Il-blu tal-metilen u l-isklerożi multipla: x’testjat ir-riċerka fuq l-annimali

Fittex il-blu tal-metilen għall-isklerożi multipla u ssib studji li jidhru li jwieġbu l-istess mistoqsija. Iżda mhux hekk. Studju wieħed ta l-blu tal-metilen lil ġrieden morda bħala trattament. L-ieħor qatt ma ttratta ebda annimal bih. Uża l-blu tal-metilen bħala żebgħa blu fuq qatgħat irqaq tas-sinsla tad-dahar sabiex patologu seta’ jara l-mjelina taħt mikroskopju.

Dan huwa l-kunċett li fuqu huwa mibni l-artiklu kollu. Iż-żebgħa għandha żewġ rwoli fil-bijoloġija li m’għandhom xejn komuni ħlief il-flixkun. Bħala sustanza kandidata għal mediċina, tingħata f’dożi lil annimal ħaj, u l-mistoqsija hija jekk il-marda tinbidilx. Bħala żebgħa, tiġi applikata fuq tessut mejjet u ffissat wara l-esperiment, u l-mistoqsija hija kif kien jidher it-tessut. Jekk ma tagħmilx din id-distinzjoni, taqra taqsima dwar il-metodi tal-patoloġija bħallikieku kienet riżultat ta’ trattament.

X’inhi EAE, fi kliem sempliċi

L-enċefalomjelite awtoimmuni sperimentali, ġeneralment imqassra għal EAE, hija l-mudell standard fl-annimali għal ċerti aspetti tal-isklerożi multipla. Riċerkatur jimmunizza ġurdien suxxettibbli b’framment ta’ proteina tal-mjelina flimkien ma’ aġġuvant qawwi. Is-sistema immuni mbagħad tattakka s-sistema nervuża ċentrali tal-annimal stess. Il-ġurdien jiżviluppa dgħufija li timxi ’l fuq fil-ġisem u li faċilment tingħata punteġġ fuq skala minn 0 sa 5, minn denb mitluq sa paraliżi tar-riġlejn ta’ wara.

Il-konvenjenza ta’ din is-sistema ta’ punteġġi tispjega għaliex EAE hija popolari u wkoll għaliex tista’ twassal għal konklużjonijiet qarrieqa. L-isklerożi multipla fil-bnedmin tfeġġ waħedha, tinvolvi firxa usa’ u inqas definita ta’ miri, u tipproduċi sintomi ottiċi, sensorji, konjittivi, ċerebellari u motorji f’andamenti b’rikaduti jew progressivi. EAE tirriproduċi mekkaniżmi magħżula bħall-infjammazzjoni, id-demjelinizzazzjoni u l-ħsara lill-assoni taħt kundizzjonijiet ikkontrollati. Ma tirriproduċix l-isklerożi multipla f’daqs żgħir. Il-qarrejja li jridu l-qafas ġenerali jistgħu jirrevedu kif huwa maħsub li jaġixxi l-blu tal-metilen fil-livell ċellulari qabel ma jiġġudikaw kwalunkwe stqarrija dwar marda partikolari.

Iż-żewġ studji hawn taħt użaw ukoll antiġeni differenti għal EAE, u dan huwa importanti. L-istudju tat-trattament induċa l-marda b’MOG35-55, peptide qasir mill-glikoproteina tal-oligodendroċiti tal-mjelina. L-istudju tal-patoloġija induċa l-marda b’MP4, fużjoni ta’ segmenti tal-proteina bażika tal-mjelina u tal-proteina proteolipidika. L-għażliet tar-razza u tal-antiġenu jbiddlu fejn jidhru l-leżjonijiet u kif taġixxi l-infjammazzjoni, għalhekk iż-żewġ studji mhumiex żewġ repetizzjonijiet tal-istess esperiment.

Il-mappa: mill-mudell għall-mistoqsija sal-limiti

Żomm din it-tabella miftuħa. Hija r-referenza oriġinali għal dan l-artiklu. Kull ringiela tgħid liema mistoqsija klinika jista’ jindirizza l-mudell, x’ġie fil-fatt imkejjel, u fejn tieqaf l-applikazzjoni tar-riżultati għall-bnedmin.

Kull min jiċċekkja t-titlu li jmiss jista’ jerġa’ juża l-istess kolonni bl-għajnuna ta’ kif taqra studji prekliniċi: staqsi dwar l-ispeċi u l-antiġenu, ir-rwol tal-kompost, il-parametri mkejla, u jekk ir-riżultat jirrappreżentax l-andament tal-marda jew stampa tat-tessut f’mument wieħed.

Ir-riżultat tat-trattament: x’biddel l-għoti tad-dożi

L-istudju tat-trattament tal-2016 fil-Journal of Neuroimmunology uża ġrieden nisa C57BL/6, ta’ madwar 8 sa 10 ġimgħat, immunizzati b’250 mikrogramma ta’ MOG35-55 għal kull ġurdien. Wara l-induzzjoni, l-annimali b’EAE tqassmu b’mod każwali fi grupp li ngħata l-blu tal-metilen jew fi grupp b’EAE mingħajr trattament, u l-punteġġi kliniċi ġew segwiti sa madwar jum 30.

Il-punteġġi kliniċi kienu sinifikament aktar baxxi fil-ġrieden ittrattati milli fil-kontrolli b’EAE minn jum 15 sa jum 30, b’P inqas minn 0.01. L-analiżi tas-sinsla tad-dahar indikat l-istess direzzjoni, b’inqas infiltrazzjoni infjammatorja, inqas demjelinizzazzjoni u inqas telf ta’ assoni fl-annimali ttrattati.

Il-parti distintiva kienet is-sett ta’ kejl tas-sinjalar. It-trattament żied l-attivazzjoni ta’ AMPK u l-espressjoni ta’ SIRT1 u rażżan l-attivazzjoni ta’ NF-kB, swiċċ ċentrali tal-infjammazzjoni. Min-naħa tal-immunità adattiva, naqqas ir-rispons Th17 u saħħaħ ir-rispons Treg. Il-katina proposta għalhekk hija mill-blu tal-metilen għal AMPK u SIRT1, għal tnaqqis fis-sinjalar ta’ NF-kB, għal bidla minn Th17 infjammatorju lejn Treg regolatorju, għal ħsara inqas severa fit-tessut, għal punteġġi aktar baxxi.

Dik il-katina hija interpretazzjoni, mhux sekwenza kawżali ppruvata. L-istudju juri li l-mediċina, il-bidliet fis-sinjali u t-titjib fil-marda jseħħu flimkien. Ma jipprovax li AMPK u SIRT1 huma responsabbli għall-benefiċċju kollu, u t-test indiċjat pubblikament ma jurix id-doża eżatta f’milligrammi għal kull kilogramma, il-mod ta’ amministrazzjoni, il-jum tal-bidu jew it-tul tat-trattament b’biżżejjed ċarezza biex ir-reġim jiġi riprodott mill-astratt biss. Qis kwalunkwe ċifra ta’ dożaġġ ikkwotata dwar dan l-istudju fuq paġna tal-bejgħ bħala mhux ivverifikata sakemm ma tiċċitax il-metodi mit-test sħiħ. Il-ġabra usa’ ta’ evidenza dwar il-blu tal-metilen fil-bnedmin hija l-post fejn għandek tiċċekkja jekk dan is-sinjal immuni bikri qattx wassal għal dejta klinika.

Ir-riżultat tal-patoloġija: x’wera t-tessut fuq sitt xhur

L-istudju tal-2015 b’MP4 f’PLoS ONE uża ġrieden nisa C57BL/6 immunizzati b’200 mikrogramma ta’ MP4 fl-aġġuvant komplut ta’ Freund flimkien mat-tossina tal-pertussis fil-jum tal-immunizzazzjoni u għal darb’oħra 48 siegħa wara. Ebda annimal ma rċieva l-blu tal-metilen bħala mediċina. Wara l-iffissar u l-inkorporazzjoni, sezzjonijiet trasversali tas-sinsla tad-dahar ta’ mikrometru wieħed ġew miżbugħa bil-blu tal-metilen għall-mikroskopija bid-dawl, filwaqt li ntużat il-mikroskopija elettronika tal-passaġġ ventrolaterali għal dettall ifjen.

It-tessut ġie kkampjunat fi tliet stadji: fil-quċċata tal-fażi akuta b’7 ġrieden, tliet xhur wara l-bidu b’5 ġrieden, u sitt xhur wara l-bidu b’10 ġrieden. Il-punteġġi kliniċi medji f’dawk l-istadji dehru kważi identiċi, qrib 1.7 sa 1.8 fuq l-iskala minn 0 sa 5. It-tessut wera storja differenti. Il-ħsara limitata għall-mjelina żdiedet minn madwar 569,000 fibra għal kull millimetru kwadru fil-quċċata tal-fażi akuta għal madwar 1,496,000 wara sitt xhur, bil-paragun bejn il-fażi akuta u l-perjodu fit-tul ikun sinifikanti b’P ugwali għal 0.027. Il-ħsara kkombinata lill-mjelina u lill-assoni bejn wieħed u ieħor irduppjat sa sitt xhur. Il-fibri li kienu qed jerġgħu jiġu mjelinizzati baqgħu taħt wieħed fil-mija f’kull stadju, dettall li jtemmen it-tamiet għat-tiswija.

Il-ħsara lill-assoni segwiet xejra f’forma ta’ U: għolja fil-quċċata tal-fażi akuta, aktar baxxa wara tliet xhur, u l-ogħla wara sitt xhur. Kienet korrelatata man-nefħa mitokondrijali u mat-tnaqqis fid-distanza bejn in-newrofilamenti. Il-valutazzjoni saret mingħajr għarfien tal-punteġġ u tal-istadju, u dan isaħħaħ l-interpretazzjoni li l-punteġġi kliniċi ma kinux jirriflettu b’mod sħiħ il-ħsara strutturali li kienet għaddejja.

Din id-diskrepanza hija l-kontribut veru tal-istudju għal qarrej interessat fl-isklerożi multipla. Punteġġ stabbli ta’ diżabbiltà ma kienx ifisser tessut stabbli. Turi wkoll għaliex dan l-istudju ma jista’ jsostni ebda stqarrija dwar il-blu tal-metilen bħala trattament għall-isklerożi multipla. Ittestja ż-żmien, mhux it-trattament.

Għaliex ebda wieħed miż-żewġ studji ma jistabbilixxi benefiċċju fil-pazjenti

Aħseb f’kull studju bħala wieħed li jwieġeb tajjeb mistoqsija speċifika, iżda ma jwieġeb xejn il-mistoqsija dwar il-pazjenti.

L-ewwel, il-kawża hija differenti. EAE tiġi kkawżata apposta b’antiġenu u aġġuvant definiti. L-isklerożi multipla fil-bnedmin tiżviluppa spontanjament b’repertorju immuni usa’ li jinkludi ċelloli T, ċelloli B, immunità innata u glija residenti. Kompost li jbiddel rispons orjentat lejn MOG f’ġurdien mhux bilfors ibiddel dak ir-rispons usa’ fil-bnedmin.

It-tieni, il-fenotip huwa differenti. Id-dgħufija f’ġurdien li titla’ mid-denb sar-riġlejn ta’ wara hija indikatur konvenjenti. Tikkompressa l-eteroġeneità tal-isklerożi multipla fil-bnedmin f’numru wieħed tal-funzjoni motorja. Il-mediċini spiss ibiddlu l-punteġġi ta’ EAE fuq medda qasira mingħajr ma jbiddlu l-andament tal-marda fil-bnedmin, u għalhekk EAE hija għodda għall-iskrinjar u għall-istudju tal-mekkaniżmi, mhux klinika f’daqs żgħir.

It-tielet, l-espożizzjoni u ż-żmien tal-għoti għadhom mhux riżolti. Għoti kontinwu ta’ dożi minn kmieni f’esperiment ta’ 30 jum fuq ġurdien mhuwiex l-istess bħal użu orali kroniku f’persuna b’marda diġà stabbilita, u ebda wieħed miż-żewġ studji ma kejjel il-livelli tal-mediċina fis-sistema nervuża. Mingħajr dik ir-rabta, m’hemm ebda pont bejn konċentrazzjoni fi platt tal-laboratorju jew doża f’ġurdien u reġim għall-bnedmin.

Ir-raba’, iż-żewġ studji ma jirreplikawx lil xulxin. Antiġeni differenti, mistoqsijiet differenti, parametri mkejla differenti, u f’każ wieħed ebda trattament. Li jiġu ċċitati flimkien bħala żewġ studji pożittivi dwar it-trattament tal-isklerożi multipla huwa żball ta’ kategorizzazzjoni.

Xi jfisser dan għall-qarrejja li qed jiżnu l-evidenza

F’dawn l-istudji m’hemm ebda protokoll stabbilit tal-blu tal-metilen għall-isklerożi multipla. L-istudju tat-trattament jappoġġa aktar riċerka dwar AMPK, SIRT1, NF-kB u l-bilanċ bejn Th17 u Treg f’MOG EAE. L-istudju tal-patoloġija jfakkar li l-ħsara fit-tessut tista’ tavvanza waqt li l-punteġġi jidhru li ma jinbidlux, u li l-blu tal-metilen f’taqsima tal-metodi xi drabi jfisser vażett taż-żebgħa aktar milli kabinett tal-mediċini. Il-qarrejja li jsegwu r-riċerka li għaddejja dwar l-isklerożi multipla għandhom iżommu f’moħħhom din id-distinzjoni bejn żebgħa u mediċina. Il-mistoqsijiet dwar is-sigurtà, inklużi r-riskji relatati mad-demm u mal-interazzjonijiet, għandhom jiġu diskussi ma’ professjonist kliniku flimkien mad-dejta ġenerali dwar is-sigurtà tal-blu tal-metilen qabel ma xi ħadd jieħu azzjoni abbażi ta’ titli dwar riżultati tal-laboratorju.

Il-konklużjoni tista’ tinġabar f’sentenza waħda. Studju ċċitat wieħed ta dożi tal-blu tal-metilen lil ġrieden b’MOG EAE u rrapporta marda inqas severa flimkien ma’ bidla immuni antiinfjammatorja, filwaqt li l-istudju ċċitat l-ieħor ma ta ebda doża u uża l-blu tal-metilen biss biex jagħti kulur lis-sinsla tad-dahar waqt li ddokumenta sitt xhur ta’ ħsara li kienet qed takkumula fil-mjelina u fl-assoni, għalhekk iż-żewġ studji flimkien ma jistabbilixxux li l-blu tal-metilen jgħin fl-isklerożi multipla fil-bnedmin.