ເມທິລີນບລູໃນການກວດ G6PD ທາງຫ້ອງປະຕິບັດການ: ສານສີນີ້ເຮັດໜ້າທີ່ຫຍັງແທ້

ນັກສຶກສາຄົນໜຶ່ງສັງເກດຫຼອດທົດລອງສອງຫຼອດຫຼັງຈາກການບົ່ມ. ຫຼອດໜຶ່ງປ່ຽນເປັນສີທີ່ຄາດໄວ້. ອີກຫຼອດໜຶ່ງບໍ່ປ່ຽນ. ນັກສຶກສາຈຶ່ງສະຫຼຸບວ່າຜູ້ປ່ວຍຄົນທີສອງມີພາວະຂາດເອນໄຊກລູໂຄສ-6-ຟອສເຟດ ດີໄຮໂດຣຈີເນສ. ຂໍ້ສະຫຼຸບນັ້ນອາດຖືກຕ້ອງ, ແຕ່ການໃຫ້ເຫດຜົນຂ້າມແນວຄິດສຳຄັນທີ່ເຮັດໃຫ້ການກວດນີ້ໃຊ້ໄດ້. ບໍ່ມີສິ່ງໃດໃນຫຼອດທີ່ວັດເອນໄຊໂດຍກົງ. ສິ່ງທີ່ຫຼອດວັດແມ່ນຜົນຜະລິດຂອງເອນໄຊ ໂດຍໃຊ້ເມທິລີນບລູເປັນຕົວກາງ.

ເມື່ອເຂົ້າໃຈການວັດທາງອ້ອມນີ້ແລ້ວ, ຂັ້ນຕອນ, ຕົວຄວບຄຸມ ແລະລາຍການຜົນຄາດເຄື່ອນອັນຍາວນານ ກໍຈະບໍ່ເບິ່ງຄືວ່າຖືກກຳນົດຂຶ້ນໂດຍບໍ່ມີເຫດຜົນອີກຕໍ່ໄປ.

ຄຳຕອບແບບສັ້ນ

ເມທິລີນບລູໃນການກວດ G6PD ເປັນຕົວຊີ້ວັດຣີດອກຊ໌. ເອນໄຊ G6PD ສ້າງ NADPH, ແລະລະບົບທີ່ອາໄສ NADPH ຈະຣີດິວຊ໌ເມທິລີນບລູສີຟ້າໃຫ້ເປັນຮູບແບບລິວໂຄທີ່ບໍ່ມີສີ (ຫຼືໃຊ້ມັນເພື່ອຖ່າຍທອດອິເລັກຕຣອນ). ກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊທີ່ປົກກະຕິເຮັດໃຫ້ການຣີດິວຊ໌ເກີດຂຶ້ນຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. ກິດຈະກຳທີ່ບົກພ່ອງເຮັດໃຫ້ການຣີດິວຊ໌ຊ້າ ຫຼືບໍ່ສົມບູນ. ນີ້ແມ່ນສັນຍານທັງໝົດທີ່ການກວດອາໄສ.

ສອງວິທີທີ່ໃຊ້ໃນອະດີດໃຊ້ສານສີດຽວກັນ ແຕ່ມີຈຸດສິ້ນສຸດທີ່ໃຊ້ອ່ານຜົນຕ່າງກັນ. ຫາກແຍກສອງວິທີນີ້ໃຫ້ຊັດເຈນ, ຄວາມສັບສົນສ່ວນໃຫຍ່ກໍຈະຫາຍໄປ.

