పాలకు మిథిలీన్ బ్లూ క్షయకరణ పరీక్ష: సూత్రం మరియు పరిమితులు

ఒక విద్యార్థిని పాలు ఉన్న రెండు పరీక్ష నాళికలను పైకి ఎత్తి చూపిస్తుంది. ఒకటి గంటలో తెల్లగా మారింది. మరొకటి ఐదు గంటలపాటు నీలంగానే ఉంది. ఆమె నీలంగా ఉన్న నాళికను చూపించి, ఆ పాలు తాగడానికి సురక్షితమని చెబుతుంది.

ఆ నిర్ధారణ పరీక్షపై తప్పుడు అవగాహనను వెల్లడిస్తుంది. పాలకు చేసే మిథిలీన్ బ్లూ పరీక్ష భద్రతను గుర్తించదు. స్థిరమైన పరిస్థితుల్లో ఆ నాళికలోని సూక్ష్మజీవ సముదాయం రెడాక్స్ పొటెన్షియల్‌ను ఎంత వేగంగా తగ్గిస్తుందో అది తెలియజేస్తుంది. నెమ్మదిగా వచ్చిన ఫలితం నమూనాలో మొత్తం జీవక్రియ క్రియాశీలత తక్కువగా ఉందని సూచిస్తుంది. ఏ జీవులు ఉన్నాయి, వాటిలో వ్యాధికారక జీవి ఉందా, లేదా పాలను సరిగ్గా పాశ్చరైజ్ చేశారా అనే విషయాల గురించి అది ఏమీ చెప్పదు.

ఈ తేడా ముఖ్యమైనది, ఎందుకంటే పరీక్ష చూడటానికి నమ్మదగినదిగా అనిపిస్తుంది. నీలం రంగు మాయమవుతుంది. గడియారం ఒక సంఖ్యను ఇస్తుంది. సంఖ్యలు వాటి పరిధికి మించి అర్థాలు తీసుకునేలా చేస్తాయి. ఈ వ్యాసం ఉపయోగకరమైన అర్థాన్ని నిలుపుతూ, సురక్షితం కాని నిర్ధారణను నిరోధిస్తుంది.

క్షయకరణ నిజంగా ఏమి కొలుస్తుంది

ఆక్సీకరణ చెందినప్పుడు మిథిలీన్ బ్లూ నీలంగా ఉంటుంది; ల్యూకోమిథిలీన్ బ్లూగా క్షయకరణ చెందినప్పుడు దాదాపు రంగులేనిదిగా ఉంటుంది. తాజా పాలలో కరిగిన ఆక్సిజన్ ఉంటుంది. అది రంగుద్రవ్యాన్ని నీలంగా ఉంచుతుంది. శ్వాసక్రియ, కిణ్వ ప్రక్రియ చేసే బ్యాక్టీరియా ఆ ఆక్సిజన్‌ను వినియోగించి, క్షయకరణ సమ్మేళనాలను విడుదల చేస్తాయి. రెడాక్స్ పొటెన్షియల్ తగినంతగా పడిపోయినప్పుడు, రంగుద్రవ్యం ఎలక్ట్రాన్‌లను స్వీకరించి తన రంగును కోల్పోతుంది. గ్వెల్ఫ్ విశ్వవిద్యాలయపు పాల సూక్ష్మజీవశాస్త్ర పాఠ్యగ్రంథం ఇదే క్రమాన్ని, బ్యాక్టీరియా జీవక్రియలో ముందుగా ఆక్సిజన్ తొలగిపోవడం, ఆ తరువాత క్షయకరణ పదార్థాలు ఏర్పడటం అని వివరిస్తుంది.

