Bluu ya methilini na sklerosisi nyingi: utafiti wa wanyama ulipima nini

Ukitafuta bluu ya methilini kwa MS, utapata makala za utafiti zinazoonekana kujibu swali lilelile. Lakini sivyo. Makala moja iliwapa panya wagonjwa bluu ya methilini kama matibabu. Nyingine haikuitumia kutibu mnyama yeyote. Ilitumia bluu ya methilini kama rangi ya buluu kwenye vipande vyembamba vya uti wa mgongo ili mtaalamu wa patholojia aweze kuona mielini kwa darubini.

Hili ndilo wazo kuu la makala hii nzima. Rangi hii ina majukumu mawili katika biolojia, na hayana kitu cha pamoja isipokuwa chupa. Inapochunguzwa kama dawa inayoweza kutumika, hupewa mnyama aliye hai, na swali ni kama ugonjwa unabadilika. Inapotumika kutia rangi, huwekwa kwenye tishu zisizo hai zilizohifadhiwa kwa kemikali baada ya jaribio, na swali ni jinsi tishu zilivyoonekana. Ukikosa kutofautisha hayo, utasoma sehemu ya mbinu za patholojia kana kwamba ni matokeo ya matibabu.

EAE ni nini, kwa lugha rahisi

Ensefalomielitisi ya majaribio inayosababishwa na kinga kushambulia mwili wenyewe, ambayo kwa kawaida hufupishwa kuwa EAE, ni modeli ya kawaida ya wanyama inayotumika kuwakilisha baadhi ya vipengele vya sklerosisi nyingi. Mtafiti humchanja panya anayeweza kuathiriwa kwa kipande cha protini ya mielini pamoja na kichocheo chenye nguvu cha mwitikio wa kinga. Kisha mfumo wa kinga hushambulia mfumo wa neva wa kati wa mnyama mwenyewe. Panya hupata udhaifu unaoenea kutoka sehemu za chini kwenda juu, ambao ni rahisi kupima kwa alama kwenye kipimo cha 0 hadi 5, kuanzia mkia uliolegea hadi kupooza kwa miguu ya nyuma.

Urahisi huo wa kutoa alama unaeleza kwa nini EAE hutumika sana, na pia kwa nini inaweza kupotosha. MS kwa binadamu hutokea yenyewe, huhusisha malengo mengi zaidi yasiyobainishwa kwa uwazi sawa, na husababisha dalili za kuona, hisia, utambuzi, serebela na mwendo, kwa mwenendo wa kurudia mashambulizi au kuendelea kuzorota. EAE huiga mifumo fulani kama vile uvimbe wa uchochezi, kupotea kwa mielini na jeraha la aksoni katika mazingira yanayodhibitiwa. Haiigi MS kwa kiwango kidogo. Wasomaji wanaotaka kuelewa mfumo wa jumla wanaweza kupitia jinsi bluu ya methilini inavyodhaniwa kufanya kazi katika kiwango cha seli kabla ya kutathmini dai lolote kuhusu ugonjwa fulani.

Makala mbili zilizo hapa chini pia zilitumia antijeni tofauti za EAE, jambo ambalo ni muhimu. Utafiti wa matibabu ulichochea ugonjwa kwa MOG35-55, peptidi fupi kutoka kwenye glikoproteini ya mielini ya oligodendrosaiti. Utafiti wa patholojia ulichochea ugonjwa kwa MP4, muunganiko wa sehemu za protini ya msingi ya mielini na protini ya proteolipidi. Uchaguzi wa aina ya kijenetiki ya panya na antijeni hubadilisha mahali vidonda vinapotokea na mwenendo wa uvimbe wa uchochezi, kwa hiyo tafiti hizi mbili si marudio mawili ya jaribio moja.

Ramani: kutoka modeli hadi swali na mipaka

Liweke jedwali hili wazi ili ulirejelee. Ndilo rejeleo la msingi la makala hii. Kila safu inaeleza swali la kitabibu ambalo modeli inaweza kushughulikia, kilichopimwa hasa, na mahali matumizi ya matokeo kwa binadamu yanapofikia kikomo.

Mtu yeyote anayechunguza kichwa kingine cha habari anaweza kutumia safu hizohizo kwa msaada wa jinsi ya kusoma tafiti za kabla ya majaribio ya binadamu: uliza kuhusu spishi na antijeni, jukumu la kiambato, vipimo vya matokeo, na kama matokeo yanaonyesha mwenendo wa ugonjwa au hali ya tishu katika wakati mmoja.

Matokeo ya matibabu: utoaji wa dawa ulibadilisha nini

Utafiti wa matibabu wa 2016 katika Journal of Neuroimmunology ulitumia panya jike wa C57BL/6, wenye umri wa takribani wiki 8 hadi 10, waliochanjwa kwa 250 micrograms za MOG35-55 kwa kila panya. Baada ya ugonjwa kuchochewa, wanyama wenye EAE waligawiwa kwa nasibu katika kundi la bluu ya methilini au kundi la EAE lisilopewa matibabu, na alama za hali ya kitabibu zilifuatiliwa hadi takribani siku ya 30.

