မက်သလင်းဘလူးက မိုင်တိုကွန်ဒရီးယား၏ Complex III ကို ကျော်လွှားနိုင်သလား။ လေ့လာမှုများ အဘယ်ကြောင့် သဘောမတူကြသနည်း

ဓာတ်ခွဲခန်းနှစ်ခုက မက်သလင်းဘလူးသည် ပိတ်ဆို့ခံထားရသော မိုင်တိုကွန်ဒရီးယား၏ Complex III ကို ကျော်လွှားနိုင်သလားဟု စမ်းသပ်ခဲ့ကြသည်။ တစ်ခုက မနိုင်ဟု အဖြေပေးခဲ့သည်။ နောက်တစ်ခုက နိုင်သည်ဟု အဖြေပေးခဲ့သည်။ နှစ်ခုစလုံးတွင် အချက်အလက်များ ရှိခဲ့သည်။

ပထမလေ့လာမှုက ကြွက်ငယ်၏ ဦးနှောက်မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများတွင် ထိုဆိုးဆေးသည် မကျော်လွှားနိုင်ကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ဒုတိယလေ့လာမှုက ကြွက်မျိုးစိတ်သုံးမျိုး၏ ဦးနှောက်မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများတွင် တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ကျော်လွှားနိုင်ကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ကြွက်ငယ်အသည်းတွင် ပြုလုပ်ခဲ့သော တတိယလေ့လာမှုကိုလည်း ယင်းတို့နှင့်အတူ မကြာခဏ ကိုးကားကြသော်လည်း ၎င်းက အခြားအရာတစ်ခုကို စမ်းသပ်ခဲ့ခြင်းဖြစ်သည်။ ထိုလေ့လာမှုကို သက်ဆိုင်ရာနယ်ပယ်အတွင်းသာ ထားလိုက်လျှင် ရှုပ်ထွေးမှုတစ်ဝက်ခန့် ပြေလည်သွားမည်။

အခြေအနေအားလုံးနှင့် သက်ဆိုင်သော လုပ်ဆောင်ပုံတစ်ခုကို ကြေညာရန် မရှိပါ။ ပိတ်ဆို့ပစ္စည်း၊ အသုံးပြုပမာဏနှင့် တိုင်းတာချက်များ မတူသော စမ်းသပ်မှုသုံးခုသာ ရှိသည်။ အခြေအနေများကို အရင်ဖတ်ပါ။ ထို့နောက် ကောက်ချက်များကို နားလည်နိုင်မည်။

ဤနေရာတွင် ကျော်လွှားခြင်းဟု ဆိုလိုသည်မှာ

အီလက်ထရွန်များသည် Complex I မှတစ်ဆင့် (NADH မှ) သို့မဟုတ် Complex II မှတစ်ဆင့် (ဆက်စီနိတ်မှ) ကွင်းဆက်အတွင်း ဝင်ရောက်ပြီး Complex III ကို ဖြတ်၍ ဆိုက်တိုခရုမ်း c သို့၊ ထို့နောက် Complex IV ကို ဖြတ်၍ အောက်ဆီဂျင်သို့ ရောက်ရှိကြသည်။ လမ်းတစ်လျှောက် ဖြစ်ပေါ်လာသော အဆင့်ကွာခြားမှုကို ဆဲလ်က ATP ထုတ်လုပ်ရန် အသုံးပြုသည်။