జర్నల్ ఆఫ్ డెయిరీ సైన్స్‌లోని ప్రామాణిక పరిశోధన దీన్ని రెండు దశల ప్రక్రియగా వివరిస్తుంది: ముందుగా సూక్ష్మజీవ సముదాయం ఆక్సిజన్‌ను తగ్గిస్తుంది; తరువాత పాలలోని భాగాలు రంగుద్రవ్యాన్ని వేగంగా క్షయకరణ చేస్తాయి. అందువల్ల పాలకు మిథిలీన్ బ్లూ క్షయకరణ పరీక్షను కణాలను లెక్కించే పరీక్షగా కాకుండా, ఉమ్మడి జీవక్రియ క్రియాశీలతను అంచనా వేసే క్రియాత్మక పరీక్షగా అర్థం చేసుకోవడం సముచితం. మిథిలీన్ బ్లూ రెడాక్స్ ప్రవర్తన ఆ మార్పు వెనుక ఉన్న రసాయనశాస్త్రాన్ని వివరిస్తుంది.

ఆక్సిజన్ పరీక్ష ముగింపు స్థితిని తిరగదోడుతుంది. క్షయకరణ చెందిన ల్యూకో రంగుద్రవ్యం గాలికి గురైతే మళ్లీ ఆక్సీకరణ చెంది నీలంగా మారుతుంది. అందువల్ల కుదపడం, పోయడం, వెడల్పైన నాళికలు, ద్రవం పైన ఎక్కువ ఖాళీ స్థలం ఉండటం ఫలితాన్ని ఆలస్యం చేస్తాయి. నాళికలోని ప్రధాన ద్రవ భాగం రంగు కోల్పోయిన తరువాత కూడా గాలితో తాకే ఉపరితలం వద్ద పలుచని నీలి వలయం తరచుగా మిగిలి ఉంటుంది. ప్రామాణిక విధానాలు ఆ వలయం మాయమయ్యే వరకు వేచి ఉండకుండా, దానిని అనుమతిస్తాయి.

జీవి రకం రెండో రకమైన వక్రీకరణను కలిగిస్తుంది. కోలిఫార్మ్‌లు, అనేక లాక్టిక్ సూక్ష్మజీవులు రంగుద్రవ్యాన్ని వేగంగా క్షయకరణ చేస్తాయి. తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల్లో పెరిగే అనేక సూక్ష్మజీవులు, వేడిని తట్టుకునే జీవులు దాన్ని నెమ్మదిగా క్షయకరణ చేస్తాయి లేదా దాదాపుగా చేయవు. ఒకే ప్లేట్ కౌంట్ ఉన్న రెండు పాల నమూనాలు నీలం రంగు కోల్పోయే సమయాల్లో గంటల తేడా ఉండవచ్చు. ఈ ఒక్క వాస్తవమే సమయాన్ని కాలనీ సంఖ్యలుగా మార్చడం చెల్లదని చూపిస్తుంది.

నియంత్రిత ప్రయోగశాల విధానం

క్షేత్రస్థాయి, పాఠ్యగ్రంథ విధానాల వివరాల్లో తేడాలు ఉంటాయి. కాబట్టి ఒక ఫలితం దాన్ని ఉత్పత్తి చేసిన పద్ధతి పరిధిలోనే చెల్లుతుంది. ఆహార ప్రయోగశాలల్లో వాడే సంప్రదాయ విధానం ఇలా ఉంటుంది:

