മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിലെ കോംപ്ലക്സ് III-നെ മറികടക്കാൻ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന് കഴിയുമോ? പഠനങ്ങൾ വിയോജിക്കുന്നത് എന്തുകൊണ്ട്

തടയപ്പെട്ട മൈറ്റോകോണ്ട്രിയൽ കോംപ്ലക്സ് III-നെ മെത്തിലീൻ ബ്ലൂവിന് മറികടക്കാനാകുമോ എന്ന് രണ്ട് ലബോറട്ടറികൾ അന്വേഷിച്ചു. ഒന്നിന്റെ ഉത്തരം ഇല്ല എന്നായിരുന്നു. മറ്റൊന്നിന്റെ ഉത്തരം അതെ എന്നും. രണ്ടിനും ഡാറ്റയുണ്ടായിരുന്നു.

ചുണ്ടെലിയുടെ മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ നടത്തിയ ആദ്യ പഠനം ഈ വർണകത്തിന് അത് സാധിക്കില്ലെന്ന് കണ്ടെത്തി. മൂന്ന് ദംശക ഇനങ്ങളുടെ മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ നടത്തിയ രണ്ടാമത്തെ പഠനം ഭാഗികമായി സാധിക്കുമെന്ന് കണ്ടെത്തി. ചുണ്ടെലിയുടെ കരളിൽ നടത്തിയ മൂന്നാമത്തെ പഠനം പലപ്പോഴും ഇവയ്‌ക്കൊപ്പം ഉദ്ധരിക്കപ്പെടുന്നുണ്ടെങ്കിലും അത് പരിശോധിച്ചത് മറ്റൊരു കാര്യമാണ്. അതിനെ അതിന്റെ ശരിയായ പശ്ചാത്തലത്തിൽ നിർത്തിയാൽ ആശയക്കുഴപ്പത്തിന്റെ പകുതി മാറും.

എല്ലാ സാഹചര്യങ്ങൾക്കും ബാധകമായ ഒരു പ്രവർത്തനരീതി പ്രഖ്യാപിക്കാനില്ല. വ്യത്യസ്ത തടയൽ പദാർഥങ്ങളും ഡോസുകളും അളവെടുപ്പുകളും ഉപയോഗിച്ച മൂന്ന് പരീക്ഷണങ്ങളാണ് ഉള്ളത്. ആദ്യം സാഹചര്യങ്ങൾ വായിക്കുക. നിഗമനങ്ങൾ അതിനെ പിന്തുടരും.

ഇവിടെ മറികടക്കുക എന്നതിന്റെ അർഥം

ഇലക്ട്രോണുകൾ കോംപ്ലക്സ് I വഴിയോ (NADH-ൽ നിന്ന്) കോംപ്ലക്സ് II വഴിയോ (സക്സിനേറ്റിൽ നിന്ന്) ശൃംഖലയിലേക്ക് പ്രവേശിക്കുന്നു. കോംപ്ലക്സ് III വഴി സൈറ്റോക്രോം c-യിലെത്തിയ ശേഷം കോംപ്ലക്സ് IV വഴി ഓക്സിജനിലേക്ക് പോകുന്നു. ഈ വഴിയിൽ രൂപപ്പെടുന്ന ഗ്രേഡിയന്റാണ് ATP നിർമിക്കാൻ കോശം ഉപയോഗിക്കുന്നത്.

ഒരു തടസ്സത്തിന് മുമ്പുള്ള ഭാഗത്തുനിന്ന് മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഇലക്ട്രോണുകൾ സ്വീകരിച്ച് തടസ്സത്തിന് ശേഷമുള്ള ഭാഗത്ത് കൈമാറുന്നു എന്നതാണ് മറികടക്കൽ സംബന്ധിച്ച അവകാശവാദം. ഓക്സീകരിക്കപ്പെട്ട വർണകം NADH-ൽ നിന്നോ ശൃംഖലയുടെ ആദ്യ ഘടകങ്ങളിൽ നിന്നോ ഇലക്ട്രോണുകൾ സ്വീകരിച്ച് ല്യൂക്കോമെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ആയി മാറുന്നു. ഈ നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട രൂപം അവയെ സൈറ്റോക്രോം c-യിലേക്കോ തിരികെ ശൃംഖലയിലേക്കോ കൈമാറുന്നു. കൈമാറ്റം തടസ്സത്തിന് ശേഷമുള്ള ഭാഗത്തേക്കാണെങ്കിൽ ശ്വസനവും മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യലും ഭാഗികമായി വീണ്ടെടുക്കപ്പെടും. തടസ്സമുള്ള ഭാഗത്തേക്കോ അതിന് മുമ്പുള്ള ഭാഗത്തേക്കോ ആണെങ്കിൽ ഒന്നും വീണ്ടെടുക്കപ്പെടില്ല.

