Кто разработал фиолетовую окраску крови? Метиленовый синий, Малаховский, Романовский и Гимза

Эозин красный. Метиленовый синий синий. Смешайте их, нанесите смесь на высушенную плёнку крови, и части плёнки станут фиолетовыми.

Не все части. В хорошем препарате ядра белых кровяных клеток приобретают красно-фиолетовый цвет, а внутри малярийного паразита хроматин получает тот же цвет, тогда как окружающие эритроциты остаются розовыми, а цитоплазма — серо-синей. Фиолетовый цвет позволяет клеткам различать себя между собой.

Ни в одном флаконе нет фиолетового красителя. Цвет появляется только тогда, когда определённый продукт распада метиленового синего встречается с эозином на предметном стекле, и в 1880-х и 1890-х годах никто не знал о существовании этого продукта, не говоря уже о его природе. Люди, которые искали этот цвет, работали с нечистыми красителями, по отдельности, без надёжного способа узнать, что находилось во флаконе после того, как он два месяца простоял на полке.

Именно поэтому у вопроса в заголовке есть более одного обоснованного ответа, и именно поэтому ответ изменился в 2011 году.

Показание, которое менялось вместе со смесью

Окраска не была изобретена. Она накапливалась. Каждое изменение смеси давало ровно один новый фрагмент видимой информации, и последовательность этих фрагментов — самый ясный способ прочитать эту историю.

Важен узор в последней колонке. Каждый шаг расширял диапазон цветов, и каждое расширение делало видимой ещё одну структуру. Фиолетовый цвет — не украшение техники; это разница между тем, чтобы увидеть наличие паразита, и тем, чтобы увидеть, из чего он состоит. Как сам краситель прошёл путь из красильного производства BASF в медицину — это более длинная история со своими документами. Полная последовательность выше с источником для каждой записи хранится как хронология участников с источниками.

Рисунок: те же шесть смесей, показанные как то, что находилось в сосуде, и то, что из него получалось. Круги содержат красители; блоки под ними показывают цвета, которые эти красители могли создавать в плёнке крови. Ни одна смесь до 1890 года не создаёт красно-фиолетовый блок, и ни одна после этого года не обходится без него.

Человек, который использовал буру намеренно

Эрнст Малаховский был врачом в Бреслау, ныне Вроцлав, который всю карьеру работал в частной практике и в небольшой клинике, которую он вёл с коллегой, выполняя лабораторную работу в свободное время. Он родился в Стржельно 12 марта 1857 года, изучал медицину в Университете Бреслау и с 1882 по 1887 год работал ассистентом по внутренней медицине в госпитале Всех Святых, тогда второй крупнейшей больнице Германии.

Он начал в 1888 году с двойной окраски Хенцинского и Плена. В препарате, сделанном в 1889 году, он увидел, что хроматин ядра плазмодия окрашивается иначе, чем цитоплазма, а затем обнаружил, что не может воспроизвести результат. Он попробовал подкислить метиленовый синий, что ухудшило ситуацию. Он попробовал сделать его щелочным с помощью буры, и это срабатывало каждый раз. Он публично продемонстрировал метод 15 июня 1890 года и опубликовал более полное описание в августе 1891 года, включая инструкцию по использованию буры. Он отметил, что окрашивание занимало двадцать четыре часа и что результаты легко воспроизводились.

Двадцать четыре часа — это долго для диагностической лаборатории, и его статья не уделяла особого внимания красно-фиолетовому цвету ядра паразита. Какова бы ни была причина, никто не применял намеренное подщелачивание метиленового синего до тех пор, пока Нохт не сделал это снова в 1898 году. Малаховский больше никогда не писал об окраске крови.

Причина того, что о нём было так мало известно до недавнего времени, связана с архивами, а не с тайной. В медицинской литературе почти не осталось следов его жизни, а сохранившиеся материалы прошли через один путь. Его дочь Мари покинула Германию и уехала в Лондон в 1939 году, служила в британской армии и поселилась в Канаде, а её семейный архив оказался в Институте Лео Бека в Нью-Йорке. Её брат Лео погиб в Первой мировой войне. Её сестра Ева была депортирована из Бреслау в транзитный лагерь Избица в апреле 1942 года и больше не вернулась. Её мать Хедвиг покончила с собой 22 апреля 1942 года, не желая ждать той же депортации. Малаховский умер в 1934 году, до всех этих событий.

Семейная история, заканчивающаяся таким образом, перестаёт цитироваться. Две статьи, вернувшие Малаховского в историю развития окраски, обе опубликованные в 2011 году, были составлены на основе архивных документов из Познани и Вроцлава и бумаг Мари из Нью-Йорка.

Заплесневелый флакон и удачливый русский

Дмитрий Романовский изучал медицину в Военно-медицинской академии в Санкт-Петербурге и большую часть карьеры работал над малярией. В 1890 году он опубликовал метод, который на бумаге почти совпадал с методом Хенцинского: неизменённый метиленовый синий и эозин, с немного большим количеством эозина.

