Artikel
De Methylenblo-Reduktiounstest fir Mëllech: Prinzip a Grenzen
Eng Studentin hält zwee Reagenzglieser mat Mëllech an d'Luucht. Eent ass bannent enger Stonn wäiss ginn. Dat anert ass fënnef Stonne blo bliwwen. Si weist op dat blot a seet, et wier sécher ze drénken.
Dës Schlussfolgerung verréit eng falsch Virstellung. De Methylenblo-Test fir Mëllech erkennt keng Sécherheet. E weist, wéi séier d'mikrobiell Populatioun an deem Reagenzglas de Redoxpotenzial ënner festgeluechte Bedéngunge senkt. E lues Resultat bedeit eng niddreg metabolesch Gesamtaktivitéit an der Prouf. Et seet näischt doriwwer aus, wéi eng Organisme präsent sinn, ob e Krankheetserreeger dorënner ass oder ob d'Mëllech korrekt pasteuriséiert gouf.
Dësen Ënnerscheed ass wichteg, well den Test iwwerzeegend ausgesäit. Déi blo Faarf verschwënnt. Eng Auer liwwert eng Zuel. Zuele verleeden dozou, ze vill dran eranzeliesen. Dësen Artikel hält un der nëtzlecher Interpretatioun fest a weist déi onsécher zeréck.
Wat d'Reduktioun tatsächlech moosst
Methylenblo ass blo, wann et oxidéiert ass, a bal faarflos, wann et zu Leukomethylenblo reduzéiert gëtt. Frësch Mëllech enthält opgeléiste Sauerstoff, deen de Faarfstoff blo hält. Bakterien, déi respiréieren a fermentéieren, verbrauchen dëse Sauerstoff a setzen reduzéierend Verbindunge fräi. Wann de Redoxpotenzial wäit genuch fält, hëlt de Faarfstoff Elektronen op a verléiert seng Faarf. Den Text iwwer Mëllechmikrobiologie vun der University of Guelph beschreift déiselwecht Reiefolleg: Fir d'éischt gëtt de Sauerstoff verbraucht, duerno entsti reduzéierend Substanze beim bakterielle Stoffwiessel.
Klassesch Aarbechten am Journal of Dairy Science beschreiwen et als e Prozess an zwou Etappen: D'Flora verbraucht fir d'éischt de Sauerstoff, duerno reduzéieren d'Bestanddeeler vun der Mëllech de Faarfstoff séier. De Methylenblo-Reduktiounstest fir Mëllech ass also am beschten als funktionellen Test vun der kombinéierter metabolescher Aktivitéit ze verstoen, net als Zellzieler. D'Redoxverhale vu Methylenblo erkläert d'Chimie hannert dësem Ëmschlag.
Sauerstoff mécht den Endpunkt réckgängeg. De reduzéierte Leuko-Faarfstoff gëtt bei Kontakt mat Loft nees oxidéiert a gëtt erëm blo. Schüttelen, Ëmschëdden, breet Reagenzglieser an e grousse Loftraum iwwer der Flëssegkeet verzögeren dofir d'Resultat. En dënne bloe Rank bleift dacks un der Loftuewerfläch bestoen, nodeems de Rescht vum Inhalt seng Faarf verluer huet. Standardprozeduren akzeptéieren dëse Rank, amplaz ze waarden, bis och e verschwënnt.
D'Aart vun den Organisme bréngt eng zweet Verzerrung mat sech. Koliform Bakterien a vill Mëllechsaierorganisme reduzéieren de Faarfstoff séier. Vill psychrotroph an thermodur Organisme reduzéieren e lues oder bal guer net. Zwou Mëllechprouwe mat der selwechter Keimzuel op Kulturplacke kënnen déi blo Faarf mat engem Ënnerscheed vu Stonne verléieren. Schonn dës Tatsaach schléisst aus, d'Zäit a Koloniezuelen ëmzerechnen.
Eng kontrolléiert Laboprozedur
Versioune fir den Asaz um Terrain an a Léierbicher ënnerscheede sech an den Detailer. E Resultat ass dofir nëmmen am Kader vun der Method valabel, mat där et ermëttelt gouf. Eng konventionell Versioun fir e Liewensmëttellabo leeft esou of:
- Huelt eng Prouf vu réier Mëllech mat sou wéineg Loftkontakt wéi méiglech a killt se direkt of. Mëscht se duerch virsiichtegt Ëmdréien, éier Dir eng Prouf dovun ofhuelt.
- Gitt 10 mL Mëllech an e sterilt Reagenzglas mat 1 mL Faarfstoff-Aarbechtsléisung. Eng vill benotzt Aarbechtskonzentratioun ass 0.005 Prozent Faarfstoff, mat engem Verhältnes vu Mëllech zu Faarfstoff vun 10 zu 1.
- Verschléisst d'Reagenzglas mat engem Stopp, dréit et zweemol virsiichteg ëm a stellt et bannent Minutten an e Waasserbad. Déi typesch Inkubatiounstemperatur läit bei 35 bis 38 Grad Celsius, jee nom uginnene Standard. Notéiert, wéi ee Standard Dir befollegt.
