ಲೇಖನ
ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೇಗೆ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ: ಅಪಚಯ, ಮರುಉತ್ಕರ್ಷಣ ಮತ್ತು ಪೊರೆಯಲ್ಲಿನ ವಿಭಾಜನ
ಪಾತ್ರೆಯಲ್ಲಿರುವ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಅನ್ನು ಒಳಗ್ರಹಿಸುವುದನ್ನು ಗಮನಿಸಿದರೆ, ಸಹಜವಾಗಿ ತೋರುವ ಅರ್ಥೈಸುವಿಕೆಯೇ ತಪ್ಪಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಮಾಧ್ಯಮವು ತನ್ನ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ನೀಲಿ ಕಣಗಳು ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ; ಹಾಗಾಗಿ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವು ನೀಲಿ ಅಣುವಿನ ರೂಪದಲ್ಲೇ ಪೊರೆಯನ್ನು ದಾಟಿರಬೇಕು ಎಂದು ತೋರುತ್ತದೆ. ಆದರೆ ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಬೇರೆಯದೇ ಸಂಗತಿಯನ್ನು ಹೇಳುತ್ತವೆ. ನೀಲಿ ರೂಪವು ಪೊರೆಯನ್ನು ದಾಟುವುದು ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ. ದಾಟುವುದು ಬಣ್ಣರಹಿತ ರೂಪ; ಒಳಗೆ ಕಾಣಿಸುವ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವು ಅಣು ಒಳಗೆ ಬಂದ ನಂತರ ಅಲ್ಲಿಯೇ ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
ಈ ತಿರುವು ಮುಖ್ಯವಾದುದು, ಏಕೆಂದರೆ ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಏನನ್ನು ತಿಳಿಸಬಲ್ಲದು ಮತ್ತು ಏನನ್ನು ತಿಳಿಸಲಾರದು ಎಂಬುದನ್ನು ಇದು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ. ನೀಲಿ ಕಣಗಳು ಕೋಶಾಂಗಗಳಲ್ಲಿ ಮರುಉತ್ಕರ್ಷಣಗೊಂಡು ಸಿಲುಕಿಕೊಂಡ ಉತ್ಕರ್ಷಿತ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಇರುವಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಅವು ಕೋಶದಲ್ಲಿರುವ ಒಟ್ಟು ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಅಪಚಯಿತ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಸೂಚಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅಳೆಯುವುದಿಲ್ಲ. ಏಕೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತಿಳಿಯಲು ಮೂರು ಹಂತಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ: ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಅಪಚಯ, ಅಪಚಯಿತ ರೂಪದ ವಿಸರಣ, ಒಳಗೆ ಮರುಉತ್ಕರ್ಷಣ ಮತ್ತು ಬಂಧನ.
ಎರಡು ರೂಪಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಅಣುಗಳಂತೆ ವರ್ತಿಸುತ್ತವೆ
ಉತ್ಕರ್ಷಿತ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಸಮತಟ್ಟಾದ, ಧನ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶ ಹೊಂದಿರುವ ಉಂಗುರ ರಚನೆಯಾಗಿದೆ. ಇದು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುತ್ತದೆ, ಸುಮಾರು 600 ರಿಂದ 700 nanometers ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಪ್ರಬಲವಾಗಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನೀಲಿಯಾಗಿ ಕಾಣುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿ ವಿದ್ಯುದಾವೇಶವೇ ಮುಖ್ಯ. ವಿದ್ಯುದಾವೇಶ ಹೊಂದಿರುವ, ನೀರಿಗೆ ಆಕರ್ಷಿತವಾಗುವ ಅಣು ಲಿಪಿಡ್ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ಸುಲಭವಾಗಿ ಜಾರುವುದಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ ಸಾಹಿತ್ಯದಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯ ಪದಪ್ರಯೋಗವು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಪೊರೆ ದಾಟಲಾರದ ರೂಪ ಎಂಬುದೇ ಹೊರತು, ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ದಾಟಲಾರದ ರೂಪ ಎಂಬುದಲ್ಲ.
