ലേഖനം
മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവും കോശീയ സെനെസൻസും: ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് പരീക്ഷണങ്ങൾ എന്താണ് അളക്കുന്നത്
ഒരു സാധാരണ തെറ്റായ വായന ഇങ്ങനെയാണ്. കൾച്ചറിൽ വളർത്തിയ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളിൽ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ കോശസമൂഹത്തിന് 20-ലധികം അധിക ഇരട്ടിയാകലുകൾ നൽകിയെന്ന് ഒരു ഗവേഷണപ്രബന്ധം റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യുന്നു. അതിനാൽ, അത് സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ നീക്കംചെയ്യുന്നുവെന്നോ മനുഷ്യന്റെ ആയുസ്സ് സമാനമായ തോതിൽ നീട്ടുന്നുവെന്നോ വായനക്കാരൻ നിഗമനത്തിലെത്തുന്നു. ഈ നിഗമനം സ്വാഭാവികമായി തോന്നാം. എന്നാൽ രണ്ട് വ്യത്യസ്ത കാര്യങ്ങളിൽ അത് തെറ്റാണ്.
അടിസ്ഥാന പ്രശ്നം സംഖ്യകളിലല്ല, ആശയത്തിലാണ്. കോശസമൂഹത്തിന്റെ ഇരട്ടിയാകലുകൾ, സെനെസൻസ് സൂചകങ്ങൾ, ടെലോമിയർ അളവുകൾ എന്നിവ ഓരോന്നും വ്യത്യസ്ത ചോദ്യങ്ങൾക്കാണ് ഉത്തരം നൽകുന്നത്. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് ഗവേഷണത്തെ, ഒരു കൾച്ചർ പാത്രത്തിലെ ഒരുതരം കോശങ്ങൾ സെനെസൻസിലേക്ക് കടക്കുന്നത് വൈകുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള പഠനമായി വായിക്കുന്നതാണ് ഏറ്റവും ഉചിതം; മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ സംബന്ധമായ അളവുകൾ ഇതിനെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു. ഇത് ഇതിനകം സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ തിരഞ്ഞെടുത്ത് നീക്കംചെയ്യുന്നതിൽനിന്ന് വ്യത്യസ്തമാണ്; ജീവിയുടെ വാർധക്യത്തിൽനിന്നും വേറിട്ടതാണ്. ഈ വ്യത്യാസത്തിന്റെ വിശാലമായ പശ്ചാത്തലം മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിലെ ഇലക്ട്രോൺ ഗതാഗതം കോശത്തിന്റെ ഊർജത്തെ എങ്ങനെ രൂപപ്പെടുത്തുന്നു എന്ന വിഷയത്തിന്റെയും മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഗവേഷണത്തിലെ അവകാശവാദങ്ങൾ എങ്ങനെ വ്യാഖ്യാനിക്കണം എന്നതിന്റെയും ഭാഗമാണ്.
കോശസമൂഹത്തിന്റെ ഇരട്ടിയാകലുകൾ രേഖപ്പെടുത്തുന്നത് ചരിത്രമാണ്, യൗവനമല്ല
പ്രധാന ഫലങ്ങളിൽ മിക്കതും IMR90 കോശങ്ങളിൽനിന്നാണ് ലഭിക്കുന്നത്. പരിമിതമായ വിഭജനശേഷിയുള്ള, സാധാരണ മനുഷ്യ ഭ്രൂണത്തിന്റെ ശ്വാസകോശ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് കോശവംശമാണിത്. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവും IMR90 ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളുടെ വിഭജന ആയുസ്സും സംബന്ധിച്ച ആദ്യകാല പഠനത്തിൽ, നിശ്ചിത സമയക്രമത്തിൽ കൾച്ചറുകൾ പുതിയ പാത്രങ്ങളിലേക്ക് മാറ്റുകയും കൾച്ചർ വിഭജനം നിർത്തുന്നതുവരെ കോശസമൂഹത്തിന്റെ ആകെ ഇരട്ടിയാകലുകൾ രേഖപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്തു. 100 nM കേന്ദ്രീകരിച്ചുള്ള നാനോമോളാർ അളവുകളിലെ പ്രയോഗം, വിഭജനം നിലയ്ക്കുന്നതിനുമുമ്പ് 20-ലധികം അധിക ഇരട്ടിയാകലുകൾ കൈവരിക്കാൻ കൾച്ചറുകളെ അനുവദിച്ചു.
