மெத்திலீன் நீல நிறமூட்டல்: நுண்ணோக்கி முறைகளும் உண்மைப் படத்தொகுப்பும்

மெத்திலீன் நீல நிறமூட்டல், பிரகாசப்புல நுண்ணோக்கியில் மங்கலாகத் தெரியும் செல்லின் அம்சங்களை எளிதாக வேறுபடுத்திப் பார்க்க உதவுகிறது. கன்னச் செல்லின் உட்கருவைக் கண்டறியவோ நுண்ணுயிரிகளின் வெளிவடிவத்தையும் அவை அமைந்துள்ள விதத்தையும் ஆராயவோ இது மாணவர்களுக்கு உதவலாம். ஆனால், நீல நிறப் பொருள் தெரிவது ஒரு கவனிப்பு மட்டுமே. உயிரினத்துக்குப் பெயரிடுவது, அதை அளவிடுவது, அது நோயைக் குறிக்கிறதா என்று முடிவெடுப்பது ஆகியவை தனித்தனிப் பணிகள்.

அட்டைப்படம் காட்சிவேறுபாட்டின் அடிப்படைக் கொள்கையை விளக்குகிறது. கீழுள்ள படத்தொகுப்பில், தனித்தனியாக ஆவணப்படுத்தப்பட்ட மாதிரிகளின் உண்மையான புகைப்படங்கள் அவற்றின் அசல் மூலத் தகவல்களுடன் இடம்பெற்றுள்ளன.

மெத்திலீன் நீலம் எவற்றை வெளிப்படுத்துகிறது?

மெத்திலீன் நீலம் ஒரு காரத்தன்மைச் சாயம்: அதன் நிறமுள்ள அயனி நேர்மின்சுமையைக் கொண்டுள்ளது. மாதிரிகளுக்கு நிறமூட்டுவது குறித்த விளக்கத்தில் OpenStax கூறுவதுபோல, காரத்தன்மைச் சாயங்கள் எதிர்மின்சுமை கொண்ட செல்லுலார் பொருள்களுடன் வினைபுரிந்து, வெளிர்ந்த பின்னணியில் செல்கள் தெளிவாகத் தெரிய உதவலாம். பொருத்தமாகத் தயாரிக்கப்பட்ட மாதிரிகளில், நியூக்ளிக் அமிலங்கள் நிறைந்த பகுதிகளையும் நிறமூட்டியைப் பிணைக்கும் பிற கட்டமைப்புகளையும் மெத்திலீன் நீலம் தெளிவுபடுத்துகிறது.

எளிய நிறமூட்டலில், ஒரு சாயம் காட்சிவேறுபாட்டை அளிக்கிறது. இதனால், வெவ்வேறு உயிரினங்கள் ஒரே உயிரினமாக இல்லாவிட்டாலும் நீலமாகத் தோன்றலாம். தொடக்கத்தில் பயனுள்ள கேள்விகள் விவரிப்புத் தன்மை கொண்டவை: பொருள்கள் வட்டமாக உள்ளனவா அல்லது நீண்டுள்ளனவா, தனித்தனியாக உள்ளனவா அல்லது கொத்தாக உள்ளனவா, சீராக நிறமூட்டப்பட்டுள்ளனவா அல்லது உட்பகுதிகளில் வேறுபாடு தெரிகிறதா? நிறத்தை வகைப்பாட்டின் முடிவாகப் பொருள்கொள்வதற்கு முன், எளிய நிறமூட்டலுக்கும் கிராம் நிறமூட்டலுக்கும் உள்ள வேறுபாட்டைப் பாருங்கள்.

காட்சிவேறுபாடும் பிரிதிறனும் வேறுபட்டவை. காட்சிவேறுபாடு ஒரு பொருளை அதன் சுற்றுப்புறத்திலிருந்து வேறுபடுத்த உதவுகிறது; பிரிதிறன் அருகருகே உள்ள நுண்விவரங்களைத் தனித்தனியாகக் காட்டுகிறது. ஒரு படம் அடர்ந்த நிறத்தில் இருப்பதால், அதிக கட்டமைப்புகள் தெளிவாகப் பிரித்துக் காட்டப்படுகின்றன என்று உறுதியாகக் கூற முடியாது. அதேபோல், ஒவ்வொரு கருமையான துகளையும் செல்லுறுப்பாகக் குறிப்பிடக் கூடாது.

