DNA ਅਤੇ RNA ਦੀ ਰੰਗਾਈ ਲਈ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ: ਜੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ

ਇੱਕ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਅਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਚਲਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਉਸ ਨੂੰ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਰੰਗਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਜਿੱਥੇ ਚਮਕਦਾਰ ਬੈਂਡ ਦੀ ਉਮੀਦ ਸੀ, ਉੱਥੇ ਕੁਝ ਵੀ ਨਹੀਂ ਦਿਸਦਾ। ਨਾਲ ਵਾਲੇ ਕਾਰਜ-ਸਥਾਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪੋਸਟਡਾਕ ਉਸੇ ਨੀਲੇ ਘੋਲ ਦੀ ਬੋਤਲ ਨਾਲ ਨਾਰਦਰਨ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਰੰਗਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸਪਸ਼ਟ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ ਬੈਂਡ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਲੈਂਦਾ ਹੈ। ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਨਤੀਜਾ ਕੱਢਦਾ ਹੈ ਕਿ ਜੈੱਲ ਫੇਲ੍ਹ ਹੋ ਗਈ। ਜੈੱਲ ਫੇਲ੍ਹ ਨਹੀਂ ਹੋਈ ਸੀ। ਦੋਵੇਂ ਕੰਮ ਵੱਖਰੇ ਸਨ, ਅਤੇ ਇੱਕੋ ਰੰਗਕ ਉਨ੍ਹਾਂ ਲਈ ਵੱਖਰੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਵੱਖਰੀ ਪਿਛੋਕੜ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਕਦਮਾਂ ਲਈ ਵੱਖਰੇ ਨਿਯਮਾਂ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ DNA ਅਤੇ RNA ਦੀ ਰੰਗਾਈ ਦਾ ਰਸਾਇਣ ਇੱਕੋ ਹੈ, ਪਰ ਉਦੇਸ਼ ਵੱਖਰੇ ਹਨ। ਜੈੱਲ ਵਿੱਚ ਰੰਗਕ ਦੱਸਦਾ ਹੈ ਕਿ ਛਿਦਰਦਾਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਦੇ ਅੰਦਰ ਕਿੰਨਾ ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡ ਹੈ। ਝਿੱਲੀ ਉੱਤੇ ਇਹ ਦੱਸਦਾ ਹੈ ਕਿ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਸਫਲ ਹੋਇਆ ਜਾਂ ਨਹੀਂ ਅਤੇ ਲੇਨਾਂ ਵਿੱਚ ਨਮੂਨੇ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਲੋਡ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜਾਂ ਨਹੀਂ। ਇਹ ਫ਼ਰਕ ਸਪਸ਼ਟ ਹੋਣ ਮਗਰੋਂ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ, ਖੋਜ ਦੀਆਂ ਹੱਦਾਂ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਦੀਆਂ ਹੱਦਾਂ ਸਮਝ ਆ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ।

ਸੰਖੇਪ ਜਵਾਬ

ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਇੱਕ ਸਮਤਲੀ ਧਨਾਇਨੀ ਰੰਗਕ ਹੈ ਜੋ ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡਾਂ ਨਾਲ ਗੈਰ-ਸਹਿਸੰਯੋਜਕ ਅਤੇ ਉਲਟਣਯੋਗ ਢੰਗ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਵਿੱਚ ਫਾਸਫੇਟ ਵੱਲ ਸਥਿਰ-ਵਿਦਿਉਤੀ ਖਿੱਚ, ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ-ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਅਤੇ ਛੋਟੀ ਖਾਂਚ ਨਾਲ ਜੁੜਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਇਸ ਦਾ ਉਲਟਣਯੋਗ ਹੋਣਾ ਹੀ ਮੁੱਖ ਗੱਲ ਹੈ। ਬੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਦਿੱਖਣਯੋਗ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ ਰੰਗ ਕੇ ਦਰਜ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਫਿਰ ਕਲੋਨਿੰਗ, ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਮੁੜ ਪ੍ਰੋਬ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦਾ ਰੰਗ ਹਟਾਇਆ ਜਾਂ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਦੋਹਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲੇ DNA ਦੀ ਅਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਨੂੰ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਰੰਗਣ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਤੇਜ਼ ਵਿਧੀ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 0.02 percent w/v (200 micrograms ਪ੍ਰਤੀ mL) ਹੈ। ਲਗਭਗ 15 ਮਿੰਟ ਰੰਗਾਈ ਅਤੇ ਲਗਭਗ 15 ਮਿੰਟ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇਸ ਨੂੰ ਸਫ਼ੈਦ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਾਲੇ ਲਾਈਟ ਬਾਕਸ ਉੱਤੇ ਦੇਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਝਿੱਲੀਆਂ ਲਈ ਰਵਾਇਤੀ ਨਾਰਦਰਨ ਬਲਾਟ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ pH 5.2 ਦੇ ਨੇੜੇ ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ ਵਿੱਚ 0.02 ਤੋਂ 0.04 percent ਰੰਗਕ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਅਤੇ ਸਥਿਰੀਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਈ ਮਿੰਟ ਰੰਗਾਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਫਿਰ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋ ਕੇ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰੰਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਸੀਮਿਤ ਹੈ: ਚੰਗੀਆਂ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਜੈੱਲ ਬੈਂਡ ਦਹਾਕਿਆਂ ਤੋਂ ਸੈਂਕੜਿਆਂ nanograms ਤੱਕ, ਜਦਕਿ ਸਾਵਧਾਨੀ ਨਾਲ ਦਿੱਤੇ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਕ 0.5 ਤੋਂ 1 microgram ਦੱਸਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਐਥੀਡੀਅਮ ਬ੍ਰੋਮਾਈਡ ਅਤੇ SYBR ਰੰਗਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕਈ ਘਾਤਾਂ ਵੱਧ ਮਾਤਰਾ ਹੈ। ਝਿੱਲੀਆਂ ਉੱਤੇ ਕਿਸੇ ਇੱਕ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਲਈ ਖੋਜ ਦੀ ਕੋਈ ਲਾਭਕਾਰੀ ਇਕੱਲੀ ਹੱਦ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਰੰਗਾਈ ਮੁੱਖ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਵੱਧ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ RNA ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਲੋਡ ਕੀਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਦਿਖਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਕਿਸੇ ਵੀ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਖੁਦਰਾ ਵੇਚਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਸਪਲੀਮੈਂਟ ਘੋਲ ਬਦਲ ਵਜੋਂ ਨਾ ਵਰਤੋ। ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਤਮਕ ਗ੍ਰੇਡ ਦੇ ਰੰਗਕ, ਨਿਰਧਾਰਤ ਬਫ਼ਰਾਂ ਅਤੇ RNA ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ RNase-ਰਹਿਤ ਸੰਭਾਲ ਉੱਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹਨ।