Alama za hali ya kitabibu zilikuwa chini kwa kiasi chenye umuhimu wa kitakwimu kwa panya waliotibiwa kuliko kwa panya wa kundi la udhibiti la EAE kuanzia siku ya 15 hadi siku ya 30, kwa P chini ya 0.01. Uchambuzi wa uti wa mgongo ulionyesha mwelekeo huohuo: wanyama waliotibiwa walikuwa na upenyaji mdogo wa seli za uchochezi, upotevu mdogo wa mielini na upotevu mdogo wa aksoni.

Sehemu ya kipekee ilikuwa mkusanyiko wa vipimo vya ishara za seli. Matibabu yaliongeza uamilishaji wa AMPK na uzalishaji wa SIRT1 na kukandamiza uamilishaji wa NF-kB, swichi kuu ya uvimbe wa uchochezi. Kwa upande wa kinga inayojifunza kutambua malengo, yalipunguza mwitikio wa Th17 na kuimarisha mwitikio wa Treg. Kwa hiyo, mnyororo unaopendekezwa ni kutoka bluu ya methilini kwenda AMPK na SIRT1, kisha kupungua kwa ishara za NF-kB, kisha mabadiliko kutoka Th17 ya uchochezi kuelekea Treg inayodhibiti kinga, kisha jeraha dogo zaidi la tishu, na hatimaye alama za chini.

Mnyororo huo ni tafsiri, si mfuatano wa sababu na matokeo uliothibitishwa. Utafiti unaonyesha dawa, mabadiliko ya ishara na kuboreka kwa ugonjwa vikienda pamoja. Hauthibitishi kwamba AMPK na SIRT1 ndizo zinazosababisha manufaa yote, na maandishi yaliyoorodheshwa kwa umma hayaelezi dozi halisi ya milligram per kilogram, njia ya utoaji, siku ya kuanza au muda wa utoaji kwa uwazi wa kutosha kurudia utaratibu huo kwa kutumia muhtasari pekee. Ichukulie namba yoyote ya dozi inayotajwa kuhusu makala hii kwenye ukurasa wa mauzo kuwa haijathibitishwa isipokuwa inarejelea mbinu katika maandishi kamili. Ushahidi mpana zaidi kuhusu bluu ya methilini kwa binadamu ndio mahali pa kuangalia kama ishara hii ya awali ya kinga iliwahi kuendelezwa hadi kupata data za kitabibu.

Matokeo ya patholojia: tishu zilionyesha nini katika miezi sita

Utafiti wa MP4 wa 2015 katika PLoS ONE ulitumia panya jike wa C57BL/6 waliochanjwa kwa 200 micrograms za MP4 katika kichocheo kamili cha kinga cha Freund, pamoja na toksini ya pertussis siku ya chanjo na tena baada ya saa 48. Hakuna mnyama aliyepewa bluu ya methilini kama dawa. Baada ya tishu kuhifadhiwa kwa kemikali na kupachikwa katika nyenzo ya kuzikatia, vipande vya uti wa mgongo vilivyokatwa kwa upana na vyenye unene wa micrometer moja vilitiwa rangi kwa bluu ya methilini kwa uchunguzi wa darubini ya mwanga. Njia ya nyuzinyuzi za neva iliyo upande wa mbele na pembeni pia ilichunguzwa kwa darubini ya elektroni ili kuona maelezo madogo zaidi.

Sampuli za tishu zilichukuliwa katika hatua tatu: kilele cha awamu kali kwa panya 7, miezi mitatu baada ya kuanza kwa ugonjwa kwa panya 5, na miezi sita baada ya kuanza kwa ugonjwa kwa panya 10. Wastani wa alama za hali ya kitabibu katika hatua hizo ulionekana karibu sawa, takribani 1.7 hadi 1.8 kwenye kipimo cha 0 hadi 5. Tishu zilionyesha hali tofauti. Uharibifu wa mielini pekee uliongezeka kutoka takribani nyuzinyuzi 569,000 kwa kila millimeter ya mraba katika kilele cha awamu kali hadi takribani 1,496,000 katika miezi sita. Ulinganisho wa awamu kali na kipindi cha muda mrefu ulikuwa na umuhimu wa kitakwimu, kwa P sawa na 0.027. Uharibifu wa pamoja wa mielini na aksoni uliongezeka takribani mara mbili kufikia miezi sita. Nyuzinyuzi zilizokuwa zikitengeneza tena mielini zilibaki chini ya asilimia moja katika kila hatua, jambo linalopunguza matumaini kuhusu ukarabati.

Jeraha la aksoni lilifuata mwelekeo wenye umbo la U: lilikuwa kubwa katika kilele cha awamu kali, dogo zaidi katika miezi mitatu, na kubwa zaidi kuliko hatua zote katika miezi sita. Lilihusiana na kuvimba kwa mitokondria na kupungua kwa nafasi kati ya nyuzinyuzi za neva. Waliotathmini tishu hawakujua alama wala hatua ya ugonjwa, jambo linaloimarisha tafsiri kwamba alama za hali ya kitabibu hazikuonyesha kiwango kamili cha uharibifu wa kimuundo uliokuwa ukiendelea.

Kutolingana huko ndiko mchango halisi wa utafiti huu kwa msomaji anayehusika na MS. Alama ya ulemavu iliyobaki thabiti haikumaanisha tishu zilibaki thabiti. Pia kunaonyesha kwa nini makala hii haiwezi kuunga mkono dai lolote la matibabu ya MS kwa bluu ya methilini. Ilipima athari za muda, si matibabu.

Kwa nini hakuna utafiti unaothibitisha manufaa kwa wagonjwa

Ichukulie kila makala kuwa inajibu vizuri swali lenye mipaka finyu, lakini haijibu kabisa swali kuhusu wagonjwa.

Kwanza, chanzo kinatofautiana. EAE huchochewa kwa makusudi kwa antijeni iliyobainishwa na kichocheo cha kinga. MS kwa binadamu hutokea yenyewe ikiwa na mkusanyiko mpana zaidi wa vipengele vya kinga, ukiwemo seli T, seli B, kinga ya asili na seli za glia zinazokaa katika mfumo wa neva. Kiambato kinachobadilisha mwitikio unaoelemea MOG kwa panya si lazima kibadilishe mwitikio huo mpana zaidi kwa binadamu.

Pili, namna ugonjwa unavyojitokeza inatofautiana. Udhaifu unaoenea kutoka mkiani hadi miguu ya nyuma ya panya ni kipimo rahisi. Unafupisha utofauti wa MS kwa binadamu kuwa namba moja ya uwezo wa mwendo. Mara nyingi dawa hubadilisha alama za EAE za muda mfupi bila kubadilisha mwenendo wa ugonjwa kwa binadamu. Ndiyo maana EAE ni zana ya uchunguzi wa awali na ya kuelewa utaratibu wa utendaji, badala ya kuwa kliniki ndogo.

Tatu, kiwango cha mwili kukabiliwa na dawa na muda wa utoaji havijatatuliwa. Utoaji unaoendelea wa dawa unaoanza mapema katika jaribio la panya la siku 30 si sawa na matumizi ya muda mrefu kwa kumeza kwa mtu mwenye ugonjwa ambao tayari umejengeka. Wala hakuna utafiti kati ya hii miwili uliopima viwango vya dawa katika mfumo wa neva. Bila kiungo hicho, hakuna daraja linalounganisha mkusanyiko kwenye sahani ya maabara au dozi kwa panya na utaratibu wa matumizi kwa binadamu.

Nne, makala hizi mbili hazirudii na kuthibitisha matokeo ya kila moja. Antijeni tofauti, maswali tofauti, vipimo tofauti vya matokeo, na katika moja hakuna matibabu kabisa. Kuzitaja pamoja kama tafiti mbili zenye matokeo chanya ya matibabu ya MS ni kosa la kuweka vitu katika kundi lisilofaa.

Maana yake kwa wasomaji wanaopima ushahidi

Hakuna utaratibu uliothibitishwa wa kutumia bluu ya methilini kwa MS katika makala hizi. Utafiti wa matibabu unaunga mkono utafiti zaidi kuhusu AMPK, SIRT1, NF-kB na uwiano wa Th17 na Treg katika MOG EAE. Utafiti wa patholojia ni ukumbusho kwamba jeraha la tishu linaweza kuendelea huku alama zikionekana kutobadilika, na kwamba bluu ya methilini katika sehemu ya mbinu wakati mwingine humaanisha chupa ya rangi badala ya dawa. Wasomaji wanaofuatilia utafiti unaoendelea kuhusu sklerosisi nyingi wanapaswa kukumbuka tofauti hiyo kati ya rangi na dawa. Maswali ya usalama, yakiwemo hatari zinazohusu damu na mwingiliano na dawa nyingine, yanapaswa kujadiliwa na mtaalamu wa afya pamoja na data za jumla za usalama wa bluu ya methilini kabla mtu yeyote hajachukua hatua kwa kutegemea vichwa vya habari vya maabara.

Hitimisho linaweza kutolewa kwa sentensi moja. Utafiti mmoja uliorejelewa uliwapa panya wenye MOG EAE bluu ya methilini na kuripoti ugonjwa usio mkali sana pamoja na mabadiliko ya kinga kuelekea kupunguza uvimbe wa uchochezi, huku utafiti mwingine uliorejelewa haukutoa dawa yoyote na ulitumia bluu ya methilini kutia rangi uti wa mgongo pekee wakati ukiandika ushahidi wa miezi sita ya uharibifu unaokusanyika wa mielini na aksoni, kwa hiyo tafiti hizi mbili hazithibitishi kwamba bluu ya methilini husaidia MS kwa binadamu.