இயல்நிலை மாதிரித் தயாரிப்புகள், நிறமூட்டப்பட்ட ஈர மவுண்டுகள், தடவல்கள்

நிறமூட்டப்படாத, அதாவது இயல்நிலை ஈர மாதிரித் தயாரிப்பு, சாயம் சேர்க்கப்படாத காட்சியைப் பாதுகாக்கிறது. இருப்பினும், அசல் சூழலிலிருந்து அகற்றுவதும் மாதிரியை மாற்றுகிறது. நிறமூட்டப்பட்ட ஈர மவுண்டில், பொருள் மூடுகண்ணாடியின் கீழ் திரவத்தில் இருக்கும்போதே வினைப்பொருள் சேர்க்கப்படுகிறது. நிலைப்படுத்தப்பட்ட தடவலில், பொருள் கண்ணாடித் தகட்டில் பரப்பப்பட்டு, அடுத்தடுத்த செயலாக்கத்திற்கு முன் குறிப்பிட்ட நிலைப்படுத்தல் முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது. OpenStax வழங்கும் மாதிரி தயாரிப்பு மேலோட்டம் ஈர மவுண்டுகளையும் நிலைப்படுத்தலையும் வேறுபடுத்துவதுடன், நிலைப்படுத்தப்பட்ட உயிரினங்கள் ஏன் இயல்பான இயக்கத்தையோ வளர்சிதை மாற்றத்தையோ இனி காட்டுவதில்லை என்பதையும் விளக்குகிறது.

இந்த மாதிரித் தயாரிப்புகள் வெவ்வேறு கேள்விகளுக்குப் பதிலளிக்கின்றன:

வகுப்பறை ஒப்பீட்டிற்கு, கற்பித்தல் நெறிமுறையின்படி தனியாகத் தயாரிக்கப்பட்ட நிறமூட்டப்பட்ட மாதிரியை ஆராய்வதற்கு முன், நிறமூட்டப்படாத மாதிரியைப் பதிவு செய்யுங்கள். ஒளியமைப்பையும் படப்பதிவு அமைப்புகளையும் ஒப்பிடத்தக்க வகையில் வைத்திருங்கள். இரண்டு வெவ்வேறு செல்கள் புகைப்படம் எடுக்கப்பட்டால், அவற்றை எடுத்துக்காட்டுகளாக விவரியுங்கள்; ஒரே செல்லின் முன்-பின் பதிவாகக் குறிப்பிடாதீர்கள்.

நுண்ணோக்கிப் படத்தொகுப்பு: நிறமூட்டப்பட்ட மூன்று உண்மையான மாதிரிகள்

இந்தப் படத்தொகுப்பு, திறந்த உரிமம் கொண்ட மூன்று நுண்ணோக்கிப் படங்களின் எங்களுடைய சொந்தத் தேர்வும் விளக்கமும் ஆகும். மூலப் படங்களின் ஆசிரியர்கள் மாதிரிகளையும் நிறமூட்டிகளையும் அடையாளப்படுத்தியுள்ளனர். அவர்களின் மாதிரிகளை நாங்கள் சுயாதீனமாக உறுதிப்படுத்தவில்லை. படங்கள் வெட்டப்படாமல், அம்சங்கள் சேர்க்கப்படாமல், நிறங்கள் மாற்றப்படாமல், தரவிழப்பற்ற WebP மாற்றங்களாக மறுவெளியிடப்பட்டுள்ளன.

படம் 1: மனிதக் கன்னச் செல்கள்

மாதிரி: மனிதக் கன்னச் செல்கள். நிறமூட்டி: மெத்திலீன் நீலம். உருப்பெருக்கம்: 400×, புகைப்படக் கலைஞர் தெரிவித்தது. அளவுக்கோடு: கிடைக்கவில்லை; அளவுத்திருத்தம் செய்யப்பட்ட பிக்சல் அளவை மூலம் வழங்கவில்லை. Fritzmann2002 எடுத்த புகைப்படம், 2017, மனிதக் கன்னச் செல்கள் (மெத்திலீன் நீல நிறமூட்டல்) என்பதிலிருந்து, CC BY-SA 4.0 உரிமத்தின் கீழ் உள்ளது. இந்த மறுவெளியீட்டிலும் அதே உரிமம் தொடர்கிறது.