കോംപ്ലക്സ് III-യുടെ ഒരു സവിശേഷതയാണ് ഈ തർക്കത്തിന്റെ വലിയൊരു ഭാഗം നിർണയിക്കുന്നത്. ഈ കോംപ്ലക്സ് രണ്ട് ഇൻഹിബിറ്റർ സ്ഥാനങ്ങളുള്ള ഒരു Q ചക്രം നടത്തുന്നു. ആന്റിമൈസിൻ Qi സ്ഥാനത്ത് ബന്ധിക്കുന്നു. മിക്സോതയസോൾ Qo സ്ഥാനത്ത് ബന്ധിക്കുന്നു. ഇവയിൽ ഒന്ന് മാത്രം ഉപയോഗിക്കുന്ന പഠനം കോംപ്ലക്സിന്റെ പകുതി മാത്രമാണ് പരിശോധിച്ചിട്ടുള്ളത്.

പഠനം ഒന്ന്: ചുണ്ടെലിയുടെ മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ മറികടക്കൽ ഇല്ല

Gureev-ഉം സഹപ്രവർത്തകരും C57BL/6 ചുണ്ടെലികളുടെ മസ്തിഷ്ക കോർട്ടക്സിൽ നിന്നുള്ള മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ ഉപയോഗിച്ചു. ഡിജിറ്റോണിൻ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുത്ത ഇവയിൽ 0.1 mg protein per ml എന്ന സാന്ദ്രതയിൽ പരിശോധന നടത്തി. സബ്‌സ്ട്രേറ്റുകൾ മൂന്ന് ക്രമീകരണങ്ങളിലായിരുന്നു: പൈറുവേറ്റും മാലേറ്റും 5 mM വീതം, സക്സിനേറ്റ് 10 mM-നൊപ്പം ഗ്ലൂട്ടമേറ്റ് 2 mM, L-പ്രോലിൻ 10 mM. തടയൽ പദാർഥങ്ങൾ റോട്ടിനോൺ 1 micromolar (കോംപ്ലക്സ് I), ആന്റിമൈസിൻ 1 microgram per ml (കോംപ്ലക്സ് III) എന്നിവയായിരുന്നു. വർണക ഡോസുകൾ 0.5, 1, 2 micromolar ആയിരുന്നു; പ്രധാന സാന്ദ്രത 1 micromolar ആയിരുന്നു. രീതികളും അളവെടുപ്പ് രേഖകളും FEBS Letters-ലെ സംക്ഷിപ്ത ഗവേഷണ റിപ്പോർട്ടിൽ ഉണ്ട്.

കോംപ്ലക്സ് I-നെ മറികടക്കൽ പ്രവർത്തിച്ചു. റോട്ടിനോൺ ADP ഉത്തേജിപ്പിച്ച ശ്വസനത്തെ ഏകദേശം 121-ൽ നിന്ന് ഏകദേശം 2 nmol per minute per mg ആയി കുറച്ചു; 1 micromolar വർണകം അതിനെ ഏകദേശം 21 ആയി വീണ്ടെടുത്തു. പൈറുവേറ്റും മാലേറ്റും ചേർത്തപ്പോഴും L-പ്രോലിൻ ഉപയോഗിച്ചപ്പോഴും മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യൽ വീണ്ടെടുക്കപ്പെട്ടു.