1. గాలి వీలైనంత తక్కువగా కలిసేలా ముడి పాలను సేకరించి, వెంటనే చల్లబరచండి. నమూనా తీసుకునే ముందు మెల్లగా తలకిందులు చేసి కలపండి.
2. శుభ్రజీవరహిత నాళికలో 10 mL పాలు, 1 mL పరీక్షకు ఉపయోగించే రంగుద్రవ్య ద్రావణం వేయండి. విస్తృతంగా ఉపయోగించే ఒక సాంద్రత 0.005 శాతం రంగుద్రవ్యం; పాలు, రంగుద్రవ్యం నిష్పత్తి 10 కు 1.
3. నాళికకు మూత పెట్టి, రెండుసార్లు మెల్లగా తలకిందులు చేసి, కొన్ని నిమిషాల్లోనే నీటి స్నానంలో ఉంచండి. అనుసరించే నిర్దిష్ట ప్రమాణాన్ని బట్టి సాధారణ ఇంక్యుబేషన్ ఉష్ణోగ్రత 35 నుంచి 38 డిగ్రీల సెల్సియస్ ఉంటుంది. మీరు ఏ ప్రమాణాన్ని అనుసరిస్తున్నారో నమోదు చేయండి.
4. కాంతి క్షయకరణను వేగవంతం చేస్తుంది కాబట్టి, ఇంక్యుబేషన్ సమయంలో నాళికలను కాంతి నుంచి రక్షించండి.
5. 30 నిమిషాలకు పరిశీలించి, తరువాత స్థిరమైన విరామాల్లో పరిశీలించండి. నాళిక రంగు మరిగించిన పాల సూచన నమూనాతో సరిపోలినప్పుడు లేదా విధానంలో నిర్వచించిన స్థాయికి రంగు కోల్పోయినప్పుడు పట్టిన సమయమే పరీక్ష ముగింపు సమయం.
6. పద్ధతిలో దృశ్య నియంత్రణ నమూనా అవసరమైతే, అదే పాలతో ఎలాంటి చికిత్స చేయని ఒక నాళికను ఉంచండి.

FAO పాల పరీక్షల మాన్యువల్ ఈ క్రమానికి స్పష్టమైన క్షేత్రస్థాయి విధానాన్ని అందిస్తుంది: 10 mL పాలకు 1 mL రంగుద్రవ్యం కలపడం, మూత పెట్టడం, మెల్లగా తలకిందులు చేయడం, సుమారు 37 నుంచి 38 డిగ్రీల వద్ద ఇంక్యుబేషన్ చేయడం, ప్రతి 30 నిమిషాలకు పరిశీలించడం. దాని నియంత్రణ నాళికల్లో మరిగించిన పాలను ఉపయోగించి సహజ క్షయకరణ వ్యవస్థను నిర్వీర్యం చేస్తారు; రంగు పోలికకు స్థిరమైన ఆధారాన్ని ఏర్పరుస్తారు.

పైన ఉన్న పథక చిత్రం నియంత్రణకు సంబంధించిన హద్దులను చూపిస్తుంది. ఒకే పరిమాణాలు, ఒకే రంగుద్రవ్యం, ఒకే ఉష్ణోగ్రత, ఒకే కలిపే విధానం, ఒకే కాంతి రక్షణ, ఒకే ముగింపు నియమం ఉండాలి. వీటిలో ఏ ఒక్కదాన్ని మార్చినా సమయం కూడా మారుతుంది. అందుకే ఇష్టానుసారమైన రంగుద్రవ్య సాంద్రతను ఉపయోగించే ఇంటి పరీక్షలను ప్రయోగశాల గ్రేడ్లతో పోల్చలేము.

క్షయకరణ సమయం ఏమి సూచిస్తుంది

ఎక్కువ సమయం పట్టడం అంటే పేర్కొన్న పరిస్థితుల్లో మొత్తం క్రియాశీలత తక్కువగా ఉందని అర్థం. తక్కువ సమయం పట్టడం అంటే మొత్తం క్రియాశీలత ఎక్కువగా ఉందని అర్థం. పాడి పరిశ్రమ బోధన పట్టికలు ఈ సమయాలకు సుమారు గ్రేడ్లు కేటాయిస్తాయి. ఉదాహరణకు, BIS ఆధారంగా రూపొందించిన ఒక పద్ధతిలో 5 లేదా అంతకంటే ఎక్కువ గంటలను చాలా మంచిదిగా, 30 నిమిషాల కంటే తక్కువ సమయాన్ని నాసిరకంగా పరిగణిస్తారు.