ကျော်လွှားနိုင်သည်ဟူသော အဆိုမှာ မက်သလင်းဘလူးသည် ပိတ်ဆို့ထားသည့်နေရာမတိုင်မီမှ အီလက်ထရွန်များကို လက်ခံပြီး ထိုနေရာလွန်သည့်ဘက်သို့ ပို့ပေးသည်ဟု ဆိုလိုသည်။ ဓာတ်တိုးထားသော ဆိုးဆေးသည် NADH သို့မဟုတ် ကွင်းဆက်၏ အစောပိုင်းအစိတ်အပိုင်းများမှ အီလက်ထရွန်များကို လက်ခံ၍ လူကိုမက်သလင်းဘလူး ဖြစ်လာပြီး၊ ထိုဓာတ်လျှော့ထားသော ပုံစံက ၎င်းတို့ကို ဆိုက်တိုခရုမ်း c သို့မဟုတ် ကွင်းဆက်အတွင်းသို့ ပြန်လွှဲပေးသည်။ ထိုလွှဲပြောင်းမှုက ပိတ်ဆို့နေရာလွန်သည့်ဘက်သို့ ရောက်လျှင် ဆဲလ်အသက်ရှူခြင်းနှင့် အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာတို့ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ပြန်ကောင်းလာသည်။ ပိတ်ဆို့နေရာတွင် သို့မဟုတ် ထိုနေရာမတိုင်မီ၌သာ ရောက်လျှင် မည်သည့်အရာမျှ ပြန်မကောင်းလာပါ။

Complex III ၏ အသေးစိတ်အချက်တစ်ခုက ဤအငြင်းပွားမှု၏ အများစုကို အဆုံးအဖြတ်ပေးသည်။ ဤကွန်ပလက်စ်သည် တားဆီးပစ္စည်း ချိတ်ဆက်နိုင်သော နေရာနှစ်ခုပါသည့် Q စက်ဝန်းကို လည်ပတ်စေသည်။ အန်တီမိုင်စင်က Qi နေရာတွင် ချိတ်ဆက်သည်။ မိုင်ဆိုသိုင်ယာဇောက Qo နေရာတွင် ချိတ်ဆက်သည်။ ယင်းနှစ်မျိုးအနက် တစ်မျိုးကိုသာ အသုံးပြုသော လေ့လာမှုသည် ကွန်ပလက်စ်၏ တစ်ဝက်ကိုသာ စမ်းသပ်ထားခြင်းဖြစ်သည်။

လေ့လာမှုတစ် — ကြွက်ငယ်၏ ဦးနှောက်မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများတွင် ကျော်လွှားမှုမရှိ

Gureev နှင့် လုပ်ဖော်ကိုင်ဖက်များသည် C57BL/6 ကြွက်ငယ်များ၏ ဦးနှောက်အပြင်လွှာမှ မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများကို ဒီဂျီတိုနင်ဖြင့် ခွဲထုတ်ကာ ပရိုတင်းပမာဏ 0.1 mg per ml ဖြင့် စမ်းသပ်တိုင်းတာခဲ့ကြသည်။ ဓာတ်ပြုအလွှာများကို အခြေအနေသုံးမျိုးဖြင့် အသုံးပြုခဲ့သည် — ပိုင်ရူဗိတ်နှင့် မာလိတ် တစ်မျိုးစီ 5 mM၊ ဆက်စီနိတ် 10 mM နှင့် ဂလူတာမိတ် 2 mM၊ ထို့ပြင် L-ပရိုလင်း 10 mM တို့ဖြစ်သည်။ ပိတ်ဆို့ပစ္စည်းများမှာ ရိုတီနုန်း 1 micromolar (Complex I) နှင့် အန်တီမိုင်စင် 1 microgram per ml (Complex III) ဖြစ်သည်။ ဆိုးဆေးပမာဏများမှာ 0.5၊ 1 နှင့် 2 micromolar ဖြစ်ပြီး အဓိကပြင်းအားအဖြစ် 1 micromolar ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ နည်းလမ်းများနှင့် တိုင်းတာမှုမျဉ်းကြောင်းများကို FEBS Letters သုတေသနတင်ပြချက် တွင် ဖတ်ရှုနိုင်သည်။

Complex I ကို ကျော်လွှားမှုမှာ အလုပ်ဖြစ်ခဲ့သည်။ ရိုတီနုန်းက ADP ဖြင့် လှုံ့ဆော်ထားသော ဆဲလ်အသက်ရှူနှုန်းကို 121 ခန့်မှ 2 nmol per minute per mg ခန့်အထိ လျှော့ချခဲ့ပြီး၊ ဆိုးဆေး 1 micromolar က 21 ခန့်အထိ ပြန်မြှင့်ပေးခဲ့သည်။ ပိုင်ရူဗိတ်နှင့် မာလိတ်ကို အသုံးပြုသည့်အခါနှင့် L-ပရိုလင်းကို အသုံးပြုသည့်အခါ အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာ ပြန်ကောင်းလာခဲ့သည်။