- Schützt d'Reagenzglieser wärend der Inkubatioun viru Liicht, well Liicht d'Reduktioun beschleunegt.
- Liest no 30 Minutten of, duerno a festen Ofstänn. Den Endpunkt ass deen Zäitpunkt, wou den Inhalt vum Reagenzglas enger Referenz aus ofgekachter Mëllech entsprécht oder de Faarfverloscht erreecht, deen d'Prozedur definéiert.
- Halt e Reagenzglas mat onbehandelter Mëllech aus der selwechter Prouf als visuell Kontroll zeréck, wann d'Method dat verlaangt.
D'FAO-Handbuch fir Mëllechtester beschreift eng ausdrécklech Versioun fir den Asaz um Terrain mat 10 mL Mëllech plus 1 mL Faarfstoff, Verschléisse mat engem Stopp, virsiichtegem Ëmdréien, Inkubatioun bei ongeféier 37 bis 38 Grad an Ofliessen all 30 Minutten. A senge Kontrollreagenzglieser gëtt ofgekachte Mëllech benotzt, fir dat natierlecht reduzéierend System ze zerstéieren an eng fest Referenz fir de Faarfverglach ze bidden.
D'Schema hei uewen weist de Kader vun de kontrolléierte Bedéngungen. Selwecht Volummen, selwechte Faarfstoff, selwecht Temperatur, selwecht Mëschung, selwechte Liichtschutz, selwecht Reegel fir den Endpunkt. Ännert een eenzege vun dëse Facteuren, ännert d'Zäit sech mat. Dofir si Versioune fir doheem, déi eng arbiträr Faarfstoffkonzentratioun benotzen, net mat de Qualitéitsklassen aus dem Labo vergläichbar.
Wat d'Reduktiounszäit ugëtt
Eng méi laang Zäit bedeit eng méi niddreg Gesamtaktivitéit ënner den uginnene Bedéngungen. Eng méi kuerz Zäit bedeit eng méi héich Gesamtaktivitéit. Tabellen aus der Ausbildung am Mëllechsecteur ordnen dësen Zäite graff Qualitéitsklassen zou, zum Beispill 5 oder méi Stonnen als ganz gutt an ënner 30 Minutten als schlecht an engem Schema, dat vum BIS ofgeleet ass.
D'Bandbreet ass déi wichteg Erkenntnis. E Resultat vu 5 Stonnen huet keng universell Qualitéitsklass. Et gehéiert zu der Prozedur, déi et definéiert huet. Dat fachlech vertrietbart Format fir de Rapport ass dofir:
MBRT entsprécht X Stonnen no der uginnener Method, entspriechend der Qualitéitsklass vun där Method.
Et ass ni: MBRT entsprécht X koloniebildenden Eenheete pro mL. Richtlinnen, déi aus Standard Methods ofgeleet sinn, halen fest, datt Resultater vun der Faarfstoffreduktioun net als Bakterienzuele gemellt solle ginn. Och d'Prozedur fir déi einfach Fierwung mat Methylenblo beäntwert eng aner Fro, well se d'Zellform ënner dem Mikroskop weist an net d'Gesamtaktivitéit an engem Reagenzglas.
Tabell iwwer d'Interpretatioun an d'Grenzen
Dës Tabell ass déi ursprénglech Referenz fir den Artikel. Liest all Rei ganz duerch. Keng eenzel Zell steet fir sech eleng.
| Observatioun oder Ausso | Wat se ugëtt | Wat se net beweise kann | Haaptstéierfacteuren |
|---|---|---|---|
| Séiere Verloscht vun der bloer Faarf, ënner 2 Stonnen an engem Schema fir réi Mëllech | Héich reduzéierend Aktivitéit, vereinbar mat enger héijer Keimbelaaschtung oder schlechter Haltbarkeet | Aart, genee Zuel, Toxinnen oder Feeler bei der Pasteuriséierung | Waarm Lagerung, Flora mat ville koliforme Bakterien, Liicht, niddreg Faarfstoffdosis |
| Mëttel Zäit, 2 bis 4 Stonnen | Moderat Aktivitéit; Qualitéitsklass nëmmen am Kader vum uginnene Schema | Sécherheet oder Feele vu lues reduzéierenden Organismen | Héich Inkubatiounstemperatur, Ënnerscheeder an der Belëftung, Ofsetze vum Fett |
| Lues Reduktioun, 5 oder méi Stonnen | Niddreg Gesamtaktivitéit an deem Schema | Feele vu Krankheetserreeger, Pasteuriséierung oder chemesch Sécherheet | Antibiotikareschter, Konservéierungsmëttel, zousätzlech opgeléiste Sauerstoff, héich Faarfstoffdosis |
| Bloe Rank bleift un der Uewerfläch, wärend de Rescht vum Inhalt seng Faarf verléiert | Reoxidatioun un der Grenzfläch mat der Loft, en normale Randeffekt | Mësslongenen Test oder onvollstänneg Reaktioun | Breet Reagenzglas, labbere Stopp, widderholl Opmaache fir d'Kontroll |
| Wäisst Reagenzglas no der Inkubatioun vun erhëtzter Mëllech | Verännert reduzéierend System zesumme mat iwwerliewender Aktivitéit | Datt d'Erhëtzung enger validéierter Pasteuriséierung entsprach huet | Hëtzteschied, Reparatur wärend der Inkubatioun, spéider Kontaminatioun |
| All eenzele MBRT-Wäert, deen ouni Method uginn ass | Onbekannt Testbedéngungen | Iergendeng Qualitéitsklass oder Zuel | Faarfstoffformuléierung, Verhältnes, Temperatur, Mëschung a Reegel fir den Endpunkt sinn all net uginn |
Wuesstumsbaséiert Kontrollen, wéi bakteriell Kulturmedien, bleiwen de Wee fir ze zielen an ze isoléieren. D'Reduktiounsreagenzglas déngt dem Screening. D'Kulturplack identifizéiert an zielt.
Wat den Test net iwwer d'Sécherheet beweise kann
E lues Resultat kann net beweisen, datt keng Krankheetserreeger do sinn. E Krankheetserreeger, deen an enger klinesch relevanter Dosis präsent ass, kann nëmme wéineg zum gesamte Sauerstoffverbrauch bäidroen. Den Noweis vu Krankheetserreeger erfuerdert organismusspezifesch Methoden, déi an der aktueller Versioun vu Standard Methods als eegene Beräich getrennt vum allgemenge Qualitéitsscreening behandelt ginn.
Den Test kann d'Pasteuriséierung net iwwerpréiwen. Fir d'Hëtztbehandlung ze iwwerpréiwen, gëtt en Test op alkalesch Phosphatase oder eng aner validéiert Method no de Codex-Richtlinne fir Mëllechhygiène benotzt. E wäisst oder blot Reagenzglas seet näischt iwwer den Zäit-Temperatur-Verlaf vun der Charge aus.
Den Test kann d'Liewensmëttelsécherheet net zertifizéieren. D'Sécherheet hänkt vu Krankheetserreeger, scho gebilten Toxinnen, Medikamentereschter, chemesche Kontaminanten, dem Verlaf vun der Killketten a Kontaminatioun no der Proufhuele of. Codex behandelt d'Sécherheet vu Mëllechprodukter als eng Kette vu Kontrollmoossnamen an net als een eenzegt Screeningresultat.
De Kontext vun engem Liewensmëttellabo ass keen Test doheem
An engem Mëllechlabo déngt den Test dem Screening vun der geliwwerter Mëllech, dem Verglach vu Liwweranten iwwer Zäit oder dem Léiere vu Redoxmikrobiologie ënner Opsiicht. D'Prouwe sinn noweisbar. D'Reagenzie si standardiséiert. D'Temperature gi protokolléiert. Den Offall gëtt iwwer d'Entsuergung vum Labo ofgeféiert.
Beim Testen doheem gëtt et näischt dovun. D'Volummen an der Kiche sinn ongeféier. D'Konzentratioune vun de Faarfstoffer, déi online verkaaft ginn, variéiere staark. D'Inkubatioun fënnt dacks an engem waarme Raum statt an net an engem kalibréierte Waasserbad. De Faarfwiessel geschitt trotzdeem. Doduerch wierkt d'Resultat zouverlässeg, obwuel all kontrolléiert Bedéngung feelt, déi him seng Bedeitung ginn huet.
De méi akute Risiko läit am Verhalen. E blot Reagenzglas doheem verleeft dozou, réi Mëllech ze drénken, déi e Labo nach ëmmer fir Keimzielungen op Kulturplacken, Screeningen op Krankheetserreeger a Kontrolle vu Réckstänn géif weiderginn. De Methylenblo-Test fir Mëllech gouf entwéckelt, fir réi Mëllech bei der Unnam a Qualitéitsklassen anzedeelen, net fir Mëllech fir de Konsum fräizeginn. De méi séiere Resazurin-Screening huet déiselwecht Grenz: e méi séier ofliesbare Faarfwiessel, awer nach ëmmer keng Äntwert iwwer Krankheetserreeger.
Eng kuerz Reegel fir de Labodësch
Standardiséiert de Faarfstoff, d'Verhältnes, d'Temperatur, d'Mëschung, d'Liicht an den Endpunkt. Gitt d'Zäit zesumme mam Numm vun der Method an der Qualitéitsklass un. Interpretéiert d'Minutten am Kontext vun der Lagerungsgeschicht, der Aart vun der Flora, de Réckstänn an der Qualitéit vun der Proufhuele. Eng kuerz Zäit weist op Aktivitéit hin, déi eng weider Ënnersichung verdéngt. Eng laang Zäit zertifizéiert ni d'Sécherheet.