E. coli an aner Kolonieformen op EMB-Agar beurteelen

E Student sträicht eng onbekannt Prouf op Eosin-Methylenblo-Agar aus, inkubéiert se iwwer Nuecht a fënnt duerno eng Plack mat donkele Kolonien, déi gréng schimmeren. Am Notizbuch steet „E. coli, bestätegt.“ Dësen Andrag behaapt méi, wéi d'Plack beleeë kann. D'Plack weist e Wuesstems- a Fermentatiounsphenotyp ënner bestëmmte Bedéngungen. D'Identitéit vun der Spezies ass eng separat Ausso, déi separat Beweiser brauch.

Dëse Guide behandelt Resultater op EMB-Agar als eng Interpretatiounsaufgab. E erkläert d'Grondiddi, féiert duerch en illustrative Plackenatlas mat Kontrollen a weist d'Fäll, an deenen d'Léierbuchbild an d'Ier féiert.

D'Iddi hannert der Plack

EMB-Agar ass souwuel selektiv wéi och differenziell. D'Faarfstoffer Eosin Y a Methylenblo hemme vill grampositiv Organismen, soudatt de Medium de Wuesstem vu gramnegative begënschtegt. Déiselwecht Faarfstoffer déngen als Indicateuren: wann en Organismus de verfügbaren Zocker fermentéiert a lokal genuch Säier produzéiert, hëlt d'Kolonie vill Faarfstoff op a gëtt donkelviolett bis blo-schwaarz. Bei staarker Säierproduktioun kann d'Uewerfläch vun der Kolonie e metallesche gréngen Iriséiere weisen. Den ASM-Protokoll fir Eosin-Methylenblo-Agarplacken beschreift dës Kombinatioun vu Selektioun an Differenzéierung a liwwert Referenzfotoe fir den Unterrecht.

Een Detail ass wichteg, éier een e Resultat beurteelt: kontrolléiert, wéi eng Formulatioun benotzt gëtt. Déi méi al Holt-Harris-Teague-Formulatioun enthält Laktos a Saccharos, wärend Levine-EMB nëmme Laktos enthält. En Organismus, dee Saccharos, awer keng Laktos fermentéiert, wéi vill Serratia-marcescens-Isolater, kann op den zwou Versiounen anescht ausgesinn. D'Hierstellerdokumentatioun fir EMB-Medien nennt dësen Ënnerscheed tëscht de Formulatiounen ausdrécklech. Notéiert den Hiersteller an d'Formulatioun zesumme mam Resultat am Notizbuch.

Preparéierten, net inokuléierten EMB-Agar ass typescherweis routbrong bis roudelzeg-violett, heiansdo mat engem grénglechen Toun oder engem feine Prezipitat. Dës Hannergrondfaarf ass kee Wuesstem. Vergläicht all Bewäertung mat enger net inokuléierter Plack oder dem dokumentéierten Ausgangszoustand, a beurteelt déi primär Plack no ongeféier 18 bis 24 Stonnen aerober Inkubatioun bei 35 bis 37 C, ausser den Unterrechtsprotokoll schreift eppes anescht vir. Eng méi laang Inkubatioun kann d'Erscheinungsbild vun der Fermentatioun veränneren.

Wéi een d'Plack betruecht

Benotzt zwou Aarte vu Liicht. Betruecht d'Plack fir d'éischt ënner reflektéiertem oder schréi afalendem Liicht a kippt se: de metallesche Glanz ass iriséierend a kann jee no Bléckwénkel optrieden oder verschwannen. Ënnersicht se duerno mat duerchfalendem Liicht, fir d'Koloniefaarf an déi donkel Zentren ze beurteelen. Schafft mat gutt isoléierte Kolonien, well dicht beieneeliegend Kolonien an Nopeschkolonien déi lokal Usammlung vu Säier veränneren an d'Faarf ofschwächen oder verstäerke kënnen. D'ASM-Bildersammlung weist dat direkt: E. coli an enger Mëschkultur kann den erwaarte Glanz verléieren, well d'Organismen ronderëm d'Säierëmfeld veränneren.