Complex III ကို ကျော်လွှားမှုမှာ အလုပ်မဖြစ်ခဲ့ပါ။ အန်တီမိုင်စင်က ဆဲလ်အသက်ရှူနှုန်းကို 16 ခန့်အထိ လျှော့ချခဲ့ပြီး၊ ဆိုးဆေးက 20 ခန့်သို့သာ တိုးစေခဲ့သည်။ ဆိုးဆေးပမာဏ 5 micromolar အထိ အသုံးပြုသော်လည်း မည်သည့်ဓာတ်ပြုအလွှာတွင်မျှ အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာ ပြန်မကောင်းလာခဲ့ပါ။ ပါအောက်ဆိုဒ်အချက်အလက်များကလည်း တူညီသောကောက်ချက်ကို ညွှန်ပြခဲ့သည်။ ဆိုးဆေးတစ်မျိုးတည်းက ပါအောက်ဆိုဒ်ထုတ်လွှတ်မှုကို အခြေခံနှုန်း 76 pmol per minute per mg နီးပါးမှ အသုံးပြုပမာဏသုံးမျိုးအလိုက် 1170၊ 1460 နှင့် 1945 ခန့်အထိ မြှင့်တင်ခဲ့သော်လည်း၊ အန်တီမိုင်စင်က ထိုဆိုးဆေးကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော အချက်ပြမှုကို အသီးသီး 25၊ 88 နှင့် 96 percent ခန့် လျှော့ချခဲ့သည်။ ဓာတ်လျှော့ထားသော ဆိုးဆေးက အောက်ဆီဂျင်နှင့် တိုက်ရိုက်ဓာတ်ပြုပါက Complex III ကို ပိတ်ဆို့ခြင်းသည် အချက်ပြမှုကို မဖိနှိပ်သင့်ပါ။ စာရေးသူများက ဓာတ်လျှော့ထားသော ဆိုးဆေးသည် အန်တီမိုင်စင်ဖြင့် ပိတ်ဆို့ထားသောနေရာမတိုင်မီရှိ Complex III ၏ Qo နေရာတွင် ဓာတ်တိုးခံရသည်ဟု ကောက်ချက်ချခဲ့ကြသည်။ တိုတောင်းသော လမ်းပတ်ကို စကားဖြင့်ဆိုရလျှင် — အီလက်ထရွန်ပေးသူများမှ ဆိုးဆေးသို့၊ ဆိုးဆေးမှ Qo သို့၊ ထို့နောက် ပုံမှန်လမ်းကြောင်းအတိုင်း ရှေ့ဆက်သွားသည်။ ရိုတီနုန်းပိတ်ဆို့မှုကို ကျော်လွှားနိုင်သည်။ အန်တီမိုင်စင်ပိတ်ဆို့မှုကို မကျော်လွှားနိုင်ပါ။

လေ့လာမှုနှစ် — မျိုးစိတ်သုံးမျိုးတွင် တားဆီးပစ္စည်းချိတ်ဆက်ရာ နေရာနှစ်ခုစလုံး၌ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ကျော်လွှားမှု

Svab နှင့် လုပ်ဖော်ကိုင်ဖက်များက စမ်းသပ်ပုံစံကို ပိုမိုကျယ်ပြန့်စေခဲ့သည်။ ကြွက်ငယ်၊ ကြွက်နှင့် ဂီနီဝက်တို့၏ ဦးနှောက်မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများကို Percoll ဖြင့် ခွဲထုတ်၍ တူညီသော 0.1 mg per ml ဖြင့် စမ်းသပ်တိုင်းတာခဲ့သည်။ ပိုင်ရူဗိတ်နှင့် မာလိတ် သို့မဟုတ် ဂလူတာမိတ်နှင့် မာလိတ်ကို တစ်မျိုးစီ 5 mM အသုံးပြုခဲ့သည်။ Complex III ပိတ်ဆို့ပစ္စည်းနှစ်မျိုးကို အသုံးပြုခဲ့သည် — အန်တီမိုင်စင် A 0.3 micromolar နှင့် မိုင်ဆိုသိုင်ယာဇော 1 micromolar တို့ဖြစ်သည်။ စမ်းသပ်တိုင်းတာမှုအများစုတွင် ဆိုးဆေး 2 micromolar၊ ဆိုက်တိုခရုမ်း c ဆိုင်ရာ စမ်းသပ်မှုတွင် 0.5 ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ တူညီအောင် သတ်မှတ်ထားသော လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများဖြင့် စမ်းသပ်ခဲ့သည့် မျိုးစိတ်သုံးမျိုးစလုံး၏ အချက်အလက်များကို အခမဲ့ဖတ်ရှုနိုင်သော သုတေသနစာတမ်း တွင် ဖော်ပြထားသည်။

မျိုးစိတ်သုံးမျိုးစလုံးတွင် ပိတ်ဆို့မှုနှစ်မျိုးစလုံးကို တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ကျော်လွှားနိုင်ခဲ့သည်။ ကြွက်ငယ်၏ မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများတွင် အန်တီမိုင်စင်က ဆဲလ်အသက်ရှူခြင်းကို ဖိနှိပ်ခဲ့ပြီး ဆိုးဆေးက ယင်းနှုန်းကို 60 percent ခန့်၊ 37 ခန့်မှ 59 nmol per minute per mg ခန့်အထိ မြှင့်တင်ခဲ့သည်။ မိုင်ဆိုသိုင်ယာဇောက ယင်းနှုန်းကို 88 percent လျှော့ချ၍ 4.5 ခန့်အထိ ကျဆင်းစေခဲ့ပြီး ဆိုးဆေးက ငါးဆတိုး၍ 23 ခန့်အထိ မြှင့်တင်ခဲ့သည်။ တားဆီးပစ္စည်း မည်သည့်တစ်မျိုးကိုမဆို အသုံးပြုထားသည့်အခါ အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာသည် တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ပြန်လည်ပိုလာရိုင်ဇေးရှင်း ဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။ အလင်းဆိုင်ရာ တိုင်းတာမှုအမှားအယွင်းများကို ဖယ်ရှားနိုင်ရန် ဆိုးဆေးနှစ်မျိုးဖြစ်သော ဆာဖရာနင် O နှင့် အချိုးအခြေပြု TMRM တို့ဖြင့် တိုင်းတာခဲ့သည်။

ဤစာတမ်းက အီလက်ထရွန်လွှဲပြောင်းမှုကိုလည်း တိုက်ရိုက်စမ်းသပ်ခဲ့သည်။ ပထမလေ့လာမှုတွင် ထိုသို့ မစမ်းသပ်ခဲ့ပါ။ ပြင်ပမှ ထည့်သွင်းထားသော အက်စီတိုင်လိတ်ပြုထားသည့် ဆိုက်တိုခရုမ်း c 25 micromolar ကို စွမ်းအင်ရရှိထားသော မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများက တားဆီးပစ္စည်း ရှိသည်ဖြစ်စေ၊ မရှိသည်ဖြစ်စေ ဓာတ်မလျှော့နိုင်ခဲ့သော်လည်း၊ ဆိုးဆေးထည့်လိုက်သောအခါ အခြေအနေနှစ်မျိုးစလုံးတွင် ဓာတ်လျှော့မှု ဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။ ဆဲလ်မပါသော ဘဖာပျော်ရည်တွင် NADH နှင့် ဆိုးဆေးတို့က ဆိုက်တိုခရုမ်း c ကို NADH ပမာဏနှင့် အချိုးကျသော နှုန်းဖြင့် ဓာတ်လျှော့ခဲ့သည်။ ပိုဝေးသောခုန်ကူးမှုကို စကားဖြင့်ဆိုရလျှင် — ဓာတ်လျှော့ညီမျှယူနစ်များမှ ဆိုးဆေးသို့၊ ဆိုးဆေးမှ ဆိုက်တိုခရုမ်း c သို့ တိုက်ရိုက်၊ Complex IV မှ အောက်ဆီဂျင်သို့ ဖြစ်သည်။ ထိုလမ်းကြောင်းက Complex III တစ်ခုလုံးကို ကျော်သွားသောကြောင့် ပိတ်ဆို့ပစ္စည်းနှစ်မျိုးစလုံးကို ကျော်လွှားနိုင်သည်။

နောက်ထပ်တိုင်းတာချက်နှစ်ခုက ထိုအဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုမှုကို ထောက်ခံသည်။ မိုင်ဆိုသိုင်ယာဇောဖြင့် ပြုပြင်ထားသော မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများထဲသို့ ဆိုးဆေးထည့်လိုက်သောအခါ NAD(P)H ၏ ဖလူအော်ရက်ဆင့်အလင်း ကျဆင်းခဲ့သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ ဓာတ်လျှော့ညီမျှယူနစ်များသည် လမ်းကြောင်းအသစ်မှတစ်ဆင့် ထွက်သွားခြင်းဖြစ်သည်။ ထို့ပြင် 660 nm တွင် ဆိုးဆေး၏ အလင်းစုပ်ယူမှုက အဆင့်ဆင့်ထည့်သွင်းမှုတစ်ခုစီနှင့်အတူ လိုက်လံပြောင်းလဲခဲ့သည်။ ဗဟိုခွာလည်ပတ်ပြီးနောက် ရရှိသော အပေါ်ယံအရည်များကလည်း ဓာတ်တိုးထားသော ဆိုးဆေးသည် စွမ်းအင်ရရှိထားသော မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများအတွင်း အဆတစ်ရာကျော် စုဝေးလာပြီး၊ လျှပ်စစ်အလားအလာ ပျက်ပြယ်သည့်အခါ ပြန်ထွက်သွားကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ ပရိုတွန်အရေအတွက်အရလည်း ကိုက်ညီသည်။ ပရိုတွန်ပန့်ထုတ်သည့် အဆင့်များကို ကျော်သွားခြင်းကြောင့် အီလက်ထရွန်တစ်စုံလျှင် ပရိုတွန် 10 အစား 2 ခန့်သာ ကျန်ရှိသည်။ ထို့ကြောင့် အောက်ဆီဂျင်ကို ပိုမြန်စွာ အသုံးပြုသော်လည်း ပြန်လည်ပိုလာရိုင်ဇေးရှင်း တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းသာ ဖြစ်ပေါ်ခြင်းသည် အမှန်တကယ် ကျော်လွှားလမ်းကြောင်းတစ်ခု၏ ပုံစံဖြစ်ပြီး၊ ကျော်လွှားမှုမရှိကြောင်း သက်သေမဟုတ်ပါ။

တူညီသော ပြင်ဆင်နမူနာတွင်ပင် ပေါ့ပေါ့တန်တန် ဖတ်ရှုပါက အဓိပ္ပာယ်လွဲနိုင်သော တုံ့ပြန်မှုများ ဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။ တားဆီးပစ္စည်းနှင့် ဆိုးဆေးတို့ ရှိနေသောအခါ ADP က ဆဲလ်အသက်ရှူခြင်းကို မြှင့်တင်မည့်အစား လျှော့ချခဲ့ပြီး၊ သယ်ပို့မှုကို ပိတ်ဆို့ခြင်းက ယင်းကို နှေးကွေးစေမည့်အစား လှုံ့ဆော်ခဲ့သည်။ သို့သော် အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာကမူ ပုံမှန်ဦးတည်ချက်များအတိုင်း ပြောင်းလဲနေဆဲဖြစ်သည်။ ဤစနစ်တွင် အောက်ဆီဂျင်သုံးစွဲမှုတစ်ခုတည်းကို ကြည့်ခြင်းက အဓိပ္ပာယ်လွဲစေသည်။

လေ့လာမှုသုံး — Complex III မဟုတ်ဘဲ Complex I နှင့် II ကို စမ်းသပ်ခဲ့သော အသည်းလေ့လာမှု

Lee နှင့် Boelsterli တို့သည် အီဖာဗီရန်ဇ် (Complex I၊ IC50 သည် 30 micromolar နီးပါး) နှင့် အိုင်ဆိုနိုင်ယာဇစ်၏ ဇီဝဖြစ်စဉ်ပြောင်းလဲထွက်ပစ္စည်း ဟိုက်ဒရာဇင်း (Complex II၊ IC50 သည် 30 micromolar နီးပါး) တို့ကြောင့် ထိခိုက်ထားသော ကြွက်ငယ်အသည်း မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများနှင့် မွေးမြူထားသော အသည်းဆဲလ်များကို အသုံးပြုခဲ့ကြသည်။ ဆိုးဆေး 30 micromolar ခန့်က NADH ဓာတ်တိုးမှု၊ အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာနှင့် ATP တို့ကို ပြန်ကောင်းစေခဲ့ပြီး၊ တစ်ချိန်တည်းတွင် ဓာတ်တိုးပစ္စည်းများနှင့် နက်ခရိုးစစ်ကြောင့် ဆဲလ်သေဆုံးမှုကို လျှော့ချခဲ့သည်။ Redox Biology သုတေသနစာတမ်း တွင် ယင်းကို ဆိုးဆေးက ထိခိုက်နေသော Complex I နှင့် II တို့ကို ကျော်၍ အီလက်ထရွန်များ သယ်ပို့ပေးခြင်းအဖြစ် ပုံစံချရှင်းပြထားသည်။

ထိုရလဒ်သည် ကွင်းဆက်၏ အစောပိုင်းဘက်အတွက် သဘောတူညီမှုရှိပြီးသား နောက်ခံအချက်ဖြစ်သည်။ Complex III တွင် မည်သည့်ပိတ်ဆို့မှုမျှ မပြုလုပ်ထားသောကြောင့် ယင်းအကြောင်း မည်သည့်အချက်မျှ မပြောနိုင်ပါ။ ထိုရလဒ်က ဦးနှောက်လေ့လာမှုနှစ်ခုအနက် မည်သည့်တစ်ခုကိုမျှ အတည်မပြုနိုင်သလို မငြင်းဆိုနိုင်ပါ။

အခြေအနေများ နှိုင်းယှဉ်ဇယား

Complex III လေ့လာမှုနှစ်ခုစလုံးက မိမိတို့၏ စမ်းသပ်အခြေအနေအတွက် မှန်နိုင်သည့် အကြောင်းရင်းလေးခု

1. ပိတ်ဆို့ပစ္စည်းဖြင့် ပြုလုပ်သော ကြားဝင်ပြောင်းလဲမှု မတူခဲ့ပါ။ အန်တီမိုင်စင်တစ်မျိုးတည်းကို 1 microgram per ml အသုံးပြုခြင်းနှင့် အန်တီမိုင်စင် 0.3 micromolar အပြင် သီးခြား Qo နေရာပိတ်ဆို့ပစ္စည်းတစ်မျိုးကို အသုံးပြုခြင်းတို့ ကွာခြားသည်။ Qo နေရာသို့ အီလက်ထရွန်ပို့ပေးသော ဆိုးဆေးလမ်းကြောင်းက မအောင်မြင်သည့်နေရာတွင်ပင် ဆိုက်တိုခရုမ်း c သို့ တိုက်ရိုက်ပို့သော လမ်းကြောင်းက အောင်မြင်နိုင်သည်။ နေရာတစ်ခုတည်းကို စမ်းသပ်ခြင်းက နှစ်ခုစလုံးကို ကိုယ်စားမပြုနိုင်ပါ။

2. ဆိုးဆေးပမာဏနှင့် အချိန်သတ်မှတ်ချက် ကွာခြားခဲ့သည်။ အဓိကပြင်းအားများမှာ 1 နှင့် 2 micromolar ဖြစ်သည်။ ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျှော့ စက်ဝန်းလည်ပတ်သည့် ဤပစ္စည်း၏ အတွင်းသို့ဝင်ရောက်မှုနှင့် ဆိုက်တိုခရုမ်း c ကို တိုက်ရိုက်ဓာတ်လျှော့မှုတို့သည် ပြင်းအားနှင့် အချိန်ပေါ် မူတည်သည်။ အသုံးပြုပမာဏ အနည်းငယ်ကွာခြားခြင်းနှင့် တိုင်းတာချိန် မတူခြင်းတို့ ပေါင်းစပ်သွားပါက ကွန်ရက်တစ်ခုတည်း၏ မတူသောလမ်းခွဲများကို ထင်ရှားစေနိုင်သည်။

3. ပြင်ဆင်နမူနာများ ကွာခြားခဲ့သည်။ ဒီဂျီတိုနင်ဖြင့် ခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် Percoll အဆင့်ကွာခြားမှုဖြင့် ခွဲထုတ်ခြင်းတို့က အချို့တူညီသော်လည်း အတိအကျ မတူသော မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားအစုများကို ရွေးထုတ်ပေးသည်။ ပရိုတင်းပြင်းအားသည် 0.1 mg per ml တွင် တူညီသောကြောင့် ထိုကိန်းရှင်ကို ဖယ်ထုတ်နိုင်သော်လည်း၊ အစုခွဲများနှင့် ဖွဲ့စည်းပုံပြည့်စုံမှုကိုမူ မဖယ်ထုတ်နိုင်ပါ။ မျိုးစိတ်ကွာခြားမှုကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်ဟူသော သံသယကိုလည်း ပယ်ရှားနိုင်ခဲ့သည်။ ဒုတိယအဖွဲ့က ကြွက်ငယ်တွင်လည်း တူညီသော တုံ့ပြန်မှုပုံစံကို ထပ်မံရရှိခဲ့သည်။

4. ဓာတ်ပြုအလွှာ၏ အခြေအနေက ဆိုးဆေး ဘာလုပ်နိုင်သည်ကို သတ်မှတ်ပေးသည်။ ဓာတ်ပြုအလွှာအခြေအနေသုံးမျိုးနှင့် NADH နှင့် ဆက်စပ်သော ဓာတ်ပြုအလွှာအတွဲများကို နှိုင်းယှဉ်ထားခြင်းဖြစ်သည်။ NADH ရရှိမှုနှင့် အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာတို့ ပေါင်းစပ်၍ ဆိုးဆေး မည်မျှမြန်မြန် ဓာတ်လျှော့ခံရသည်၊ မည်သည့်နေရာတွင် ဖြန့်ဝေစုဝေးသည်တို့ကို သတ်မှတ်ပေးသည်။ ဓာတ်တိုးထားသော ဆိုက်တိုခရုမ်း c အနီးတွင် ဓာတ်လျှော့ထားသော ဆိုးဆေးရှိရန် လိုအပ်သည့် လမ်းကြောင်းသည် ထိုရွေးချယ်မှုအပေါ် မူတည်နေသည်။

နောက်ထပ် ကျော်လွှားနိုင်သည်ဟူသော အဆိုတစ်ခုကို မည်သို့ဖတ်ရှုရမည်

မည်သည့်ကွန်ပလက်စ်ကို မည်သည့်တားဆီးပစ္စည်းဖြင့်၊ မည်သည့်နေရာတွင်၊ မည်သည့်ပမာဏဖြင့် ပိတ်ဆို့ထားသလဲဟု မေးပါ။ ဆိုးဆေးပြင်းအားနှင့် တိုင်းတာချက်ကို မည်သည့်အချိန်တွင် ရယူခဲ့သလဲဟု မေးပါ။ တစ်ရှူး၊ မျိုးစိတ်၊ ခွဲထုတ်နည်း၊ ပရိုတင်းပြင်းအားနှင့် ဓာတ်ပြုအလွှာတို့ကို မေးပါ။ ထို့ပြင် လျှပ်စစ်အလားအလာ၊ ဆဲလ်အသက်ရှူခြင်း၊ ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျှော့အခြေအနေနှင့် တိုက်ရိုက်လွှဲပြောင်းမှု စမ်းသပ်တိုင်းတာချက်တို့ ကိုက်ညီသလားဟု မေးပါ။ အကြောင်းမှာ ဤစမ်းသပ်မှုများတွင် အောက်ဆီဂျင်သုံးစွဲမှုတစ်ခုတည်းက အကြိမ်တစ်ကြိမ်ထက်ပို၍ မှားယွင်းသောကောက်ချက်ဘက်သို့ ညွှန်ပြခဲ့သောကြောင့်ဖြစ်သည်။

ကန့်သတ်ထားသော အနှစ်ချုပ်က ခိုင်လုံနေဆဲဖြစ်သည်။ ဆိုးဆေးက Complex I ကို ကျော်လွှားနိုင်ကြောင်း သဘောတူညီမှုရှိသည်။ Complex III အတွက်မူ အန်တီမိုင်စင် 1 microgram per ml နှင့် ဆိုးဆေး 1 micromolar အသုံးပြုထားသော ကြွက်ငယ်မိုင်တိုကွန်ဒရီးယားများတွင် လုပ်ဆောင်ချက်ဆိုင်ရာ ကျော်လွှားမှု မပြသသော်လည်း၊ အန်တီမိုင်စင် 0.3 micromolar သို့မဟုတ် မိုင်ဆိုသိုင်ယာဇော 1 micromolar နှင့် ဆိုးဆေး 2 micromolar အသုံးပြုထားသော မျိုးစိတ်သုံးမျိုးတွင် ဆိုးဆေးမှ ဆိုက်တိုခရုမ်း c သို့ တိုက်ရိုက်လွှဲပြောင်းမှုနှင့်အတူ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ကျော်လွှားမှုကို ပြသသည်။ ထိုဖော်ပြချက်နှစ်ခု အတူတကွ မှန်ကန်နိုင်သည်။ ထို့ထက် ပိုကျယ်ပြန့်သော အဆိုမှန်သမျှသည် ရလဒ်များကို ကျော်လွန်၍ ခန့်မှန်းချဲ့ထွင်ခြင်းဖြစ်သည်။

ဆက်စပ်ဖတ်ရှုစရာများက အငြင်းပွားနေသော အဆိုကို အငြင်းပွားမှုမရှိသော ဓာတုဖြစ်စဉ်များ၏ ဘောင်အတွင်း ထားပေးသည် — လက်ဆင့်ကမ်းမှုအတွက် မက်သလင်းဘလူးက အီလက်ထရွန်များကို မည်သို့ရွှေ့ပြောင်းပေးသနည်း၊ သဘောတူညီမှုရှိပြီးသား ကွင်းဆက်အစောပိုင်းဘက် အခြေအနေအတွက် Complex I ကျော်လွှားမှု စမ်းသပ်ချက်များ၊ ဆိုးဆေးနှစ်မျိုး အဘယ်ကြောင့် လိုအပ်ခဲ့သည်ကို နားလည်ရန် အမြှေးပါးလျှပ်စစ်အလားအလာ တိုင်းတာချက်များနှင့် ၎င်းတို့၏ တိုင်းတာမှုအမှားအယွင်းများ၊ အသုံးပြုပမာဏနှင့် အချိန်သတ်မှတ်မှုတွင် မှားနိုင်သည့်အချက်များအတွက် ဓာတ်တိုး-ဓာတ်လျှော့ စက်ဝန်းလည်ပတ်ပစ္စည်းများကို ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် ကိုင်တွယ်ခြင်းတို့ ဖြစ်သည်။