ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਖਮੀਰ ਦੀਆਂ ਜਾਂਚਾਂ: ਜੀਵਤ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਬਨਾਮ ਸ਼ਵਸਨ ਦਾ ਸਮਾਂ ਮਾਪਣਾ

ਲੈਬ ਦੀ ਮੇਜ਼ ਉੱਤੇ ਦੋ ਟਿਊਬਾਂ ਪਈਆਂ ਹਨ। ਦੋਵੇਂ ਨੀਲੀਆਂ ਹਨ। ਇੱਕ ਵਿੱਚ, ਸੂਖਮਦਰਸ਼ੀ ਹੇਠ ਨੀਲੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦਾ ਮਤਲਬ ਮਰਿਆ ਹੋਇਆ ਖਮੀਰ ਹੈ। ਦੂਜੀ ਵਿੱਚ, ਟਿਊਬ ਦਾ ਨੀਲੇ ਤੋਂ ਰੰਗਹੀਣ ਹੋਣਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਖਮੀਰ ਜੀਵਤ ਹੈ ਅਤੇ ਸ਼ਵਸਨ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹੈ। ਰੰਗਕ ਇੱਕੋ ਹੈ, ਪਰ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਅਰਥ ਉਲਟ ਹਨ। ਦੋਵਾਂ ਜਾਂਚਾਂ ਨੂੰ ਰਲਗੱਡ ਕਰਨ ਨਾਲ ਹਰ ਨਤੀਜਾ ਉਲਟ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਇਹ ਫ਼ਰਕ ਹੀ ਇਸ ਪੂਰੇ ਲੇਖ ਦਾ ਵਿਸ਼ਾ ਹੈ। ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਇੱਕ ਰੈਡੌਕਸ ਰੰਗਕ ਹੈ: ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਇਹ ਨੀਲਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਅਪਚਯ ਹੋਣ ਉੱਤੇ ਇਹ ਰੰਗਹੀਣ ਲਿਊਕੋਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਬਣ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਜੀਵਤਤਾ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਇਸ ਰਸਾਇਣਕ ਗੁਣ ਨੂੰ ਸੂਖਮਦਰਸ਼ੀ ਹੇਠ ਇੱਕ ਛੋਟੀ ਸਮੇਂ-ਝਲਕ ਵਿੱਚ ਵਰਤਦੀ ਹੈ। ਸ਼ਵਸਨ ਦਾ ਪ੍ਰਯੋਗ ਇਸੇ ਗੁਣ ਨੂੰ ਪੂਰੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਸਮਾਂ ਮਾਪ ਕੇ ਕੀਤੀ ਜਾਣ ਵਾਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤਦਾ ਹੈ। ਹਰੇਕ ਲਈ ਆਪਣੀ ਕਾਰਜਵਿਧੀ, ਆਪਣੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਆਪਣੀ ਆਲੋਚਨਾਤਮਕ ਜਾਂਚ ਲੋੜੀਂਦੀ ਹੈ।

ਜੀਵਤਤਾ ਦੀ ਗਿਣਤੀ: ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਰੰਗੋ, ਤੁਰੰਤ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰੋ

ਬੀਅਰ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਣ ਵਾਲੀ ਕਾਰਜਵਿਧੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਮਿਆਰੀਕ੍ਰਿਤ ਰੂਪ ਹੈ। 2% ਸੋਡੀਅਮ ਸਿਟਰੇਟ ਵਿੱਚ 0.01% w/v ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਤਿਆਰ ਕਰੋ, ਇਸ ਨੂੰ ਖਮੀਰ ਦੇ ਮੁਅੱਤਲ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ 1:1 ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ ਇੱਕ ਛੋਟੇ, ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਸਮੇਂ ਬਾਅਦ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ। ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਸਮੇਂ ਬ੍ਰੂਇੰਗ ਸਾਇੰਸ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਦੀ ਹੱਥ-ਪੁਸਤਕ ਵਿੱਚ 1 ਤੋਂ 2 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਲੈ ਕੇ ਖੋਜ ਕਾਰਜਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 5 ਮਿੰਟ ਤੱਕ ਹਨ, ਜਦਕਿ OIV ਦੀ ਵਾਈਨ ਸੂਖਮਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿਧੀ ਅਨੁਸਾਰ ਜਾਂਚ 10 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਗਿਣਤੀ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਰੰਗਕ ਦੀ ਸੰਕੇਂਦਰਤਾ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 0.005% ਬਣਦੀ ਹੈ। ਸੁਧਾਰੇ ਹੋਏ ਨਿਊਬਾਊਅਰ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਮਿਸ਼ਰਣ ਭਰੋ ਅਤੇ ਲਗਭਗ 400x ਉੱਤੇ ਗੂੜ੍ਹੀਆਂ ਨੀਲੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਅਜੀਵਤ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਰੰਗੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਜੀਵਤ ਮੰਨੋ। OIV ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਹਲਕੀਆਂ ਨੀਲੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਜੀਵਤ ਗਿਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਹੇਠਾਂ ਚਰਚਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਮੁਲਾਂਕਣਕਰਤਾ ਦੀ ਨਿੱਜੀ ਵਿਆਖਿਆ ਵਾਲੀ ਸਮੱਸਿਆ ਦਾ ਸੰਕੇਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।

ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਸੰਕੇਂਦਰਤਾ ਚੈਂਬਰ ਦੀ ਜਿਆਮਿਤੀ ਤੋਂ ਨਿਕਲਦੀ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਕੇਂਦਰੀ 1 mm ਵਾਲੇ ਪੂਰੇ ਵਰਗ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਤੀ mL ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ N ਗੁਣਾ ਪਤਲਾਕਰਨ ਗੁਣਕ ਗੁਣਾ 10^4 ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ N ਉਸ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਗਿਣੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ASBC ਦੀਆਂ ਖਮੀਰ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਜੀਵਤਤਾ ਦਾ ਹਿਸਾਬ ਹੋਰ ਸੌਖਾ ਹੈ: ਬਿਨਾਂ ਰੰਗੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਕੁੱਲ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨਾਲ ਭਾਗ ਦਿਓ ਅਤੇ 100 ਨਾਲ ਗੁਣਾ ਕਰੋ। FEMS ਦੇ ਬੀਅਰ ਉਤਪਾਦਨ ਸੰਬੰਧੀ ਤੁਲਨਾਤਮਕ ਅਧਿਐਨ ਅਤੇ OIV ਦੀ ਪ੍ਰਥਾ ਅਨੁਸਾਰ, ਜੀਵਤਤਾ ਦਾ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਲਗਭਗ 400 ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਗਿਣੋ। ਹੱਦਾਂ ਲਈ ਇੱਕੋ ਨਿਯਮ ਲਗਾਤਾਰ ਵਰਤੋ; ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਗਰਿੱਡ ਦੀਆਂ ਹੇਠਲੀਆਂ ਅਤੇ ਖੱਬੀਆਂ ਲਾਈਨਾਂ ਉੱਤੇ ਪਈਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਉੱਪਰਲੀਆਂ ਤੇ ਸੱਜੀਆਂ ਲਾਈਨਾਂ ਉੱਤੇ ਪਈਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਛੱਡ ਦਿਓ।

ਗਿਣਤੀ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਲੀਆਂ ਲਈ ਨਿਯਮ ਤੈਅ ਕਰਨਾ ਲਾਜ਼ਮੀ ਹੈ। ਇੱਕ ਆਮ ਰਿਵਾਜ ਅਨੁਸਾਰ, ਜਦੋਂ ਕਲੀ ਮਾਤਾ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਦੇ ਲਗਭਗ ਅੱਧੇ ਆਕਾਰ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਉਸ ਨੂੰ ਵੱਖਰੀ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਗਿਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ਇਸ ਤੋਂ ਛੋਟੀ ਕਲੀ ਨੂੰ ਮਾਤਾ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਨਾਲ ਹੀ ਗਿਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਜੋ ਵੀ ਨਿਯਮ ਚੁਣੋ, ਉਸ ਨੂੰ ਹਰੇਕ ਵਰਗ ਉੱਤੇ ਲਾਗੂ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵਰਕਸ਼ੀਟ ਉੱਤੇ ਲਿਖੋ ਤਾਂ ਜੋ ਅਗਲਾ ਵਿਅਕਤੀ ਵੀ ਉਹੀ ਨਿਯਮ ਵਰਤੇ।

