मिथिलीन ब्लू अभिरंजन: सूक्ष्मदर्शकीय पद्धती आणि प्रत्यक्ष प्रतिमांचा संग्रह

मिथिलीन ब्लू अभिरंजनामुळे उज्ज्वल-क्षेत्र सूक्ष्मदर्शनात एरवी अस्पष्ट दिसणारी पेशीय वैशिष्ट्ये अधिक सहज ओळखता येतात. यामुळे विद्यार्थ्यांना गालाच्या पेशीतील केंद्रक शोधण्यास किंवा सूक्ष्मजीवांच्या बाह्यरेषा आणि मांडणीचे निरीक्षण करण्यास मदत होऊ शकते. मात्र, निळी वस्तू दिसणे हे एक निरीक्षण आहे. त्या जीवाचे नाव ठरवणे, त्याचे मोजमाप करणे आणि तो रोग दर्शवतो का हे ठरवणे ही स्वतंत्र कामे आहेत.

मुखपृष्ठावरील प्रतिमा दृश्यभेदाचे तत्त्व स्पष्ट करते. खालील प्रतिमासंग्रहात स्वतंत्रपणे नोंद केलेल्या नमुन्यांची प्रत्यक्ष छायाचित्रे, त्यांच्या मूळ स्रोतांच्या माहितीसह दिली आहेत.

मिथिलीन ब्लूमुळे काय दिसते?

मिथिलीन ब्लू हा क्षारीय रंजक आहे: त्याचा रंगीत आयन धनभारित असतो. नमुना अभिरंजनावरील विवेचनात OpenStax स्पष्ट करते त्याप्रमाणे, क्षारीय रंजक ऋणभारित पेशीय पदार्थांशी परस्परक्रिया करतात आणि फिकट पार्श्वभूमीवर पेशी ठळकपणे दिसू शकतात. योग्य रीतीने तयार केलेल्या नमुन्यांत मिथिलीन ब्लू न्यूक्लिक आम्लांनी समृद्ध भाग आणि अभिरंजकाला बांधून ठेवणाऱ्या इतर रचना उठून दिसण्यास मदत करते.

साध्या अभिरंजनात एकच रंजक दृश्यभेद निर्माण करतो. त्यामुळे वेगवेगळे जीव एकच जीव नसतानाही निळे दिसू शकतात. सुरुवातीला उपयुक्त प्रश्न हे वर्णनात्मक असतात: दिसणाऱ्या वस्तू गोल आहेत की लांबट, स्वतंत्र आहेत की समूहात, एकसारख्या रंगलेल्या आहेत की त्यांच्या आतील भागांत भेद दिसतात? रंगाचा अर्थ वर्गीकरणाचा निष्कर्ष म्हणून लावण्यापूर्वी साधे अभिरंजन आणि ग्राम अभिरंजन यांतील फरक पाहा.

दृश्यभेद आणि विभेदन वेगवेगळे आहेत. दृश्यभेदामुळे एखादी वस्तू तिच्या सभोवतालच्या भागापासून वेगळी ओळखता येते; विभेदनामुळे जवळजवळ असलेले तपशील स्वतंत्रपणे दिसतात. अधिक गडद प्रतिमा म्हणजे अधिक रचना स्पष्टपणे वेगळ्या दिसतीलच असे नाही. तसेच प्रत्येक गडद कणाला पेशीअंगक म्हणणे योग्य नाही.

मूळ अवस्थेतील नमुने, अभिरंजित ओल्या नमुन्यांची मांडणी आणि स्मिअर

अभिरंजन न केलेल्या, म्हणजे मूळ अवस्थेतील, ओल्या नमुन्यात अतिरिक्त रंजक न घालता निरीक्षण करता येते; मात्र नमुना त्याच्या मूळ वातावरणातून बाहेर काढल्यानेही त्यात बदल होतात. अभिरंजित ओल्या नमुन्याच्या मांडणीत पदार्थ आच्छादक काचेच्या खाली द्रवात असतानाच अभिकर्मक घातले जाते. स्थिरीकृत स्मिअरमध्ये पदार्थ काचपट्टीवर पसरवला जातो आणि पुढील प्रक्रियेपूर्वी ठरावीक स्थिरीकरण पद्धत वापरली जाते. OpenStax मधील नमुना तयार करण्याच्या पद्धतींचा आढावा ओल्या नमुन्यांची मांडणी आणि स्थिरीकरण यांतील फरक स्पष्ट करतो आणि स्थिरीकृत जीवांत नेहमीची हालचाल किंवा चयापचय का पाहता येत नाही हे सांगतो.

या प्रकारे तयार केलेले नमुने वेगवेगळ्या प्रश्नांची उत्तरे देतात:

वर्गातील तुलनेसाठी, अध्यापनाच्या कार्यपद्धतीनुसार स्वतंत्रपणे अभिरंजित केलेला नमुना पाहण्यापूर्वी अभिरंजन न केलेल्या नमुन्याची नोंद करा. प्रकाशयोजना आणि प्रतिमा टिपण्याच्या सेटिंग्ज तुलनायोग्य ठेवा. दोन वेगवेगळ्या पेशींची छायाचित्रे काढली असतील, तर त्यांचे वर्णन उदाहरणे म्हणून करा; एकाच पेशीच्या आधीच्या आणि नंतरच्या अवस्थांची नोंद म्हणून करू नका.

सूक्ष्मदर्शकीय प्रतिमासंग्रह: तीन प्रत्यक्ष अभिरंजित नमुने

हा प्रतिमासंग्रह खुल्या परवान्याअंतर्गत उपलब्ध असलेल्या तीन सूक्ष्मप्रतिमांची स्वतंत्र निवड आणि त्यांचे विवेचन आहे. स्रोतांच्या लेखकांनी नमुने आणि अभिरंजकांची ओळख दिली आहे. आम्ही त्यांच्या नमुन्यांची स्वतंत्रपणे पडताळणी केलेली नाही. प्रतिमा न कापता, कोणतीही वैशिष्ट्ये न जोडता किंवा रंग न बदलता, माहितीची हानी न होणाऱ्या WebP रूपांतरणांमध्ये पुनरुत्पादित केल्या आहेत.

प्रतिमा 1: मानवी गालाच्या पेशी

नमुना: मानवी गालाच्या पेशी. अभिरंजक: मिथिलीन ब्लू. आवर्धन: 400×, छायाचित्रकाराने नोंदवलेले. मापनपट्टी: उपलब्ध नाही; स्रोताने अंशांकित पिक्सेल आकार दिलेला नाही. Fritzmann2002 यांचे छायाचित्र, 2017, मानवी गालाच्या पेशी (मिथिलीन ब्लू अभिरंजन) येथून, CC BY-SA 4.0 परवान्याअंतर्गत. या पुनरुत्पादनासाठी तोच परवाना कायम आहे.

प्रथम एखादी स्वतंत्र पेशी पाहा: सभोवतालच्या निळ्या पेशीद्रव्यापासून तिचे गडद केंद्रक वेगळे ओळखणे अधिक सोपे असते. त्यानंतर तिच्या खाली एकमेकांवर आलेल्या पेशी पाहा. पेशी एकमेकांवर आल्यामुळे त्यांची सीमा शोधणे कठीण होते आणि काही भाग अधिक गडद दिसू शकतो. प्रत्येक गडद भाग केंद्रक म्हणून मोजण्याऐवजी बाह्यरेषांचा मागोवा घेण्याचा सराव करण्यासाठी ही प्रतिमा वापरा. गालाच्या पेशींच्या निरीक्षणाचा मार्गदर्शक या नमुन्यासाठीचा विशिष्ट सराव विस्ताराने सांगतो.

प्रतिमा 2: कांद्याच्या पेशी

नमुना: स्रोताने ओळख दिल्यानुसार कांद्याच्या पेशी. अभिरंजक: मिथिलीन ब्लू. आवर्धन: मूळ फाइलच्या नावात “200x” आहे; त्याची स्वतंत्रपणे पडताळणी झालेली नाही. मापनपट्टी: उपलब्ध नाही; अंशांकन दिलेले नाही. Alvy16 यांचे छायाचित्र, 2019, कांद्याची पेशी 200x येथून, CC BY 4.0 परवान्याअंतर्गत.

लांबट कप्पे एक सुव्यवस्थित थर तयार करतात. त्यांच्या लांब सामायिक सीमांची तुलना प्रतिमा 1 मधील अनियमित बाह्यरेषांशी करा. तसेच ठळक गडद पदार्थ आणि दृश्यक्षेत्रातील असमान उजेडाकडे लक्ष द्या. प्रत्येक गडद साचलेल्या पदार्थाची ओळख या छायाचित्रावरून निश्चित होत नाही. रंग घेणाऱ्या प्रत्येक गोष्टीला नाव देण्याऐवजी, उपयुक्त निरीक्षण नोंदीत नमुना तयारी किंवा प्रतिमांकनामुळे निर्माण झालेल्या कृत्रिम खुणा आणि अनिश्चितता का समाविष्ट कराव्यात हे यातून स्पष्ट होते.

प्रतिमा 3: स्रोताने Candida spp. म्हणून ओळख दिलेले यीस्ट

नमुना: छायाचित्रकाराच्या माहितीनुसार Candida spp. अभिरंजक: मिथिलीन ब्लूने साधे धनात्मक अभिरंजन. आवर्धन: उपलब्ध नाही. मापनपट्टी: उपलब्ध नाही; अंशांकित पिक्सेल आकार दिलेला नाही. Marta, Wikimedia वापरकर्ता Martunia.g, यांचे छायाचित्र, 2021, मिथिलीन ब्लूने धनात्मक अभिरंजन 2 येथून, CC BY 4.0 परवान्याअंतर्गत.

दाट निळ्या समूहांची तुलना कमी गर्दी असलेल्या कडांच्या भागांशी करा. वस्तू एकमेकांवर कमी प्रमाणात आलेल्या ठिकाणी स्वतंत्र बाह्यरेषांचा मागोवा घेणे अधिक सोपे असते. Candida हे नाव स्रोताच्या नोंदीतून आले आहे; या छायाचित्रावरून केलेल्या प्रजातीच्या ओळखीतून नाही. ही प्रतिमा जीवक्षमतेचाही कोणताही निष्कर्ष देत नाही. यीस्टची जीवक्षमता आणि श्वसन चाचण्या यांसाठी स्वतंत्र परिस्थिती, नियंत्रणे आणि अर्थ लावण्याची पद्धत आवश्यक असते.

मापनाचा योग्य अर्थ लावणे

या प्रतिमा दृश्य तुलनेसाठी उपयुक्त आहेत; मायक्रोमीटरमधील मोजमापांसाठी किंवा वेगवेगळ्या प्रतिमांतील पेशींच्या प्रत्यक्ष आकाराची तुलना करण्यासाठी नाहीत. नोंदवलेले आवर्धन उपलब्ध नसलेल्या कॅमेरा अंशांकनाची जागा घेऊ शकत नाही. प्रतिमा दाखवण्याचा आकार बदलल्यास तिचे दिसणारे आवर्धन बदलते.

स्वतःच्या प्रतिमांसाठी, ज्ञात प्रमाणक आणि संबंधित प्रकाशीय मांडणी वापरून मापनाचे अंशांकन निश्चित करा. मंच सूक्ष्ममापकामुळे प्रतिमेतील किंवा जालिकेतील मनमानी विभागांचे प्रत्यक्ष लांबीत रूपांतर कसे होते, हे Nikon च्या सूक्ष्ममापन मार्गदर्शकात स्पष्ट केले आहे. वस्तुभिंग, कॅमेऱ्याची संरचना आणि अंशांकन नोंदवा आणि त्या माहितीवरून मापनपट्टी जोडा. पाठ्यपुस्तकातील पेशीच्या सरासरी आकारावरून मापनपट्टी ठरवू नका.