ఈ వ్యత్యాసమే ఇక్కడ నేర్చుకోవాల్సిన విషయం. 5 గంటల ఫలితానికి సార్వత్రిక గ్రేడ్ లేదు. దాన్ని నిర్వచించిన విధానానికే అది చెందుతుంది. అందువల్ల సమర్థించదగిన నివేదిక రూపం ఇలా ఉంటుంది:

పేర్కొన్న పద్ధతి ప్రకారం MBRT = X గంటలు; ఇది ఆ పద్ధతిలోని గ్రేడ్‌కు సరిపోతుంది.

MBRT = ప్రతి mLకు X కాలనీ ఏర్పరచే యూనిట్లు అని ఎప్పుడూ చెప్పకూడదు. స్టాండర్డ్ మెథడ్స్ ఆధారంగా రూపొందించిన మార్గదర్శకత్వం, రంగుద్రవ్య క్షయకరణ ఫలితాలను బ్యాక్టీరియా సంఖ్యలుగా నివేదించకూడదని పేర్కొంటుంది. మిథిలీన్ బ్లూతో సరళ రంజన విధానం కూడా వేరే ప్రశ్నకు సమాధానం ఇస్తుంది. అది నాళికలోని మొత్తం క్రియాశీలతకు బదులుగా, సూక్ష్మదర్శినిలో కణాల ఆకారాన్ని చూపిస్తుంది.

ఫలితాల అర్థం మరియు పరిమితుల పట్టిక

ఈ పట్టిక వ్యాసానికి మూల సూచనగా ఉపయోగపడుతుంది. ప్రతి వరుసను పూర్తిగా చదవండి. ఏ ఒక్క గడినీ విడిగా అర్థం చేసుకోకూడదు.

బ్యాక్టీరియా కల్చర్ మాధ్యమాల వంటి వృద్ధి ఆధారిత పరీక్షలే లెక్కింపు, వేరుచేయడానికి మార్గంగా ఉంటాయి. క్షయకరణ నాళిక ప్రాథమిక పరిశీలన చేస్తుంది. ప్లేట్ గుర్తించి, లెక్కిస్తుంది.

భద్రత గురించి ఈ పరీక్ష ఏమి నిరూపించలేదు

నెమ్మదిగా వచ్చిన ఫలితం వ్యాధికారక జీవులు లేవని నిరూపించలేదు. వైద్యపరంగా ప్రాధాన్యం ఉన్న పరిమాణంలో ఉన్న వ్యాధికారక జీవి కూడా మొత్తం ఆక్సిజన్ వినియోగానికి చాలా తక్కువగా తోడ్పడవచ్చు. వ్యాధికారక జీవులను గుర్తించడానికి ఆ జీవులకు ప్రత్యేకమైన పద్ధతులు అవసరం. ప్రస్తుత స్టాండర్డ్ మెథడ్స్, వీటిని సాధారణ నాణ్యత ప్రాథమిక పరిశీలనకు వేరైన విభాగంగా పరిగణిస్తుంది.

ఇది పాశ్చరైజేషన్‌ను నిర్ధారించలేదు. కోడెక్స్ పాల పరిశుభ్రత మార్గదర్శకత్వం ప్రకారం, వేడి చికిత్సను ధ్రువీకరించడానికి ఆల్కలైన్ ఫాస్ఫటేజ్ పరీక్ష లేదా మరొక ధ్రువీకరించిన పద్ధతిని ఉపయోగిస్తారు. తెల్లగా లేదా నీలంగా ఉన్న నాళిక, ఆ బ్యాచ్‌కు గతంలో ఏ ఉష్ణోగ్రతను ఎంతసేపు వర్తింపజేశారో చెప్పదు.

ఇది ఆహార భద్రతను ధ్రువీకరించలేదు. భద్రత అనేది వ్యాధికారక జీవులు, ముందుగానే ఏర్పడిన విషపదార్థాలు, ఔషధ అవశేషాలు, రసాయన కలుషితాలు, శీతల సరఫరా గొలుసు చరిత్ర, నమూనా సేకరణ తరువాత కలుషితం కావడం వంటి అంశాలపై ఆధారపడి ఉంటుంది. కోడెక్స్ పాల భద్రతను ఒక ప్రాథమిక పరీక్ష ఫలితంగా కాకుండా, వరుస నియంత్రణ చర్యల వ్యవస్థగా పరిగణిస్తుంది.