കോശസമൂഹം ഒരിക്കൽ ഇരട്ടിയാകുന്നത് ഒരു കണക്കെടുപ്പ് ഏകകമാണ്. കോശസമൂഹം ഏകദേശം എത്ര തവണ ഇരട്ടിയായി എന്ന് അത് രേഖപ്പെടുത്തുന്നു. ഒരു പ്രത്യേക കോശം സെനെസൻസിലാണോ, താൽക്കാലിക നിഷ്‌ക്രിയാവസ്ഥയിലാണോ, വ്യത്യാസീകരണം സംഭവിച്ചതാണോ, മരിച്ചതാണോ എന്ന് അത് നേരിട്ട് പറയുന്നില്ല. കോശങ്ങൾ കൂടുതൽ കാലം വിഭജനശേഷി നിലനിർത്തുന്നതിനാലോ, സമ്മർദത്തിൽ കുറച്ച് കോശങ്ങൾ മാത്രം നേരത്തേ വിഭജനം നിർത്തുന്നതിനാലോ, സാഹചര്യങ്ങൾ പെരുകുന്ന ഒരു ഉപസമൂഹത്തെ അനുകൂലിക്കുന്നതിനാലോ ഒരു കൾച്ചറിന് കൂടുതൽ ഇരട്ടിയാകലുകൾ ലഭിക്കാം. എണ്ണം മാത്രം ഉപയോഗിച്ച് ഈ വഴികളെ വേർതിരിക്കാനാവില്ല.
അതുകൊണ്ടാണ് ഇരട്ടിയാകലുകളുടെ എണ്ണത്തോടൊപ്പം സൂചകങ്ങളും പരിശോധിക്കുന്നത്. കോശപ്പെരുക്കം എത്രകാലം തുടർന്നുവെന്ന് എണ്ണം പറയുന്നു. വിഭജനം നിലച്ചതോ അതിജീവിച്ചതോ ആയ കോശങ്ങൾ ഏത് അവസ്ഥയിലേക്ക് കടന്നുവെന്ന് സൂചകങ്ങൾ പറയുന്നു.
പരീക്ഷണാന്ത്യ അളവുകളിലേക്കുള്ള മാർഗ്ഗദർശി: ഓരോ സൂചകവും എന്താണ് വ്യക്തമാക്കുന്നത്
കൾച്ചറിലെ സെനെസൻസ് പല സ്വതന്ത്ര അളവുകളിലൂടെ നിർണ്ണയിക്കുന്ന ഒരു ഫീനോടൈപ്പാണ്. ഏതെങ്കിലും ഒരു സ്റ്റെയിനോ പ്രോട്ടീനോ മാത്രം അത് തെളിയിക്കുന്നില്ല.
DNA സംശ്ലേഷണം നഷ്ടപ്പെടുന്നതിനോടൊപ്പമുള്ള വളർച്ചാ സ്തംഭനം. BrdU അല്ലെങ്കിൽ EdU ഉൾക്കൊള്ളൽ കുറയുന്നത്, പരന്ന കോശരൂപം, വീണ്ടും കൾച്ചർ പാത്രത്തിൽ വിതച്ചശേഷം വളരാൻ കഴിയാതിരിക്കുക എന്നിവയിലൂടെ നിലനിൽക്കുന്ന വിഭജനസ്തംഭനം പരിശോധിക്കുന്നു. സെനെസൻസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സ്തംഭനത്തെ താൽക്കാലിക നിഷ്‌ക്രിയാവസ്ഥയിൽനിന്ന് ഇത് വേർതിരിക്കുന്നു.
സെനെസൻസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട ബീറ്റാ ഗാലാക്ടോസിഡേസ്. SA-beta-gal, pH 6.0-നടുത്തുള്ള ലൈസോസോമൽ പ്രവർത്തനത്തിന് നിറം നൽകുന്നു. ലൈസോസോമുകളുടെ ആകെ അളവ് വർധിക്കുമ്പോൾ സെനെസൻസിലെത്തിയ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകൾ പലപ്പോഴും ഈ സ്റ്റെയിനിൽ പോസിറ്റീവ് ആകുന്നു. ഇത് സെനെസൻസിന് മാത്രമുള്ള സൂചകമല്ല; അതിനാൽ കോശപ്പെരുക്കത്തിന്റെയും തന്മാത്രാതല സൂചകങ്ങളുടെയും കൂടെയാണ് ഇതിനെ വിലയിരുത്തുന്നത്.