ਗਿਣਤੀ ਲਈ ਵਰਕਸ਼ੀਟ (ਇਸ ਨੂੰ ਛਾਪੋ)

ਇਹ ਵਰਕਸ਼ੀਟ ਇਸ ਲੇਖ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਮੂਲ ਸਮੱਗਰੀ ਹੈ। ਇਸ ਨੂੰ ਨੋਟਬੁੱਕ ਵਿੱਚ ਨਕਲ ਕਰੋ ਜਾਂ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਤੀ ਛਾਪੋ।

Viability (%) = 100 x unstained / (unstained + dark blue). Total cells per mL = N x dilution factor x 10^4, ਜਿੱਥੇ N ਨਿਰਧਾਰਤ ਚੈਂਬਰ ਖੇਤਰ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਹੈ। ਇੱਥੇ Viability ਜੀਵਤਤਾ, unstained ਬਿਨਾਂ ਰੰਗੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ, dark blue ਗੂੜ੍ਹੀਆਂ ਨੀਲੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਅਤੇ dilution factor ਪਤਲਾਕਰਨ ਗੁਣਕ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਨਤੀਜੇ ਦੇ ਨਾਲ ਰੰਗਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਦਰਜ ਕਰੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਸਮੇਂ ਦੀ ਜਾਣਕਾਰੀ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਜੀਵਤਤਾ ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਦੁਹਰਾਇਆ ਨਹੀਂ ਜਾ ਸਕਦਾ।

ਜੀਵਤਤਾ ਦੇ ਅੰਕੜੇ ਕਿਉਂ ਬਦਲਦੇ ਹਨ

ਪਹਿਲਾ ਵਿਘਨ ਸਮਾਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਦੋਵਾਂ ਪਾਸਿਆਂ ਤੋਂ ਅਸਰ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਚਯਾਪਚਯਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਸਰਗਰਮ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਰੰਗਕ ਦਾ ਅਪਚਯ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਬਹੁਤ ਜਲਦੀ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਉੱਤੇ ਜੀਵਤ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦਾ ਅਪਚਯ ਪੂਰਾ ਹੋਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਮਰੀਆਂ ਮੰਨਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਪਰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਰੰਗਕ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਰਹਿਣਾ ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਜ਼ਹਿਰੀਲਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਨੁਕਸਾਨੀਆਂ ਹੋਈਆਂ ਨੀਲੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਮੌਤ ਦਰਸਾਉਣ ਵਾਲਾ ਭਰਮਾਉਂਦਾ ਰੰਗਣ ਮਿਲਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੀ ਇੱਕ ਅਧਿਆਪਨ ਕਾਰਜਵਿਧੀ 5 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਨੂੰ ਕਹਿੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਵਿਸਕੌਨਸਿਨ ਦੀ ਖਮੀਰ ਅਧਿਆਪਨ ਕਾਰਜਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਦਰਜ ਹੈ। ਸਾਵਧਾਨੀ ਨਾਲ ਕਹਿਣ ਵਾਲੀ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਸਮੇਂ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਸਮਾਂ-ਅੰਤਰ ਤੈਅ ਕਰੋ ਅਤੇ ਲੜੀ ਦੇ ਹਰ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਉਹੀ ਰੱਖੋ।