Benotzt Kontrollen, wann d'Übung dat erlaabt. Eng heefeg Kontrollserie fir den Unterrecht besteet aus E. coli ATCC 25922 fir de blo-schwaarze Phenotyp mat metalleschem Glanz, engem net fermentéierenden Organismus wéi Salmonella Typhimurium ATCC 14028 oder Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 fir de faarflose Phenotyp, an engem grampositive wéi Enterococcus faecalis oder Staphylococcus aureus als Hemmungskontroll, wéi an de Standard-QC-Tabelle fir EMB-Medien opgelëscht. Wann déi positiv Kontroll kee Glanz huet, denkt fir d'éischt un d'Inkubatioun, ze dicht beieneeliegend Kolonien oder d'Formulatioun, éier Dir d'Ursaach bei der onbekannter Prouf sicht.

Illustrative Plackenatlas

D'Placken hei ënnendrënner si generéiert Illustratiounen, keng Fotoe vu richtege Kulturen. Si weisen d'Muster, op dat een oppasse soll, net de geneeë Faarftoun vun engem bestëmmte Stamm. Vergläicht se mat den ASM-Referenzfotoen a mat richtege Placken aus dem Unterrechtslaboratoire.

Plack 1: Escherichia coli op EMB-Agar, staark Laktosfermentatioun

E. coli op EMB-Agar ass typescherweis donkelviolett bis blo-schwaarz, dacks mat engem donkelen Zentrum an engem metallesche grénge Glanz duerch staark Säierproduktioun. De Glanz ass dat bekannt Zeechen, no deem d'Studente sichen, mee betruecht en als ënnerstëtzenden Hiweis an net als Definitioun. D'Intensitéit vum Glanz variéiert mam Stamm, der Inkubatiounszäit, der Koloniedicht an dem Bléckwénkel. D'Feele vu Glanz schléisst E. coli net aus, an eng donkel Kolonie ouni Glanz weist op verschidden aner fermentéierend Organismen hin. Wielt fir all weider Aarbecht eng gutt isoléiert Kolonie, amplaz e dicht bewuesse Secteur ze beurteelen.

Plack 2: Klebsiella pneumoniae op EMB-Agar, schleimege fermentéierenden Organismus

Klebsiella pneumoniae op EMB-Agar formt typescherweis grouss, glänzend, schleimeg Kolonien a rosa-violette bis brong-violette Faarftéin, dacks mat donkelen Zentren, awer normalerweis ouni staarke metallesche Glanz. Eng änlech Morphologie kënnt bei verwandte fermentéierenden Organismen wéi Enterobacter vir. D'schleimeg Textur an d'Koloniegréisst gehéieren zur Bewäertung: eng rosa Kolonie, déi kleng a flaach ass, huet en aneren Aussoewäert wéi eng grouss, gewëlleft a schleimeg Kolonie. Wéi bei E. coli léisst d'Plack e Fermentatiounsphenotyp unhuelen, an eng Benennung op Speziesniveau brauch déi biochemesch Bestätegung, déi hei ënnendrënner beschriwwe gëtt.

Plack 3: Salmonella op EMB-Agar an aner net fermentéierend Organismen, faarflos Kolonien

Salmonella op EMB-Agar a verwandten Organismen, déi keng Laktos fermentéieren, dorënner Shigella a vill Pseudomonas-Isolater, wuessen typescherweis als faarflos bis transluzent oder hell bernsteenfaarweg Kolonien. Verschidde Formulatiounen a Bedéngunge féieren zu engem liicht rosa Toun, soudatt eng hellrosa Kolonie net automatesch e fermentéierenden Organismus ass. EMB ënnerscheet Salmonella net vu Shigella oder vun aneren net fermentéierenden Organismen; dës Ënnerscheedung erfuerdert spéider Tester. Bedenkt och, datt laktospositiv Salmonella-Stämm mat metallesche Kolonien änlech wéi bei E. coli dokumentéiert goufen. Dat ass e weidere Grond, firwat eng eenzeg Plack de Fall net ofschléisse kann.

Plack 4: Serratia marcescens an d'Fal vun der Formulatioun

Serratia marcescens kritt eng eege Sektioun, well d'Studenten dacks rout Kolonien erwaarden an d'Plack dann falsch beurteelen. Déi meescht klinesch Isolater fermentéiere keng Laktos, soudatt se op Levine-EMB meeschtens blatzeg bis schwaach gefierft ausgesinn. Well vill Isolater Saccharos fermentéieren, kann eng saccharoshalteg Formulatioun eng méi donkel oder méi staark mat Säier verbonne Reaktioun erginn. Erwaart bei 35 bis 37 C och net dat klassescht rout Prodigiosin-Pigment; d'Pigmentproduktioun ass bei Inkubatortemperatur net zouverlässeg. Wann de Protokoll Serratia marcescens op EMB-Agar nennt, kontrolléiert, wéi eng Formulatioun déi Ausso viraussetzt. Eng Iwwersiicht iwwer de Metabolismus vu Serratia resüméiert dat laktosnegatiivt a fir Saccharos variabelt Muster hannert dëser Fal.