കോംപ്ലക്സ് III-നെ മറികടക്കൽ പ്രവർത്തിച്ചില്ല. ആന്റിമൈസിൻ ശ്വസനത്തെ ഏകദേശം 16 ആയി കുറച്ചു; വർണകം അത് ഏകദേശം 20 വരെ മാത്രമേ ഉയർത്തിയുള്ളൂ. വർണക ഡോസ് 5 micromolar വരെ ആയിട്ടും ഒരു സബ്‌സ്ട്രേറ്റിലും മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യൽ വീണ്ടെടുക്കപ്പെട്ടില്ല. പെറോക്സൈഡ് ഡാറ്റയും ഇതേ ദിശയിലായിരുന്നു: വർണകം മാത്രം നൽകിയപ്പോൾ പെറോക്സൈഡ് പുറന്തള്ളൽ ഏകദേശം 76 pmol per minute per mg എന്ന അടിസ്ഥാന നിരക്കിൽ നിന്ന് മൂന്ന് ഡോസുകളിൽ യഥാക്രമം ഏകദേശം 1170, 1460, 1945 ആയി ഉയർന്നു. എന്നാൽ വർണകം സൃഷ്ടിച്ച ആ സിഗ്നലിനെ ആന്റിമൈസിൻ യഥാക്രമം ഏകദേശം 25, 88, 96 ശതമാനം കുറച്ചു. നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട വർണകം ഓക്സിജനുമായി നേരിട്ട് പ്രതികരിച്ചിരുന്നെങ്കിൽ കോംപ്ലക്സ് III തടയുന്നത് ഈ സിഗ്നലിനെ അടിച്ചമർത്താൻ പാടില്ലായിരുന്നു. നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട വർണകം ആന്റിമൈസിൻ തടസ്സത്തിന് മുമ്പുള്ള കോംപ്ലക്സ് III-യുടെ Qo സ്ഥാനത്ത് ഓക്സീകരിക്കപ്പെടുന്നുവെന്ന് രചയിതാക്കൾ അനുമാനിച്ചു. വാക്കുകളിൽ ഈ ചെറിയ ചക്രം ഇങ്ങനെയാണ്: ഇലക്ട്രോൺ ദാതാക്കളിൽ നിന്ന് വർണകത്തിലേക്ക്, വർണകത്തിൽ നിന്ന് Qo-യിലേക്ക്, തുടർന്ന് സാധാരണ വഴിയിലൂടെ മുന്നോട്ട്. റോട്ടിനോൺ തടസ്സം മറികടക്കപ്പെടുന്നു. ആന്റിമൈസിൻ തടസ്സം മറികടക്കപ്പെടുന്നില്ല.

പഠനം രണ്ട്: മൂന്ന് ഇനങ്ങളിൽ, രണ്ട് ഇൻഹിബിറ്റർ സ്ഥാനങ്ങളിലും ഭാഗികമായ മറികടക്കൽ

Svab-ഉം സഹപ്രവർത്തകരും പരീക്ഷണ രൂപകൽപ്പന വിപുലമാക്കി. ചുണ്ടെലി, എലി, ഗിനിപ്പന്നി എന്നിവയുടെ മസ്തിഷ്ക മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ പെർകോൾ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുത്തു. അതേ 0.1 mg per ml സാന്ദ്രതയിൽ, പൈറുവേറ്റും മാലേറ്റും അല്ലെങ്കിൽ ഗ്ലൂട്ടമേറ്റും മാലേറ്റും 5 mM വീതം ഉപയോഗിച്ച് പരിശോധിച്ചു. അവർ രണ്ട് കോംപ്ലക്സ് III തടയൽ പദാർഥങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചു: ആന്റിമൈസിൻ A 0.3 micromolar, മിക്സോതയസോൾ 1 micromolar. മിക്ക പരിശോധനകളിലും വർണകം 2 micromolar ആയിരുന്നു; സൈറ്റോക്രോം c സംബന്ധിച്ച പരിശോധനകളിൽ 0.5 ആയിരുന്നു. ഒരേ പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ ഉപയോഗിച്ച മൂന്ന് ഇനങ്ങളുടെയും വിവരങ്ങൾ തുറന്ന പ്രവേശനമുള്ള പ്രബന്ധത്തിൽ ഉണ്ട്.

മൂന്ന് ഇനങ്ങളിലും രണ്ട് തടസ്സങ്ങളും ഭാഗികമായി മറികടക്കപ്പെട്ടു. ചുണ്ടെലിയുടെ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ ആന്റിമൈസിൻ ശ്വസനത്തെ അടിച്ചമർത്തി; വർണകം അത് ഏകദേശം 60 ശതമാനം ഉയർത്തി, ഏകദേശം 37-ൽ നിന്ന് 59 nmol per minute per mg ആയി. മിക്സോതയസോൾ അത് 88 ശതമാനം കുറച്ച് ഏകദേശം 4.5 ആക്കി; വർണകം അത് അഞ്ചിരട്ടി ഉയർത്തി ഏകദേശം 23 ആക്കി. ഏത് ഇൻഹിബിറ്ററിന്റെ സാന്നിധ്യത്തിലും മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യൽ ഭാഗികമായി പുനഃധ്രുവീകരിക്കപ്പെട്ടു. പ്രകാശപരമായ അളവെടുപ്പ് പിഴവുകൾ ഒഴിവാക്കാൻ രണ്ട് വർണകങ്ങൾ (സാഫ്രനിൻ O, അനുപാതാധിഷ്ഠിത TMRM) ഉപയോഗിച്ചാണ് ഇത് അളന്നത്.

ആദ്യ പഠനം ഒരിക്കലും ചെയ്യാത്ത ഒരു കാര്യം ഈ പ്രബന്ധം ചെയ്തു: ഇലക്ട്രോൺ കൈമാറ്റം നേരിട്ട് പരിശോധിച്ചു. പുറത്തുനിന്ന് ചേർത്ത അസിറ്റിലേറ്റഡ് സൈറ്റോക്രോം c, 25 micromolar സാന്ദ്രതയിൽ, ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ ഉണ്ടായാലും ഇല്ലെങ്കിലും ഊർജിതമായ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയാൽ നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ടില്ല. എന്നാൽ വർണകം ചേർത്തപ്പോൾ രണ്ട് സാഹചര്യങ്ങളിലും നിരോക്സീകരണം നടന്നു. കോശങ്ങളില്ലാത്ത ബഫറിൽ NADH-ഉം വർണകവും ചേർന്ന് NADH-ന് ആനുപാതികമായ നിരക്കിൽ സൈറ്റോക്രോം c-യെ നിരോക്സീകരിച്ചു. വാക്കുകളിൽ ഈ ദീർഘമായ ചാട്ടം ഇങ്ങനെയാണ്: നിരോക്സീകരണ തുല്യങ്ങളിൽ നിന്ന് വർണകത്തിലേക്ക്, വർണകത്തിൽ നിന്ന് നേരിട്ട് സൈറ്റോക്രോം c-യിലേക്ക്, കോംപ്ലക്സ് IV വഴി ഓക്സിജനിലേക്ക്. ഈ വഴി കോംപ്ലക്സ് III-നെ പൂർണമായി ഒഴിവാക്കുന്നു; അതിനാൽ രണ്ട് തടയൽ പദാർഥങ്ങളും സൃഷ്ടിക്കുന്ന തടസ്സങ്ങൾ മറികടക്കാനാകും.

രണ്ട് അധിക അളവെടുപ്പുകൾ ഈ വ്യാഖ്യാനത്തെ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു. മിക്സോതയസോൾ നൽകിയ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ വർണകം ചേർത്തപ്പോൾ NAD(P)H ഫ്ലൂറസെൻസ് കുറഞ്ഞു. അതായത്, പുതിയ വഴിയിലൂടെ നിരോക്സീകരണ തുല്യങ്ങൾ ഒഴുകിപ്പോയി. കൂടാതെ, 660 nm-ലെ വർണകത്തിന്റെ പ്രകാശ ആഗിരണം ഓരോ കൂട്ടിച്ചേർക്കലിനെയും ക്രമമായി പ്രതിഫലിപ്പിച്ചു. സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത ശേഷമുള്ള മേൽദ്രാവകങ്ങൾ പരിശോധിച്ചപ്പോൾ, ഊർജിതമായ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയ്ക്കുള്ളിൽ ഓക്സീകരിക്കപ്പെട്ട വർണകത്തിന്റെ സാന്ദ്രത നൂറിരട്ടിയിലേറെ വർധിച്ചതായും പൊട്ടൻഷ്യൽ തകർന്നപ്പോൾ അത് പുറത്തേക്ക് പോയതായും കണ്ടു. പ്രോട്ടോൺ കണക്കും ഇതുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു: പമ്പിങ് ഘട്ടങ്ങൾ ഒഴിവാക്കുമ്പോൾ ഒരു ഇലക്ട്രോൺ ജോഡിക്ക് 10-ന് പകരം ഏകദേശം 2 പ്രോട്ടോണുകൾ മാത്രമേ ലഭിക്കൂ. അതിനാൽ ഓക്സിജൻ ഉപയോഗം വേഗത്തിലാകുകയും പുനഃധ്രുവീകരണം ഭാഗികമായി മാത്രം നടക്കുകയും ചെയ്യുന്നത് യഥാർഥ മറികടക്കലിൽ പ്രതീക്ഷിക്കാവുന്നതാണ്; അത് മറികടക്കലിനെതിരായ തെളിവല്ല.

അതേ തയ്യാറാക്കലിൽ ഉണ്ടായ പ്രതികരണങ്ങൾ ഉപരിപ്ലവമായ വായനയെ തെറ്റിദ്ധരിപ്പിക്കാം. ഇൻഹിബിറ്ററും വർണകവും ചേർന്നപ്പോൾ ADP ശ്വസനത്തെ ഉയർത്തുന്നതിന് പകരം കുറച്ചു. ഗതാഗതം തടഞ്ഞപ്പോൾ അത് ശ്വസനത്തെ മന്ദഗതിയിലാക്കുന്നതിന് പകരം ഉത്തേജിപ്പിച്ചു. അതേസമയം മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യൽ സാധാരണ ദിശകളിൽ തന്നെയാണ് മാറിയത്. ഈ സംവിധാനത്തിൽ ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം മാത്രം നോക്കുന്നത് തെറ്റിദ്ധരിപ്പിക്കും.

പഠനം മൂന്ന്: കോംപ്ലക്സുകൾ I, II എന്നിവ പരിശോധിച്ച കരൾ പഠനം, III അല്ല

Lee-യും Boelsterli-യും ചുണ്ടെലിയുടെ കരൾ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയും കൾച്ചർ ചെയ്ത ഹെപ്പറ്റോസൈറ്റുകളും ഉപയോഗിച്ചു. എഫാവിറെൻസ് (കോംപ്ലക്സ് I, IC50 ഏകദേശം 30 micromolar), ഐസോണിയാസിഡിന്റെ മെറ്റബോളൈറ്റായ ഹൈഡ്രസിൻ (കോംപ്ലക്സ് II, IC50 ഏകദേശം 30 micromolar) എന്നിവ മൂലം ഇവയ്ക്ക് തകരാർ സംഭവിച്ചിരുന്നു. ഏകദേശം 30 micromolar വർണകം NADH ഓക്സീകരണം, മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യൽ, ATP എന്നിവ വീണ്ടെടുക്കുകയും ഓക്സിഡന്റുകളും നെക്രോട്ടിക് കോശമരണവും കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്തു. തകരാറിലായ കോംപ്ലക്സുകൾ I, II എന്നിവയെ മറികടന്ന് വർണകം ഇലക്ട്രോണുകളെ വഹിക്കുന്നതായി Redox Biology പ്രബന്ധം ഇതിനെ മാതൃകപ്പെടുത്തുന്നു.

ശൃംഖലയുടെ മുൻഭാഗത്തെക്കുറിച്ച് സ്ഥിരീകരിക്കപ്പെട്ട പശ്ചാത്തലമാണ് ആ ഫലം. കോംപ്ലക്സ് III-യെക്കുറിച്ച് അത് ഒന്നും പറയുന്നില്ല, കാരണം അവിടെ ഒന്നും തടയപ്പെട്ടിരുന്നില്ല. മസ്തിഷ്കത്തിലെ രണ്ട് പഠനങ്ങളിൽ ഏതെങ്കിലും ഒന്നിനെ സ്ഥിരീകരിക്കാനോ തള്ളിക്കളയാനോ അതിന് കഴിയില്ല.

സാഹചര്യങ്ങളുടെ താരതമ്യപ്പട്ടിക

കോംപ്ലക്സ് III-യുടെ രണ്ട് പഠനങ്ങളും സ്വന്തം പരീക്ഷണക്രമത്തെക്കുറിച്ച് ശരിയായിരിക്കാവുന്നതിന്റെ നാല് കാരണങ്ങൾ

1. തടയൽ ഇടപെടൽ ഒരുപോലെയായിരുന്നില്ല. ഒരിടത്ത് ആന്റിമൈസിൻ മാത്രം 1 microgram per ml; മറ്റിടത്ത് ആന്റിമൈസിൻ 0.3 micromolar-ഉം പ്രത്യേകമായ ഒരു Qo സ്ഥാന തടയൽ പദാർഥവും. സൈറ്റോക്രോം c-യിലേക്ക് നേരിട്ടുള്ള വഴി വിജയിക്കുന്ന അതേ സാഹചര്യത്തിൽ Qo സ്ഥാനത്തേക്ക് ഇലക്ട്രോണുകൾ നൽകുന്ന വർണക വഴി പരാജയപ്പെടുന്നു. ഒരു സ്ഥാനത്തിന്റെ പരിശോധന രണ്ടിനും പകരമാകില്ല.

2. വർണക ഡോസും സമയക്രമവും വ്യത്യസ്തമായിരുന്നു. പ്രധാന സാന്ദ്രതകൾ 1, 2 micromolar ആയിരുന്നു. ഉപയോഗിച്ചത് ഒരു റെഡോക്സ് ചക്രണ പദാർഥമാണ്; അതിന്റെ ഉൾക്കൊള്ളലും സൈറ്റോക്രോം c-യുടെ നേരിട്ടുള്ള നിരോക്സീകരണവും സാന്ദ്രതയെയും സമയത്തെയും ആശ്രയിക്കുന്നു. ഡോസിലെ ചെറിയ വ്യത്യാസങ്ങളും അളവെടുപ്പ് സമയത്തിലെ വ്യത്യാസങ്ങളും ഒരേ ശൃംഖലയുടെ വ്യത്യസ്ത ഭാഗങ്ങളെ വെളിപ്പെടുത്താം.

3. തയ്യാറാക്കലുകൾ വ്യത്യസ്തമായിരുന്നു. ഡിജിറ്റോണിൻ ഉപയോഗിച്ചുള്ള വേർതിരിക്കലും പെർകോൾ ഗ്രേഡിയന്റ് ഉപയോഗിച്ചുള്ള വേർതിരിക്കലും പരസ്പരം ഭാഗികമായി ഒത്തുചേരുന്നെങ്കിലും ഒരുപോലെയല്ലാത്ത മൈറ്റോകോണ്ട്രിയ കൂട്ടങ്ങളെ തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നു. പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത 0.1 mg per ml എന്ന നിലയിൽ ഒരുപോലെയായിരുന്നു. അതിനാൽ ആ ചരത്തെ ഒഴിവാക്കാം; എന്നാൽ ഉപകൂട്ടങ്ങളിലെയും അഖണ്ഡതയിലെയും വ്യത്യാസങ്ങളെ ഒഴിവാക്കാനാവില്ല. ഇനവ്യത്യാസമാണ് കാരണമെന്ന സംശയവും നീങ്ങി: രണ്ടാമത്തെ സംഘം ചുണ്ടെലിയിലും അതേ പ്രതികരണരൂപം ആവർത്തിച്ചു.

4. വർണകത്തിന് എന്ത് ചെയ്യാനാകുമെന്ന് സബ്‌സ്ട്രേറ്റ് നില നിർണയിക്കുന്നു. ഒരിടത്ത് മൂന്ന് സബ്‌സ്ട്രേറ്റ് ക്രമീകരണങ്ങൾ; മറ്റിടത്ത് NADH-ബന്ധിത ജോഡികൾ. വർണകം എത്ര വേഗത്തിൽ നിരോക്സീകരിക്കപ്പെടുന്നു എന്നും അത് എവിടെ വിതരണം ചെയ്യപ്പെടുന്നു എന്നും NADH ലഭ്യതയും മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യലും ചേർന്ന് നിർണയിക്കുന്നു. ഓക്സീകരിക്കപ്പെട്ട സൈറ്റോക്രോം c-യ്ക്ക് അരികിൽ നിരോക്സീകരിക്കപ്പെട്ട വർണകം ആവശ്യമായ ഒരു വഴി ആ തിരഞ്ഞെടുപ്പിനെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു.