ਘੱਟ ਜੀਵਤਤਾ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਦੂਜਾ ਪੱਖਪਾਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਮਿਆਰੀਕ੍ਰਿਤ ਵਿਧੀ ਚੇਤਾਵਨੀ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਲਗਭਗ 80% ਤੋਂ ਘੱਟ ਜੀਵਤਤਾ ਉੱਤੇ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਅਸਲ ਜੀਵਤਤਾ ਨੂੰ ਵੱਧ ਦਰਸਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਜਿਹੜੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਅਜੇ ਵੀ ਰੰਗਕ ਦਾ ਅਪਚਯ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਜਨਨ ਸਮਰੱਥਾ ਬਚੀ ਹੋਣੀ ਲਾਜ਼ਮੀ ਨਹੀਂ। ਬੀਅਰ ਉਤਪਾਦਨ ਸੰਬੰਧੀ ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਵੀ ਜੀਵਤਤਾ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟ ਜਾਣ ਉੱਤੇ ਇਸੇ ਅਣਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਦਾ ਵਰਣਨ ਹੈ। ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਤੇਜ਼, ਮੋਟੇ ਅੰਦਾਜ਼ੇ ਵਜੋਂ ਵਰਤੋ ਅਤੇ ਘੱਟ ਜੀਵਤਤਾ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਅਹਿਮ ਫ਼ੈਸਲਿਆਂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਪਲੇਟ ਗਿਣਤੀ ਜਾਂ ਪੂਰਕ ਰੰਗਣ ਨਾਲ ਕਰੋ, ਜਿਵੇਂ ਕਿਸੇ ਕਲਚਰ ਨੂੰ ਮੁੜ ਖਮੀਰਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਣ ਦਾ ਫ਼ੈਸਲਾ।

ਤੀਜਾ ਕਾਰਨ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਮਾਧਿਅਮ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹਨ। OIV ਵਿਧੀ ਲਗਭਗ pH 4.6 ਉੱਤੇ ਚੱਲਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਚੇਤਾਵਨੀ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਘੱਟ pH ਵਾਲੇ, ਮਜ਼ਬੂਤੀ ਨਾਲ ਬਫ਼ਰ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨੇ ਰੰਗਕ ਦੇ ਸਹੀ ਵਿਹਾਰ ਵਿੱਚ ਰੁਕਾਵਟ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਇਹ 100 g/L ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ੱਕਰ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਜਾਂਚ ਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਸਲਾਹ ਦਿੰਦੀ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਉੱਥੇ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਭਰਮਾਉਂਦੇ ਢੰਗ ਨਾਲ ਹਲਕੀਆਂ ਨੀਲੀਆਂ ਦਿਸਦੀਆਂ ਹਨ। ਰੰਗਣ ਦੇ pH ਦੀ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਜਾਂਚੀ ਗਈ ਸੀਮਾ ਦੌਰਾਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਬਦਲਾਅ ਮਿਲਿਆ, ਜੋ pH ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਵਿਧੀ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ। ਮਲਬਾ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਫੰਦਾ ਹੈ: ਗੰਦੇ ਮੈਸ਼ ਵਿੱਚ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਕਣ ਮਰੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਰਗੇ ਦਿਸਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮੁਲਾਂਕਣਕਰਤਾਵਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਫ਼ਰਕ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਨ।