ਬੰਧਨ ਕਿਵੇਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਿੱਥੇ ਗੁੰਮਰਾਹ ਕਰਦਾ ਹੈ

ਇਸ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ ਲਾਭਕਾਰੀ ਮਾਡਲ ਦੇ ਤਿੰਨ ਹਿੱਸੇ ਹਨ। ਪਹਿਲਾਂ, ਧਨਾਤਮਕ ਆਵੇਸ਼ ਵਾਲੀ ਵਲਯ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਰਿਣਾਤਮਕ ਆਵੇਸ਼ ਵਾਲੀ ਫਾਸਫੇਟ ਰੀੜ੍ਹ ਵੱਲ ਖਿੱਚੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪਿਕ ਅਧਿਐਨਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਘੱਟ ਲੂਣ ਵਾਲੀਆਂ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਇਹ ਸਥਿਰ-ਵਿਦਿਉਤੀ ਹਿੱਸਾ ਹਾਵੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਮਾਡਲਿੰਗ ਅਤੇ ਅਣੂ-ਗਤੀ ਵਿਗਿਆਨ ਦੋਹਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲੇ DNA ਲਈ ਅੰਤਰ-ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਅਤੇ ਛੋਟੀ ਖਾਂਚ ਨਾਲ ਬੰਧਨ ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਢੰਗ ਮੰਨਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਤੇ DNA ਦੇ ਬੰਧਨ ਦੇ ਇੱਕ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪਿਕ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਸੰਖੇਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਦੂਜਾ, GC ਲਈ ਕੁਝ ਤਰਜੀਹ ਮੌਜੂਦ ਹੈ। ਮਾਡਲਿੰਗ CpG ਅਤੇ GpC ਕਦਮਾਂ ਨੂੰ ਤਰਜੀਹ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੀਆਂ ਅੰਤਰ-ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਤਰਜੀਹਾਂ ਬਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ GC-ਭਰਪੂਰ ਦੁਹਰੇ ਤੰਤੂਆਂ ਨਾਲ ਵਧੇਰੇ ਜੁੜਾਅ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਪਰ AT ਦੁਹਰੇ ਤੰਤੂ ਵੀ ਬੰਧਨ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਆਮ ਰੰਗਾਈ ਅਨੁਕ੍ਰਮ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ। ਤੀਜਾ, ਇਕਹਿਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲਾ DNA ਅਤੇ RNA ਮੁੱਖ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਸਥਿਰ-ਵਿਦਿਉਤੀ ਕਿਰਿਆਵਾਂ ਅਤੇ ਪਹੁੰਚਯੋਗ ਬੇਸਾਂ ਤੇ ਦੁਹਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲੇ ਖੇਤਰਾਂ ਨਾਲ ਸਟੈਕਿੰਗ ਰਾਹੀਂ ਜੁੜਦੇ ਹਨ। ਇਸੇ ਲਈ ਰੰਗਾਈ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਲੰਬਾਈ, ਅਨੁਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਦੂਜੀਕ ਸੰਰਚਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਬਦਲਦੀ ਹੈ।

