मेथिलिन ब्लु र दृष्टि: रेटिनासम्बन्धी अनुसन्धानले के देखाउँछ र यसको सीमा कहाँ छ

एक पाठकले मेथिलिन ब्लुले रेटिनालाई जोगाएको अध्ययन भेट्छन्, त्यसपछि स्वाभाविक प्रश्न गर्छन्: के यसलाई आँखामा हाल्नुपर्छ? मेथिलिन ब्लु र दृष्टिसम्बन्धी अनुसन्धानले यो प्रश्नको उत्तर दिँदैन, किनभने कुनै पनि प्रमुख अध्ययनले त्यसरी प्रयोग गर्ने परीक्षण गरेको थिएन। एउटामा मुसाको आँखाको भिट्रियसमा विषाक्त पदार्थसँगै यो रङद्रव्य इन्जेक्सन गरिएको थियो। अर्कोमा यसलाई प्रयोगशाला पात्रमा अलग गरिएका कोशिकाहरू राखिएको संवर्धन माध्यममा थपिएको थियो। अर्कोमा आनुवंशिक उत्परिवर्तन भएका मुसाहरूको पिउने पानीमा मिसाइएको थियो। प्रत्येक नतिजा त्यसको प्रयोग मार्ग र मोडेलसँग मात्र सम्बन्धित छ।

यस लेखले तीन पूर्वक्लिनिकल अध्ययन, रेटिनाका दुई प्रकारका कोशिका, र प्रयोगशालामा देखिएको संरक्षण तथा क्लिनिकल नेत्र उपचारबीचको सीमालाई केलाउँछ। समग्र ढाँचा एउटै छ: नियन्त्रित अवस्थामा मेथिलिन ब्लुले रेटिनाका कोशिकाहरूमा माइटोकन्ड्रियासम्बन्धी तनाव परिवर्तन गर्न सक्छ, र त्यो निष्कर्षले खुद्रा बिक्रीका घोल आँखामा लगाउन उचित ठहराउँदैन।

दुई प्रकारका कोशिका, दुई फरक रोग

रेटिना तहहरू मिलेर बनेको हुन्छ, र कुन तह हो भन्ने कुरा महत्त्वपूर्ण हुन्छ। प्रकाश पहिले बाहिरी रेटिनाका प्रकाशग्राहीहरूमा पर्छ। तिनका सङ्केतहरू मध्यवर्ती स्नायुकोशिकाहरू हुँदै भित्री रेटिनाका ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरूमा पुग्छन्, जसका अक्षतन्तुहरू दृष्टि स्नायुमार्फत बाहिर निस्कन्छन्। तलको चित्रले यी तहहरूलाई क्रमअनुसार देखाउँछ।

ग्लुकोमा र दृष्टि स्नायु विकृतिमा जोखिममा पर्ने कोशिकाहरू रेटिनाका ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरू हुन्। खोजीहरूमा मेथिलिन ब्लु ग्लुकोमा उल्लेख हुँदा सामान्यतया यही भित्री तह र यसका अक्षतन्तुहरूलाई जनाइएको हुन्छ। बाहिरी रेटिनाको क्षयमा जोखिममा पर्ने कोशिकाहरू प्रकाशग्राही हुन्। रेटिनामा तिनको ऊर्जा माग सबैभन्दा बढी हुन्छ र तिनीहरू आफ्नो कोशिकीय श्वसन क्षमताको सीमाको नजिक काम गर्छन्, जसले गर्दा माइटोकन्ड्रियाको कम्प्लेक्स I असफल हुँदा तिनीसँग निकै कम अतिरिक्त क्षमता बाँकी रहन्छ। एउटा कोशिका प्रकारको नतिजा अर्कोमा लागू हुँदैन, र तलका तीन अध्ययनले तिनलाई छुट्टाछुट्टै राखेका छन्। मोडेल र निष्कर्ष छुट्याउने सामान्य सीपबारे मेथिलिन ब्लुसम्बन्धी अनुसन्धान कसरी पढ्ने मा व्याख्या गरिएको छ।

