ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦਾ ਮਾਪ

ਦੋ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਅਜਿਹਾ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ ਜਿਸ ਨੂੰ ਦੋਵੇਂ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦਾ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕਹਿੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਇੱਕ ਦੱਸਦੀ ਹੈ ਕਿ ਰੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਦੂਜੀ ਦੱਸਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਦੋਵੇਂ ਸਪਸ਼ਟ ਖੁਰਾਕ-ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਕਰ ਦਿਖਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਦੋਵੇਂ ਇਮਾਨਦਾਰੀ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰ ਰਹੀਆਂ ਹਨ। ਇਹ ਫ਼ਰਕ ਨਾ ਧੋਖਾਧੜੀ ਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਾ ਹੀ ਅਯੋਗਤਾ ਦਾ। ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਦੋਵਾਂ ਸਮੂਹਾਂ ਨੇ ਵੱਖਰੀ ਰੌਸ਼ਨੀ ਹੇਠ ਵੱਖਰੀਆਂ ਚੀਜ਼ਾਂ ਮਾਪੀਆਂ, ਅਜਿਹੇ ਪ੍ਰੋਬਾਂ ਨਾਲ ਜੋ ਵੱਖਰੇ ਸਵਾਲਾਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਦੋਵੇਂ ਜਵਾਬਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸ਼ਬਦ ਨਾਲ ਦਰਸਾਇਆ: ROS।

ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਾਪਣਾ ਇਸ ਲਈ ਔਖਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਉਸ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਆਪ ਹਿੱਸਾ ਲੈਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਦਾ ਇਸ ਨੇ ਨਿਰੀਖਣ ਕਰਨਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਇਹ ਦਾਤਿਆਂ ਅਤੇ ਗ੍ਰਹਿਣਕਰਤਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਵਾਪਸ ਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਚੱਕਰ ਮੁੜ ਚਲਾ ਸਕੇ। ਰੌਸ਼ਨੀ ਹੇਠ ਇਹ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਵੇਦਕ ਬਣ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਉਤੇਜਿਤ ਟ੍ਰਿਪਲੈੱਟ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਪਹੁੰਚਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਅਵਸਥਾ ਤੋਂ ਇਹ ਆਕਸੀਜਨ ਨੂੰ ਊਰਜਾ ਦੇ ਕੇ ਸਿੰਗਲੈੱਟ ਆਕਸੀਜਨ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨਾਂ ਦਾ ਤਬਾਦਲਾ ਕਰਕੇ ਰੈਡੀਕਲ ਅਤੇ ਹਾਈਡਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਪੈਦਾ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਕੋਈ ਵੀ ਪ੍ਰੋਬ ਖ਼ੁਦ ਰੰਗ ਕਾਰਨ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ, ਅਪਚਯਿਤ, ਰੰਗਹੀਣ ਜਾਂ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਓਹਲੇ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਕਿਸੇ ਵੀ ROS ਮਾਪ-ਸੰਕੇਤ ਬਾਰੇ ਪਹਿਲਾ ਸਵਾਲ ਕਦੇ ਵੀ ਇਹ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ ਕਿ ਅੰਕ ਕਿੰਨਾ ਹੈ। ਸਵਾਲ ਇਹ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਪਰਖ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਕੀ ਪਛਾਣਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਰੰਗ ਉਸ ਪਰਖ ਨਾਲ ਕੀ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਐਂਪਲੈਕਸ ਰੈੱਡ: ਹਾਈਡਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟ ਕੀਤੀ ਪਰਖ

ਸਹੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਉੱਤੇ, ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ ਐਂਪਲੈਕਸ ਰੈੱਡ ਦਾ ਜੋੜ ਇਸ ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਹੈ। ਇਸ ਦੀ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਹੈ: ਹੌਰਸਰੈਡਿਸ਼ ਪਰਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਹਾਈਡਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਐਂਪਲੈਕਸ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤ ਉਤਪਾਦ, ਰੈਜ਼ੋਰੂਫਿਨ, ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਦਾ ਸਟੋਇਕੀਓਮੈਟ੍ਰਿਕ ਅਨੁਪਾਤ ਲਗਭਗ ਇੱਕ ਨਾਲ ਇੱਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਟੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਬਣ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਮਿਆਰੀ ROS ਸਮੂਹ ਦਾ ਹੋਰ ਕੋਈ ਪਦਾਰਥ ਇਸ ਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਨਹੀਂ ਚਲਾਉਂਦਾ।