ಲ್ಯೂಕೊಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಅಪಚಯಿತ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಬಣ್ಣರಹಿತವಾಗಿದ್ದು, ವಿದ್ಯುದಾವೇಶವಿಲ್ಲದೆ ಕೊಬ್ಬಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುತ್ತದೆ. ವಿದ್ಯುದಾವೇಶವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿದರೆ ಪೊರೆ ಗೋಡೆಯಂತೆ ತಡೆಯುವುದನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸುತ್ತದೆ. ಅಪಚಯಿತ ಅಣು ಸುಲಭವಾಗಿ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ವಿಸರಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚು ಉತ್ಕರ್ಷಣಶೀಲವಾದ ವಿಭಾಗದೊಳಗೆ ಹೋದ ಬಳಿಕ ಅದು ಮತ್ತೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಂಡು, ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ, ವಿದ್ಯುದಾವೇಶ ಹೊಂದಿರುವ, ಒಳಗೆ ಸಿಲುಕುವ ರೂಪಕ್ಕೆ ಮರಳಬಹುದು. ಹೀಗಾಗಿ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ರೆಡಾಕ್ಸ್ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರವೇ ಅದರ ಸಾಗಣೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವೂ ಆಗಿದೆ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಬದಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯೂ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಮೊದಲ ಹಂತಕ್ಕೆ ಬೇಕಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳು ಕೋಶದಿಂದಲೇ ಬರುತ್ತವೆ. ಸಸ್ತನಿ ಕೋಶಗಳು ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸಾಗಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸುತ್ತವೆ; ಕೋಶದೊಳಗಿನ ದಾತಗಳಿಂದ ಅಪಚಾಯಕ ಸಮತುಲ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊರಕ್ಕೆ, ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿರುವ ಸ್ವೀಕಾರಕಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸುತ್ತವೆ. ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ನಡೆಯುವ ಈ ಚಟುವಟಿಕೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಕೋಶ ಕಾರ್ಯವಾಗಿದ್ದು, ಬಹುತೇಕ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ. ಥಯಾಜಿನ್ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಮೇಲ್ಮೈ ರಿಡಕ್ಟೇಸ್ ಒಂದು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಅಂಶದಲ್ಲಿ ಇತರ ರಿಡಕ್ಟೇಸ್‌ಗಳಂತೆ ವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ: ನಂತರದ ಹಂತಗಳನ್ನು ಸ್ಥಗಿತಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರಮಾಣದ ಸಯನೈಡ್ ಮತ್ತು ಅಜೈಡ್ ಇದ್ದರೂ ಅದು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತಲೇ ಇರುತ್ತದೆ. ಈ ಹಂತಗಳ ನಡುವಿನ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಯೇ ಇಡೀ ವಿವರಣೆಯ ಆಧಾರ.
ವಿಭಾಜನದ ಕಲ್ಪನೆ ಮೊದಲು ಬಂತು; ಅದು ಒಳಗ್ರಹಣವನ್ನು ಬಹುತೇಕ ವಿವರಿಸಿತು
1929ರಲ್ಲಿ ರಾಕ್‌ಫೆಲರ್ ಸಂಸ್ಥೆಯ ಮರಿಯನ್ ಇರ್ವಿನ್ ಹೆಚ್ಚು ಸರಳವಾದ ಪ್ರಶ್ನೆಯನ್ನು ಕೇಳಿದರು. ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಪ್ರವೇಶವು ಕೇವಲ ನೀರು ಮತ್ತು ಕೋಶದ ಕೊಬ್ಬಿನ ಪದರಗಳ ನಡುವಿನ ವಿಭಾಜನವಾಗಿರಬಹುದೇ? ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್ ಪದರವು ಆ ಕೊಬ್ಬಿನ ಪದರಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿಯಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದೇ? ಅವರ ವರ್ಣಪಟಲಮಾಪನ ಆಧಾರಿತ ಪ್ರವೇಶ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಜಲೀಯ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯ ದ್ರಾವಣಗಳನ್ನು ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ, ಸಾವಯವ ಹಂತಕ್ಕೆ ಸಾಗಿದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಜೀವಂತ ಶೈವಲ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಪ್ರವೇಶಿಸಿದ ಪ್ರಮಾಣದೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಯಿತು.