जीवित मुसाको आँखामा ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरू

तीनमध्ये सबैभन्दा पुरानो अध्ययनमा, अनुसन्धानकर्ताहरूले मुसाको एउटा आँखाको भिट्रियसमा रोटेनोनको सूक्ष्म इन्जेक्सन दिएर दृष्टि स्नायु विकृतिको मोडेल बनाए, र अर्को आँखालाई वाहक पदार्थको नियन्त्रणका रूपमा प्रयोग गरे। रोटेनोनले माइटोकन्ड्रियाको कम्प्लेक्स I अवरुद्ध गर्छ, जुन NADH बाट इलेक्ट्रोनहरू अगाडि पठाउने प्रवेशबिन्दु हो। कम्प्लेक्स I को कार्यविकार नै यस मोडेललाई ग्याङ्ग्लियन कोशिका र दृष्टि स्नायुको रोग, लेबर वंशानुगत दृष्टि स्नायु विकृतिसँग जोड्ने विशेषता पनि हो।

चौबीस घण्टापछि, रोटेनोन दिइएका आँखाहरूको ग्याङ्ग्लियन कोशिका तह नियन्त्रण आँखाको भन्दा पातलो थियो र त्यसमा कम कोशिका थिए। मेथिलिन ब्लु र रोटेनोन एकैसाथ इन्जेक्सन गर्दा त्यो क्षति मात्रा अनुसार रोकिएको थियो। परीक्षण गरिएको सबैभन्दा उच्च मात्रा (0.07 mg/kg, मुसाको LD50 भन्दा निकै कम) ले तहको मोटाइ र कोशिका सङ्ख्या दुवै जोगाएको थियो। मस्तिष्कको समरूप बनाइएको ऊतक मिश्रणमा गरिएका समानान्तर परीक्षणले दुई प्रभाव देखाए: मेथिलिन ब्लुले रोटेनोनबाट उत्पन्न अक्सिडेटिभ तनाव उल्ट्यायो र अक्सिजन खपतमा आएको गिरावट पनि उल्ट्यायो। लेखकहरूले उत्तेजनाजन्य विषाक्तताको संयन्त्र प्रस्ताव गरे, जसमा रोटेनोनले सङ्केत नियमन गर्ने अमाक्रिन कोशिकाहरूलाई चोट पुर्‍याउँछ, ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरूले अत्यधिक सङ्केत प्रवाह गर्छन्, र एन्टिअक्सिडेन्ट क्रियाले त्यसबाट हुने क्षति रोक्छ। त्यस संरक्षणको पछाडि प्रस्तावित रसायनबारे मेथिलिन ब्लुका माइटोकन्ड्रियासम्बन्धी संयन्त्रहरू मा विस्तार गरिएको छ।

यस नतिजाका तीन सीमा छन्। रङद्रव्य विषाक्त पदार्थसँगै सिधै आँखाभित्र इन्जेक्सन गरिएको थियो, जुन पदार्थ पुर्‍याउने विधि हो, उपचार तालिका होइन। अवलोकन अवधि 24 घण्टा थियो। अनि चोट पुगेका दुवै समूहमा साइटोक्रोम अक्सिडेजको मापन बढेको थियो, जसलाई लेखकहरूले जीवित रेटिनामा कोशिकीय श्वसन पुनःस्थापित भएको प्रमाण नभई अत्यधिक सक्रियताका रूपमा व्याख्या गरे।

प्रयोगशाला पात्रमा अलग गरिएका ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरू

दोस्रो अध्ययनमा आँखालाई नै प्रयोगबाट अलग राखियो। अनुसन्धानकर्ताहरूले कम उमेरका मुसाहरूबाट प्राथमिक रेटिनल ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरू अलग गरे र तिनलाई रोटेनोन, एपोप्टोसिस उत्प्रेरक स्टाउरोस्पोरिन, वा 72 घण्टासम्म कम अक्सिजनको अवस्थामा राखे, त्यसपछि जीवित/मृत कोशिका छुट्याउने रञ्जकले बाँच्ने अवस्था मापन गरे। संवर्धन माध्यममा 1 र 10 micromolar मेथिलिन ब्लुले प्रत्येक हानिकारक अवस्थाविरुद्ध कोशिकाहरूको बाँच्ने दर सुधार्‍यो, जुन अवस्था अनुसार लगभग 1.5 देखि 1.9 गुणा थियो। सँगै गरिएको परीक्षणले हाइड्रोजन पेरोक्साइडको प्रभाव पर्दा मेथिलिन ब्लुले साइटोक्रोम c अक्सिडेजको सक्रियता जोगाएको देखायो।

यो अलग गरिएका कोशिकामा गरिएको औषधीय अध्ययन हो। यौगिक निश्चित सान्द्रतामा संवर्धन माध्यम हुँदै विसरणबाट कोशिकासम्म पुग्यो; बाटोमा कर्निया, आँसुको तह, लेन्स, भिट्रियस, रक्त आपूर्ति वा प्रतिरक्षा प्रणाली केही थिएन। यही सरलता यस मोडेलको उद्देश्य हो: यसले यौगिक पुगेपछि ग्याङ्ग्लियन कोशिकाहरू आफैँ जोगिन सक्छन् भन्ने देखाउँछ। कर्नियाको सतहमा राखिएको थोपाले भित्री रेटिनासम्म कुनै निश्चित सान्द्रता पुर्‍याउँछ कि पुर्‍याउँदैन भन्नेबारे यसले केही बताउँदैन। तिनै कोशिकामा विषाक्तता हुने भएकाले 10 micromolar भन्दा माथिका सान्द्रता प्रयोग गरिएनन्। यो प्रयोगशाला पात्रमा मात्राप्रतिको प्रतिक्रिया लाभ र हानि दुवैतर्फ जान सक्छ भन्ने सम्झना हो।

आनुवंशिक उत्परिवर्तन भएका मुसा र कोशिका लाइनमा प्रकाशग्राहीहरू

तेस्रो अध्ययन बाहिरी रेटिनासँग सम्बन्धित छ। अनुसन्धानकर्ताहरूले हार्लेक्विन मुसा प्रयोग गरे, जसमा एपोप्टोसिस उत्प्रेरक कारकको कमी हुन्छ र त्यसले कम्प्लेक्स I लाई अपूर्ण रूपमा संयोजित अवस्थामा छोड्छ, र 11 महिनाको उमेरमा प्रकाशग्राहीको संरचना, बाहिरी खण्डका सूचकहरू र माइटोकन्ड्रियाको अखण्डता जाँचे। दूध छुटाएपछि मेथिलिन ब्लु पिउने पानीमार्फत दैनिक करिब 10 mg/kg को मात्रामा शरीरभरि पुग्ने गरी दिइएको थियो। उपचार नदिइएका उत्परिवर्तित मुसाको तुलनामा उपचार दिइएका उत्परिवर्तित मुसामा रेटिनाको मोटाइ बढी कायम रह्यो, रोडोप्सिन र अप्सिनका सूचकहरू बढी कायम रहे, र माइटोकन्ड्रियाको संरचना बढी स्वस्थ रह्यो।