ਇਸ ਦਾ ਨਿਰਣਾਇਕ ਲਾਭ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਹੈ। ਸਾਵਧਾਨੀ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਖੋਜਕਰਤਾ ਉਸੇ ਬਫ਼ਰ ਵਿੱਚ, ਪਰਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਅਤੇ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਦੀਆਂ ਉਹੀ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ, ਉਹੀ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਅਤੇ ਉਹੀ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਕ ਸੈਟਿੰਗਾਂ ਵਰਤ ਕੇ ਜਾਣੀ ਹੋਈ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਵਾਲੇ ਮਿਆਰੀ ਨਮੂਨੇ ਚਲਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਫਿਰ ਉਸ ਵਕਰ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਮਾਪ ਪੜ੍ਹਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਵਿਧੀ ਦੇ ਆਧਾਰ ਬਣੇ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਲੇਖਕਾਂ ਨੇ ਬਿਲਕੁਲ ਇਹੀ ਕੀਤਾ: ਹਰ ਪ੍ਰਯੋਗੀ ਦੌਰ ਦੇ ਅੰਤ ਉੱਤੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀਆਂ ਜਾਣੀਆਂ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਜੋੜੀਆਂ। ਨਤੀਜੇ ਮਨਮਾਨੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਇਕਾਈਆਂ ਦੀ ਥਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪਿਕੋਮੋਲ ਦੀ ਦਰ ਵਜੋਂ ਦਿੱਤੇ ਗਏ। ਇਹੀ ਗੱਲ ਇੱਕ ਚਮਕ ਨੂੰ ਮਾਪ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦੀ ਹੈ।

ਉਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਤਿੰਨ ਵੇਰਵੇ ਅਪਣਾਉਣ ਯੋਗ ਹਨ। ਪਹਿਲਾਂ, ਲੇਖਕਾਂ ਨੇ ਕੈਟਲੇਜ਼ ਨਾਲ ਸੰਕੇਤ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ, ਜੋ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਨਸ਼ਟ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਕਾਰਨ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਵਿੱਚ ਆਇਆ ਵਾਧਾ ਕੈਟਲੇਜ਼ ਜੋੜਨ ਉੱਤੇ ਰੁਕ ਗਿਆ। ਇਸ ਨਾਲ ਪੁਸ਼ਟੀ ਹੋਈ ਕਿ ਸੰਕੇਤ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਸੀ, ਕਿਸੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਕ ਕਲਾਤੱਥ ਦਾ ਨਹੀਂ। ਦੂਜੇ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਉਤੇਜਕ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਕਿਰਣ ਉੱਤੇ ਸ਼ਟਰ ਵਰਤ ਕੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਸਿੱਧੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ, ਤਾਂ ਜੋ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਆਮ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਾ ਅੱਠਵਾਂ ਹਿੱਸਾ ਮਿਲੇ। ਸੰਕੇਤ ਸਿਰਫ਼ ਨੌਂ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਘਟਿਆ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਵੱਲੋਂ ਦਰਜ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਨੱਬੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਿੱਸਾ ਮਾਪਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਰੌਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ ਸੀ। ਤੀਜੇ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਨਾਲ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੇ ਹਟਾਏ ਜਾਣ ਨੂੰ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਮਾਪਿਆ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ ਰੰਗ ਨੇ ਇਸ ਦਾ ਉਤਪਾਦਨ ਵਧਾਇਆ ਵੀ ਅਤੇ ਇਸ ਦਾ ਹਟਣਾ ਹੌਲਾ ਵੀ ਕੀਤਾ। ਸਿਰਫ਼ ਸ਼ੁੱਧ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਦੱਸਣ ਵਾਲਾ ਪ੍ਰੋਬ ਇਨ੍ਹਾਂ ਦੋ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਰਲਾ ਦਿੰਦਾ।

ਇਸ ਪਰਖ ਵਿੱਚ ਫਿਰ ਵੀ ਅਸਫਲ ਹੋਣ ਦੇ ਕਈ ਤਰੀਕੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕਈ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਰੰਗ ਉਸੇ ਲਾਲ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਸੋਖਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਰੈਜ਼ੋਰੂਫਿਨ ਰੌਸ਼ਨੀ ਉਤਸਰਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਰੰਗ ਦੀਆਂ ਉੱਚੀਆਂ ਸੰਘਣਤਾਵਾਂ ਉੱਤੇ ਨਮੂਨਾ ਅੰਦਰੂਨੀ ਫ਼ਿਲਟਰ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਰਾਹੀਂ ਆਪਣਾ ਸੰਕੇਤ ਆਪ ਓਹਲੇ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਕਾਰਨ ਮਿਆਰੀ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਰੰਗ ਦੀ ਸੰਘਣਤਾ ਜਾਂਚੇ ਜਾ ਰਹੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਜਿੰਨੀ ਹੀ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਐਂਪਲੈਕਸ ਰੈੱਡ ਦਾ ਆਪਣੇ ਆਪ ਵੀ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਆਕਸੀਕਰਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਦਾ ਉਤਪਾਦ ਰੈਜ਼ੋਰੂਫਿਨ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਰੈਡੌਕਸ ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਦਾਖ਼ਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਅਤੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਗੱਲ ਉਸ ਵੇਲੇ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਕਿਸੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਵੇਦਕ ਉੱਤੇ ਵੀ ਰੌਸ਼ਨੀ ਪਾਈ ਜਾ ਰਹੀ ਹੋਵੇ। ਵਿਹਾਰਕ ਹੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦਿੱਤੀ ਜਾਵੇ ਅਤੇ ਫਿਰ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਛੋਟੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੀ ਐਂਪਲੈਕਸ ਰੀਏਜੈਂਟਾਂ ਨਾਲ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਪਰਖ ਕੀਤੀ ਜਾਵੇ, ਨਾ ਕਿ ਰੰਗ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਬ ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦਿੱਤੀ ਜਾਵੇ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼ ਸਿਰਫ਼ ਐਂਪਲੈਕਸ ਸੰਕੇਤ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੀ ਨਹੀਂ: ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣਾ ਇਸ ਨੂੰ ਵਧਾ ਵੀ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਵਧਾਉਣ ਵਾਲਾ SOD ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਸਫਲ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ। ਇਸ ਨੇ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਨੂੰ ਕਿਰਿਆ-ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਪਹਿਲਾਂ ਬਣਨ ਵਾਲੀ ਪ੍ਰਜਾਤੀ ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਹੈ।

DCFDA: ਆਕਸੀਕਰਨ ਦਾ ਇੱਕ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੂਚਕ

ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ DCFDA ਦਾ ਜੋੜ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਉਲਝਣ ਦਾ ਸਰੋਤ ਹੈ। DCFH-DA ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਪਹੁੰਚਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਪੂਰਵਗਾਮੀ ਪਦਾਰਥ ਹੈ। ਸੈੱਲ ਅੰਦਰਲੇ ਐਸਟਰੇਜ਼ ਇਸ ਦੇ ਐਸੀਟੇਟ ਸਮੂਹ ਹਟਾ ਕੇ ਗੈਰ-ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤ DCFH ਛੱਡ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ DCFH ਦਾ ਆਕਸੀਕਰਨ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤ DCF ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਨੂੰ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀ ਸੂਚੀ ਲੰਮੀ ਹੈ: ਹਾਈਡਰੌਕਸਿਲ ਰੈਡੀਕਲ, ਪਰਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਅਤੇ ਹੀਮ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਉਤਪਾਦ, ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਡਾਈਆਕਸਾਈਡ, ਹਾਈਪੋਕਲੋਰਸ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਪਰਆਕਸੀਨਾਈਟ੍ਰਾਈਟ ਤੋਂ ਬਣੇ ਰੈਡੀਕਲ। ਇਕੱਲੀ ਹਾਈਡਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਕਿਸੇ ਲਾਭਕਾਰੀ ਦਰ ਉੱਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ; ਪਰਆਕਸਾਈਡ-ਨਿਰਭਰ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਲਈ ਆਮ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਇਸ ਕਿਰਿਆ-ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਲੋਹੇ, ਹੀਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਜਾਂ ਪਰਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਦੀ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਜਿਸ ਆਲੋਚਨਾ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਹਰ ਵਿਧੀ-ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਉਹ ਕਲਿਆਣਰਾਮਨ ਅਤੇ ਸਹਿਕਰਮੀਆਂ ਵੱਲੋਂ ਪ੍ਰੋਬ ਵਜੋਂ DCFH ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਆਉਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਦਾ ਸਾਰ ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਉਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜਿਸ ਨੇ ਇਸ ਕਾਰਨ DCFDA ਨੂੰ ਰੱਦ ਕੀਤਾ ਸੀ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਇਹ ਰੰਗ ਹੌਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਦੀ ਸਟੋਇਕੀਓਮੈਟ੍ਰੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਇਸ ਦੀ ਕੋਈ ਵੈਧ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਨਹੀਂ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਗੈਰ-ROS ਯੋਗਿਕਾਂ ਨਾਲ ਵੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰੋਬ ਜਿਸ ਨੂੰ ਮਾਪਦਾ ਹੈ ਉਸ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਵੀ ਹੈ: DCFH ਦਾ ਇੱਕ-ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਆਕਸੀਕਰਨ DCF ਰੈਡੀਕਲ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਆਕਸੀਜਨ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਕੇ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਡਿਸਮਿਊਟੇਸ਼ਨ ਰਾਹੀਂ ਵਾਧੂ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਮਾਪ-ਸੰਕੇਤ ਜਿਸ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਉਸ ਦਾ ਕੁਝ ਹਿੱਸਾ ਆਪ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਇਨ੍ਹਾਂ ਗੱਲਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੋਈ ਵੀ DCFDA ਨੂੰ ਬੇਕਾਰ ਨਹੀਂ ਬਣਾਉਂਦੀ। ਇਹ ਇਸ ਨੂੰ ਪਛਾਣ ਦੀ ਥਾਂ ਮੁੱਢਲੀ ਜਾਂਚ ਦਾ ਸਾਧਨ ਬਣਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ। DCF ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਆਕਸੀਕਾਰਕ-ਨਿਰਭਰ ਪ੍ਰੋਬ ਆਕਸੀਕਰਨ ਵਧਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਦਾ ਮਤਲਬ ਇਹ ਨਹੀਂ ਕਿ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਵਧੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਇਸ ਦਾ ਮਤਲਬ ਇਹ ਨਹੀਂ ਕਿ ਕੁੱਲ ROS ਵਧੇ ਹਨ—ਕੋਈ ਵੀ ਇਕੱਲਾ ਪ੍ਰੋਬ ਇਸ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਮਾਪਦਾ। ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਉੱਤੇ ਪਹਿਲੇ ਕੰਮ ਵਿੱਚ, ਜਿਸ ਨੇ ਇੱਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਮੋਲਰ ਤੋਂ ਉੱਪਰ DCF ਆਕਸੀਕਰਨ ਉੱਤੇ ਭਰੋਸਾ ਕੀਤਾ ਸੀ, ਆਕਸੀਕਰਨ ਵਧਾਉਣ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਰਜ ਕੀਤੇ ਗਏ। ਉਸੇ ਦੌਰ ਦੀਆਂ ਹੋਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਕਾਰਨ ਹੋਈ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਤੋਂ ਸੁਰੱਖਿਆ ਦਰਜ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਵੱਖਰੇ ਰੈਡੌਕਸ ਸੰਦਰਭਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਰੰਗ ਲਈ ਦੋਵੇਂ ਨਿਰੀਖਣ ਸੱਚ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਕੱਲਾ DCF ਨਤੀਜਾ ਇਹ ਨਹੀਂ ਦੱਸ ਸਕਦਾ ਕਿ ਕਿਹੜਾ ਆਕਸੀਕਾਰਕ ਸੰਕੇਤ ਦਾ ਕਾਰਨ ਸੀ। ਪਹਿਲਾ ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਅਧਿਐਨ ਇਸ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਨੇ ਇਸ ਮੁੱਢਲੀ ਜਾਂਚ ਦੀ ਥਾਂ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟ ਕੀਤਾ ਮਾਪ ਵਰਤਿਆ ਅਤੇ ਵਾਧਾ ਸਿੱਧਾ ਲੱਭਿਆ: ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਸੌ ਨੈਨੋਮੋਲਰ ਰੰਗ ਨੇ ਵੀ ਜਾਂਚੇ ਗਏ ਹਰ ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਅਤੇ ਸ਼ਵਸਨ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਮੁਕਤੀ ਕਈ ਗੁਣਾ ਵਧਾਈ।

DCFDA ਨਾਲ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਇੱਕ ਹੋਰ ਫੰਦਾ ਵੀ ਹੈ। ਇਹ ਰੰਗ ਬਹੁਤ ਗੂੜ੍ਹਾ ਅਤੇ ਰੈਡੌਕਸ-ਸਰਗਰਮ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਮਿਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਉਤਸਰਜਨ ਦਬਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਸੈੱਲੀ ROS ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਪ੍ਰੋਬ ਦੀ ਰਸਾਇਣਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਰੰਗ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਬ ਵਾਲਾ, ਪਰ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਨਿਯੰਤਰਣ ਕੋਈ ਚੋਣਵਾਂ ਵਾਧਾ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਇਹ ਉਹ ਪ੍ਰਯੋਗ ਹੈ ਜੋ ਦੱਸਦਾ ਹੈ ਕਿ ਰੰਗ ਪ੍ਰੋਬ ਨਾਲ ਸਿੱਧੀ ਅੰਤਰਕਿਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।

ਸਪਿਨ ਟ੍ਰੈਪਿੰਗ ਅਤੇ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ: ਪਛਾਣ ਅਤੇ ਪ੍ਰਵਾਹ

ਜਿੱਥੇ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤ ਪ੍ਰੋਬ ਇਹ ਦੱਸਦੇ ਹਨ ਕਿ ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਹੋ ਸਕਣ ਵਾਲਾ ਕੋਈ ਪਦਾਰਥ ਉਭਰਿਆ ਹੈ, ਉੱਥੇ ਸਪਿਨ ਟ੍ਰੈਪਾਂ ਨਾਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਸਪਿਨ ਰੈਜ਼ੋਨੈਂਸ ਇਸ ਗੱਲ ਦੇ ਹੋਰ ਨੇੜੇ ਪਹੁੰਚਦਾ ਹੈ ਕਿ ਉਹ ਪਦਾਰਥ ਕੀ ਸੀ। ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੀ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਰਸਾਇਣ ਬਾਰੇ ਪ੍ਰਸਿੱਧ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਰੰਗ, ਐਸਕੋਰਬੇਟ ਅਤੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਬਣੇ ਐਸਕੋਰਬੇਟ ਰੈਡੀਕਲ ਨੂੰ ਪਛਾਣਨ ਲਈ ESR ਵਰਤਿਆ, ਫਿਰ ਆਕਸੀਜਨ-ਖਪਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਬਣਨਾ ਅਤੇ ਸਪਿਨ ਟ੍ਰੈਪਿੰਗ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਲੋਹੇ ਦੁਆਰਾ ਉਤਪ੍ਰੇਰਿਤ ਹਾਈਡਰੌਕਸਿਲ ਰੈਡੀਕਲ ਦਾ ਬਣਨਾ ਦਿਖਾਇਆ। ਹਰ ਤਕਨੀਕ ਨੇ ਉਸ ਸਵਾਲ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੱਤਾ ਜੋ ਦੂਜੀਆਂ ਨਹੀਂ ਦੇ ਸਕਦੀਆਂ ਸਨ: ESR ਨੇ ਰੈਡੀਕਲ ਦੀ ਪਛਾਣ ਦਿੱਤੀ, ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ ਨੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤ ਪ੍ਰੋਬ ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ ਕਿਰਿਆ-ਪ੍ਰਵਾਹ ਦਿੱਤਾ, ਅਤੇ ਇਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਜੋੜ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਇੱਕੋ ਰੌਸ਼ਨ ਕੀਤੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਸਿੰਗਲੈੱਟ ਆਕਸੀਜਨ ਅਤੇ ਰੈਡੀਕਲ ਦੋਵਾਂ ਦੇ ਮਾਰਗ ਕੰਮ ਕਰ ਰਹੇ ਸਨ।

1984 ਦਾ ਉਹ ਨਤੀਜਾ ਅੱਜ ਵੀ ਚੇਤਾਵਨੀ ਵਾਂਗ ਪੜ੍ਹਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਰੌਸ਼ਨੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਅਪਚਾਇਕ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਰੰਗ ਨੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀ, ਅਤੇ ਲੋਹੇ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੇ ਹਾਈਡਰੌਕਸਿਲ ਰੈਡੀਕਲ ਬਣਾਇਆ, ਜੋ ਇਸ ਸਮੂਹ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਪ੍ਰਜਾਤੀ ਹੈ। ਲੇਖਕਾਂ ਨੇ ਇਸ ਨੂੰ ਅੱਖ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਐਸਕੋਰਬੇਟ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਅਤੇ ਅੱਖਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸ ਦੀ ਬਿਨਾਂ ਪੂਰੀ ਸੋਚ-ਵਿਚਾਰ ਵਰਤੋਂ ਉੱਤੇ ਸਵਾਲ ਉਠਾਇਆ। ਅੱਜ ਦੇ ਪਾਠਕਾਂ ਨੂੰ ਹਾਲਾਤ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ: ਰੌਸ਼ਨੀ ਨਾਲ ਅਪਚਾਇਕ ਅਤੇ ਲੋਹਾ। ਇਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੋਈ ਇੱਕ ਹਟਾ ਦਿਓ ਤਾਂ ਇਹ ਮਾਰਗ ਕਮਜ਼ੋਰ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਖ਼ਤਮ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਆਕਸੀਜਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਆਪਣੀ ਉਪਯੋਗਤਾ ਵੱਖਰੇ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸਾਬਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਕਲਾਰਕ-ਕਿਸਮ ਦਾ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧ ਖਪਤ ਮਾਪਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਨਾਲ ਇਹ ਸਥਾਪਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਰੰਗ ਦੁਆਰਾ ਚਲਾਈ ਰੈਡੌਕਸ ਰਸਾਇਣਕ ਕਿਰਿਆ ਅਣਵੀ ਆਕਸੀਜਨ ਵਰਤ ਰਹੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਅਜਿਹੀ ਕਿਰਿਆ-ਗਤੀ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਦੀ ਨਕਲ ਕੋਈ ਪ੍ਰਤੀਦੀਪਤਾ ਕਲਾਤੱਥ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ। ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਪਛਾਣ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ। ਪਰਆਕਸਾਈਡ, ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਦੇ ਬਣਨ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਮਾਰਗ ਅਤੇ ਸਿੰਗਲੈੱਟ ਆਕਸੀਜਨ ਦਾ ਖ਼ਤਮ ਹੋਣਾ—ਸਾਰੇ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਪਛਾਣ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਪ੍ਰਵਾਹ ਉਨਾ ਹੀ ਅਧੂਰਾ ਹੈ ਜਿੰਨੀ ਪ੍ਰਵਾਹ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਪਛਾਣ। ਇਸ ਲਈ ਮਜ਼ਬੂਤ ਖੋਜ-ਪੱਤਰ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਨੂੰ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਟ ਕੀਤੀ ਪਰਖ ਜਾਂ ਕਿਸੇ ਟ੍ਰੈਪ ਨਾਲ ਜੋੜਦੇ ਹਨ।

ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਸੰਬੰਧੀ ਨਤੀਜੇ ਆਪਸ ਵਿੱਚ ਕਿਉਂ ਟਕਰਾਉਂਦੇ ਹਨ

ਤਿੰਨਾਂ ਮਾਪ-ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਨਾਲੋ-ਨਾਲ ਰੱਖੋ ਤਾਂ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਦਿੱਸਦੇ ਵਿਰੋਧ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਫ਼ਰਕ ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਤੱਥਾਂ ਰਾਹੀਂ ਸਮਝ ਆ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।