p16, p21 പാതകൾ. p16, CDK4, CDK6 എന്നിവയിലൂടെയും RB പാതയിലൂടെയും പ്രവർത്തിക്കുന്നു. p21 പലപ്പോഴും p53 വഴിയാണ് പ്രേരിപ്പിക്കപ്പെടുന്നത്. ഇവയുടെ അളവ് ഉയരുന്നത് വിഭജനസ്തംഭനത്തെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു; എന്നാൽ ഈ രണ്ട് പ്രോട്ടീനുകളും സെനെസൻസിൽ മാത്രം കാണപ്പെടുന്നവയല്ല.
സ്രവണാവസ്ഥ. സെനെസൻസുമായി ബന്ധപ്പെട്ട സ്രവണ ഫീനോടൈപ്പ്, അഥവാ SASP, സൈറ്റോകൈനുകൾ, കീമോകൈനുകൾ, വളർച്ചാ ഘടകങ്ങൾ, പ്രോട്ടിയേസുകൾ എന്നിവ പുറത്തുവിടുന്നതിലെ മാറ്റങ്ങളെയാണ് സൂചിപ്പിക്കുന്നത്. SASP ഘടകങ്ങൾക്കായുള്ള RNA അല്ലെങ്കിൽ പ്രോട്ടീൻ പരിശോധനകൾ, കോശങ്ങൾ അയൽക്കോശങ്ങളിലേക്ക് എങ്ങനെ സന്ദേശങ്ങൾ അയക്കുന്നു എന്ന് വിവരിക്കുന്നു. അവ വിഭജനശേഷി നേരിട്ട് അളക്കുന്നില്ല.
ഓക്സിഡന്റുകളും മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ സംബന്ധമായ അളവുകളും. മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഗവേഷണപ്രബന്ധങ്ങൾ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ സംബന്ധമായ ഒരു തലവും ചേർക്കുന്നു: കോംപ്ലക്സ് IV-ന്റെ അളവും പ്രവർത്തനവും, ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം, ഹീം സംശ്ലേഷണം, സ്തരത്തിന്റെ ആകെ അളവ്, സ്തര വൈദ്യുതവിഭവം, ATP, ഓക്സിഡന്റ് സിഗ്നലുകൾ എന്നിവ. വിഭജനസ്തംഭനം വൈകുന്നതിനോടൊപ്പം കാണപ്പെടുന്ന ഉപാപചയാവസ്ഥയാണ് ഇവ വിവരിക്കുന്നത്. ഇവ മാത്രം സെനെസൻസിനെ നിർവചിക്കുന്നില്ലെങ്കിലും നിർദ്ദേശിക്കപ്പെട്ട പ്രവർത്തനരീതി പരിശോധിക്കുന്നു. NAD(P)H മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെ നിരോക്സീകരിക്കുകയും സൈറ്റോക്രോം c അതിനെ വീണ്ടും ഓക്സീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്ന റെഡോക്സ് ചക്രത്തിന്റെ മാതൃക, അതേ റെഡോക്സ് ചക്രത്തെ കുറഞ്ഞ ഓക്സിഡന്റ് ഉൽപാദനവുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്ന IMR90 പഠനത്തിൽ വിശദീകരിച്ചിട്ടുണ്ട്. പ്രയോഗിക്കുന്ന അളവും വിതരണവും സംബന്ധിച്ച യുക്തി, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന്റെ ഫാർമക്കോളജിയിലും കലകളിലെ സമ്പർക്കത്തിലും വിശദീകരിക്കുന്നു.
ടെലോമിയർ ക്ഷയത്തിന്റെ നിരക്ക്. ശരിയായ ഏകകം, ഒരൊറ്റ സമയബിന്ദുവിലെ നീളമല്ല; ആഴ്ചകളിലായി ഓരോ ഇരട്ടിയാകലിലും നഷ്ടപ്പെടുന്ന ബേസ് പെയറുകളാണ്. ക്ഷയം മന്ദഗതിയിലാകുന്നത് ഓരോ പകർപ്പുണ്ടാകലിലും നീളം കുറയുന്നത് കുറഞ്ഞുവെന്നാണ് അർഥം. അത് നീളം കൂടുന്നതായി അർഥമാക്കുന്നില്ല; ടെലോമിയറിൽ കാര്യമായ മാറ്റമില്ലാതെയും സമ്മർദം IMR90 കോശങ്ങളുടെ വിഭജനം നിർത്താം.