सँगै गरिएको कोशिका अध्ययनमा 661W कोशिकाहरू प्रयोग गरियो। यो मुसाका प्रकाशग्राहीजस्ता कोशिकाहरूको निरन्तर विभाजन गर्न सक्ने लाइन हो, जसलाई मेथिलिन ब्लुसहित वा बिना रोटेनोनको सम्पर्कमा 24 घण्टासम्म राखियो। 30 micromolar मा बाँच्ने दर सुधारियो, र कम सान्द्रताले NADH र NAD+ को अनुपात सामान्य बनायो तथा अक्सिडेटिभ तनाव घटायो। उल्लेखनीय कुरा मेथिलिन ब्लुले नगरेको काम हो: यसले ATP पुनःस्थापित गरेन। संरक्षण ऊर्जा आपूर्ति पुनःस्थापित हुनुसँग नभई रेडक्स तनाव कम हुनुसँग र तनावसम्बन्धी मार्गहरू शान्त हुनुसँग जोडिएको थियो। ती मार्गहरूमा माइटोकन्ड्रियाको अनफोल्डेड प्रोटिन प्रतिक्रिया र माइटोफेजीका सूचकहरू पनि समावेश थिए।

मेथिलिन ब्लु र रेटिनासम्बन्धी दाबीका लागि यो भिन्नता महत्त्वपूर्ण छ। कुनै यौगिकले तनावमा परेको प्रकाशग्राहीलाई त्यसको ऊर्जा अभाव नसुधारी पनि जीवित राख्न सक्छ। यसले कुनै पनि सम्भावित चिकित्सकीय व्याख्यालाई व्यापक पुनर्जीवनको सट्टा रेडक्स तनावसम्म सीमित गर्छ।

तीन अध्ययनको सँगसँगै तुलना

तलको तुलनामा प्रत्येक अध्ययनलाई मोडेल र प्रयोग मार्गअनुसार चिनाइएको छ, किनभने यी दुई स्तम्भले नतिजाले के कुरालाई समर्थन गर्न सक्छ भन्ने निर्धारण गर्छन्।

हरेक पङ्क्ति पूर्वक्लिनिकल हो। कुनै पनि पङ्क्तिको अध्ययनले बिरामी समावेश गरेन, दृष्टि मापन गरेन वा आँखाका लागि तयार गरिएको औषधीय मिश्रण परीक्षण गरेन।

यो किन ग्लुकोमाको उपचार होइन

ग्लुकोमाको उपचारले आँखाभित्रको दबाब घटाउँछ। स्नायु संरक्षणले भने फरक उद्देश्य राख्छ: तनावको अवस्थामा ग्याङ्ग्लियन कोशिका र तिनका अक्षतन्तुहरूलाई जीवित राख्ने। माथिका अध्ययनहरू दोस्रो उद्देश्यसँग सम्बन्धित छन्, पहिलोसँग होइनन्। कुनैले पनि दबाब घटाएन, र कुनैले मेथिलिन ब्लुलाई दबाब घटाउने उपचारसँग तुलना गरेन। त्यसैले ग्लुकोमा र दबाब नियन्त्रणका स्थापित उपायहरू रेडक्ससम्बन्धी स्नायु संरक्षणभन्दा छुट्टै प्रश्न हुन्, र कोशिका बाँच्नुको नतिजालाई दृष्टि जोगिएको अर्थमा लिन मिल्दैन।

प्रयोग मार्गका भिन्नताले यो कुरा थप स्पष्ट पार्छन्। भिट्रियसभित्र एकैसाथ दिइएको इन्जेक्सनले चोट लाग्ने क्षणमै ज्ञात मात्रा रेटिनाको छेउमा पुर्‍याउँछ। पिउने पानीमार्फत मात्रा दिँदा महिनौँसम्म पूरै जनावरमा प्रभाव पर्छ, तर रेटिनामा पुग्ने सान्द्रता अज्ञात हुन्छ। संवर्धन माध्यमले खुला कोशिकाहरूलाई सिधै सम्पर्कमा ल्याउँछ। यीमध्ये कुनैले पनि आँखाको सतहमा लगाइएको मात्राको कति अंश कर्निया पार गर्छ, आँसुबाट पखालिनबाट बच्न सक्छ, लेन्स र भिट्रियस पार गर्छ, र रेटिनाको कुनै तहमा उपयोगी सान्द्रतामा पुग्छ भन्ने पूर्वानुमान गर्दैन। पदार्थ पुर्‍याउने यो समस्या मेथिलिन ब्लुका प्रयोग मार्ग र वितरण सम्बन्धी व्यापक प्रश्नको अंश हो, जहाँ हरेक मार्गका लागि छुट्टै सान्द्रता मापन आवश्यक हुन्छ।