Plack 5: Kontrollen a gehemmt Organismen

Grampositiv Organismen wéi Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus a Bacillus ginn op EMB-Agar allgemeng gehemmt oder däitlech am Wuesstem ënnerdréckt, obwuel d'Hemmung net fir all Stamm absolut ass. Eng Kontrollserie suergt fir eng éierlech Bewäertung: d'E.-coli-Kontroll soll gudde Wuesstem mat blo-schwaarzer Faarf a Glanz weisen, d'Kontroll mam net fermentéierenden Organismus soll faarflose Wuesstem weisen, an d'Hemmungskontroll soll wéineg oder kee Wuesstem weisen. Wann d'Hemmungskontroll gutt wiisst, huet de selektive Schrëtt net funktionéiert, an all aner Bewäertung aus där Charge ass zweifelhaft. Fierwmethoden beäntweren eng aner Fro wéi Kulturmedien; fir d'Fierwe vun Objektträgeren am Laboratoire, kuckt den Atlas fir Methylenblo-Fierwung.

Verglach mat kloere Grenzen

Dräi Sätz resüméieren déi irféierend Erscheinungsbiller. Donkel bedeit net E. coli, well Klebsiella, Enterobacter an aner fermentéierend Organismen donkel Zentren ouni Glanz entwéckelen. Rosa bedeit net Klebsiella, well mëttelstaark oder lues fermentéierend Organismen an e puer nominell net fermentéierend Organisme rosa oder lavendelfaarweg ausgesinn. Glanz bedeit net definitiv E. coli, well aner staark fermentéierend Organismen en och produzéiere kënnen. Den Unterrechtsprotokoll a seng Biller vu Mëschkulturen illustréieren all dës Feelinterpretatiounen.

Grenze vun der Bestätegung

EMB-Agar weist e Phenotyp, keng Spezies. Verschidden Organisme kënnen datselwecht Kolonieausgesinn hunn, an een Organismus kann duerch de Stamm, den Alter, ze dicht beieneeliegend Kolonien, d'Formulatioun an d'Inkubatioun vu sengem Léierbuchbild ofwäichen. Dofir gëtt d'EMB-Morphologie an den Aarbechtsabläif vum Unterrecht a vun der Klinik als virleefegen Hiweis behandelt.

E gutt begrënnbare studentëschen Aarbechtsablaf ass: beschreift déi isoléiert Kolonie (Gréisst, Faarf, Zentrum, Glanz ënner schréi afalendem Liicht, schleimege Charakter), notéiert d'Formulatioun, d'Inkubatiounszäit an d'Temperatur souwéi d'Kontrollen; stellt duerno duerch Subkultur vun enger gutt isoléierter Kolonie eng Rengkultur hier, éier Dir e Bestätegungstest maacht. Heefeg weider Ënnersichunge sinn eng Gram-Fierwung plus IMViC-Reaktioune fir déi virleefeg Identifikatioun vun E. coli a koliformen Organismen, TSI oder KIA an organismusspezifesch biochemesch Testserië fir enteresch Organismen, ergänzt duerch serologesch, MALDI TOF oder aner validéiert Identifikatiounsmethoden, wann d'Aufgab et erfuerdert. Fir Hannergrondinformatiounen doriwwer, wéi EMB ënner de selektiven an differenziellen enteresche Medien anzeuerdnen ass, kuckt Aféierungen an enteresch Kulturmedien an d'weider Ënnersichungen no der Gram-Fierwung. Fir déi verwandte Fro, wat eng blo Fierwung um Objektträger beweise kann a wat net, trennt den Atlas fir Methylenblo-Fierwung am selwechte Sënn Observatioun a Schlussfolgerung.

Schreift d'Observatioun virun der Schlussfolgerung op. „Donkel blo-schwaarz Kolonie mat wénkelofhängegem grénge Glanz op Levine-EMB no 24 Stonnen, vereinbar mat staarker Laktosfermentatioun“ ass gutt begrënnbar. „E. coli, bestätegt“ erfuerdert de Bestätegungsschrëtt, deen d'Plack eleng net liwwere kann.