ಆ ಕೆಲಸದ ಎರಡು ಸಂಶೋಧನಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಈಗಲೂ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿವೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ವಾಣಿಜ್ಯ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಈಗ Azure B ಎಂದು ಕರೆಯುವ ಟ್ರೈಮೆಥಿಲ್ ಥಯೋನಿನ್ ಇತ್ತು. ಈ ಕಲ್ಮಶವು ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗಿಂತ ವೇಗವಾಗಿ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತಿತ್ತು; ವಿಶೇಷವಾಗಿ, ಲಿಪಿಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಕರಗುವ ಮುಕ್ತ ಪ್ರತ್ಯಾಮ್ಲ ರೂಪವು ಪ್ರಧಾನವಾಗಿರುವ ಕ್ಷಾರೀಯ pHನಲ್ಲಿ. ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂ ಪ್ರವೇಶವೆಂದು ತೋರಿದ ಕೆಲವು ಘಟನೆಗಳು ವಾಸ್ತವವಾಗಿ Azure Bಯ ಆಯ್ದ ಪ್ರವೇಶವಾಗಿದ್ದವು. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, pH ಅಯಾನೀಕರಣದ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಫಲಿತಾಂಶವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತಿತ್ತು; ಗಾಯಗೊಂಡ ಕೋಶಗಳು ಅಕ್ಷತ ಕೋಶಗಳಿಗಿಂತ ಬಹಳ ಹೆಚ್ಚು ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಒಳಗೆ ಬಿಡುತ್ತಿದ್ದವು. ಕೃತಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಮತ್ತು ಜೀವಂತ ಕೋಶವು ತಲಾ ಎಷ್ಟನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ವಿಭಾಜನ ಗುಣಾಂಕಗಳು ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುದಾವೇಶದ ಸ್ಥಿತಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತಿದ್ದವು. ಇವೆರಡರ ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆಯು ಕೋಶದ ಗಡಿಯಲ್ಲಿ ಜಲೀಯವಲ್ಲದ ಪದರಗಳಿವೆ ಎಂಬ ಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸಿತು.
ಈ ಮಾದರಿಯು ಲಿಪಿಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಅಯಾನೀಕರಣದ ವಿಷಯದಲ್ಲಿ ದೂರದೃಷ್ಟಿಯದ್ದಾಗಿತ್ತು. ಆದರೆ ತನ್ನ ಮೂಲ ರೂಪದಲ್ಲೇ ವಿಭಾಜನಗೊಳ್ಳುವ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು, ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆಗೊಂಡು ಬೇರೆ ರೂಪದಲ್ಲಿ ದಾಟಿ ಒಳಗೆ ಮತ್ತೆ ಮೂಲ ರೂಪಕ್ಕೆ ಮರಳುವ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಅದಕ್ಕೆ ಸಾಧ್ಯವಾಗಲಿಲ್ಲ. ಆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ತಿಳಿಯಲು ಬೇರೆಯೊಂದು ಪ್ರಯೋಗ ಬೇಕಾಗಿತ್ತು; ಅದು ಎಪ್ಪತ್ತು ವರ್ಷಗಳ ನಂತರ ಶ್ವಾಸಕೋಶದ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಂನಲ್ಲಿ ನಡೆಯಿತು.