മൂന്ന് ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് പഠനരൂപകൽപ്പനകളുടെ താരതമ്യം
ഈ പേജിനായി തയ്യാറാക്കിയ സവിശേഷ ഉള്ളടക്കമാണ് താഴെയുള്ള താരതമ്യം. കോശതരം, സമ്പർക്കം, അളവ്, പരിമിതി എന്നിവ ഒറ്റനോട്ടത്തിൽ ഇതിൽ കാണാം.
| പഠനം | കോശങ്ങളും സമ്പർക്കവും | അളന്നത് | ഇതിന് കാണിക്കാനാവാത്തത് |
|---|---|---|---|
| Atamna-യും സഹപ്രവർത്തകരും, FASEB J 2008 | സാധാരണ IMR90 ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകൾ, ദീർഘകാല നാനോമോളാർ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ പ്രയോഗം, മാനദണ്ഡ സാഹചര്യമായി 100 nM | ആകെ ഇരട്ടിയാകലുകൾ, കോംപ്ലക്സ് IV-ന്റെ അളവ്, ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗത്തിൽ 37 മുതൽ 70 percent വരെ വർധന, ഹീം സംശ്ലേഷണം, ഹൈഡ്രജൻ പെറോക്സൈഡോ കാഡ്മിയമോ മൂലം നേരത്തേ ഉണ്ടാകുന്ന സെനെസൻസിൽനിന്നുള്ള വീണ്ടെടുപ്പ്, HepG2 കോശങ്ങളിലെ ഘട്ടം 2 എൻസൈമുകൾ | സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ നീക്കംചെയ്യുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള പരിശോധനയില്ല. മൃഗങ്ങളുടെയോ മനുഷ്യരുടെയോ ആയുർദൈർഘ്യം സംബന്ധിച്ച പരീക്ഷണാന്ത്യ അളവില്ല. ഇവിടെ വിഭജന ആയുസ്സ് എന്നത് കൾച്ചർ പാത്രത്തിലെ ഇരട്ടിയാകലുകളെയാണ് അർഥമാക്കുന്നത്. |
| Atamna-യും സഹപ്രവർത്തകരും, Redox Biology 2015, AMPK-യും കോംപ്ലക്സ് IV ജൈവോൽപാദനവും സംബന്ധിച്ച തുടർ പ്രവർത്തനരീതി പഠനത്തിൽ വിവരിച്ചത് | IMR90 ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകൾ, പ്രധാനമായും 100 nM മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, താരതമ്യത്തിനായി ദീർഘകാല AMPK സജീവകാരിയായ AICAR | സമയക്രമത്തിലെ NAD-നും NADH-നും ഇടയിലുള്ള അനുപാതം, താൽക്കാലിക AMPK ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ, PGC-1alpha, SURF1 എന്നിവയുടെ പ്രേരണം, കോംപ്ലക്സ് IV പ്രവർത്തനത്തിൽ 100 percent-ലധികം വർധന, ഓക്സിഡന്റുകൾ 28 percent കുറവ്, മന്ദഗതിയിലുള്ള ടെലോമിയർ ക്ഷയം, AICAR-ലുള്ള ഏകദേശം 2 അധിക ഇരട്ടിയാകലുകളെ അപേക്ഷിച്ച് ഏകദേശം 18 അധിക ഇരട്ടിയാകലുകൾ, കോശചക്രത്തിൽ സ്വാധീനമില്ല | AICAR താരതമ്യത്തിൽ പ്രയോഗിച്ച അളവ് ഏകദേശം 1000 മടങ്ങ് വ്യത്യസ്തമാണ്; നിർദ്ദിഷ്ടതയിലും വ്യത്യാസമുണ്ട്. അതിനാൽ തുല്യ പ്രവർത്തനശക്തിയല്ല, സജീവീകരണരീതിയാണ് ഇത് പരിശോധിക്കുന്നത്. ടെലോമിയർ ഫലം ആഴ്ചകളിലായി വിഭജിക്കുന്ന കൾച്ചറുകൾക്കാണ് ബാധകമാകുന്നത്. |