ऊतकका भिन्नताले अर्को अवरोध थप्छन्। आँखाको अगाडिको भागमा पुगेको रङद्रव्य पछाडिको भागमा पुगेको हुँदैन, र एउटा तहलाई लाभ दिने सान्द्रताले अर्को तहमा क्षति पुर्‍याउन सक्छ। खुद्रा बिक्रीका घोलहरू आँखामा प्रयोग गरिने तयारीहरूजस्तै उत्पादन, निर्जीवीकरण, बफर समायोजन वा परिरक्षण गरिएका हुँदैनन्। कर्निया र आँखाभित्रको सम्पर्कका लागि शुद्धता, pH, अस्मोलालिटी र सहायक घटकहरू सबै महत्त्वपूर्ण हुन्छन्। रेटिनासम्बन्धी यी निष्कर्षमध्ये कुनैले पनि यस्ता घोल आँखाभित्र वा आँखाको सतहमा लगाउने अभ्यासलाई मान्यता दिँदैन। तयारीका मापदण्डबारेका प्रश्नहरू मेथिलिन ब्लुको सुरक्षा र ह्यान्डलिङसँग सम्बन्धित छन्।

प्रमाणको सीमा कहाँ छ

सँगै पढ्दा यी तीन शोधपत्रले एउटा सीमित दाबीलाई समर्थन गर्छन्: नियन्त्रित अवस्थामा मेथिलिन ब्लुले रेटिनाका स्नायुकोशिकामा माइटोकन्ड्रियासम्बन्धी रेडक्स तनाव कम गर्न र तिनको संरचना जोगाउन सक्छ। ती अवस्थाहरू जहाँ समाप्त हुन्छन्, दाबी पनि त्यहीँ समाप्त हुन्छ। विषाक्त पदार्थ र आनुवंशिक कम्प्लेक्स I का मोडेलहरू ग्लुकोमा, ड्रुसेन वा मधुमेहसम्बन्धी रोग होइनन्। छोटा अवलोकन अवधि र संरचनासम्बन्धी अन्तिम मापनहरू दीर्घकालसम्म कायम रहने दृष्टि होइनन्। अनि एउटा भागमा संरक्षण दिने सान्द्रता अर्को भागका लागि प्रयोग गर्ने मात्रा होइन।

अझ बलियो आधारका लागि छुट्टाछुट्टै प्रमाण आवश्यक पर्नेछन्: क्लिनिकल रूपमा प्रयोग गर्न मिल्ने मार्गबाट दिएपछि रेटिनामा पुग्ने निश्चित मात्रा, जनावरमा दृष्टिको कार्यक्षमतासम्बन्धी अन्तिम मापनहरू, ग्लुकोमासँग सान्दर्भिक मोडेलमा दबाबबाट स्वतन्त्र लाभ, र त्यसपछि मानिसमा सुरक्षा तथा प्रभावकारिताका तथ्याङ्क। ती उपलब्ध नभएसम्म मेथिलिन ब्लु र दृष्टिसम्बन्धी विषय स्पष्ट सीमा भएको अनुसन्धान परिकल्पना नै रहन्छ: रेटिनामा सम्भाव्य माइटोकन्ड्रियासम्बन्धी औषधीय प्रभाव, जुन कोशिका र जनावरमा मात्र देखाइएको छ, र यी अध्ययनबाट आँखाको उपचारसम्म पुग्ने कुनै आधार छैन।