தனியாக உள்ள ஒரு செல்லிலிருந்து தொடங்குங்கள்: அதைச் சுற்றியுள்ள நீல சைட்டோபிளாசத்திலிருந்து அதன் அடர்ந்த நிற உட்கருவை வேறுபடுத்துவது எளிது. பிறகு, அதன் கீழே ஒன்றன்மேல் ஒன்று படிந்துள்ள செல்களை ஆராயுங்கள். இவ்வாறு படிவது எல்லையைத் தொடர்ந்து காண்பதைச் சிரமமாக்குவதுடன், ஒரு பகுதியில் அடர்ந்த நிறத்தையும் உருவாக்கலாம். ஒவ்வொரு கருமையான பகுதியையும் உட்கருவாக எண்ணாமல், வெளிவடிவங்களைத் தொடர்ந்து கண்டறியப் பயிற்சி செய்ய இந்தப் படத்தைப் பயன்படுத்துங்கள். கன்னச் செல் கவனிப்பு வழிகாட்டி இந்த மாதிரிக்கான பயிற்சியை மேலும் விரிவுபடுத்துகிறது.

படம் 2: வெங்காயச் செல்கள்

மாதிரி: மூலத்தில் அடையாளப்படுத்தப்பட்டபடி, வெங்காயச் செல்கள். நிறமூட்டி: மெத்திலீன் நீலம். உருப்பெருக்கம்: அசல் கோப்புப் பெயரில் “200x” உள்ளது; இது சுயாதீனமாக உறுதிப்படுத்தப்படவில்லை. அளவுக்கோடு: கிடைக்கவில்லை; அளவுத்திருத்தத் தகவல் வழங்கப்படவில்லை. Alvy16 எடுத்த புகைப்படம், 2019, வெங்காயச் செல் 200x என்பதிலிருந்து, CC BY 4.0 உரிமத்தின் கீழ் உள்ளது.

நீண்ட பிரிவுகள் ஒழுங்கான ஒரு தாள்போன்ற அடுக்கை உருவாக்குகின்றன. அவற்றின் நீண்ட பொதுவான எல்லைகளைப் படம் 1-இல் உள்ள ஒழுங்கற்ற வெளிவடிவங்களுடன் ஒப்பிடுங்கள். தெளிவாகத் தெரியும் கருமையான பொருளையும் காட்சிப்புலத்தின் சீரற்ற ஒளிர்வையும் கவனியுங்கள். ஒவ்வொரு கருமையான படிவின் அடையாளத்தையும் இந்தப் புகைப்படம் உறுதிப்படுத்தவில்லை. நிறத்தை ஏற்கும் அனைத்திற்கும் பெயரிடுவதற்குப் பதிலாக, தயாரிப்பு அல்லது படப்பதிவால் ஏற்பட்ட செயற்கைத் தோற்றங்களையும் நிச்சயமின்மையையும் பயனுள்ள கவனிப்புப் பதிவில் சேர்க்க வேண்டியதன் காரணத்தை இது காட்டுகிறது.

படம் 3: மூலத்தில் Candida spp. என அடையாளப்படுத்தப்பட்ட ஈஸ்ட்

மாதிரி: புகைப்படக் கலைஞரின் தகவலின்படி, Candida spp. நிறமூட்டி: மெத்திலீன் நீலத்துடன் எளிய நேர்மறை நிறமூட்டல். உருப்பெருக்கம்: கிடைக்கவில்லை. அளவுக்கோடு: கிடைக்கவில்லை; அளவுத்திருத்தம் செய்யப்பட்ட பிக்சல் அளவு வழங்கப்படவில்லை. விக்கிமீடியா பயனர் Martunia.g என்ற Marta எடுத்த புகைப்படம், 2021, மெத்திலீன் நீலத்துடன் நேர்மறை நிறமூட்டல் 2 என்பதிலிருந்து, CC BY 4.0 உரிமத்தின் கீழ் உள்ளது.