| Xiong-യും സഹപ്രവർത്തകരും, Aging Cell 2016, മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയുടെയും ന്യൂക്ലിയസിന്റെയും വീണ്ടെടുപ്പിനെക്കുറിച്ചുള്ള പ്രൊജീരിയ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് പഠനത്തിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തത് | പ്രാഥമിക Hutchinson-Gilford പ്രൊജീരിയ ത്വക്ക് ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളും അവയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുത്തിയ സാധാരണ നിയന്ത്രണ കോശങ്ങളും, പ്രധാനമായും 5 മുതൽ 12 ആഴ്ച വരെ 100 nM | ഫ്ലൂറസൻസും ഇലക്ട്രോൺ മൈക്രോസ്കോപ്പിയും ഉപയോഗിച്ചുള്ള മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയുടെ രൂപം, തത്സമയ ചിത്രീകരണത്തിലൂടെയുള്ള ചലനശേഷി, സൂപ്പർഓക്സൈഡ്, സ്തര വൈദ്യുതവിഭവം, ATP, PGC-1alpha, കോശപ്പെരുക്കത്തിന്റെയും സെനെസൻസിന്റെയും സൂചകങ്ങൾ, കൂടാതെ ന്യൂക്ലിയസിലെ കുമിളപോലുള്ള തള്ളലുകൾ, പ്രൊജെറിന്റെ സ്ഥാനം, ഹെറ്ററോക്രോമാറ്റിൻ, ജീൻ ആവിഷ്കാരം | രോഗവിശിഷ്ടമായ അകാല വാർധക്യ മാതൃകയാണ്, സാധാരണ വാർധക്യമല്ല. രൂപഘടനയിലും സൂചകങ്ങളിലും ഉണ്ടാകുന്ന വീണ്ടെടുപ്പ് സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ നീക്കംചെയ്യുന്നതല്ല. മൃഗങ്ങളിലെ ഫലപ്രാപ്തിയോ ക്ലിനിക്കൽ പരീക്ഷണാന്ത്യ അളവോ ഇല്ല. |
| Xue-യും സഹപ്രവർത്തകരും, Cells 2021 അവലോകനം, വാർധക്യവിരുദ്ധ സാധ്യതയുള്ള സംയുക്തമായി മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെ വിലയിരുത്തുന്ന അവലോകനത്തിൽ സംഗ്രഹിച്ചത് | മസ്തിഷ്ക വാർധക്യം, നാഡീക്ഷയം, ത്വക്ക്, മുറിവുണങ്ങൽ, പ്രൊജീരിയ എന്നിവ സംബന്ധിച്ച സാഹിത്യത്തിന്റെ സമന്വയം | വാർധക്യത്തിന്റെ ഫ്രീ റാഡിക്കൽ സിദ്ധാന്തങ്ങളുടെ പശ്ചാത്തലത്തിൽ, കോംപ്ലക്സ് I, III എന്നിവയിലെ ഇലക്ട്രോൺ ഗതാഗതത്തിന്റെ ചില ഭാഗങ്ങൾ മറികടക്കാൻ കഴിയുന്ന ഉൽപ്രേരക റെഡോക്സ് ചക്രകാരിയായി മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെ അവതരിപ്പിക്കുന്നു | വിവരണാത്മക സമന്വയം മാത്രം. ഇത് പരികൽപ്പനകളെ ക്രമീകരിക്കുകയും ക്ലിനിക്കൽ തെളിവുകൾ എവിടെയെല്ലാം ഇപ്പോഴും അനിശ്ചിതമാണെന്ന് രേഖപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുന്നു. |
ഏതെങ്കിലും ഒരു നിരയെക്കാൾ പ്രധാനമാണ് നിരകളിലുടനീളം കാണുന്ന രീതി. കുറഞ്ഞ അളവിലുള്ള മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ, കൂടുതൽ നീണ്ട കോശപ്പെരുക്ക കാലയളവ്, ഉയർന്ന കോംപ്ലക്സ് IV പ്രവർത്തനം, കുറഞ്ഞ ഓക്സിഡന്റ് സിഗ്നലുകൾ, മെച്ചപ്പെട്ട രൂപഘടന എന്നിവയുമായി ആവർത്തിച്ച് ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. പഠനരൂപകൽപ്പന തുടർന്നും കാലക്രമത്തിലുള്ളതാണ്: വിഭജിക്കുന്ന കോശങ്ങളിൽനിന്ന് തുടങ്ങുക, അവ പെരുകുമ്പോൾ സംയുക്തം പ്രയോഗിക്കുക, വിഭജനം എത്രകാലം തുടരുന്നു എന്ന് രേഖപ്പെടുത്തുക. ഈ ഘടനയ്ക്ക് വൈകിപ്പിക്കൽ സംബന്ധിച്ച അവകാശവാദത്തെ പിന്തുണയ്ക്കാനാകും. മറ്റൊരു രൂപകൽപ്പനയില്ലാതെ നീക്കംചെയ്യൽ സംബന്ധിച്ച അവകാശവാദത്തെ പിന്തുണയ്ക്കാനാവില്ല.