В сентябре 1891 года он опубликовал метод, который сделал его имя известным, и важная деталь была спрятана в инструкции. Лучшие результаты он получал с die vorräthige Methylenlösung, запасным раствором метиленового синего, который стоял более двух месяцев с растущей плесенью. Плесень и время выдержки частично деметилировали краситель. Романовский этого не знал и не мог контролировать, а другие исследователи, пытавшиеся повторить его метод, не получали фиолетовый цвет. Его диссертация была подана в Санкт-Петербурге в июне 1891 года, поэтому стандартное описание считает 1891 год годом открытия.

Демонстрация Малаховского состоялась в июне 1890 года, более чем за год до этого, и его метод работал намеренно.

Почему эпоним достался не тому человеку

Аргументация в пользу Малаховского была собрана Кристиной Крафтс, Эрнстом Хемпельманном и Барбарой Олексин и основана на четырёх фактах. Дата публичной демонстрации: июнь 1890 года против сентября 1891 года. Слово намеренно против слова случайно. Тот факт, что Малаховский опубликовал свой метод вместе с бурой, тогда как метод Романовского зависел от неконтролируемого фактора. И наблюдение, что описание ядра плазмодия вместе с фиолетовым цветом, который его показывал, фактически исчезло из литературы на семь лет, потому что никто не мог воспроизвести случайную версию.

Они прямо формулируют вывод. В биографической статье они называют это присвоение "травестией" и цитируют Ральфа Лилли, который в 1978 году написал, что "возможно, нам следует называть это семейство красителей окрасками Малаховского".

Это утверждение оспаривается, как обычно бывает с вопросами приоритета, и форму спора стоит объяснить, а не разрешать. Спор о приоритете должен определить, что именно было открытием. Если открытием был фиолетовый цвет, Малаховский имеет более раннюю документированную демонстрацию. Если открытием был опубликованный метод, оба человека опубликовали свои работы в 1891 году, а эпоним достался Романовскому. Если открытием было объяснение, ни один из них не может претендовать на него, потому что никто не знал, что созревание является деметилированием, и никто не мог объяснить, почему вообще появляется цвет. Последний момент часто пропускают популярные рассказы. Активным компонентом была примесь, которую никто не идентифицировал, а первый человек, получивший цвет намеренно, сделал это с помощью воспроизводимого эмпирического рецепта, а не благодаря пониманию того, что делает этот рецепт.

Две статьи 2011 года являются наиболее полным опубликованным изложением аргумента в пользу Малаховского, и обе доступны бесплатно в PubMed: большой обзор в PMID 21235291 и биографическая статья в PMID 21660627. Запись PubMed для обзора также содержит комментарий к нему, опубликованный в том же журнале позже в том же году, 86(5):366, что напоминает: спор был оспорен в печати сразу после появления.

Спор не касается химии. Все участники согласны с тем, что представляет собой фиолетовый цвет и какие компоненты его создают. Разногласие касается того, кто пришёл к этому первым, и того, можно ли считать достижением случайный результат, который никто не мог повторить.

Что дали более поздние имена

Если Малаховский первым получил фиолетовый цвет, почему окраска носит имена Романовского, Райта и Гимзы?

Потому что окраска, которая работает один раз в руках своего создателя, ещё не является реагентом. Позднейшая работа превратила капризную смесь в то, чем мог пользоваться техник в другой стране во вторник.

Нохт пришёл к этому благодаря рассуждению. После того как он не смог получить надёжный результат с простым нейтральным красителем, он заключил, что фиолетовый должен происходить из чего-то в метиленовом синем, что не является самим метиленовым синим, и начал искать это вещество. Унна уже заметил, что состарившиеся растворы метиленового синего окрашивали гранулы тучных клеток в красный цвет, и предположил, что при созревании красителя образуется новое вещество. Бернтсен показал в 1885 году, что щелочные условия удаляют метильные группы из метиленового синего, а эти продукты мы теперь называем азурами. Нохт экстрагировал активную фракцию хлороформом и мог назвать её только Rot aus Methylenblau, красное из метиленового синего; Михаэлис назвал её azure I в 1901 году. Дженнер решил логистическую проблему. Растворение осадка метиленового синего и эозина в абсолютном метаноле давало единый стабильный раствор, который фиксировал плёнку одновременно с окрашиванием и устранял тепловую фиксацию. Лейшман и Рейтер объединили полихромный краситель со спиртовым растворителем и получили одновременно стабильность и фиолетовый цвет. Райт заменил двенадцатичасовую инкубацию при 65 °C и десятидневное выдерживание на час в проточном паре. Гимза полностью отказался от зависимости от случайно созревшего раствора, используя измеренные количества известных красителей с глицерином в метаноле, чтобы продукт выдерживал тропическую жару. Он никогда не публиковал способ получения чистого метиленового Azure. Он прод