அடர்த்தியான நீலக் கொத்துகளை, நெருக்கம் குறைவாக உள்ள ஓரப்பகுதிகளுடன் ஒப்பிடுங்கள். பொருள்கள் குறைவாக ஒன்றன்மேல் ஒன்று படிந்துள்ள இடங்களில், தனித்தனி வெளிவடிவங்களைத் தொடர்ந்து காண்பது எளிது. Candida என்ற பெயர் மூலப் பதிவிலிருந்து பெறப்பட்டது; இந்தப் புகைப்படத்தில் செய்யப்பட்ட இன அடையாள ஆய்விலிருந்து அல்ல. இந்தப் படம் உயிர்வாழ்திறன் குறித்த எந்த முடிவையும் வழங்கவில்லை. ஈஸ்ட் உயிர்வாழ்திறன் மற்றும் சுவாசச் சோதனைகளுக்கு அவற்றுக்குரிய சூழ்நிலைகள், கட்டுப்பாட்டு மாதிரிகள், விளக்கம் ஆகியவை தேவை.

அளவைச் சரியாகப் புரிந்துகொள்ளுதல்

இந்தப் படங்கள் காட்சி ஒப்பீட்டிற்கு உதவுகின்றன; மைக்ரோமீட்டர்களில் அளவிடுவதற்கோ படங்களுக்கு இடையே செல்களின் உண்மையான அளவை ஒப்பிடுவதற்கோ அல்ல. தெரிவிக்கப்பட்ட உருப்பெருக்கத்தைக் கொண்டு, விடுபட்ட கேமரா அளவுத்திருத்தத் தகவலை மீட்டெடுக்க முடியாது. ஒரு படத்தின் காட்சி அளவை மாற்றுவது, அது பெரிதாகத் தோன்றும் அளவை மாற்றுகிறது.

உங்கள் சொந்தப் படங்களுக்கு, அறியப்பட்ட தரநிலை அளவையும் தொடர்புடைய ஒளியியல் அமைப்பையும் பயன்படுத்தி அளவீட்டுக்கான அளவுத்திருத்தத்தை நிறுவுங்கள். நுண்ணளவீடு குறித்த Nikon வழிகாட்டி, மேடை மைக்ரோமீட்டர் எவ்வாறு படம் அல்லது விழியாடிக் குறியளவுத் தட்டின் தன்னிச்சையான பிரிவுகளை உண்மையான நீளங்களாக மாற்றுகிறது என்பதை விளக்குகிறது. பொருளருகு வில்லை, கேமரா அமைப்பு, அளவுத்திருத்தம் ஆகியவற்றைப் பதிவு செய்து, அந்தத் தரவுகளிலிருந்து அளவுக்கோட்டைச் சேருங்கள். பாடநூலில் குறிப்பிடப்படும் செல்லின் சராசரி அளவிலிருந்து அளவுக்கோட்டை ஊகிக்காதீர்கள்.

பாட்டிலில் உள்ள கலவை முறைக்குப் பொருந்துகிறதா?

மெத்திலீன் நீலம் எனக் குறிக்கப்பட்ட பாட்டில், முழுமையான ஆய்வக விவரக்குறிப்பு அல்ல. அதன் செறிவு மற்றும் அலகுகள், கரைப்பான், கூடுதல் சேர்மங்கள், திட்டமிடப்பட்ட பயன்பாடு, தயாரிப்புத் தொகுதியின் ஆவணங்கள், வழிமுறைகள் ஆகியவற்றைச் சரிபாருங்கள். வினைப்பொருளின் பாதுகாப்புத் தரவுத் தாள் அபாயங்களை விவரிக்கிறது; திட்டமிடப்பட்ட மாதிரி தயாரிப்பிற்கு அதை எப்படிப் பயன்படுத்துவது என்பதை முறைக்கான வழிமுறைகள் நிர்ணயிக்கின்றன.