സെനെസൻസ് വൈകിപ്പിക്കുന്നത് സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ നീക്കംചെയ്യുന്നതല്ല
വൈകിപ്പിക്കൽ എന്നതുകൊണ്ട് അർഥമാക്കുന്നത്, വിഭജിക്കുന്ന കോശങ്ങൾ വിഭജനം നിർത്തുന്നതിനുമുമ്പ് കൂടുതൽ കാലം വിഭജിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുന്നു എന്നതാണ്. പലപ്പോഴും സെനോലൈറ്റിക് പ്രഭാവം എന്ന് വിളിക്കുന്ന നീക്കംചെയ്യൽ എന്നത്, ഇതിനകം സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ തിരഞ്ഞെടുത്ത് കൊല്ലുകയോ അവയുടെ എണ്ണം കുറയ്ക്കുകയോ ചെയ്യുകയും സമീപത്തുള്ള പെരുകുന്ന കോശങ്ങൾ അതിജീവിക്കുകയും ചെയ്യുന്നതാണ്.
മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനെക്കുറിച്ചുള്ള ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് സാഹിത്യം ആദ്യത്തെ ഘടനയാണ് പരിശോധിക്കുന്നത്. കൾച്ചറുകൾ തുടക്കത്തിൽ പെരുകുന്നവയാണ്; തുടർച്ചയായി പുതിയ പാത്രങ്ങളിലേക്ക് മാറ്റുന്നതിനിടെ പ്രയോഗം ലഭിക്കുകയും കൂടുതൽ വൈകി വിഭജനസ്തംഭനത്തിലെത്തുകയും ചെയ്യുന്നു. അതിനാൽ SA-beta-gal, p16, p21, SASP ഘടകങ്ങൾ തുടങ്ങിയ സൂചകങ്ങൾ കൂടുതൽ വൈകിയോ ഒരു നിശ്ചിത പാസേജിൽ കുറഞ്ഞ അളവിലോ കാണപ്പെടുന്നു. ആരംഭം വൈകുമ്പോഴെല്ലാം പ്രതീക്ഷിക്കാവുന്ന രീതിയാണിത്. ഇതിനകം സെനെസൻസിലെത്തിയ ഏതെങ്കിലും കോശം നീക്കംചെയ്യപ്പെട്ടുവെന്ന് ഇത് തെളിയിക്കുന്നില്ല.
ഒരു സെനോലൈറ്റിക് അവകാശവാദത്തിന് വ്യത്യസ്തമായ പരീക്ഷണക്രമം ആവശ്യമാണ്: ആദ്യം ഒരു കൾച്ചറിനെ സ്ഥിരീകരിച്ച സെനെസൻസിലേക്ക് എത്തിക്കുക, തുടർന്ന് സംയുക്തം പ്രയോഗിക്കുക, പിന്നെ കോശങ്ങളുടെ ജീവക്ഷമതയുടെയും മരണത്തിന്റെയും നേരിട്ടുള്ള അളവുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പെരുകുന്ന നിയന്ത്രണ കോശങ്ങളെ അപേക്ഷിച്ച് സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുത്ത് നഷ്ടപ്പെടുന്നതായി കാണിക്കുക. ഒരു സൂചകം കുറയുന്നത് മാത്രം മതിയാകില്ല. കാരണം, കോശങ്ങൾ നഷ്ടപ്പെടാതെയും ആവിഷ്കാരത്തിൽ മാറ്റമുണ്ടാകാം; ശേഷിക്കുന്ന പെരുകുന്ന കോശങ്ങൾക്ക് കൾച്ചർ പാത്രത്തിൽ വ്യാപിച്ച് വളരാനും കഴിയും. ഉദ്ധരിച്ച നാല് സ്രോതസ്സുകളിലൊന്നും മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിനായി ഇത്തരത്തിലുള്ള തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെട്ട കോശനീക്ക രൂപകൽപ്പന ഉപയോഗിക്കുന്നില്ല. അതിനാൽ കൃത്യമായ വിശേഷണം ഇപ്പോഴും ഇൻ വിട്രോയിലെ സെനെസൻസ് വൈകിപ്പിക്കുന്ന അല്ലെങ്കിൽ സെനെസൻസ് വിരുദ്ധ പ്രവർത്തനം എന്നതാണ്, സെനോലൈറ്റിക് എന്നല്ല. ഈ വ്യത്യാസത്തിലെ ഓക്സിഡേറ്റീവ് സമ്മർദവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട വശം കോശങ്ങൾ റിയാക്ടീവ് ഓക്സിജൻ സ്പീഷീസിനെ എങ്ങനെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു എന്നതിൽ കൂടുതൽ വിശദീകരിക്കുന്നു.
താൽക്കാലിക സിഗ്നലിങ് ഫലം ഈ കാര്യം കൂടുതൽ വ്യക്തമാക്കുന്നു. 2015-ലെ IMR90 പഠനത്തിൽ, മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ NAD-നും NADH-നും ഇടയിലുള്ള അനുപാതത്തിൽ ഹ്രസ്വമായ വർധനയും ഹ്രസ്വമായ AMPK ഫോസ്ഫോറിലേഷനും സൃഷ്ടിച്ചു. തുടർന്ന് കോംപ്ലക്സ് IV ജൈവോൽപാദനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട PGC-1alpha, SURF1 എന്നിവ പ്രേരിപ്പിക്കപ്പെട്ടു. AICAR ഉപയോഗിച്ചുള്ള ദീർഘകാല AMPK സജീവീകരണം അധിക ഇരട്ടിയാകലുകളുടെ കാര്യത്തിൽ വളരെ മോശമായ ഫലമാണ് നൽകിയത്.
വിഭജന ആയുസ്സ് മനുഷ്യന്റെ ആയുർദൈർഘ്യമല്ല
ഓക്സിജൻ, വളർച്ചാമാധ്യമം, പാസേജ് സമയക്രമം എന്നിവ സ്ഥിരമായി നിലനിർത്തുന്ന നിയന്ത്രിത കൾച്ചർ പാത്രത്തിൽ, വിഭജനം നിലയ്ക്കുന്നതിനുമുമ്പുള്ള ഇരട്ടിയാകലുകളാണ് കോശത്തിന്റെ വിഭജന ആയുസ്സ് കണക്കാക്കുന്നത്. മനുഷ്യന്റെ ആയുർദൈർഘ്യത്തിൽ ദശാബ്ദങ്ങളിലെ വളർച്ചാവികാസം, പ്രതിരോധശേഷി, രക്തക്കുഴൽ വ്യവസ്ഥ, സ്റ്റെം കോശങ്ങളുടെ സൂക്ഷ്മപരിസരങ്ങൾ, പെരുമാറ്റം, രോഗം എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. ഒരു സംയുക്തത്തിന് രണ്ടാമത്തേതിൽ മാറ്റമുണ്ടാക്കാതെ ആദ്യത്തേത് നീട്ടാനാകും; മിക്കവയും അങ്ങനെയാണ്.
പ്രൊജീരിയ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളിൽ പ്രൊജെറിൻ ഉൽപാദിപ്പിക്കുന്ന നിർദ്ദിഷ്ട LMNA മ്യൂട്ടേഷൻ കാണപ്പെടുന്നു. അവയിൽ ഖണ്ഡിതവും ചലനശേഷി കുറഞ്ഞതുമായ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ, കുറഞ്ഞ ATP, വികൃതമായ ന്യൂക്ലിയസുകൾ, ഹെറ്ററോക്രോമാറ്റിൻ നഷ്ടം എന്നിവയുണ്ട്. നാനോമോളാർ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ സംബന്ധമായ അളവുകൾ മെച്ചപ്പെടുത്തുകയും, സ്തരത്തിൽനിന്ന് പ്രൊജെറിൻ വിടുതൽ നേടുന്നതുൾപ്പെടെ ന്യൂക്ലിയസ് സംബന്ധമായ അളവുകളിൽ ഗണ്യമായ വീണ്ടെടുപ്പ് ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്തു. കോശതലത്തിൽ ശ്രദ്ധേയമായ വീണ്ടെടുപ്പാണിത്. എങ്കിലും ഇത് ഒരു ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് ഫലം മാത്രമാണ്; മൃഗപരീക്ഷണങ്ങളെ ഭാവിയിലെ പ്രവർത്തനമായാണ് രചയിതാക്കൾ അവതരിപ്പിച്ചത്. രോഗമാതൃകയെക്കുറിച്ച് പ്രൊജീരിയയിലും അകാല വാർധക്യ മാതൃകകളിലും മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ എന്നതിൽ കൂടുതൽ ചർച്ച ചെയ്യുന്നു.
ഇതിൽനിന്ന് വായനയ്ക്കുള്ള ഒരു പ്രായോഗിക പരിശോധനപ്പട്ടിക ലഭിക്കുന്നു.
- പ്രയോഗം തുടങ്ങിയത് വിഭജനം നിലയ്ക്കുന്നതിനുമുമ്പാണോ അതോ സ്തംഭനം സ്ഥാപിതമായശേഷമാണോ എന്ന് ചോദിക്കുക. മുമ്പാണെങ്കിൽ അത് വൈകിപ്പിക്കലിനെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു. നീക്കംചെയ്യൽ തെളിയിക്കാൻ, സ്തംഭനത്തിനുശേഷമുള്ള പ്രയോഗവും തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെട്ട കോശമരണത്തിന്റെ വിവരങ്ങളും ആവശ്യമാണ്.
- നിയന്ത്രണ കൾച്ചറിന്റെ ഇരട്ടിയാകൽ വളവിൽ എന്തു സംഭവിച്ചു എന്ന് ചോദിക്കുക. ആകെ ഇരട്ടിയാകലുകളില്ലാതെ സൂചകമാറ്റങ്ങൾക്ക് വ്യക്തമായ പശ്ചാത്തലമില്ല.
- ഒരൊറ്റ സ്റ്റെയിൻ മാത്രമല്ല, കുറഞ്ഞത് രണ്ട് സൂചക വിഭാഗങ്ങളെങ്കിലും ആവശ്യപ്പെടുക; ഉദാഹരണത്തിന്, ഒരു കോശപ്പെരുക്ക അടയാളത്തോടൊപ്പം p16 അല്ലെങ്കിൽ p21, കൂടാതെ SA-beta-gal.
- ടെലോമിയറുകൾ എങ്ങനെ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു എന്ന് ചോദിക്കുക. കാലക്രമത്തിൽ ഓരോ ഇരട്ടിയാകലിലുമുള്ള മാറ്റനിരക്ക് അർഥവത്താണ്. ഒരൊറ്റ സമയത്തെ നീളത്തിന്റെ ചിത്രം അങ്ങനെയല്ല.
- എന്തൊക്കെയാണ് സ്ഥിരമായി നിലനിർത്തിയതെന്ന് ചോദിക്കുക. പാസേജ് സമയത്തെ കോശസാന്ദ്രത, ഓക്സിജൻ, വളർച്ചാമാധ്യമത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ, പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയതോ പഴകിയതോ ആയ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ സ്റ്റോക്ക് ലായനികൾ എന്നിവയെല്ലാം ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളുടെ വിഭജനസ്തംഭനത്തിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നു.
ഈ രീതിയിൽ വായിക്കുമ്പോൾ, ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് സാഹിത്യം മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന് യോജിച്ചതും എന്നാൽ പരിമിതികളുള്ളതുമായ ഒരു പങ്കാണ് നൽകുന്നത്: കൾച്ചറിൽ വളർത്തിയ മനുഷ്യ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റുകളിൽ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ സംബന്ധമായ അളവുകൾ മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനൊപ്പം വിഭജനസംബന്ധമായ സെനെസൻസ് വൈകിപ്പിക്കുന്ന, കുറഞ്ഞ അളവിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന, റെഡോക്സ് പ്രവർത്തനമുള്ള ഒരു സംയുക്തം. ഇതിന്റെ പ്രവർത്തനരീതിയെക്കുറിച്ചുള്ള ഏറ്റവും ശക്തമായ വിശദാംശങ്ങൾ താൽക്കാലിക ഊർജസിഗ്നലിങ്ങിനെയും കോംപ്ലക്സ് IV ജൈവോൽപാദനത്തെയും ചുറ്റിപ്പറ്റിയാണ്. ഈ ഗവേഷണപ്രബന്ധങ്ങളിലൊന്നും സെനെസൻസിലെത്തിയ കോശങ്ങളെ നീക്കംചെയ്യുന്നതോ മനുഷ്യന്റെ ആയുസ്സ് നീട്ടുന്നതോ തെളിയിച്ചിട്ടില്ല.