ສອງການກວດ, ສານສີດຽວ, ຈຸດສິ້ນສຸດຕ່າງກັນ

ວິທີທຳອິດແມ່ນການກວດການຣີດິວຊ໌ເມທິລີນບລູໂດຍກົງ, ທີ່ Sass ແລະຄະນະໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ ແລະຕໍ່ມາ Gibbs ໄດ້ປະເມີນ. ໃນວິທີນີ້ ຈຸດສິ້ນສຸດແມ່ນສານສີເອງ: ເມທິລີນບລູສີຟ້າໃນຮູບອອກຊິໄດຊ໌ຖືກຣີດິວຊ໌ໄປສູ່ລິວໂຄເມທິລີນບລູທີ່ບໍ່ມີສີ, ແລະອັດຕາຂອງການປ່ຽນແປງນັ້ນສະທ້ອນຄວາມສາມາດໃນການສ້າງ NADPH. ບົດຄວາມຕົ້ນສະບັບກ່ຽວກັບການຄັດກອງຖືກຈັດເຂົ້າດັດຊະນີໃນ PubMed ພາຍໃຕ້ Sass ແລະຄະນະ (1966).

ວິທີທີສອງແມ່ນການກວດການຣີດິວຊ໌ເມທີໂມໂກລບິນແບບ Brewer. ໂຊດຽມໄນໄຕຣຕ໌ຈະອອກຊິໄດຊ໌ຮີໂມໂກລບິນໃຫ້ເປັນເມທີໂມໂກລບິນສີນ້ຳຕານກ່ອນ. ຈາກນັ້ນ ເມທິລີນບລູເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຕົວກາງໃນການຖ່າຍທອດອິເລັກຕຣອນ: ເມທິລີນບລູທີ່ຖືກຣີດິວຊ໌ແລ້ວຈະສົ່ງຕໍ່ສົມມູນຣີດິວຊ໌ໃຫ້ເມທີໂມໂກລບິນ, ປ່ຽນມັນກັບເປັນຮີໂມໂກລບິນສີແດງ. ດັ່ງນັ້ນ ຈຸດສິ້ນສຸດທີ່ມອງເຫັນແມ່ນສີນ້ຳຕານທຽບກັບສີແດງ, ບໍ່ແມ່ນສີຟ້າທຽບກັບບໍ່ມີສີ. ວິທີຕົ້ນສະບັບໄດ້ຕີພິມໃນ ວາລະສານຂອງອົງການອະນາໄມໂລກ (Brewer ແລະຄະນະ, 1960).

ການເອີ້ນການກວດ Brewer ວ່າເປັນການກວດການຈາງສີຂອງສານສີ ແມ່ນບໍ່ແມ່ນຍຳໃນທາງເຄມີ. ສານສີໝູນວຽນລະຫວ່າງຮູບແບບຕ່າງໆ; ສ່ວນຮີໂມໂກລບິນເປັນສິ່ງທີ່ປ່ຽນສີ. ແຜນວາດຂ້າງລຸ່ມສະແດງທັງສອງເສັ້ນທາງ.

ປະຕິກິລິຍາພື້ນຖານ

G6PD ເລັ່ງປະຕິກິລິຍາໃນຂັ້ນຕອນອອກຊິເດຊັນທຳອິດຂອງເສັ້ນທາງເພນໂທສຟອສເຟດ:

Glucose-6-phosphate + NADP+ ປ່ຽນເປັນ 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

ເມັດເລືອດແດງທີ່ເຕີບເຕັມທີ່ອາໄສເສັ້ນທາງນີ້ຢ່າງຫຼາຍເພື່ອສ້າງ NADPH, ດັ່ງທີ່ທົບທວນໄວ້ໃນ ວາລະສານ Blood ໂດຍ Luzzatto ແລະຄະນະ (2020). NADPH ຮັກສາກລູຕາໄທໂອນໃຫ້ຢູ່ໃນຮູບຣີດິວຊ໌ ແລະປົກປ້ອງເຊລຈາກຄວາມເສຍຫາຍຈາກອອກຊິເດຊັນ. ເມທິລີນບລູເຂົ້າມາມີບົດບາດໃນລະບົບນີ້ໃນຖານະຕົວຮັບອິເລັກຕຣອນ. G6PD ທີ່ພຽງພໍເຮັດໃຫ້ມີ NADPH ພຽງພໍ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການຣີດິວຊ໌ມີປະສິດທິພາບ. G6PD ທີ່ຕ່ຳເຮັດໃຫ້ລຳດັບນີ້ຂາດຕອນຕັ້ງແຕ່ຈຸດທຳອິດ.

ໃຫ້ຄິດວ່າສານສີເປັນເຄື່ອງວັດລະດັບນ້ຳມັນ, ບໍ່ແມ່ນເຄື່ອງຈັກ. ມັນລາຍງານກ່ຽວກັບປະລິມານ NADPH ທີ່ມີໃຫ້ໃຊ້. ປັດໄຈອື່ນໃດກໍຕາມທີ່ປ່ຽນປະລິມານນັ້ນ ຫຼືປ່ຽນສັນຍານທີ່ອ່ານໄດ້ ສາມາດເຮັດໃຫ້ເຂັມວັດເຄື່ອນໄດ້ ໂດຍທີ່ຍີນບໍ່ໄດ້ປ່ຽນແປງ.

ຂັ້ນຕອນແບບ Brewer ດຳເນີນແນວໃດ

ສູດສານທົດສອບໄດ້ປ່ຽນແປງໄປຕະຫຼອດຫຼາຍທົດສະວັດ, ດັ່ງນັ້ນ ຄຳອະທິບາຍເພື່ອການຮຽນການສອນຈຶ່ງບໍ່ຄວນຖືກເຂົ້າໃຈຜິດວ່າເປັນຂັ້ນຕອນປະຕິບັດທາງຄລີນິກ. ທຸກຫ້ອງປະຕິບັດການຕ້ອງປະຕິບັດຕາມຂັ້ນຕອນມາດຕະຖານຂອງຕົນທີ່ຜ່ານການຢືນຢັນຄວາມຖືກຕ້ອງແລ້ວ. ໂດຍຄຳນຶງເຖິງຂໍ້ຄວນລະວັງນີ້, ການຈັດຫຼອດທົດລອງແບບດັ້ງເດີມດຳເນີນດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້, ໃນຮູບແບບທີ່ໃຊ້ສາມຫຼອດ ແລະບົ່ມ 3 ຊົ່ວໂມງ ຕາມທີ່ບັນທຶກໄວ້ໃນ ວິທີປະຕິບັດທີ່ຕີພິມນີ້:

1. ຫຼອດຜູ້ປ່ວຍ: ເລືອດຄົບສ່ວນບວກກລູໂຄສ, ໂຊດຽມໄນໄຕຣຕ໌ ແລະເມທິລີນບລູ. ໄນໄຕຣຕ໌ສ້າງເມທີໂມໂກລບິນ, ກລູໂຄສເປັນແຫຼ່ງສຳລັບເມແທບໍລິຊຶມຂອງເມັດເລືອດແດງ, ແລະສານສີເປັນຕົວຖ່າຍທອດທີ່ອາໄສ NADPH.
2. ຕົວຄວບຄຸມອອກຊິໄດຊ໌: ເລືອດບວກໄນໄຕຣຕ໌ ແລະກລູໂຄສ ແຕ່ບໍ່ມີເມທິລີນບລູ. ມັນສະແດງຈຸດສິ້ນສຸດຂອງເມທີໂມໂກລບິນສີນ້ຳຕານ ເຊິ່ງເປັນຮູບແບບຂອງພາວະຂາດ.
3. ຕົວຄວບຄຸມຮີໂມໂກລບິນ: ເລືອດບວກນ້ຳ. ມັນສະແດງຈຸດສິ້ນສຸດຂອງຮີໂມໂກລບິນສີແດງ ເຊິ່ງເປັນຮູບແບບປົກກະຕິ.
4. ບົ່ມ ທຸກຫຼອດທີ່ອຸນຫະພູມໃກ້ 37 C, ໂດຍທົ່ວໄປເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ, ພ້ອມປະສົມເບົາໆ.
5. ເຈືອຈາງ ຕົວຢ່າງສ່ວນນ້ອຍຈາກແຕ່ລະຫຼອດໃນນ້ຳກັ່ນ ເພື່ອໃຫ້ເຊລແຕກ ແລະເຮັດໃຫ້ປຽບທຽບສີໄດ້ຊັດເຈນ.
6. ປຽບທຽບ ຫຼອດຜູ້ປ່ວຍກັບຕົວຄວບຄຸມທັງສອງ. ການປ່ຽນກັບໄປທາງສີແດງບົ່ງຊີ້ວ່າມີຄວາມສາມາດໃນການຣີດິວຊ໌ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ການຄົງສີໄປທາງນ້ຳຕານຊີ້ແນະວ່າມີພາວະຂາດຢ່າງຊັດເຈນ.

ສູດໜຶ່ງໃນອະດີດໃຊ້ເລືອດປະມານ 1 mL ກັບສານທົດສອບທີ່ມີໂຊດຽມໄນໄຕຣຕ໌ໃກ້ 180 mM, ເດັກຊ໌ໂທຣສ 280 mM ແລະເມທິລີນບລູ 0.4 mM. ໃຫ້ຖືວ່າຕົວເລກເຫຼົ່ານີ້ເປັນຕົວຢ່າງຈາກເອກະສານວິຊາການ, ບໍ່ແມ່ນຂໍ້ກຳນົດທີ່ໃຊ້ໄດ້ທົ່ວໄປ.

ການອ່ານຜົນ

ການຄັດກອງແບບຄຸນນະພາບແຍກແຍະໄດ້ດີທີ່ສຸດໃນບໍລິເວນປະມານ 30 ຫາ 40 ເປີເຊັນຂອງກິດຈະກຳປົກກະຕິ, ດັ່ງທີ່ອະພິປາຍໃນ ບົດທົບທວນຂອງ Malaria Journal ກ່ຽວກັບຊ່ອງຫວ່າງໃນການກວດພົບ G6PD ນີ້. ດັ່ງນັ້ນ ຜົນຄັດກອງທີ່ປົກກະຕິໝາຍຄວາມວ່າການກວດບໍ່ໄດ້ກວດພົບພາວະຂາດຮຸນແຮງ. ມັນບໍ່ໄດ້ຮັບຮອງວ່າກິດຈະກຳປົກກະຕິຢ່າງສົມບູນ.

ເປັນຫຍັງການຄັດກອງຈຶ່ງອາດໃຫ້ຜົນທີ່ຊວນໃຫ້ເຂົ້າໃຈຜິດ

ການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງເຣຕິຄູໂລໄຊຕ໌ຫຼັງເມັດເລືອດແດງແຕກ ເປັນສາເຫດທີ່ພົບໄດ້ຄລາສສິກຂອງຜົນປົກກະຕິປອມ. ເມັດເລືອດແດງອາຍຸນ້ອຍ ແລະເຣຕິຄູໂລໄຊຕ໌ມີ G6PD ຫຼາຍກວ່າເຊລເກົ່າ. ໃນຊ່ວງທີ່ມີການແຕກຂອງເມັດເລືອດແດງແບບສ້ວຍແຫຼມ, ເຊລທີ່ເກົ່າທີ່ສຸດ ແລະຂາດເອນໄຊຫຼາຍທີ່ສຸດອາດຖືກທຳລາຍໄປແລ້ວ, ເຫຼືອແຕ່ກຸ່ມເຊລອາຍຸນ້ອຍທີ່ກວດໄດ້ກິດຈະກຳປົກກະຕິ. ປັດໄຈທາງຊີວະວິທະຍາດຽວກັນນີ້ເຮັດໃຫ້ການກວດແບບປະລິມານຄາດເຄື່ອນໄດ້ເຊັ່ນກັນ, ບໍ່ແມ່ນພຽງແຕ່ການຄັດກອງດ້ວຍສານສີ.

ການຮັບເລືອດເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້ ບົດບັງພາວະຂາດ ເພາະເມັດເລືອດແດງຈາກຜູ້ບໍລິຈາກນຳເອນໄຊຂອງຕົນເຂົ້າມາໃນຕົວຢ່າງ. Mayo Clinic Laboratories ລະບຸການຮັບເລືອດ ເປັນໜຶ່ງໃນສາເຫດທີ່ເຮັດໃຫ້ຜົນກວດເອນໄຊບໍ່ໜ້າເຊື່ອຖື, ຮ່ວມກັບການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງເຣຕິຄູໂລໄຊຕ໌ ແລະການລົບກວນຈາກເມັດເລືອດຂາວ.

ແມ່ຍິງທີ່ມີຍີນແບບເຮເທີໂຣໄຊກັສ ເປັນກໍລະນີທີ່ຍາກທີ່ສຸດ. ການຢຸດການເຮັດວຽກຂອງໂຄໂມໂຊມ X ແບບສຸ່ມເຮັດໃຫ້ມີເມັດເລືອດແດງທັງທີ່ປົກກະຕິ ແລະທີ່ຂາດເອນໄຊປະປົນກັນ, ແລະກິດຈະກຳໂດຍລວມອາດຢູ່ລະດັບໃດກໍໄດ້ ຕັ້ງແຕ່ຂາດຮຸນແຮງຈົນເຖິງເບິ່ງຄືປົກກະຕິ. ການຄັດກອງແບບຄຸນນະພາບມັກກວດບໍ່ພົບຟີໂນໄທປ໌ລະດັບກາງ. ເອກະສານຂອງ WHO ກ່ຽວກັບການກວດ G6PD ອະພິປາຍຂໍ້ຈຳກັດນີ້ຢ່າງລະອຽດ.

ອາຍຸຂອງຕົວຢ່າງ, ອຸນຫະພູມໃນການເກັບຮັກສາ, ຄວາມຂຶ້ນກັບຜູ້ສັງເກດໃນການອ່ານຈຸດສິ້ນສຸດດ້ວຍສາຍຕາ, ຮີມາໂຕຄຣິດ ແລະຄຸນນະພາບຂອງສານທົດສອບ ລ້ວນເພີ່ມຄວາມຜັນຜວນທາງການວິເຄາະ ນອກເໜືອຈາກຜົນທາງຊີວະວິທະຍາເຫຼົ່ານີ້.

ການຄັດກອງບໍ່ແມ່ນການວິນິດໄສ

ຜົນຄັດກອງທີ່ບົ່ງຊີ້ພາວະຂາດ, ຢູ່ລະດັບກາງ ຫຼືບໍ່ສອດຄ່ອງກັບຂໍ້ມູນທາງຄລີນິກ ຕ້ອງມີ ການກວດເອນໄຊ G6PD ແບບປະລິມານ. WHO ຖືວ່າການວັດດ້ວຍສະເປັກໂຕຣໂຟໂຕເມຕຣີແບບປະລິມານທີ່ຄວບຄຸມອຸນຫະພູມ ເປັນວິທີອ້າງອີງ. ໃນການກວດນັ້ນ, ສານລະລາຍຈາກເມັດເລືອດແດງທີ່ຖືກເຮັດໃຫ້ແຕກຈະຖືກເຕີມກລູໂຄສ-6-ຟອສເຟດ ແລະ NADP+, ແລະຕິດຕາມ NADPH ທີ່ເກີດຂຶ້ນຜ່ານຄ່າການດູດກືນແສງທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນທີ່ 340 nm. ອັດຕາການປ່ຽນແປງເປັນສັດສ່ວນກັບກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊ, ໂດຍປົກກະຕິປັບທຽບກັບຮີໂມໂກລບິນເປັນໜ່ວຍຕໍ່ກຣາມ. ແນວປະຕິບັດປັດຈຸບັນໃນຫ້ອງປະຕິບັດການທາງຄລີນິກຖືກສະຫຼຸບໄວ້ໃນ ລາຍການກວດຂອງ Mayo ສຳລັບກິດຈະກຳ G6PD.

ການແປຜົນໃຊ້ຊ່ວງຄ່າອ້າງອີງທີ່ຫ້ອງປະຕິບັດການໄດ້ຢືນຢັນຄວາມຖືກຕ້ອງ, ເຊິ່ງມັກກຳນົດໂດຍທຽບກັບກິດຈະກຳປົກກະຕິຂອງປະຊາກອນ, ໂດຍມັກອະພິປາຍພາວະຂາດໃນບໍລິເວນໃກ້ເກນ 30 ເປີເຊັນ ແລະກິດຈະກຳລະດັບກາງຢູ່ເໜືອເກນນັ້ນ. ເອກະສານຂອງ WHO ວ່າດ້ວຍຄຸນລັກສະນະເປົ້າໝາຍຂອງຜະລິດຕະພັນສຳລັບການກວດ G6PD (2022) ກຳນົດກອບການວິນິດໄສນັ້ນໄວ້. ຫາກການແຕກຂອງເມັດເລືອດແດງ ຫຼືການຮັບເລືອດເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້ເຮັດໃຫ້ການປະເມີນຟີໂນໄທປ໌ບໍ່ໜ້າເຊື່ອຖື, ໃຫ້ກວດຊ້ຳຫຼັງຈາກກຸ່ມເມັດເລືອດແດງກັບເຂົ້າສູ່ສົມດຸນອີກຄັ້ງ, ແລະການກວດລະດັບໂມເລກຸນສາມາດເພີ່ມຂໍ້ມູນໄດ້ ໂດຍບໍ່ແທນທີ່ການວັດເອນໄຊ.

ຂອບເຂດທີ່ຄວນແຍກໃຫ້ຊັດເຈນ

ເມທິລີນບລູໃນການກວດເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນ ສານທົດສອບທາງຫ້ອງປະຕິບັດການທີ່ໃຊ້ນອກຮ່າງກາຍ. ຂໍ້ເທັດຈິງນີ້ເປັນຄົນລະປະເດັນກັບຄວາມປອດໄພໃນການໃຫ້ເມທິລີນບລູແກ່ຜູ້ປ່ວຍ, ເຊິ່ງອະທິບາຍໄວ້ໃນ ຄຳແນະນຳກ່ຽວກັບຂໍ້ຫ້າມໃຊ້ເມທິລີນບລູ. ຊີວະເຄມີເຊື່ອມໂຍງສອງປະເດັນນີ້ ເພາະຢາກໍອາໄສການຣີດິວຊ໌ທີ່ຂຶ້ນກັບ NADPH ເຊັ່ນກັນ, ແຕ່ສານສີໃນຫຼອດທົດລອງບໍ່ແມ່ນຂະໜາດຢາໃນກະແສເລືອດ. ສຳລັບບໍລິບົດກ່ຽວກັບການເຮັດໜ້າທີ່ຂອງສານສີນີ້ເປັນສານຍ້ອມໃນສະພາບການອື່ນ, ເບິ່ງ ຫຼັກການຍ້ອມສີດ້ວຍເມທິລີນບລູ, ແລະສຳລັບກຸ່ມທາງເຄມີທີ່ມັນສັງກັດ, ໃຫ້ເບິ່ງສານສີຣີດອກຊ໌ໃນຫ້ອງປະຕິບັດການ.

ການຄັດກອງຖາມວ່າຄວາມສາມາດໃນການຣີດິວຊ໌ເບິ່ງຄືຍັງສົມບູນຫຼືບໍ່. ການກວດຢືນຢັນຖາມວ່າມີເອນໄຊຢູ່ຫຼາຍປານໃດແທ້. ສານສີຕອບຄຳຖາມທຳອິດໄດ້ດີ, ຕາບໃດທີ່ບໍ່ມີໃຜຄາດຫວັງໃຫ້ມັນຕອບຄຳຖາມທີສອງ.