இதற்கு ஒரு குறிப்பிட்ட எடுத்துக்காட்டு Merck வழங்கும் லொஃப்லரின் மெத்திலீன் நீலக் கரைசல். உற்பத்தியாளர் இதை நுண்ணோக்கிப் பயன்பாட்டிற்கான வினைப்பொருளாகக் குறிப்பிட்டு, அமிலத்தாங்கு நிறமூட்டலில் இதன் பங்கை எதிர்நிறமூட்டியாக விவரிக்கிறார். கையாளுதல் அல்லது சூடாக்குதலைத் திட்டமிடுவதற்கு “ஒரு நீலத் திரவம்” என்ற தகவல் ஏன் போதாது என்பதை, பட்டியலிடப்பட்டுள்ள அதன் எரியக்கூடிய தன்மையும் காட்டுகிறது. அந்தப் பண்புகள் அந்தக் கலவைக்கே பொருந்தும்; நீரை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒவ்வொரு மெத்திலீன் நீலக் கரைசலுக்கும் தானாகப் பொருந்தாது.

அதேபோல், ஈயோசின் மெத்திலீன் நீல அகார் என்பது குறிப்பிட்ட கலவையாகத் தயாரிக்கப்பட்ட வளர்ப்பு ஊடகம். மாதிரியில் சாதாரண மெத்திலீன் நீலத்தைச் சேர்த்துத் தயாரிக்கும் கண்ணாடித் தகட்டு நிறமூட்டி அல்ல அது. வேறொரு படமெடுப்பு நோக்கத்திற்கு, நுண்ணோக்கிப் பயன்பாட்டில் மெத்திலீன் நீலத்திற்கு மாற்றானவற்றை ஒப்பிடுங்கள்.

தொடக்கநிலை நுண்ணோக்கித் தொகுப்பைப் பயன்படுத்தும்போது, அதில் ஆவணப்படுத்தப்பட்டுள்ள கல்வி முறை, அடையாளம் தெரிந்த தயாரிக்கப்பட்ட கண்ணாடித் தகடுகள், குறிப்பிடப்பட்ட வினைப்பொருள் ஆகியவற்றுடன் தொடங்குங்கள். பாட்டிலின் அடையாளச் சீட்டு தொலைந்துவிட்டாலோ அதன் கலவையை உறுதிப்படுத்த முடியாவிட்டாலோ, அதற்குப் பதிலாகப் பொருத்தமான, ஆவணப்படுத்தப்பட்ட வினைப்பொருளைப் பயன்படுத்துங்கள். கண் பாதுகாப்பைப் பயன்படுத்துவதுடன், அந்தக் குறிப்பிட்ட கலவைக்கு வழங்கப்பட்டுள்ள கையாளும் வழிமுறைகளைப் பின்பற்றுங்கள். மனிதரிடமிருந்து பெறப்பட்ட பொருள்களுக்கும் அடையாளம் தெரியாத சுற்றுச்சூழல் மாதிரிகளுக்கும், கற்பித்தல் ஆய்வகத்தின் மாதிரி கையாளுதல் மற்றும் அகற்றுதல் நடைமுறைகள் தேவை; நிறமூட்டல் அந்த நடைமுறைகளுக்கு மாற்றாகாது.

முடிவுக்கு முன் கவனிப்பை எழுதுங்கள்

“கொத்தாக உள்ள நீல நிற நீள்வட்டப் பொருள்கள்” என்பது ஒரு படத்திற்கு ஆதாரபூர்வமாகக் கூறக்கூடிய விவரிப்பு. “ஒரு குறிப்பிட்ட தொற்று” என்று கூறுவதற்குப் படம் வழங்காத ஆதாரம் தேவை. குறிப்பேட்டில் மாதிரியின் மூலத் தகவல், தயாரிப்பு, நிறமூட்டல் வினை, அடையாளம் காணும் முறை ஆகியவற்றைத் தனித்தனியாகப் பதிவு செய்யுங்கள். இந்த வேறுபாட்டைக் கடைப்பிடிப்பது, எளிய வகுப்பறைப் படத்தைப் பயனுள்ளதாக்குவதுடன், கவர்ச்சிகரமான நுண்ணோக்கிப் படம் ஆதரிக்க முடியாத கூற்றைச் சுமப்பதையும் தடுக்கிறது.