ఆహార ప్రయోగశాల సందర్భం ఇంటి పరీక్షకు సమానం కాదు

పాడి ప్రయోగశాలలో ఈ పరీక్షను అందుకున్న పాలను ప్రాథమికంగా పరిశీలించడానికి, కాలక్రమంలో సరఫరాదారులను పోల్చడానికి లేదా పర్యవేక్షణలో రెడాక్స్ సూక్ష్మజీవశాస్త్రాన్ని బోధించడానికి ఉపయోగిస్తారు. నమూనాల మూలాన్ని గుర్తించవచ్చు. పరీక్ష రసాయనాలు ప్రామాణీకరించబడి ఉంటాయి. ఉష్ణోగ్రతలు నమోదు చేస్తారు. వ్యర్థాలను ప్రయోగశాల వ్యర్థాల పారవేత విధానంలో తొలగిస్తారు.

ఇంటి పరీక్షలో ఇవేవీ ఉండవు. వంటగదిలో కొలిచే పరిమాణాలు సుమారుగా ఉంటాయి. ఆన్‌లైన్‌లో అమ్మే రంగుద్రవ్యాల సాంద్రతల్లో పెద్ద తేడాలు ఉంటాయి. ఇంక్యుబేషన్ తరచుగా క్రమాంకనం చేసిన నీటి స్నానంలో కాకుండా వెచ్చని గదిలో జరుగుతుంది. అయినా రంగు మారుతుంది. ఫలితానికి అర్థాన్ని ఇచ్చే నియంత్రణలన్నీ లేకపోయినా, ఆ రంగు మార్పు ఫలితం నమ్మదగినదనే భావన కలిగిస్తుంది.

మరింత తీవ్రమైన ప్రమాదం ప్రవర్తనకు సంబంధించినది. ఇంట్లో నీలంగా ఉన్న నాళిక ముడి పాలను తాగవచ్చనే భావన కలిగిస్తుంది. కానీ ప్రయోగశాల అదే పాలను ఇంకా ప్లేట్ కౌంట్‌లు, వ్యాధికారక జీవుల పరీక్షలు, అవశేషాల తనిఖీలకు పంపుతుంది. పాలకు మిథిలీన్ బ్లూ పరీక్షను ముడి పాలను స్వీకరించే సమయంలో గ్రేడ్ నిర్ణయించడానికి రూపొందించారు; వాటిని వినియోగానికి అనుమతించడానికి కాదు. వేగవంతమైన రెసాజ్యూరిన్ ప్రాథమిక పరీక్షకూ ఇదే పరిమితి వర్తిస్తుంది: రంగు ఫలితం త్వరగా కనిపిస్తుంది, కానీ వ్యాధికారక జీవుల గురించి సమాధానం ఇవ్వదు.

ప్రయోగశాల పనికి ఒక సంక్షిప్త నియమం

రంగుద్రవ్యం, నిష్పత్తి, ఉష్ణోగ్రత, కలిపే విధానం, కాంతి, ముగింపు స్థితిని ప్రామాణీకరించండి. పద్ధతి పేరు, గ్రేడ్‌తో పాటు సమయాన్ని నివేదించండి. నిల్వ చరిత్ర, సూక్ష్మజీవ సముదాయం రకం, అవశేషాలు, నమూనా సేకరణ నాణ్యతను పరిగణనలోకి తీసుకుని నిమిషాలను అర్థం చేసుకోండి. తక్కువ సమయం పట్టడం మరింత పరిశీలించాల్సిన క్రియాశీలతను సూచిస్తుంది. ఎక్కువ సమయం పట్టడం ఎప్పటికీ భద్రతను ధ్రువీకరించదు.