ಹೊರಗೆ ಅಪಚಯ, ಒಳಗೆ ಬಂಧನ
ಮೆರ್ಕರ್ ಮತ್ತು ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳು ಸಂವರ್ಧಿತ ಗೋವಿನ ಶ್ವಾಸಕೋಶ ಧಮನಿಯ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡಿ, ಮೂರು ಹಂತಗಳ ಕ್ರಮವನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಿದರು: ಉತ್ಕರ್ಷಿತ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವು ಕೋಶದ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ತನ್ನ ಬಣ್ಣರಹಿತ, ಲಿಪಿಡ್‌ಗೆ ಆಕರ್ಷಿತವಾಗುವ ರೂಪಕ್ಕೆ ಅಪಚಯಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ; ಅಪಚಯಿತ ರೂಪವು ಒಳಗೆ ವಿಸರಿಸುತ್ತದೆ; ಕೋಶದೊಳಗಿನ ಮರುಉತ್ಕರ್ಷಣವು ಪೊರೆ ದಾಟಲಾರದ ಉತ್ಕರ್ಷಿತ ರೂಪವನ್ನು ಮತ್ತೆ ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದು ಸಂಗ್ರಹಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಅವರ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಥಯಾಜಿನ್ ಒಳಗ್ರಹಣ ಅಧ್ಯಯನವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಕ್ರಮವನ್ನು ತಡೆಯಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅದನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿತು.
ಮೊದಲ ಸಾಧನವು ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಆಗಿತ್ತು; ಇದು ಕೋಶವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಲಾರದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸ್ವೀಕಾರಕ. ಮೇಲ್ಮೈ ಕಿಣ್ವಗಳು ಕೋಶದ ಹೊರಗೆ ನೀಲಿ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಅದರ ಬಣ್ಣರಹಿತ ರೂಪಕ್ಕೆ ಅಪಚಯಗೊಳಿಸಿದಾಗ, ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಮತ್ತೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು, ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವು ಪೊರೆಯನ್ನು ದಾಟುವ ಮುನ್ನವೇ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ನೀಲಿ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಮರುಉತ್ಪಾದಿಸಬಲ್ಲದು. ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಅಧಿಕವಾಗಿದ್ದಷ್ಟು ಕಾಲ (10 micromolar ವರ್ಣದ್ರವ್ಯಕ್ಕೆ 50 ರಿಂದ 500 micromolar ಫೆರಿಸಯನೈಡ್), ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಒಳಗ್ರಹಣ ಬಹುತೇಕ ನಿಂತುಹೋಯಿತು. ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಬಳಸಲ್ಪಟ್ಟು ಮುಗಿದ ನಂತರವೇ ಒಳಗ್ರಹಣವು ತನ್ನ ಸಾಮಾನ್ಯ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಪುನರಾರಂಭವಾಯಿತು. ಗತಿಶಾಸ್ತ್ರವು ಇದೇ ಸಂಗತಿಯನ್ನು ಮತ್ತೊಂದು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿತು. ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಸರಿಸುಮಾರು ಸ್ಥಿರವಾದ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಕಣ್ಮರೆಯಾಯಿತು; ಮರುಬಳಕೆಯಾಗಬಲ್ಲ ಮಧ್ಯವರ್ತಿಗೆ ನಿರಂತರವಾದ ಮೇಲ್ಮೈ ಅಪಚಯ ಪ್ರವಾಹವು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತಿದೆ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಇದು ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗಿತ್ತು. ಆದರೆ ಕೋಶದ ಹೊರಗಿನ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಸಂಗ್ರಹ ಕಡಿಮೆಯಾದಂತೆ ಅದು ಘಾತೀಯವಾಗಿ ಕಣ್ಮರೆಯಾಯಿತು. ಸ್ಥಿರ ಪ್ರವಾಹ ಮತ್ತು ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತಿರುವ ಸಂಗ್ರಹ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಇರುವುದರಿಂದ, ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಸಂಕೇತವು ನಿರಂತರ ಅಪಚಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಅಣುಗಳು ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತೊರೆಯುವುದನ್ನಲ್ಲ ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ.
