektron mikroskopiyada o‘rganilgan.

To‘qima namunalari uch bosqichda olingan: kasallikning o‘tkir cho‘qqisida 7 sichqondan, boshlanishidan uch oy o‘tib 5 sichqondan va olti oy o‘tib 10 sichqondan. Bu bosqichlardagi o‘rtacha klinik ballar deyarli bir xil bo‘lib, 0 dan 5 gacha bo‘lgan shkalada taxminan 1.7 dan 1.8 gacha edi. To‘qima esa boshqa manzarani ko‘rsatgan. Faqat miyelini shikastlangan tolalar soni o‘tkir cho‘qqida har kvadrat millimetrga taxminan 569,000 dan olti oyda taxminan 1,496,000 gacha oshgan; o‘tkir bosqich bilan uzoq muddatli bosqich orasidagi farq statistik jihatdan ahamiyatli bo‘lib, P 0.027 ga teng bo‘lgan. Miyelin va akson birgalikda shikastlanishi olti oyga kelib taxminan ikki baravar oshgan. Qayta miyelinlanayotgan tolalar har bir bosqichda bir foizdan kam bo‘lgan — bu tiklanishga umid qilishda hushyorlikka undaydigan tafsilotdir.

Akson shikastlanishi U shaklidagi yo‘nalishni ko‘rsatgan: o‘tkir cho‘qqida yuqori, uch oyda pastroq, olti oyda esa eng yuqori bo‘lgan. U mitoxondriyalarning shishishi va neyrofilamentlar orasidagi masofaning qisqarishi bilan bog‘liq bo‘lgan. Baholovchilar klinik ball va bosqichdan bexabar bo‘lgan, bu esa klinik ballar davom etayotgan tuzilmaviy shikastlanishni to‘liq aks ettirmagan degan talqinni kuchaytiradi.

Ushbu nomuvofiqlik tadqiqotning MS haqida o‘qiyotgan kishi uchun haqiqiy ahamiyatidir. Nogironlik darajasining barqaror balli to‘qima holati ham barqarorligini anglatmagan. Bu, shuningdek, nima uchun ushbu maqola metilen ko‘ki bilan MSni davolashga oid hech qanday da’voni qo‘llab-quvvatlay olmasligini ko‘rsatadi. Unda davolash emas, vaqt ta’siri tekshirilgan.

Nima uchun hech bir tadqiqot bemorlarda foyda borligini isbotlamaydi

Har bir maqolani tor doiradagi savolga yaxshi javob beradigan, ammo bemorlarga oid savolga umuman javob bermaydigan ish deb qarang.

Birinchidan, sabablar farq qiladi. EAE aniq belgilangan antigen va ad’yuvant yordamida ataylab chaqiriladi. Odamdagi MS esa T hujayralari, B hujayralari, tug‘ma immunitet va asab tizimida doimiy yashovchi glial hujayralarni qamrab oladigan kengroq immun javobi bilan o‘z-o‘zidan rivojlanadi. Sichqonda MOG ga yo‘naltirilgan javobni o‘zgartiradigan modda odamdagi kengroq javobni ham o‘zgartirishi shart emas.

Ikkinchidan, fenotip farq qiladi. Sichqonda dumdan orqa oyoqlarga yuqorilab tarqaladigan kuchsizlik — qulay baholash ko‘rsatkichi. U odamdagi MSning xilma-xilligini harakatga oid bitta songa siqib qo‘yadi. Dori vositalari ko‘pincha qisqa muddatli EAE ballarini o‘zgartiradi, ammo odamdagi kasallik kechishini o‘zgartirmaydi. Shu sababli EAE kichraytirilgan klinika emas, balki dastlabki saralash va mexanizmlarni o‘rganish vositasidir.

Uchinchidan, dori ta’siriga duchor bo‘lish darajasi va qo‘llash vaqti masalalari hal qilinmagan. 30 kunlik sichqon tajribasida vositani erta bosqichdan uzluksiz berish, kasalligi allaqachon shakllangan odamning uni uzoq muddat og‘iz orqali qabul qilishiga teng emas. Ikki tadqiqotning hech birida asab tizimidagi dori miqdori o‘lchanmagan. Bu bog‘lanishsiz laboratoriya idishidagi konsentratsiya yoki sichqonga berilgan dozadan odam uchun qo‘llash tartibiga o‘tishning asosi yo‘q.

To‘rtinchidan, bu ikki maqola bir-birining natijalarini takrorlamaydi. Antigenlar, savollar va baholash ko‘rsatkichlari turlicha, birida esa umuman davolash bo‘lmagan. Ularni MSni davolash bo‘yicha ikkita ijobiy tadqiqot sifatida birga keltirish — turli toifalarni chalkashtirishdir.

Dalillarni baholayotgan o‘quvchilar uchun bu nimani anglatadi

Bu maqolalarda MS uchun metilen ko‘kini qo‘llashning tasdiqlangan protokoli yo‘q. Davolash tadqiqoti MOG EAE da AMPK, SIRT1, NF-kB hamda Th17 va Treg o‘rtasidagi muvozanatni yanada o‘rganishga asos beradi. Patologiya tadqiqoti ballar o‘zgarmay turgandek ko‘rinsa ham to‘qima shikastlanishi kuchayishi mumkinligini va usullar bo‘limidagi metilen ko‘ki ba’zan dori javonini emas, bo‘yoq idishini anglatishini eslatadi. Tarqoq skleroz bo‘yicha davom etayotgan tadqiqotlarni kuzatayotgan o‘quvchilar bo‘yoq bilan dori o‘rtasidagi shu farqni yodda tutishlari kerak. Laboratoriya natijalariga oid sarlavhalar asosida biror chora ko‘rishdan oldin xavfsizlik masalalari, jumladan qon bilan bog‘liq xavflar va o‘zaro ta’sir xavflari, metilen ko‘kining xavfsizligi haqidagi umumiy ma’lumotlar bilan birga shifokor bilan muhokama qilinishi kerak.

Asosiy xulosa bitta jumlaga sig‘adi. Keltirilgan tadqiqotlardan birida MOG EAE chaqirilgan sichqonlarga metilen ko‘ki berilib, yallig‘lanishga qarshi yo‘nalishdagi immun o‘zgarishi bilan birga kasallik yengilroq kechgani qayd etilgan, ikkinchisida esa hech qanday vosita berilmagan va metilen ko‘ki faqat orqa miyani bo‘yash uchun ishlatilgan holda olti oy davomida miyelin hamda akson shikastlanishining ortib borishi hujjatlashtirilgan; shuning uchun bu ikki tadqiqot metilen ko‘ki odamdagi MSga yordam berishini isbotlamaydi.