ਇਸ ਦੇ ਦੋ ਨਤੀਜੇ ਹਨ। ਬੰਧਨ ਗੈਰ-ਸਹਿਸੰਯੋਜਕ ਹੋਣ ਕਾਰਨ ਰੰਗਕ ਧੋਣ ਨਾਲ ਨਿਕਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪੋਲੀਆਕ੍ਰਿਲਾਮਾਈਡ ਬੈਂਡ ਛੇਤੀ ਫਿੱਕੇ ਪੈ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜਦ ਤੱਕ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਜਾਣ-ਬੁੱਝ ਕੇ ਸਥਿਰ ਨਾ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇ। ਸਥਾਈ ਸਥਿਰੀਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਖ਼ਾਸ ਰੂਪ ਇਸੇ ਲਈ ਮੌਜੂਦ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਆਮ ਰੰਗਾਈ ਅਸਥਾਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ PAGE ਜੈੱਲਾਂ ਲਈ Soto ਅਤੇ Draper ਦੀ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਵਰਣਿਤ ਹੈ। ਰੰਗਕ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਵੇਦੀਕਾਰਕ ਹੋਣ ਕਾਰਨ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਰੰਗੇ ਹੋਏ DNA ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਤੇਜ਼ ਰੌਸ਼ਨੀ ਹੇਠ ਰੱਖਣਾ ਗੁਆਨੀਨ ਦਾ ਆਕਸੀਕਰਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਖ਼ਰਕਾਰ ਤੰਤੂਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਕਿਰਿਆ-ਵਿਧੀ ਦਾ ਵੇਰਵਾ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਸੰਵੇਦਿਤ ਗੁਆਨੀਨ ਆਕਸੀਕਰਨ ਬਾਰੇ ਕੰਮ ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਫ਼ੈਦ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ ਦੇਖਣ ਨਾਲ ਰਵਾਇਤੀ ਐਥੀਡੀਅਮ ਬ੍ਰੋਮਾਈਡ ਕਾਰਜ-ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ UV ਨੁਕਸਾਨ ਤੋਂ ਬਚਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਤਿਆਰੀ ਲਈ DNA ਮੁੜ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਇਹ ਅਸਲ ਲਾਭ ਹੈ। ਦਿੱਖਣਯੋਗ ਰੌਸ਼ਨੀ ਘੱਟ ਨੁਕਸਾਨਦਾਇਕ ਹੈ, ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਿਰਦੋਸ਼ ਨਹੀਂ। ਜਦੋਂ DNA ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰਨੀ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦਾ ਸਮਾਂ ਘੱਟ ਰੱਖੋ। ਇਸ ਸਾਵਧਾਨੀ ਪਿੱਛੇ ਵਿਆਪਕ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਰਸਾਇਣ ਲਈ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਰਸਾਇਣ ਦੇ ਦੋ ਮਾਰਗ ਦੇਖੋ। ਆਕਸੀਕ੍ਰਿਤ ਰੂਪ ਬੰਧਨ ਕਿਉਂ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਪਚਯਿਤ ਰੂਪ ਕਿਉਂ ਨਹੀਂ, ਇਹ ਸਮਝਾਉਣ ਵਾਲੇ ਰੈਡਾਕਸ ਜੋੜੇ ਅਤੇ ਆਵੇਸ਼ ਅਵਸਥਾਵਾਂ ਲਈ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾ ਅਤੇ ਗੁਣਾਂ ਦਾ ਰਸਾਇਣ ਦੇਖੋ।

ਪਹਿਲਾ ਕੰਮ: ਜੈੱਲਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਰੰਗਾਈ

ਜੈੱਲ ਦੀ ਰੰਗਾਈ ਇੱਕ ਸਵਾਲ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦੀ ਹੈ: ਕੀ ਇਸ ਬੈਂਡ ਵਿੱਚ ਅੱਖ ਨਾਲ ਦੇਖਣ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡ ਹੈ? ਅਗਰੋਜ਼ ਵਿੱਚ ਦੋਹਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲਾ DNA ਸਭ ਤੋਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਮਾਮਲਾ ਹੈ। Flores ਅਤੇ ਸਹਿਯੋਗੀਆਂ ਦੀ ਮੂਲ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਜੈੱਲ ਵਿਧੀ ਨੇ 1 percent ਅਗਰੋਜ਼ ਉੱਤੇ 0.02 percent ਵਾਲੇ ਤੇਜ਼ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਸਫਲ ਮੁੜ-ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਤੇ ਕਲੋਨਿੰਗ ਦਿਖਾਈ। ਸਪਲਾਇਰ ਦਾ ਇਹੋ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ IBI Scientific ਦੇ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਉਤਪਾਦ ਪੰਨੇ ਉੱਤੇ ਵੀ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ 0.04 percent ਵਾਲੀ ਝਿੱਲੀ ਵਿਧੀ ਅਤੇ ਤੇਜ਼ ਜੈੱਲ ਰੂਪ ਇਕੱਠੇ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਹਨ।

ਵਿਹਾਰਕ ਕਾਰਜ-ਵਿਧੀ:

1. ਜੈੱਲ ਨੂੰ ਆਮ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਚਲਾਓ। ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਰੰਗਾਈ ਕਰੋ, ਉਸ ਦੌਰਾਨ ਨਹੀਂ, ਜਦ ਤੱਕ ਸੋਧੀ ਹੋਈ ਵਿਧੀ ਲਈ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਜਾਂ ਵਿਭੇਦਨ ਸਮਰੱਥਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਨਾ ਹੋਵੇ।
2. ਆਸਵਿਤ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 0.02 percent w/v ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਵਿੱਚ ਡੁਬੋ ਕੇ ਹੌਲੀ ਹਿਲਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਲਗਭਗ 15 ਮਿੰਟ ਰੱਖੋ।
3. ਪਾਣੀ ਕਈ ਵਾਰ ਬਦਲ ਕੇ ਕੁੱਲ ਲਗਭਗ 15 ਮਿੰਟ ਰੰਗ ਹਟਾਓ, ਜਦ ਤੱਕ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਦੀ ਪਿਛੋਕੜ ਘੱਟ ਨਾ ਹੋ ਜਾਵੇ ਅਤੇ ਬੈਂਡ ਸਪਸ਼ਟ ਨਾ ਦਿਸਣ।
4. ਸਫ਼ੈਦ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਾਲੇ ਇਲਿਊਮੀਨੇਟਰ ਉੱਤੇ ਤੁਰੰਤ ਤਸਵੀਰ ਲਓ।

ਅਗਰੋਜ਼ ਅਤੇ ਪੋਲੀਆਕ੍ਰਿਲਾਮਾਈਡ ਦਾ ਵਿਹਾਰ ਵੱਖਰਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਅਗਰੋਜ਼ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਵਿੱਚ ਰੰਗਕ ਰੋਕ ਕੇ ਰੱਖਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣਾ ਧੀਮਾ ਕਦਮ ਹੈ। ਪਤਲੀਆਂ ਪੋਲੀਆਕ੍ਰਿਲਾਮਾਈਡ ਜੈੱਲਾਂ ਛੇਤੀ ਰੰਗੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਪਰ ਰੰਗਕ ਛੇਤੀ ਗੁਆ ਵੀ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਨਾਲ ਤਿਆਰੀ ਲਈ ਬੈਂਡ ਕੱਟ ਕੇ ਕੱਢਣਾ ਆਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਰਿਕਾਰਡ ਲਈ ਮੁਸ਼ਕਲ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਸਥਾਪਿਤ Current Protocols ਸ਼ੈਲੀ ਦੀਆਂ PAGE ਵਿਧੀਆਂ ਅਨੁਸਾਰ, ਪੋਲੀਆਕ੍ਰਿਲਾਮਾਈਡ ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਉਸੇ 0.02 percent ਵਿਧੀ ਨਾਲ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋ ਕੇ 20 ਤੋਂ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਲੱਭਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਤਿਆਰੀ ਵਾਲੇ ਓਲੀਗੋਜ਼ ਲਈ ਪਤਲੇ TBE ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 0.0002 percent ਦੇ ਬਹੁਤ ਪਤਲੇ ਰੂਪ ਕਈ ਘੰਟਿਆਂ ਦੌਰਾਨ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਦੀਆਂ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਹਨ, ਪਰ ਉਨ੍ਹਾਂ ਲਈ ਸਬੂਤ ਘੱਟ ਮਜ਼ਬੂਤ ਹਨ।

DNA ਅਤੇ RNA ਦਾ ਫ਼ਰਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਦੋਹਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲਾ DNA ਸਭ ਤੋਂ ਮਜ਼ਬੂਤ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਬੰਧਨ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। RNA ਅਤੇ ਇਕਹਿਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲਾ DNA ਵੀ ਰੰਗੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਕਮਜ਼ੋਰ ਅਤੇ ਘੱਟ ਅਨੁਮਾਨਯੋਗ ਢੰਗ ਨਾਲ। ਫਾਰਮਲਡੀਹਾਈਡ ਅਗਰੋਜ਼ RNA ਜੈੱਲਾਂ ਲਈ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਜੈੱਲ ਦੇ ਅੰਦਰ ਨੀਲੀ ਰੰਗਾਈ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀਆਂ; ਪਹਿਲਾਂ RNA ਨੂੰ ਝਿੱਲੀ ਉੱਤੇ ਲਿਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ ਅਤੇ ਫਿਰ ਉੱਥੇ ਰੰਗਾਈ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਤਬਦੀਲੀ ਨਾਲ ਕਮਜ਼ੋਰ ਜੈੱਲ ਸੰਕੇਤ ਦੀ ਥਾਂ ਵਧੇਰੇ ਸਪਸ਼ਟ ਝਿੱਲੀ ਸੰਕੇਤ ਅਤੇ ਲੋਡਿੰਗ ਦਾ ਰਿਕਾਰਡ ਮਿਲਦਾ ਹੈ।

ਦੂਜਾ ਕੰਮ: ਝਿੱਲੀਆਂ ਉੱਤੇ ਰੰਗਾਈ

ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਰੰਗਾਈ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਸਵਾਲ ਦਾ ਜਵਾਬ ਦਿੰਦੀ ਹੈ: ਕੀ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਸਫਲ ਹੋਇਆ ਅਤੇ ਕੀ ਲੇਨਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ? ਰਵਾਇਤੀ ਵਰਤੋਂ Herrin ਅਤੇ Schmidt ਦੀ ਉਲਟਣਯੋਗ ਨਾਰਦਰਨ ਬਲਾਟ ਰੰਗਾਈ ਹੈ। ਮੂਲ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ pH 5.0 ਉੱਤੇ 50 mM ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ ਵਿੱਚ 0.04 percent ਰੰਗਕ ਨਾਲ 2 ਤੋਂ 3 ਮਿੰਟ ਰੰਗਾਈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਸੀ। ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ SSPE ਵਿੱਚ ਪਤਲੇ SDS ਨਾਲ ਰੰਗ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਸੀ।

ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਆਧੁਨਿਕ ਰੂਪ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹੈ:

1. RNA ਜਾਂ ਡੀਨੇਚਰ ਕੀਤੇ DNA ਨੂੰ ਨਾਈਲੋਨ ਜਾਂ ਨਾਈਟ੍ਰੋਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਉੱਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ, ਫਿਰ UV ਕ੍ਰਾਸਲਿੰਕਿੰਗ ਜਾਂ ਤਾਪ ਦੇ ਕੇ ਸਥਿਰ ਕਰੋ ਤਾਂ ਜੋ ਰੰਗਾਈ ਦੌਰਾਨ ਨਮੂਨਾ ਨਾ ਨਿਕਲ ਜਾਵੇ।
2. ਵਿਕਲਪੀ ਪਰ ਆਮ ਕਦਮ: ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ 5 percent ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 15 ਮਿੰਟ ਭਿਓਵੋ।
3. pH 5.2 ਦੇ ਨੇੜੇ 0.3 ਤੋਂ 0.5 M ਸੋਡੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ ਵਿੱਚ 0.02 ਤੋਂ 0.04 percent ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ 5 ਤੋਂ 10 ਮਿੰਟ ਰੰਗਾਈ ਕਰੋ।
4. ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਧੋ ਕੇ 5 ਤੋਂ 15 ਮਿੰਟ ਰੰਗ ਹਟਾਓ, ਦਰਜ ਕਰੋ ਅਤੇ ਫਿਰ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਬਚਿਆ ਹੋਇਆ ਰੰਗਕ ਹਟਾਓ।

ਨਾਰਦਰਨ ਕੰਮ ਵਿੱਚ ਧਨਾਤਮਕ ਆਵੇਸ਼ ਵਾਲਾ ਨਾਈਲੋਨ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਨਾਈਟ੍ਰੋਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਵੀ ਉਸੇ ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਐਸੀਟੇਟ ਵਾਲੀ ਕਾਰਜ-ਵਿਧੀ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਤਸਵੀਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ, 28S ਅਤੇ 18S ਬੈਂਡਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ (ਜਾਂ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ RNA ਲਈ 23S ਅਤੇ 16S), ਲੈਡਰਾਂ ਅਤੇ ਮਿਆਰਾਂ ਨੂੰ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਕਰਨ ਅਤੇ ਕੁੱਲ RNA ਦੇ ਨਾਰਮਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦਾ ਲਗਭਗ ਰਿਕਾਰਡ ਰੱਖਣ ਲਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਨਾਰਦਰਨ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਜਾਂਚ ਲਈ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ ਬੈਂਡਾਂ ਦਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਵਿੱਚ ਡੇਅਰੀ ਵਿਗਿਆਨ ਦਾ ਉਹ ਕੰਮ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ ਜਿਸ ਨੇ ਨਾਰਮਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਲਈ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ ਬੈਂਡ ਵਰਤੇ ਸਨ। ਸਦਰਨ ਝਿੱਲੀਆਂ ਨੂੰ ਵੀ ਇਸੇ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਰੰਗਕ ਨਾਰਦਰਨ ਲੋਡਿੰਗ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਧ ਸਥਾਪਿਤ ਹੈ। ਸਦਰਨ DNA ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਡੀਨੇਚਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਜੈੱਲ ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦੇ ਅੰਕੜੇ ਇੱਥੇ ਸਿੱਧੇ ਲਾਗੂ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ।

ਖੋਜ ਦੀਆਂ ਹੱਦਾਂ ਅਤੇ ਪਿਛੋਕੜ: ਜਿੱਥੇ ਨੀਲਾ ਰੰਗ ਪਿੱਛੇ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ

ਹੇਠਲੀ ਤੁਲਨਾ ਜਾਣ-ਬੁੱਝ ਕੇ ਲਗਭਗ ਅੰਕੜਿਆਂ ਉੱਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹੈ। ਰੰਗਾਈ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਜੈੱਲ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ, ਬੈਂਡ ਦੀ ਚੌੜਾਈ, ਆਪਟੀਕਲ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਅਤੇ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਦੀ ਸਾਵਧਾਨੀ ਉੱਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਹਰ ਅੰਕ ਨੂੰ ਪਰਿਮਾਣ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਵਜੋਂ ਲਓ, ਨਿਰਧਾਰਤ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਜੋਂ ਨਹੀਂ।

ਪਿਛੋਕੜ ਦਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸੀਮਿਤ ਸੰਕੇਤ ਵਰਤੋਂਯੋਗ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ। ਮੁਕਤ ਰੰਗਕ ਦਾ ਰੰਗ ਬਹੁਤ ਗੂੜ੍ਹਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਕਾਂਟ੍ਰਾਸਟ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਰੰਗਕ ਨੂੰ ਹਟਾਏ ਬਿਨਾਂ ਨਾ-ਜੁੜਿਆ ਰੰਗਕ ਕੱਢਣ ਨਾਲ ਬਣਦਾ ਹੈ। ਵੱਧ ਸੰਘਣੀ ਰੰਗਾਈ ਨਾਲ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿਰਲੇ ਹੀ ਵਧਦੀ ਹੈ। ਮੁੱਖ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਵਧਦਾ ਹੈ। ਉਸੇ ਜੈੱਲ, ਝਿੱਲੀ ਅਤੇ ਕੈਮਰੇ ਉੱਤੇ ਪਤਲਾਪਣ ਦੀ ਲੜੀ ਅਜ਼ਮਾਓ ਅਤੇ ਸਿਰਫ਼ ਉਹ ਰੇਂਜ ਵਰਤੋ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਮਾਕਲਿਤ ਤੀਬਰਤਾ ਇਨਪੁਟ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਰਹਿੰਦੀ ਹੈ। ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਅਰਧ-ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਲੋਡਿੰਗ ਨਾਰਮਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਉੱਚ ਡਾਇਨਾਮਿਕ ਰੇਂਜ ਵਾਲਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪਰਖ-ਤਰੀਕਾ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ, ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ, ਸੰਤ੍ਰਿਪਤੀ ਅਤੇ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਦੀ ਦਰ ਲੇਨ ਤੋਂ ਲੇਨ ਬਦਲਦੀ ਹੈ।

ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਦੀਆਂ ਹੱਦਾਂ: ਰੰਗਾਈ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕੀ ਵਰਤੋਂਯੋਗ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ

ਨੀਲੀ ਰੰਗਾਈ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਲੋਨਿੰਗ ਸਫਲ ਹੋਣ ਦੇ ਸਬੂਤ ਹਨ। Flores ਅਤੇ ਸਹਿਯੋਗੀਆਂ ਨੇ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਅਗਰੋਜ਼ ਬੈਂਡ ਕੱਟ ਕੇ ਕੱਢੇ, DNA ਮੁੜ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਉਸ ਦੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਾਰਮੇਸ਼ਨ ਕੀਤੀ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ UV ਨਾਲ ਐਥੀਡੀਅਮ ਬ੍ਰੋਮਾਈਡ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਨਾਲੋਂ ਬਿਹਤਰ ਕਲੋਨਿੰਗ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ। ਸੰਭਾਵੀ ਕਾਰਨ ਘੱਟ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਨੁਕਸਾਨ ਹੈ, ਰੰਗਕ ਦਾ ਆਪਣਾ ਕੋਈ ਲਾਭ ਨਹੀਂ। ਸਫ਼ੈਦ ਰੌਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ ਰੱਖਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਘੱਟ ਰੱਖੋ ਅਤੇ ਮੁੜ ਪ੍ਰਾਪਤ DNA ਨੂੰ ਆਮ ਜੈੱਲ ਐਕਸਟ੍ਰੈਕਸ਼ਨ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਵਿੱਚੋਂ ਲੰਘਾਓ।

PCR ਅਤੇ ਸੀਕਵੇਂਸਿੰਗ ਲਈ ਸਬੂਤ ਘੱਟ ਹਨ। ਬਚਿਆ ਹੋਇਆ ਰੰਗਕ ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਵਾਲੇ ਕਦਮਾਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰੰਗ ਹਟਾਓ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਰੋ। ਨੀਲੀ ਜੈੱਲ ਤੋਂ ਠੀਕ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ DNA ਕੰਮ ਕਰਨ ਦੀ ਉਮੀਦ ਹੈ, ਪਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪੋਲਿਮਰੇਜ਼ਾਂ ਅਤੇ ਸੀਕਵੇਂਸਿੰਗ ਰਸਾਇਣਾਂ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧੇ ਨਾਲ ਆਏ ਬਚੇ ਰੰਗਕ ਦੀ ਸਹਿਣਯੋਗ ਮਾਤਰਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਾਪੀ ਨਹੀਂ ਗਈ। ਇਸ ਨੂੰ ਆਪਣੇ ਆਪ ਸਹਿਣਯੋਗ ਨਾ ਮੰਨੋ।

ਬਲਾਟ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕ੍ਰਮ ਸਖ਼ਤੀ ਨਾਲ ਮੰਨਿਆ ਜਾਵੇ: ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ, ਸਥਿਰੀਕਰਨ, ਰੰਗਾਈ, ਦਰਜ ਕਰਨਾ, ਰੰਗ ਹਟਾਉਣਾ, ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ। ਇਹ ਕ੍ਰਮ Herrin ਅਤੇ Schmidt ਦੀ ਵਿਧੀ ਹੈ। ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰੰਗਾਈ ਕਰਨਾ ਜਾਂ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਦਾ ਕਦਮ ਛੱਡਣਾ ਇੱਕ ਵੱਖਰੀ ਵਿਧੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਦੀ ਆਪਣੀ ਪ੍ਰਮਾਣਿਕਤਾ ਜਾਂਚ ਲੋੜੀਂਦੀ ਹੈ। ਰੰਗਕ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਮਿਆਰੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਪ੍ਰੋਬ ਹਟਾਉਣ ਅਤੇ ਮੁੜ ਪ੍ਰੋਬ ਲਗਾਉਣ ਦੇ ਕਦਮ ਆਮ ਤਰ੍ਹਾਂ ਚੱਲਦੇ ਹਨ। ਇਸੇ ਰੰਗਕ ਪਰਿਵਾਰ ਨਾਲ ਸੈੱਲ-ਪੱਧਰ ਦੀ ਰੰਗਾਈ ਅਤੇ ਇਹ ਜਾਣਨ ਲਈ ਕਿ ਸਥਿਰ ਕੀਤੀ ਫ਼ਿਲਮ ਵਾਲਾ ਤਰਕ ਜੀਵਤ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਉੱਤੇ ਕਿਉਂ ਲਾਗੂ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਰੰਗਾਈ ਐਟਲਸ ਦੇਖੋ।

ਤਿਆਰੀ ਵਾਲੀਆਂ ਅਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਨਾਲ ਲੱਭੇ PAGE ਓਲੀਗੋਜ਼ ਲਈ ਬੈਂਡ ਕੱਟ ਕੇ ਕੱਢਣਾ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਬਸ਼ਰਤੇ ਸਥਾਈ ਸਥਿਰੀਕਰਨ ਵਾਲਾ ਰੂਪ ਨਾ ਵਰਤਿਆ ਜਾਵੇ। ਉਲਟਣਯੋਗ ਬੰਧਨ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੇ ਰੰਗਕ ਲਈ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਇਲਿਊਸ਼ਨ ਰਸਾਇਣਕ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਸੰਭਵ ਹੈ, ਪਰ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਮੁੜ-ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਦੇ ਅੰਕੜੇ ਘੱਟ ਹਨ। ਇਲਿਊਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਲੂਣ ਹਟਾਓ ਜਾਂ ਅਵਖੇਪਣ ਕਰੋ।

ਵਾਰ-ਵਾਰ ਆਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ

ਫਿੱਕੇ ਜੈੱਲ ਬੈਂਡਾਂ ਦਾ ਆਮ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਰੰਗ-ਆਧਾਰਿਤ ਰੰਗਾਈ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਪੁੰਜ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਖ਼ਾਸ ਕਰਕੇ ਛੋਟੇ ਇਕਹਿਰੇ ਤੰਤੂ ਵਾਲੇ ਜਾਂ RNA ਟਾਰਗੇਟਾਂ ਲਈ। ਵੱਧ ਨਮੂਨਾ ਲੋਡ ਕਰੋ, ਤਾਜ਼ਾ ਰੰਗਕ ਵਰਤੋ, ਸੰਘਣਤਾ ਵਧਾਉਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰੰਗਾਈ ਦਾ ਸਮਾਂ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣਾ ਪਹਿਲਾਂ ਰੋਕ ਦਿਓ। ਬਿਨਾਂ ਕਾਂਟ੍ਰਾਸਟ ਵਾਲੀ ਪੂਰੀ ਗੂੜ੍ਹੀ ਨੀਲੀ ਜੈੱਲ ਦਾ ਆਮ ਮਤਲਬ ਹੈ ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਰੰਗਾਈ ਜਾਂ ਪਾਣੀ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਵਾਰ ਬਦਲਣਾ। PAGE ਬੈਂਡਾਂ ਦਾ ਫਿੱਕਾ ਪੈਣਾ ਉਮੀਦ ਅਨੁਸਾਰ ਰਸਾਇਣਕ ਵਿਹਾਰ ਹੈ, ਰੰਗਾਈ ਦੀ ਅਸਫਲਤਾ ਨਹੀਂ। ਛੇਤੀ ਤਸਵੀਰ ਲਓ। ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਅਸਮਾਨ ਪਿਛੋਕੜ ਮੋੜਾਂ, ਬੁਲਬੁਲਿਆਂ, ਉਂਗਲਾਂ ਦੇ ਨਿਸ਼ਾਨਾਂ, ਅਸਮਾਨ ਹਿਲਾਉਣ ਜਾਂ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਹੋਏ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਵੱਲ ਇਸ਼ਾਰਾ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਕੰਟਰੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਅਸਮਾਨ ਲੋਡਿੰਗ ਨਾ ਸਮਝੋ। ਫੈਲਿਆ ਹੋਇਆ ਕਮਜ਼ੋਰ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ ਪੈਟਰਨ ਵਿਘਟਨ ਦਾ ਸੰਕੇਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਅਧੂਰੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ, ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਕੁੱਲ RNA (ਆਮ ਲੇਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕਈ ਤੋਂ ਦਹਾਕਿਆਂ micrograms ਹੁੰਦੇ ਹਨ) ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਰੰਗ ਹਟਾਉਣ ਕਾਰਨ ਵੀ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਰੰਗਕ ਵੱਧ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ RNA ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਕਿਸੇ ਖ਼ਾਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਬਾਰੇ ਨਹੀਂ ਦੱਸਦਾ। ਉਹ ਕੰਮ ਪ੍ਰੋਬ ਦਾ ਹੈ।

ਵਧਾ-ਚੜ੍ਹਾ ਕੇ ਦਾਅਵੇ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਸੁਰੱਖਿਆ ਅਤੇ ਸੰਭਾਲ

ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲਣਾ ਐਥੀਡੀਅਮ ਬ੍ਰੋਮਾਈਡ ਨਾਲੋਂ ਸੌਖਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਹਾਨੀ-ਰਹਿਤ ਨਹੀਂ। MilliporeSigma ਦੀ ਮੌਜੂਦਾ ਸੁਰੱਖਿਆ ਡਾਟਾ ਸ਼ੀਟ ਰੰਗਕ ਨੂੰ ਮੂੰਹ ਰਾਹੀਂ ਤੀਬਰ ਵਿਸ਼ਾਕਤਤਾ ਦੀ ਸ਼੍ਰੇਣੀ 4 ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਨਿਗਲਣ ਉੱਤੇ ਹਾਨੀਕਾਰਕ ਦੱਸਦੀ ਹੈ। Sigma-Aldrich ਦੀ ਮਿਥੀਲੀਨ ਬਲੂ SDS ਅਨੁਸਾਰ ਇਸ ਦਾ ਨਿਪਟਾਰਾ ਮਨਜ਼ੂਰਸ਼ੁਦਾ ਕਚਰਾ-ਨਿਪਟਾਰੇ ਦੇ ਮਾਰਗ ਰਾਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਐਥੀਡੀਅਮ ਬ੍ਰੋਮਾਈਡ ਲਈ ਜੀਨ-ਵਿਸ਼ਾਕਤਤਾ ਦੀਆਂ ਵਧੇਰੇ ਸਖ਼ਤ ਚੇਤਾਵਨੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸ ਦੀ Sigma-Aldrich ਐਥੀਡੀਅਮ ਬ੍ਰੋਮਾਈਡ SDS ਵਿੱਚ ਜਨਨ ਸੈੱਲਾਂ ਉੱਤੇ ਸ਼ੱਕੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਇਸ ਦੀਆਂ ਜੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਘੋਲ ਆਮ ਤੌਰ ਉੱਤੇ ਖ਼ਤਰਨਾਕ ਰਸਾਇਣਕ ਕਚਰੇ ਵਜੋਂ ਵੱਖ ਰੱਖੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ Thermo Fisher ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡ ਰੰਗਕ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਕ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਦੋਵਾਂ ਲਈ SDS ਅਤੇ ਸੰਸਥਾ ਦੇ ਨਿਯਮਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ। ਸੁੱਕੇ ਰੰਗਕ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬੰਦ ਅਤੇ ਸੁੱਕਾ ਰੱਖੋ, ਵਰਤੋਂ ਵਾਲੇ ਰੰਗਕ ਘੋਲ ਨੂੰ ਸਿਰਫ਼ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਅਨੁਸਾਰ ਮੁੜ ਵਰਤੋ, ਰੰਗੀਆਂ ਝਿੱਲੀਆਂ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਸ਼ੀਟਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸੁੱਕਾ ਸੰਭਾਲੋ ਅਤੇ ਬੈਂਡਾਂ ਦੇ ਵਿਸਰਣ ਨਾਲ ਫੈਲ ਜਾਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ ਤਸਵੀਰਾਂ ਲਓ।

ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਲਈ ਇਹ ਗੱਲ ਯਾਦ ਰੱਖੋ। ਜੈੱਲਾਂ ਸਫ਼ੈਦ ਰੌਸ਼ਨੀ ਹੇਠ ਵੱਧ ਲੋਡ ਉੱਤੇ ਦਿੱਖ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ। ਝਿੱਲੀਆਂ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਅਤੇ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਇਸ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਿ ਪ੍ਰੋਬ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਖੋਜ ਦਾ ਕੰਮ ਕਰੇ। ਇੱਕੋ ਰੰਗਕ ਸੀਮਿਤ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਉਲਟਣਯੋਗ ਬੰਧਨ ਅਤੇ ਕਾਰਜਾਂ ਦੇ ਸਖ਼ਤ ਕ੍ਰਮ ਨਾਲ ਦੋਵਾਂ ਲਈ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।