ਇਹ ਫ਼ਰਕ ਸਿਰਫ਼ ਤਜਰਬੇ ਦੀ ਗੱਲ ਨਹੀਂ, ਸਗੋਂ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। FEMS ਦੀ ਖਮੀਰ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਦਰਜ ਬੀਅਰ ਉਤਪਾਦਨ ਦੇ ਛੇ ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੇ ਅਜ਼ਮਾਇਸ਼ੀ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਦੁਹਰੇ ਮਾਪਾਂ ਦਾ ਔਸਤ ਮਿਆਰੀ ਵਿਚਲਨ 6.1% ਸੀ, ਜਦਕਿ ਆਕਸੋਨੋਲ ਫ਼ਲੋ ਸਾਈਟੋਮੈਟਰੀ ਲਈ ਇਹ 0.2% ਸੀ। ਇੱਕੋ ਨਮੂਨੇ ਉੱਤੇ ਦੋ ਮੁਲਾਂਕਣਕਰਤਾਵਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਵਿੱਚ 13 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਅੰਕਾਂ ਤੱਕ ਫ਼ਰਕ ਸੀ। ਜੀਵਤਤਾ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ 2023 ਦੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਫ਼ਲੂਓਰੇਸੈਂਸ ਸੂਖਮਦਰਸ਼ੀ ਜਾਂਚ ਅਤੇ ਫ਼ਲੋ ਸਾਈਟੋਮੈਟਰੀ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਧ ਸਟੀਕ ਮਿਲੀਆਂ, ਪਰ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਕਿ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਪ੍ਰਜਾਤੀ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਮਾਧਿਅਮ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਪੇਂਟਿੰਗ ਅਤੇ ਕਿਰਸੌਪ (PMID 24430080) ਦਾ ਮੂਲ ਵਿਧੀ-ਵਰਣਨ ਅਜੇ ਵੀ ਹਵਾਲੇ ਦਾ ਮੁੱਖ ਆਧਾਰ ਹੈ, ਅਤੇ ਖਮੀਰ ਦੀ ਜੀਵਤਤਾ ਅਤੇ ਚਯਾਪਚਯਕ ਸਰਗਰਮੀ ਦੀਆਂ ਜਾਂਚਾਂ ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਸਮੀਖਿਆ (PMID 25154541) ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਨਿਰਣਾਇਕ ਜਾਂਚ ਦੀ ਥਾਂ ਪੂਰਕ ਜਾਂਚਾਂ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੀ ਹੈ। ਇੱਥੇ ਟ੍ਰਾਈਪੈਨ ਬਲੂ ਆਪਣੇ ਆਪ ਬਿਹਤਰ ਵਿਕਲਪ ਨਹੀਂ ਬਣ ਜਾਂਦਾ: ਇਹ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਅਖੰਡਤਾ ਗੁਆਉਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਰੰਗਕ ਦੇ ਗ੍ਰਹਿਣ ਅਤੇ ਅਪਚਯਕ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਤਣਾਅ ਹੇਠ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਦੋਵਾਂ ਰੰਗਕਾਂ ਨਾਲ ਵੱਖਰੇ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਵਰਗੀਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਸ਼ਵਸਨ ਦਾ ਪ੍ਰਯੋਗ: ਨੀਲਾ ਰੰਗ ਗਾਇਬ ਹੋਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਮਾਪੋ

ਦੂਜੀ ਜਾਂਚ ਵਿੱਚ ਸੂਖਮਦਰਸ਼ੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਹੀ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ। ਖਮੀਰ, ਗਲੂਕੋਜ਼ ਅਤੇ ਪਤਲਾ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਇੱਕ ਬੰਦ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਘੜੀ ਨਾਲ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨੀਲਾ ਰੰਗ ਗਾਇਬ ਹੋਣ ਵਿੱਚ ਕਿੰਨਾ ਸਮਾਂ ਲੱਗਦਾ ਹੈ। ਚਯਾਪਚਯ ਦੌਰਾਨ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਅਪਚਯਕ ਸਮਤੁੱਲ ਪੈਦਾ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਜੋ ਨੀਲੇ ਰੰਗਕ ਨੂੰ ਉਸ ਦੇ ਰੰਗਹੀਣ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦੇ ਹਨ, ਜਦਕਿ ਘੁੱਲੀ ਹੋਈ ਆਕਸੀਜਨ ਉਸ ਨੂੰ ਮੁੜ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਕਰ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਆਕਸੀਜਨ ਦਾ ਪੱਧਰ ਘਟਾ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਕੁੱਲ ਅਪਚਯ ਹਾਵੀ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟਿਊਬ ਰੰਗਹੀਣ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਅੰਤ-ਬਿੰਦੂ ਸ਼ਵਸਨ, ਰੰਗਕ ਦੀ ਸੰਕੇਂਦਰਤਾ ਅਤੇ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਉਪਲਬਧਤਾ ਦੇ ਸੰਤੁਲਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਨੂੰ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਅਪਚਯ ਜਾਂ ਰੰਗਹੀਣ ਹੋਣ ਦੇ ਸਮੇਂ ਵਜੋਂ ਦਰਜ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਨਾ ਕਿ ਅਣਵੀ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ ਦੀ ਸਿੱਧੀ ਦਰ ਵਜੋਂ।

ਜੀਵਤਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਧ ਪਤਲਾ ਰੰਗਕ ਵਰਤੋ ਤਾਂ ਜੋ ਸਮਾਂ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਸੀਮਾ ਵਿੱਚ ਆਵੇ। AQA ਦੀ A ਲੈਵਲ ਲਾਜ਼ਮੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੀ ਹੱਥ-ਪੁਸਤਕ ਇਸ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਆਰੀਕ੍ਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ: ਲਗਭਗ 30 C ਤੱਕ ਗਰਮ ਕੀਤੇ ਪ੍ਰਤੀ 100 mL ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 1 g ਗਲੂਕੋਜ਼, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਪਹਿਲਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ 5 g ਸੁੱਕਾ ਖਮੀਰ ਅਤੇ ਲਗਭਗ 0.001% ਦਾ ਕਾਰਜਕਾਰੀ ਰੰਗਕ ਘੋਲ, ਜੋ 1% ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਦੇ 0.1 mL ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਕੇ ਕੁੱਲ 100 mL ਬਣਾਉਣ ਨਾਲ ਤਿਆਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਖਮੀਰ-ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੇ ਮੁਅੱਤਲ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ 2 mL ਨੂੰ ਕਾਰਜਕਾਰੀ ਰੰਗਕ ਘੋਲ ਦੇ 2 mL ਨਾਲ ਮਿਲਾਓ, ਜਾਂਚ ਵਾਲੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨਾਲ ਸੰਤੁਲਿਤ ਹੋਣ ਦਿਓ, ਇੱਕ ਵਾਰ 10 ਸਕਿੰਟ ਲਈ ਹਿਲਾਓ, ਟਾਈਮਰ ਚਾਲੂ ਕਰੋ ਅਤੇ ਮੁੜ ਨਾ ਹਿਲਾਓ। ਹਿਲਾਉਣ ਨਾਲ ਆਕਸੀਜਨ ਮੁੜ ਦਾਖ਼ਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਟਿਊਬ ਫਿਰ ਨੀਲੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ; ਇਹ ਕਾਰਜਵਿਧੀ ਕਾਰਨ ਪੈਦਾ ਹੋਣ ਵਾਲਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡਾ ਅਣਚਾਹਿਆ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੈ। AQA ਅਨੁਸਾਰ ਇਹ ਮਿਸ਼ਰਣ ਆਮ ਤੌਰ ਉੱਤੇ 35 C ਉੱਤੇ ਲਗਭਗ 5 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਰੰਗਹੀਣ ਹੋ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਅਜ਼ਮਾਇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ਸਮੇਂ 20 C ਉੱਤੇ 275 s, 35 C ਉੱਤੇ 128 s ਅਤੇ 45 C ਉੱਤੇ 145 s ਸਨ। ਇਹ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗੀ ਬਣਤਰ ਦੀਆਂ ਉਦਾਹਰਨਾਂ ਹਨ, ਸਰਬਵਿਆਪੀ ਮਾਪਦੰਡ ਨਹੀਂ। ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਅਪਚਯ ਦੀ ਦਰ ਅਤੇ ਚਯਾਪਚਯਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਸਰਗਰਮ ਖਮੀਰ ਵਿਚਕਾਰ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਸੰਬੰਧ ਨੂੰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਅਪਚਯ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਮਿਲਦਾ ਹੈ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ PMID 25773544 ਹੇਠ ਸੂਚੀਬੱਧ ਕੰਮ ਅਤੇ ਯੀਸਟ (2014) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਅਧਿਐਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।

ਸਮੇਂ ਅਨੁਸਾਰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ (ਮੂਲ ਸਮੱਗਰੀ)

ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ ਇਸ ਲੇਖ ਲਈ ਉੱਪਰ ਵਰਣਿਤ AQA ਸ਼ੈਲੀ ਦੀ ਬਣਤਰ ਨਾਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਮੂਲ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਹੈ: 2 mL ਖਮੀਰ-ਗਲੂਕੋਜ਼ ਮਿਸ਼ਰਣ ਅਤੇ ਲਗਭਗ 0.001% ਕਾਰਜਕਾਰੀ ਰੰਗਕ ਘੋਲ ਦੇ 2 mL, ਇੱਕ ਵਾਰ 10 ਸਕਿੰਟ ਲਈ ਹਿਲਾਉਣਾ ਅਤੇ ਫਿਰ ਬਿਨਾਂ ਛੇੜੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ। ਦਰਜ ਅੰਕੜੇ ਉਸ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਉਦਾਹਰਨਾਂ ਹਨ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਵਿਦਿਆਰਥੀਆਂ ਦੇ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਨਤੀਜੇ ਲਿਖਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ। ਦਰ ਸੂਚਕ ਨੂੰ 1 ਨੂੰ ਰੰਗਹੀਣ ਹੋਣ ਦੇ ਸਮੇਂ, ਸਕਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ, ਨਾਲ ਭਾਗ ਦੇ ਕੇ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਹੀ ਟਿਊਬਾਂ ਨਾਲ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕਰੋ ਅਤੇ ਇਨ੍ਹਾਂ ਦਰਜ ਅੰਕੜਿਆਂ ਦੀ ਥਾਂ ਆਪਣੇ ਮਾਪੇ ਮੁੱਲ ਲਿਖੋ।

ਟਿਊਬਾਂ A, B ਅਤੇ C ਲਈ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਦਰ ਸੂਚਕ ਦਾ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਬਣਾਓ। ਵਕਰ ਪਹਿਲਾਂ ਚੜ੍ਹਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਸਮਤਲ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਹੇਠਾਂ ਆਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੁਆਰਾ ਚਲਾਈ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਾ ਉਮੀਦ ਕੀਤਾ ਪੈਟਰਨ ਹੈ, ਸਿੱਧੀ ਲਾਈਨ ਨਹੀਂ। ਟਿਊਬਾਂ D, E ਅਤੇ F ਉਸ ਵਕਰ ਉੱਤੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਦੇ ਬਿੰਦੂ ਨਹੀਂ ਹਨ। ਇਹ ਉਹ ਨਿਯੰਤਰਣ ਹਨ ਜੋ ਵਕਰ ਦੇ ਅਰਥ ਸਮਝਣ ਯੋਗ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।

ਨਿਯੰਤਰਣ ਜੋ ਹਰੇਕ ਜਾਂਚ ਨੂੰ ਅਰਥਪੂਰਨ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ

ਸ਼ਵਸਨ ਦੀ ਹਰ ਅਜ਼ਮਾਇਸ਼ ਨਾਲ ਤਿੰਨ ਨਿਯੰਤਰਣ ਲੋੜੀਂਦੇ ਹਨ। ਉਬਾਲਿਆ ਜਾਂ ਮਾਰਿਆ ਹੋਇਆ ਖਮੀਰ, ਗਲੂਕੋਜ਼ ਅਤੇ ਰੰਗਕ ਵਾਲਾ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੀਲਾ ਹੀ ਰਹਿਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਸਾਬਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਤੇਜ਼ ਅਪਚਯ ਜੀਵਤ ਚਯਾਪਚਯ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਵਾਧੂ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਜੀਵਤ ਖਮੀਰ ਅਤੇ ਰੰਗਕ ਵਾਲਾ ਮਿਸ਼ਰਣ ਸਬਸਟਰੇਟ ਨਿਯੰਤਰਣ ਹੈ, ਪਰ ਇਸ ਵਿੱਚ ਵੀ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਰੰਗਹੀਣ ਹੋਣ ਦੀ ਉਮੀਦ ਰੱਖੋ, ਕਿਉਂਕਿ ਖਮੀਰ ਆਪਣੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਭੰਡਾਰ ਵਰਤਦਾ ਹੈ। ਖਮੀਰ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਅਤੇ ਰੰਗਕ ਵਾਲਾ ਮਿਸ਼ਰਣ ਰਸਾਇਣਕ ਖਾਲੀ ਨਿਯੰਤਰਣ ਹੈ। ਇਹ ਲਾਜ਼ਮੀ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਖਾਰੀ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਵੀ ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਦਾ ਅਪਚਯ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਜੀਵਤਤਾ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਵੱਖਰੀ ਕਿਸਮ ਦਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ: ਕਾਰਜਵਿਧੀ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ। ਇੱਕੋ ਰੰਗਕ ਸਟਾਕ ਘੋਲ, ਇੱਕੋ ਮਿਲਾਉਣ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ, ਇੱਕੋ ਰੰਗਣ ਦਾ ਸਮਾਂ, ਇੱਕੋ ਚੈਂਬਰ ਖੇਤਰ ਅਤੇ ਕਲੀਆਂ ਤੇ ਹੱਦਾਂ ਲਈ ਇੱਕੋ ਨਿਯਮ ਵਰਤੋ। ਜਿੱਥੇ ਸੰਭਵ ਹੋਵੇ, ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਪਛਾਣ ਜਾਣੇ ਬਿਨਾਂ ਗਿਣਤੀ ਕਰੋ। ਜਦੋਂ ਦੋ ਮੁਲਾਂਕਣਕਰਤਾਵਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਦਸ ਅੰਕਾਂ ਦਾ ਫ਼ਰਕ ਹੋਵੇ, ਤਾਂ ਵਰਕਸ਼ੀਟ ਆਮ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਕਾਰਨ ਦੱਸ ਦਿੰਦੀ ਹੈ: ਵੱਖਰਾ ਸਮਾਂ, ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਨੂੰ ਮੰਨਣ ਦੀ ਵੱਖਰੀ ਸੀਮਾ ਜਾਂ ਕਲੀਆਂ ਲਈ ਵੱਖਰੇ ਨਿਯਮ। ਰੰਗੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਅਤੇ ਦੇਖਣ ਦੀਆਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਸਧਾਰਨ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੰਗਣ ਦੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਦਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਇਹ ਰੰਗਕ ਕੀ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਦਾ ਵਿਆਪਕ ਸਰਵੇਖਣ ਸੂਖਮਦਰਸ਼ੀ ਰੰਗਣ ਐਟਲਸ ਵਿੱਚ ਹੈ। ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦੀ ਕਿਸੇ ਵੀ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਪੜ੍ਹਨ ਦੇ ਪਿੱਛੇ ਦੀ ਭੌਤਿਕੀ ਲਈ, ਹਾਲਤਾਂ ਸਮੇਤ ਦਰਜ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਹਵਾਲਾ ਸਮਝਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਹਰੇਕ ਗੁਣਾਂਕ ਦੇ ਨਾਲ ਉਸ ਦੇ ਘੋਲਕ, pH ਅਤੇ ਸੰਕੇਂਦਰਤਾ ਦੀਆਂ ਹਾਲਤਾਂ ਕਿਉਂ ਦਰਜ ਹੋਣੀਆਂ ਚਾਹੀਦੀਆਂ ਹਨ।

ਆਪਣੇ ਸਵਾਲ ਅਨੁਸਾਰ ਜਾਂਚ ਚੁਣੋ। ਇਸ ਵੇਲੇ ਕਿੰਨੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਜੀਵਤ ਹਨ, ਇਹ ਗਿਣਤੀ ਦਾ ਸਵਾਲ ਹੈ, ਜਿਸ ਦਾ ਜਵਾਬ ਸੂਖਮਦਰਸ਼ੀ ਅਤੇ ਵਰਕਸ਼ੀਟ ਨਾਲ ਮਿਲਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਕਲਚਰ ਕਿੰਨੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨਾਲ ਸ਼ਵਸਨ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹੈ, ਇਹ ਗਤਿਕੀ ਦਾ ਸਵਾਲ ਹੈ, ਜਿਸ ਦਾ ਜਵਾਬ ਸਟਾਪਵਾਚ ਅਤੇ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਟਿਊਬਾਂ ਨਾਲ ਮਿਲਦਾ ਹੈ। ਮਿਥਾਈਲੀਨ ਬਲੂ ਦੋਵਾਂ ਲਈ ਕੰਮ ਆਉਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਕਦੇ ਵੀ ਇੱਕੋ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਨਹੀਂ।