Agari EMB kundrejt agarit MacConkey: përzgjedhja dhe interpretimi i mjediseve

Një student inokulon me vijëzim të njëjtën mostër uji në dy pjata. Në njërën shfaqen koloni të errëta me shkëlqim metalik të gjelbër. Në tjetrën shfaqen koloni rozë të ndezura me një aureolë të turbullt. Të dyja pjatat u inokuluan nga i njëjti tub, u inkubuan krah për krah dhe u lexuan në të njëjtën orë. Studenti pyet se cila pjatë është e saktë.

Të dyja pjatat janë të sakta. Ato u përgjigjen pyetjeve të ndryshme. Konfuzioni lind kur të dy mjediset trajtohen si teste të këmbyeshme për bakteret intestinale. Ato kanë një qëllim të përbashkët, që është përzgjedhja e organizmave enterikë Gram-negativë dhe dallimi i fermentuesve të laktozës nga jofermentuesit, por këtë qëllim e realizojnë me kimi të ndryshme dhe logjikë vizuale të ndryshme. Pasi të kuptoni dy konceptet themelore, përzgjedhja e pjatës dhe leximi i kolonive bëhen rutinë.

Përgjigjja e shkurtër

Agari EMB përdor dy ngjyrues, eosin Y dhe methylene blue, që kryejnë dy funksione njëkohësisht: frenojnë rritjen e organizmave Gram-pozitivë dhe precipitojnë rreth prodhuesve të fuqishëm të acidit për të krijuar koloni të errëta, klasikisht me një shkëlqim metalik të gjelbër për Escherichia coli. Agari MacConkey i ndan funksionet: kripërat biliare së bashku me crystal violet frenojnë Gram-pozitivët, laktoza shërben si substrat për fermentim dhe neutral red sinjalizon acidin si koloni rozë ose të kuqe. Nëse detyra është një demonstrim i qartë presumptiv i E. coli, EMB ka avantazhin e vet. Nëse detyra është një ndarje e qartë rozë kundrejt pa ngjyrë e fermentuesve të laktozës nga jofermentuesit, veçanërisht në rrjedhat e punës me mostra feçesh ose urine, MacConkey zakonisht lexohet më thjesht. Asnjëra pjatë nuk identifikon një organizëm vetëm nga ngjyra.

EMB: ngjyrues që përzgjedhin dhe sinjalizojnë njëkohësisht

Koncepti i EMB kombinon përzgjedhjen dhe indikimin në të njëjtat molekula. Protokolli i ASM për agarin eosin methylene blue e përshkruan EMB si selektiv dhe diferencial, ku çifti i ngjyruesve frenon shumë organizma Gram-pozitivë, ndërsa fermentimi i laktozës nxit përthithjen dhe precipitimin e ngjyruesit. Një formulim standard Levine përmban pepton, laktozë, fosfat, eosin Y, methylene blue dhe agar, siç renditet në metodën FDA BAM për agarin Levine EMB. Vini re se recetat më të vjetra të EMB ndonjëherë shtonin saharozë krahas laktozës, ndërsa Levine EMB përmban laktozë pa saharozë, prandaj regjistroni formulimin që përdor laboratori juaj.

Leximi i EMB do të thotë të lexosh sjelljen e ngjyruesit. Fermentimi i fuqishëm i laktozës prodhon mjaftueshëm acid për të nxitur precipitimin intensiv të ngjyruesit, duke i dhënë E. coli qendra blu-të zeza të errëta dhe, në rastin klasik, një shkëlqim metalik të gjelbër në dritën e reflektuar. Fermentuesit më të dobët, si Enterobacter dhe Klebsiella, zakonisht rriten si koloni mukoide rozë deri në vjollcë pa atë shkëlqim. Jofermentuesit si Salmonella, Shigella dhe Proteus përgjithësisht rriten si koloni pa ngjyrë ose të tejdukshme, sepse nuk prodhojnë rritjen e vrullshme të aciditetit që precipiton ngjyruesit. Gram-pozitivët zakonisht frenohen, megjithëse shkalla e frenimit ndryshon sipas shtamit dhe produktit. Kimia e plotë e përgatitjes së ngjyruesve, përfshirë arsyen pse methylene blue sillet si ngjyrues kationik, i përket një diskutimi të veçantë për formulimet e ngjyruesve, ndërsa konteksti i përgjithshëm i mikroskopisë gjendet në një atlas të metodave të ngjyrosjes. Ky artikull përqendrohet te përzgjedhja dhe leximi i pjatave.

Figura më sipër është ilustruese. Ajo tregon logjikën vizuale që duhet pritur: koloni të errëta me shkëlqim, lloje mukoide rozë dhe lloje të zbehta në EMB, kundrejt llojeve rozë dhe të zbehta në MacConkey. Përdoreni për të mësuar modelin dhe më pas konfirmoni çdo vlerësim duke e krahasuar me kontrolle të fotografuara dhe me fletëudhëzuesin e produktit për mjedisin e saktë që keni në laborator.

MacConkey: funksione të ndara, rregull vizual më i thjeshtë

Koncepti i MacConkey ia cakton secilin funksion një përbërësi të veçantë. Protokolli i ASM për agarin MacConkey paraqet të njëjtin koncept selektiv dhe diferencial, ndërsa metoda FDA BAM për agarin MacConkey rendit përbërësit funksionalë: peptone, laktozë, kripëra biliare, kripë, neutral red, crystal violet dhe agar. Kripërat biliare së bashku me crystal violet përzgjedhin kundër Gram-pozitivëve. Laktoza siguron substratin e fermentimit. Neutral red vepron si tregues i pH-së, duke u bërë rozë deri në të kuq aty ku formohet acid, ndonjëherë me bilë të precipituar rreth fermentuesve të fuqishëm.

Rregulli i leximit është qëllimisht i thjeshtë: rozë do të thotë fermentues i laktozës, ndërsa pa ngjyrë ose i zbehtë do të thotë jofermentues. E. coli shfaqet rozë deri në të kuqe, shpesh me një aureolë të precipitatit biliar. Klebsiella dhe Enterobacter shfaqen rozë dhe shpesh mukoide për shkak të kapsulave të tyre. Salmonella, Shigella, Proteus dhe shumë bacile të tjera Gram-negative shfaqen pa ngjyrë. Një përfitim anësor është i rëndësishëm në laboratorët mësimorë: kripërat biliare përgjithësisht reduktojnë përhapjen e Proteus, kështu që kolonitë e izoluara përftohen më lehtë në MacConkey sesa në mjedise joselektive, megjithëse frenimi nuk është absolut dhe ekzistojnë alternativa pa kripë kur kontrolli i përhapjes është përparësia.

Arsyeja molekulare pse ngjyruesit sillen në këtë mënyrë lidhet me ngarkesën dhe strukturën. Methylene blue është një ngjyrues fenotiazinik kationik, struktura dhe vetitë e të cilit shpjegojnë afinitetin e tij për sipërfaqet bakteriale acide, i njëjti afinitet që vepron kur precipiton në zonat acide në EMB.

Krahasimi me një shikim

Lexojeni tabelën si një procedurë vendimmarrjeje. Kur ushtrimi kërkon që studentët të shohin një gradient të fuqisë së fermentimit me një rezultat përfundimtar të theksuar, EMB e tregon atë. Kur ushtrimi kërkon një ndarje të shpejtë binare përpara konfirmimit biokimik, MacConkey e tregon atë.

Cili mjedis për cilën mostër

Për ushtrimet me ujë që synojnë njohjen presumptive të koliformëve fekalë ose E. coli, EMB është tërheqës sepse shkëlqimi është vizualisht i dallueshëm. MacConkey gjithashtu përdoret për Gram-negativët enterikë dhe ka pasur përdorim historik në analizat e ujit, por asnjëra pjatë nuk zëvendëson një metodë rregullatore për ujin, e cila mund të specifikojë mjedise si modified mTEC ose MI, në varësi të testit. Kontrolloni metodën që laboratori juaj duhet të ndjekë.

Për ndarjet e tipit të mostrave të feçeve midis fermentuesve dhe jofermentuesve, MacConkey në përgjithësi është më i dobishëm nga të dy. Puna praktike me mostra feçesh për Salmonella ose Shigella zakonisht shton mjedise enterike më selektive si XLD ose Hektoen enteric, në vend që të mbështetet vetëm te MacConkey.

Për mësimdhënien me mostra urine që imiton rrjedhën klinike të punës, kombinoni MacConkey me blood agar. MacConkey siguron ndarjen e hershme të Gram-negativëve, ndërsa blood agar rikuperon organizmat që MacConkey frenon. Ky kombinim është standard në përshkrimet klinike të konfigurimit të kulturës së urinës.

Për mësimdhënie të pastër të konceptit, përdorini të dy. EMB mëson se fuqia e fermentimit ka rëndësi dhe se një molekulë mund të kryejë dy role. MacConkey mëson dizajnin modular: selektuesi, substrati dhe treguesi mbahen të ndarë. Studentët që inokulojnë krah për krah në të dy mjediset një E. coli të njohur, një Klebsiella aerogenes të njohur dhe një Salmonella të njohur rrallë i ngatërrojnë përsëri dy logjikat.

Gabime leximi që përsëriten çdo semestër

Gabimi më i zakonshëm është identifikimi vetëm nga ngjyra. Rozë në MacConkey mund të jetë E. coli, Klebsiella, Enterobacter ose një fermentues tjetër. Pa ngjyrë mund të jetë Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas ose një jofermentues tjetër. Ngjyra është një fenotip depistues që orienton punën konfirmuese, si ngjyrosja Gram, oksidaza, panelet biokimike ose identifikimi instrumental, jo emër i një specieje.

Gabimi i dytë është interpretimi i tepruar i mungesës së shkëlqimit. Disa koloni reale të E. coli, veçanërisht ato të izoluara, prodhojnë pak ose aspak shkëlqim metalik në EMB. Mungesa e shkëlqimit nuk e përjashton E. coli dhe prania e shkëlqimit nuk e vërteton atë. Trajtojeni shkëlqimin si një tregues presumptiv.

Gabimi i tretë është krahasimi i pjatave me kohë inkubimi të ndryshme. Fermentuesit e vonshëm të laktozës mund të bëhen rozë në MacConkey pas inkubimit të zgjatur, gjë që e mjegullon ndarjen e qartë midis fermentuesve dhe jofermentuesve. Lexojini në orën e përcaktuar nga laboratori dhe regjistroni kohën e inkubimit së bashku me rezultatin.

Gabimi i katërt është leximi i rritjes së përzier si një organizëm i vetëm. Një koloni rozë pranë një kolonie pa ngjyrë përfaqëson dy fenotipe, jo një gjendje të ndërmjetme. Zgjidhni koloni të izoluara mirë dhe përpunoni secilin morfotip veçmas. Tekstura mukoide krijon një kurth të ngjashëm: si Klebsiella ashtu edhe Enterobacter mund të duken mukoide, prandaj vetëm kapsula nuk përcakton kurrë emrin. Organizmi që dikur mësohej si Enterobacter aerogenes tani klasifikohet si Klebsiella aerogenes, gjë që shpjegon pse tabelat e vjetra dhe etiketat më të reja duket sikur nuk përputhen.

Kontrollet dhe një rregull përmbyllës

Përdorni kontrolle të fotografuara ose të freskëta në çdo seancë: E. coli për reaksionin e fortë fermentues, Klebsiella aerogenes për fermentim mukoid pa shkëlqimin klasik, një shtam Salmonella për reaksionin pa ngjyrë të jofermentuesit dhe Staphylococcus aureus për të konfirmuar frenimin e Gram-pozitivëve në produktin tuaj të saktë. Përputhni numrat e shtameve dhe kriteret e pranimit me fletëudhëzuesin e prodhuesit, sepse selektiviteti ndryshon me përmbajtjen e bilës, crystal violet dhe ngjyruesve.

Mbani mend një fjali në laborator. EMB përdor ngjyrues që njëkohësisht përzgjedhin dhe sinjalizojnë, duke dhënë një sinjal të theksuar për E. coli me koston e një leximi më të nuancuar. MacConkey e ndan përzgjedhjen nga sinjalizimi, duke dhënë një ndarje të thjeshtë rozë kundrejt të zbehtë me koston e më pak detajeve mbi fermentimin. Zgjidhni mjedisin koncepti i të cilit përputhet me pyetjen, konfirmoni ngjyrën me testet e duhura dhe të dyja pjatat ndalojnë së konkurruari dhe fillojnë të plotësojnë njëra-tjetrën.