ਪਹਿਲਾਂ, ਰੰਗ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਣ ਵਾਲਾ ਵਾਹਕ ਵੀ ਹੈ ਅਤੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਸਰੋਤ ਵੀ। ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨਾਂ ਨੂੰ ਉਨ੍ਹਾਂ ਸ਼ਵਸਨ ਸਥਾਨਾਂ ਤੋਂ ਹੋਰ ਪਾਸੇ ਮੋੜ ਕੇ, ਜਿੱਥੇ ਆਕਸੀਜਨ ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਬਣ ਜਾਂਦੀ, ਇਹ ਇੱਕ ROS ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸੇ ਵੇਲੇ ਇਸ ਦਾ ਅਪਚਯਿਤ ਰੂਪ ਆਕਸੀਜਨ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਵਿੱਚ ਅਪਚਯਿਤ ਕਰਕੇ ਦੂਜੇ ROS ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਰੈਡੌਕਸ ਰਸਾਇਣ ਅਤੇ ਇਸ ਦੀ ਬਾਈਪਾਸ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਬ-ਨਿਰਭਰ ਜਵਾਬਾਂ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ: ਇੱਕੋ ਕਿਊਵੇਟ ਵਿੱਚ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਮਾਪ-ਸੰਕੇਤ ਘਟਦਾ ਹੈ ਜਦਕਿ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਮਾਪ-ਸੰਕੇਤ ਵਧਦਾ ਹੈ।

ਦੂਜੇ, ਘੱਟ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਇੱਕ ਸੰਕੇਤ ਹੈ, ਸਿਰਫ਼ ਨੁਕਸਾਨ ਨਹੀਂ। ਪਹਿਲੇ ਕੰਮ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹੋਏ ਚੂਹੇ ਦੇ ਦਿਮਾਗੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਪੰਜਾਹ ਨੈਨੋਮੋਲਰ ਰੰਗ ਤੋਂ ਵੀ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਬਣਨਾ ਮਿਲਿਆ, ਜਦਕਿ ਚਿਕਿਤਸਕ ਪੱਧਰਾਂ ਉੱਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ DNA ਵਿੱਚ ਖ਼ਰਾਬੀਆਂ ਨਹੀਂ ਮਿਲੀਆਂ। ਪਹਿਲਾਂ ਰੰਗ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਕਰਵਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਰੋਟੇਨੋਨ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਖ਼ਰਾਬੀਆਂ ਤੋਂ ਸੁਰੱਖਿਆ ਵੀ ਮਿਲੀ। ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਸੌ ਮਾਈਕ੍ਰੋਮੋਲਰ ਉੱਤੇ, ਜੋ ਚਿਕਿਤਸਕ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਬਹੁਤ ਉੱਪਰ ਹੈ, ਰੰਗ ਨੇ ਚੁਣੇ ਹੋਏ DNA ਖੰਡਾਂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਇਆ। ਲਾਲ ਰੌਸ਼ਨੀ ਨਾਲ ਵੀਹ ਮਾਈਕ੍ਰੋਮੋਲਰ ਰੰਗ ਨੇ ਸਿੰਗਲੈੱਟ ਆਕਸੀਜਨ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀ ਜਿਸ ਨੇ ਜਾਂਚੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਖੰਡਾਂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਇਆ। ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਕਾਰਜ-ਵਿਧੀ ਹੋਰਮੇਟਿਕ ਹੈ: ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦਾ ਹਲਕਾ ਉਤਪਾਦਨ Nrf2 ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਰੱਖਿਆ-ਤੰਤਰ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੀ ਜੈਵ-ਉਤਪੱਤੀ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਦਾ ਆਕਸੀਕਰਨ-ਵਧਾਉਣ ਵਾਲਾ ਮਾਪ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਨਤੀਜੇ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਆਉਂਦਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਘੰਟੇ ਉੱਤੇ ਪੜ੍ਹੀ ਪਰਖ ਅਤੇ ਇੱਕ ਦਿਨ ਉੱਤੇ ਪੜ੍ਹੀ ਪਰਖ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵੱਖਰੇ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ ਕਿਉਂਕਿ ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਹਾਲਾਤ ਬਦਲ ਗਏ।