അടുത്ത മറികടക്കൽ അവകാശവാദം എങ്ങനെ വായിക്കണം

ഏത് കോംപ്ലക്സാണ് തടഞ്ഞത്, ഏത് ഇൻഹിബിറ്റർ ഉപയോഗിച്ച്, ഏത് സ്ഥാനത്ത്, ഏത് ഡോസിൽ എന്ന് ചോദിക്കുക. വർണകത്തിന്റെ സാന്ദ്രതയും അളവെടുപ്പ് നടത്തിയ സമയവും ചോദിക്കുക. കല, ഇനം, വേർതിരിക്കൽ രീതി, പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത, സബ്‌സ്ട്രേറ്റ് എന്നിവ ചോദിക്കുക. പൊട്ടൻഷ്യൽ, ശ്വസനം, റെഡോക്സ് നില, നേരിട്ടുള്ള കൈമാറ്റ പരിശോധന എന്നിവ പരസ്പരം പൊരുത്തപ്പെടുന്നുണ്ടോ എന്നും ചോദിക്കുക. കാരണം ഇവിടെ ഓക്സിജൻ ഉപഭോഗം മാത്രം ഒന്നിലധികം തവണ തെറ്റായ ദിശയിലേക്കാണ് സൂചിപ്പിച്ചത്.

പരിമിതമായ സംഗ്രഹം നിലനിൽക്കുന്നു. കോംപ്ലക്സ് I-നെ വർണകം മറികടക്കുന്നതിൽ യോജിപ്പുണ്ട്. കോംപ്ലക്സ് III-യുടെ കാര്യത്തിൽ, ആന്റിമൈസിൻ 1 microgram per ml-ഉം വർണകം 1 micromolar-ഉം ഉപയോഗിച്ച ചുണ്ടെലി മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ പ്രവർത്തനപരമായ മറികടക്കൽ കാണുന്നില്ല. അതേസമയം, ആന്റിമൈസിൻ 0.3 micromolar അല്ലെങ്കിൽ മിക്സോതയസോൾ 1 micromolar-ഉം വർണകം 2 micromolar-ഉം ഉപയോഗിച്ച മൂന്ന് ഇനങ്ങളിൽ, വർണകത്തിൽ നിന്ന് സൈറ്റോക്രോം c-യിലേക്കുള്ള നേരിട്ടുള്ള കൈമാറ്റത്തോടുകൂടിയ ഭാഗികമായ മറികടക്കൽ കാണുന്നു. ഈ വാക്യങ്ങൾ ഒരുമിച്ച് നിലനിൽക്കുന്നു. ഇതിനപ്പുറമുള്ളതെല്ലാം ലഭ്യമായ തെളിവുകൾക്ക് പുറത്തേക്കുള്ള അനുമാനമാണ്.

ബന്ധപ്പെട്ട വായനകൾ തർക്കത്തിലുള്ള അവകാശവാദത്തെ തർക്കമില്ലാത്ത രസതന്ത്രത്തിന്റെ പരിധിക്കുള്ളിൽ നിർത്തുന്നു: ഇലക്ട്രോൺ കൈമാറ്റക്രമത്തിന് മെത്തിലീൻ ബ്ലൂ ഇലക്ട്രോണുകളെ എങ്ങനെ നീക്കുന്നു, ശൃംഖലയുടെ മുൻഭാഗത്തെ സ്ഥിരീകരിക്കപ്പെട്ട സംഭവത്തിന് കോംപ്ലക്സ് I-നെ മറികടക്കുന്ന പരീക്ഷണങ്ങൾ, രണ്ട് വർണകങ്ങൾ ആവശ്യമായതിന്റെ കാരണത്തിന് മെംബ്രേൻ പൊട്ടൻഷ്യൽ അളവെടുപ്പുകളും അവയിലെ കൃത്രിമ ഫലങ്ങളും, ഡോസിലും സമയക്രമത്തിലുമുള്ള കുഴപ്പങ്ങൾക്ക് റെഡോക്സ് ചക്രണ പദാർഥങ്ങളുടെ ലബോറട്ടറി കൈകാര്യം എന്നിവ.