ಎರಡನೆಯ ಸಾಧನವು ಪೊರೆ ದಾಟುವ ಹಂತವನ್ನೇ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಿತು. ತಂಡವು ಥಯಾಜಿನ್ ವರ್ಗದ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧಿಯಾದ ಟೊಲ್ಯೂಡೀನ್ ಬ್ಲೂ O ಅನ್ನು ದೊಡ್ಡ ಪಾಲಿಅಕ್ರಿಲಮೈಡ್ ಸರಪಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಿತು. ಆ ಸರಪಳಿಯು ಯಾವುದೇ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿಯೂ ಕೋಶವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗದಷ್ಟು ದೊಡ್ಡದಾಗಿತ್ತು. ಆದರೂ ಕೋಶಗಳು ಬಂಧಿತ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಅಪಚಯಗೊಳಿಸಿದವು. ಹೀಗಾಗಿ ಅಪಚಯಕ್ಕೆ ಕೋಶದೊಳಗಿನ ಪ್ರವೇಶ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ. ಅದನ್ನು ನಡೆಸುವ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ತೆರೆದಿರುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಅದಕ್ಕೆ ವಿದ್ಯುತ್ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಪರ್ಕಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ.
ನಂತರ ಸಂಶೋಧನಾ ಲೇಖನಕ್ಕೆ ಅದರ ಶೀರ್ಷಿಕೆಯನ್ನು ನೀಡಿದ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಕಂಡುಬಂತು. 2 millimolar ಪ್ರಮಾಣದ ಸಯನೈಡ್ ಮತ್ತು ಅಜೈಡ್ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಸಂಗ್ರಹವನ್ನು ಬಲವಾಗಿ ತಗ್ಗಿಸಿದವು. ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದಲ್ಲಿ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕೋಶಕೇಂದ್ರದ ಸುತ್ತ ಕಾಣಿಸುವ ಗಾಢ ನೀಲಿ ಮತ್ತು ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣದ ಅಂತರ್ಗತ ಕಣಗಳು ಬಹುತೇಕ ಕಣ್ಮರೆಯಾದವು. ಆದರೂ ಎರಡೂ ಪ್ರತಿಬಂಧಕಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೂ ಕೋಶದ ಹೊರಗಿನ ಅಪಚಯವನ್ನು ನಿಧಾನಗೊಳಿಸಲಿಲ್ಲ: ಫೆರಿಸಯನೈಡ್ ಚಕ್ರವು ಯಾವುದೇ ಕುಸಿತವಿಲ್ಲದೆ ಮುಂದುವರಿಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರವೇಶಿಸಲಾಗದ ಪಾಲಿಮರ್ ಇನ್ನೂ ಅಪಚಯಗೊಳ್ಳುತ್ತಿತ್ತು. ತಡೆ ಮುಂದಿನ ಹಂತದಲ್ಲಿತ್ತು. ಸಯನೈಡ್ ಮತ್ತು ಅಜೈಡ್ ಕೋಶದೊಳಗಿನ ಮರುಉತ್ಕರ್ಷಣ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಬಂಧನವನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸುತ್ತಿದ್ದವು, ಮೇಲ್ಮೈ ಅಪಚಯವನ್ನಲ್ಲ. ಕೋಶಜೀವಿತ್ವದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ಈ ಅರ್ಥೈಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸಿದವು. ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳುದ್ದಕ್ಕೂ ಕೋಶಗಳು ತಮ್ಮ ಕೋಶದ್ರವದ ಗುರುತು ಕಿಣ್ವವಾದ ಲ್ಯಾಕ್ಟೇಟ್ ಡಿಹೈಡ್ರೋಜಿನೇಸ್ ಅನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿದ್ದವು; ಆದ್ದರಿಂದ ಒಳಗ್ರಹಣ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದ್ದು ಕೇವಲ ವಿಷಪ್ರಭಾವ ಅಥವಾ ಪೊರೆ ಛಿದ್ರವಾಗಿದ್ದರಿಂದ ಅಲ್ಲ.