ਤੀਜੇ, ਰੌਸ਼ਨੀ ਇਹ ਤੈਅ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਉੱਥੇ ਕਿਹੜਾ ਅਣੂ ਮੌਜੂਦ ਵੀ ਹੈ। ਰੌਸ਼ਨੀ ਰੰਗ ਦੇ ਮਿਥਾਈਲ ਸਮੂਹ ਹਟਾ ਕੇ ਇਸ ਨੂੰ Azure B ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਤਪਾਦਾਂ ਵੱਲ ਬਦਲਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਡਿਸ਼ ਉੱਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦਾ ਲੈਂਪ ਹੀ ਇਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਵੇਦਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਹੈ। ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਅਤੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਹੇਠ ਕੀਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵੱਖਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਹਨ, ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਅਤੇ ਰੰਗ ਦੇ ਸੰਭਾਲ ਲਈ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਵਾਲੇ ਭਾਗ ਨੂੰ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨਾਲ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਜਿੱਠਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਦਾ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਸਮੂਹ, ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਦਾਅਵੇ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਪੜ੍ਹਨਾ ਹੈ

ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਤੁਲਨਾ ਇਸ ਲੇਖ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਮੂਲ ਹਵਾਲਾ-ਸਮੱਗਰੀ ਹੈ। ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ROS ਨਤੀਜੇ ਨੂੰ ਸਵੀਕਾਰ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜਾਂਚੋ ਕਿ ਲੇਖਕਾਂ ਨੇ ਕਿਹੜੀ ਕਤਾਰ ਪੂਰੀ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਕਿਹੜੀ ਛੱਡ ਦਿੱਤੀ।

ਇਸ ਤੋਂ ਪੜ੍ਹਨ ਦਾ ਇੱਕ ਵਿਹਾਰਕ ਨਿਯਮ ਨਿਕਲਦਾ ਹੈ। ਪਰਆਕਸੀਡੇਜ਼ ਨਾਲ ਐਂਪਲੈਕਸ, ਜਿਸ ਦੀ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਹੋਈ ਹੋਵੇ ਅਤੇ ਕੈਟਲੇਜ਼ ਨਾਲ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੋਵੇ, ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਬਾਰੇ ਸਬੂਤ ਹੈ। DCFDA ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰੋਬ ਆਕਸੀਕਰਨ ਬਾਰੇ ਸਬੂਤ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੁਝ ਨਹੀਂ। ਰੈਡੀਕਲ ਹਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੇ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਨਾਲ ਸਪਿਨ ਟ੍ਰੈਪਿੰਗ ਰੈਡੀਕਲ ਦੀ ਪਛਾਣ ਬਾਰੇ ਸਬੂਤ ਹੈ। ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ ਪ੍ਰਵਾਹ ਬਾਰੇ ਸਬੂਤ ਹੈ। ਕੋਈ ਵਾਕ ਜੋ ਆਪਣੀ ਪਰਖ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਤੋਂ ਵੱਧ ਦਾਅਵਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਭਾਵੇਂ ਕਿੰਨੇ ਵੀ ਭਰੋਸੇ ਨਾਲ ਲਿਖਿਆ ਹੋਵੇ, ਰੰਗ ਬਾਰੇ ਨਹੀਂ ਸਗੋਂ ਪ੍ਰੋਬ ਬਾਰੇ ਵਾਕ ਹੈ। ਮਾਤਰਾ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰਤਾ ਅਤੇ ਹੋਰਮੇਟਿਕ ਸੀਮਾ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨ ਪ੍ਰਵਾਹ, ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਪਰਖ ਦਾ ਦਖ਼ਲ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਵਿੱਚ ਰੌਸ਼ਨੀ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਕਲਾਤੱਥਾਂ ਬਾਰੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਚਰਚਾਵਾਂ ਇਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰ ਨੁਕਤੇ ਨੂੰ ਅੱਗੇ ਵਧਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਹਰ ਨੁਕਤਾ ਆਪਣੇ ਅਸਥਾਈ ਹਵਾਲੇ ਦੀ ਥਾਂ ਅਸਲ ਹਵਾਲਾ ਲਾਏ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵੀ ਵੈਧ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।