बाटलीतील मिश्रण पद्धतीशी जुळते का?

मिथिलीन ब्लू असे लेबल असलेली बाटली ही प्रयोगशाळेसाठीची संपूर्ण तपशीलवार माहिती नाही. तिची सांद्रता आणि एकके, विद्रावक, अतिरिक्त घटक, उद्दिष्ट उपयोग, उत्पादन तुकडीची कागदपत्रे आणि सूचना तपासा. अभिकर्मकाचे सुरक्षा माहितीपत्रक धोके सांगते; उद्दिष्ट नमुना तयारीसाठी ते कसे वापरायचे हे पद्धतीच्या सूचनांमध्ये दिलेले असते.

Merck चे Löffler मिथिलीन ब्लू द्रावण हे एक ठोस उदाहरण आहे. उत्पादक त्याची ओळख सूक्ष्मदर्शनासाठीचे अभिकर्मक म्हणून देतो आणि आम्ल-स्थिर अभिरंजनात प्रतिअभिरंजक म्हणून त्याची भूमिका स्पष्ट करतो. त्याच्या नोंदवलेल्या ज्वलनशीलतेवरूनही हाताळणी किंवा गरम करण्याचे नियोजन करताना केवळ “एक निळा द्रव” एवढी माहिती अपुरी का ठरते हे दिसते. हे गुणधर्म त्या विशिष्ट मिश्रणाला लागू होतात; प्रत्येक जलीय मिथिलीन ब्लू द्रावणाला आपोआप लागू होत नाहीत.

त्याचप्रमाणे, इओसिन मिथिलीन ब्लू अगार हे विशिष्ट मिश्रणातून तयार केलेले संवर्धन माध्यम आहे. नमुन्यात साधे मिथिलीन ब्लू घालून बनवलेले काचपट्टीचे अभिरंजक ते नाही. प्रतिमांकनाचा उद्देश वेगळा असल्यास, सूक्ष्मदर्शनासाठी मिथिलीन ब्लूचे पर्याय यांची तुलना करा.

नवशिक्यांसाठीच्या सूक्ष्मदर्शक संचात, त्याची दस्तऐवजीकृत शैक्षणिक पद्धत, ओळख माहीत असलेल्या तयार काचपट्ट्या आणि निर्दिष्ट अभिकर्मक यांपासून सुरुवात करा. बाटलीचे लेबल हरवले असेल किंवा तिची रचना निश्चित करता येत नसेल, तर तिच्याऐवजी योग्य दस्तऐवजीकृत अभिकर्मक वापरा. डोळ्यांचे संरक्षण करा आणि प्रत्यक्ष मिश्रणासाठी दिलेल्या हाताळणीच्या सूचनांचे पालन करा. मानवी पदार्थ आणि अज्ञात पर्यावरणीय नमुन्यांसाठी अध्यापन प्रयोगशाळेच्या नमुना हाताळणी व विल्हेवाट प्रक्रियांचे पालन करणे आवश्यक आहे; अभिरंजन हा त्या प्रक्रियांचा पर्याय नाही.

निष्कर्षापूर्वी निरीक्षण लिहा

“समूहात असलेल्या निळ्या अंडाकृती वस्तू” हे प्रतिमेचे समर्थनीय वर्णन आहे. “एखादा विशिष्ट संसर्ग” असा निष्कर्ष काढण्यासाठी प्रतिमेने न दिलेला पुरावा आवश्यक असतो. वहीत नमुन्याचा उगम, नमुना तयारी, अभिरंजन प्रतिक्रिया आणि ओळख ठरवण्याची पद्धत स्वतंत्रपणे नोंदवा. हा फरक साध्या वर्गातील प्रतिमेला उपयुक्त बनवतो आणि आकर्षक सूक्ष्मप्रतिमेच्या आधारे ती समर्थित करू शकत नसलेला दावा करण्यापासून रोखतो.