ಆ ಲೇಖನದ ಒಂದು ಎಚ್ಚರಿಕೆ ಈಗಲೂ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ. ನೀಲಿ ಅಂತರ್ಗತ ಕಣಗಳು ಕೋಶಕೇಂದ್ರದ ಸುತ್ತಲೂ ಇದ್ದವು, ಆದರೆ ಅದರೊಳಗೆ ಇರಲಿಲ್ಲ. ಇದು ಉಪಕೋಶೀಯ ಕೋಶಾಂಗಗಳೊಳಗಿನ ಉತ್ಕರ್ಷಣಕ್ಕೆ ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗುತ್ತಿತ್ತು, ಆದರೆ ಯಾವ ಕೋಶಾಂಗಗಳು ಎಂಬುದನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಗುರುತಿಸಲಿಲ್ಲ. ಇತರ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡ ಇದೇ ರೀತಿಯ ವಿನ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಅಲ್ಪ ಸಾಕ್ಷ್ಯದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಲೈಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದವು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗಿತ್ತು. ಬಂಧನವು ಸ್ಥಾಪಿತ ಸಂಗತಿ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ; ಆದರೆ ಅದು ನಡೆಯುವ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸ್ಥಳವು ಇನ್ನೂ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ನಿರ್ಣಯ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್‌ಗಳು ಮುಂದೆ ಎಲ್ಲಿಗೆ ಹೋಗುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅನುಸರಿಸುವ ಓದುಗರು ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸಾಗಣೆ ಮತ್ತು ರೆಡಾಕ್ಸ್ ನಿರ್ವಹಣೆ ಹಾಗೂ ಪ್ರವೇಶ ಮಾರ್ಗಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವಿತರಣೆಯ ವಿಶಾಲ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಓದಬಹುದು.
ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಒಡ್ಡಿಕೆಯ ಅಳತೆಯಲ್ಲ
ಈ ಒಳಗ್ರಹಣದ ತರ್ಕವನ್ನು ಜೈವಿಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಮಾಪನದೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಿದಾಗ ಏನಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಮೂರನೆಯ ಅಧ್ಯಯನ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಉಂಗುರಾಕಾರದ ಸಕ್ಕರೆ ವಲಯವಾದ ಮಿಥೈಲ್ ಬೀಟಾ ಸೈಕ್ಲೋಡೆಕ್ಸ್‌ಟ್ರಿನ್ ಮೆಥಿಲೀನ್ ಬ್ಲೂಗೆ ನೇರವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸ್ಕಾಟ್ ಮತ್ತು ಸಹೋದ್ಯೋಗಿಗಳು ಕಂಡುಕೊಂಡರು. ಅಂತರ್ಗತ ಸಂಕೀರ್ಣಕ್ಕೆ ಸಂಯೋಜನ ಸ್ಥಿರಾಂಕವು ಸುಮಾರು 310 per molar ಆಗಿದ್ದರೆ, ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ದ್ವಿಯಣು ರಚನೆಗೆ ಅದು ಸುಮಾರು 5846 per molar ಆಗಿತ್ತು. L929 ಫೈಬ್ರೋಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಬಂಧನವು ಕೋಶದ ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಒಳಗ್ರಹಣದ ಉತ್ತೇಜನ ಎರಡನ್ನೂ ತಡೆಯಿತು: ಸೈಕ್ಲೋಡೆಕ್ಸ್‌ಟ್ರಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮೊದಲೇ ಇನ್‌ಕ್ಯೂಬೇಟ್ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳುವಿಕೆ ತಡೆಯಲ್ಪಟ್ಟಿತು; ನಂತರ ಅದನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ಬಣ್ಣ ತೆಗೆಯುವಿಕೆ ವೇಗವಾಯಿತು. ದೃಶ್ಯಮಾಪನದಲ್ಲಿ ಕಂಡ ನೀಲಿ ಸಂಕೇತವು ಕೋಶಗಳಿಂದ ಹೊರಹೋದಂತೆ, ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಸಾಗಣೆಯೂ ಅದರೊಂದಿಗೆ ನಿಕಟವಾಗಿ ಸಮಾಂತರವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು.
ಈ ಸಹಸಂಬಂಧವು ದೀರ್ಘಕಾಲ ಉಳಿಯುವ ಉತ್ಕರ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಒತ್ತಡದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ, ವರ್ಣದ್ರವ್ಯ ಮತ್ತು ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಸಾಗಣೆಕಾರಕದ ಸಕ್ರಿಯೀಕರಣ ಮಾರ್ಗದಲ್ಲಿರುವ ಒಂದು ಪ್ರೋಟೀನ್ ನಡುವಿನ ನೇರ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಲೇಖಕರು ಅರ್ಥೈಸಿದರು. ಈ ನಿರ್ಣಯವು ಸಮಂಜಸವಾದರೂ ಮಿತಿಯುಳ್ಳದ್ದು. ಪ್ರಯೋಗವು ಆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಸಾಗಣೆಕಾರಕಕ್ಕೇ ಬಂಧನವಾಗುವುದನ್ನು ತೋರಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಹಾಗೆಯೇ ಬಣ್ಣ ತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮದ ನಷ್ಟದ ನಡುವಿನ ಸಹಸಂಬಂಧವು ರೆಡಾಕ್ಸ್ ಮೂಲಕ ನಡೆಯುವ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಮಾರ್ಗವನ್ನೂ ತಳ್ಳಿಹಾಕಲಾರದು.
ಇದರಿಂದ ಉಳಿಯುವ ಮುಖ್ಯ ಪಾಠವು ಮಾಪನಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ದೃಶ್ಯಾಧಾರಿತ ಬಣ್ಣಮಾಪನವು ಕಾಣಿಸುವ, ಉತ್ಕರ್ಷಿತ, ಕೋಶಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಬಣ್ಣರಹಿತ ಅಪಚಯಿತ ಸಂಗ್ರಹವು ಅದಕ್ಕೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಗೋಚರಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ ತೆಳು ಬಣ್ಣದ ಕೋಶದಲ್ಲಿಯೂ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯದ ಸಮತುಲ್ಯ ಪ್ರಮಾಣಗಳು ಇರಬಹುದು; ತೀವ್ರವಾಗಿ ಬಣ್ಣಗೊಂಡ ಕೋಶವು ಒಳಗೆ ಬಂಧಿತವಾಗಿರುವ ಉತ್ಕರ್ಷಿತ ವರ್ಣದ್ರವ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಒಟ್ಟು ಅಂಗಾಂಶ ಒಡ್ಡಿಕೆ ಅಥವಾ ಪರಿಣಾಮದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನಲ್ಲ. ಇದೇ ಎಚ್ಚರಿಕೆ ದೊಡ್ಡ ಮಟ್ಟದಲ್ಲೂ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ: ಬೇರೆಬೇರೆ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಬಣ್ಣಗೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೋಲಿಸುವುದು ಅಥವಾ ಗಾಢ ಬಣ್ಣದ ಅಂಗಾಂಶ ಛೇದವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಒಡ್ಡಿಕೆಯ ಪುರಾವೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸುವುದು, ಪಾತ್ರೆಯಲ್ಲಿನ ಮೊದಲ ತಪ್ಪನ್ನೇ ಪುನರಾವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ. ಒಳಗ್ರಹಣವು ಅಪಚಯ, ವಿಸರಣ ಮತ್ತು ಮರುಉತ್ಕರ್ಷಣದ ಚಕ್ರವಾಗಿದೆ. ನೀಲಿ ರೂಪದ ಯಾವುದೇ ಒಂದು ಕ್ಷಣಚಿತ್ರವು ಅದರ ಒಂದು ಭಾಗವನ್ನು ಮಾತ್ರ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಬಣ್ಣಲೇಪನ ಮತ್ತು ನಿರ್ವಹಣೆಗೆ ಹಾಗೂ ಡೋಸ್ ಮತ್ತು ಒಡ್ಡಿಕೆಯ ಕುರಿತ ಪ್ರತಿಪಾದನೆಗಳ ಅರ್ಥೈಸುವಿಕೆಗೆ ಇದರ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಣಾಮಗಳು ನೇರವಾಗಿ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತವೆ.