ជម្រើសជំនួសមេទីលីនប្លូសម្រាប់មីក្រូទស្សន៍៖ ជ្រើសរើសតាមការងារ

សម្រាប់ស្មៀរបាក់តេរីសាមញ្ញ គ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេតអាចជំនួសមេទីលីនប្លូបាន នៅពេលគោលបំណងគឺមើលរាងកោសិកា។ សម្រាប់កោសិកាដែលនៅរស់ ជម្រើសដែលសមស្របជាងអាចជាមីក្រូទស្សន៍ phase contrast ដោយមិនប្រើសារធាតុពណ៌ទាល់តែសោះ។ ជម្រើសអាស្រ័យលើអ្វីដែលអ្នកត្រូវការសង្កេត។

សន្មតថាមនុស្សពីរនាក់កំពុងពិនិត្យវប្បធម៌បាក់តេរីដូចគ្នា។ ម្នាក់ចង់បែងចែកកោសិការាងដំបងពីកោសិការាងមូល។ ម្នាក់ទៀតចង់ដឹងថាតើការព្យាបាលមួយបានសម្លាប់បាក់តេរីឬអត់។ សារធាតុពណ៌ដែលផ្តល់រូបភាពច្បាស់ដល់មនុស្សទីមួយ អាចមិនផ្តល់ចម្លើយដែលអាចប្រើបានដល់មនុស្សទីពីរឡើយ។

មុនពេលជ្រើសរើសសារធាតុជំនួស សូមបំពេញប្រយោគនេះ៖ “ខ្ញុំត្រូវការសង្កេត ___ ក្នុង ___ ហើយកោសិកាត្រូវ / មិនចាំបាច់នៅរស់ទេ។” ប្រយោគនេះកំណត់ការងារដែលសារធាតុពណ៌ត្រូវបំពេញ។

ចាប់ផ្តើមពីសំណាក និងសំណួរ

ដំបូង សម្រេចថាតើកោសិកាត្រូវតែនៅរស់ឬអត់ បន្ទាប់មកកំណត់លក្ខណៈដែលអ្នកត្រូវការសង្កេត៖

• កោសិកាត្រូវតែនៅរស់៖ សម្រាប់ចលនា ឬរាង សូមពិចារណា phase contrast ឬ DIC ដោយមិនប្រើសារធាតុពណ៌; សម្រាប់ DNA ក្នុងនុយក្លេអ៊ែរ សូមពិចារណា Hoechst 33342 ជាមួយ fluorescence; សម្រាប់ភាពគង់វង្សនៃភ្នាសកោសិកា សូមជ្រើសរើស assay ដែលបានផ្ទៀងផ្ទាត់ ដូចជា SYTO 9 ជាមួយប្រូពីឌីយ៉ូម អាយអូឌីត។
• កោសិកាមិនចាំបាច់នៅរស់ទេ៖ សម្រាប់រូបសណ្ឋានបាក់តេរី សូមពិចារណាការជ្រលក់ពណ៌សាមញ្ញដោយគ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេត ឬការជ្រលក់ពណ៌អវិជ្ជមានដោយនីក្រូស៊ីន; សម្រាប់ប្រតិកម្ម Gram សូមប្រើវិធីសាស្ត្រជ្រលក់ពណ៌ Gram ពេញលេញ; សម្រាប់ DNA ក្នុងនុយក្លេអ៊ែរនៃកោសិកាដែលបាន fixation សូមពិចារណា DAPI fluorescence។ ប្រើតារាងនេះដើម្បីប្រៀបធៀបដែនកំណត់របស់ជម្រើសនីមួយៗ។ ទាំងនេះជាជម្រើសវិធីសាស្ត្រ មិនមែនជាសេចក្តីណែនាំឱ្យប្តូរដបសារធាតុនៅក្នុងពិធីការដែលមានស្រាប់ទេ។

សម្រាប់ស្មៀរសាមញ្ញ សូមជំនួសវិធីសាស្ត្រដោយប្រុងប្រយ័ត្ន

គ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេតជាជម្រើសអនុវត្តបាន នៅពេលការងារគឺមើលរូបសណ្ឋានបាក់តេរីជាពណ៌តែមួយ។ Bacteriological Analytical Manual របស់ FDA រាយបញ្ជី រូបមន្តគ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេតពីរដែលសមស្របសម្រាប់ការជ្រលក់ពណ៌សាមញ្ញ។ ប្រើរូបមន្តដែលមានឯកសារយោង និងវិធីរៀបចំរបស់វា; ឈ្មោះសារធាតុពណ៌តែឯងមិនកំណត់សារធាតុប្រតិកម្មដែលត្រៀមរួចសម្រាប់ប្រើប្រាស់ទេ។

គ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេតក៏ប្រើក្នុងការជ្រលក់ពណ៌ Gram ដែរ ប៉ុន្តែវាមិនមានន័យថាការជ្រលក់ពណ៌សាមញ្ញដោយគ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេតគឺជាការជ្រលក់ពណ៌ Gram នោះទេ។ នៅក្នុង ពិធីការជ្រលក់ពណ៌ Gram របស់ ASM លទ្ធផលបែងចែកអាស្រ័យលើគ្រីស្តាល់វ៉ាយអូឡេត អ៊ីយ៉ូត ការដកពណ៌ និងការជ្រលក់ពណ៌បន្ថែម ដែលដំណើរការតាមលំដាប់។ ការលុបចោលជំហានទាំងនោះផ្លាស់ប្តូរអ្វីដែលរូបភាពអាចបញ្ជាក់បាន។ សូមមើល ការជ្រលក់ពណ៌សាមញ្ញធៀបនឹងការជ្រលក់ពណ៌ Gram សម្រាប់ភាពខុសគ្នានេះ។

នីក្រូស៊ីនផ្តល់វិធីផ្សេងមួយដើម្បីបង្ហាញគែមកោសិកា៖ វាធ្វើឱ្យផ្ទៃខាងក្រោយងងឹត ខណៈកោសិកាបាក់តេរីនៅតែភ្លឺជាងប្រៀបធៀប។ មានព័ត៌មានលម្អិតសំខាន់មួយនៅក្នុង សេចក្តីណែនាំអំពីនីក្រូស៊ីនរបស់ Merck ដែលបញ្ជីសារធាតុជំនួសទូទៅអាចមើលរំលង។ រូបមន្តសម្រាប់ប្រើប្រាស់ដែលបានបញ្ជាក់របស់វាមាន formaldehyde។ ដូច្នេះ អ្នកមិនអាចសន្និដ្ឋានអំពីភាពត្រូវគ្នាជាមួយកោសិកាដែលនៅរស់ ដោយផ្អែកតែលើពាក្យ “ការជ្រលក់ពណ៌អវិជ្ជមាន” បានទេ ទោះបីកោសិកាខ្លួនឯងមើលទៅមិនមានពណ៌ក៏ដោយ។ ពិនិត្យរូបមន្តពេញលេញ និងការរៀបចំសំណាក។

សម្រាប់សំណាកដែលនៅរស់ សូមពិចារណាប្តូរប្រព័ន្ធអុបទិក

ប្រសិនបើអ្នកចង់សង្កេតកោសិកាផ្លាស់ទី ឬបែងចែក ការបន្ថែមសារធាតុពណ៌មួយទៀតអាចធ្វើឱ្យការសង្កេតកាន់តែស្មុគស្មាញ។ ដូចដែល Nikon ពន្យល់នៅក្នុងមគ្គុទ្ទេសក៍អំពី contrast ក្នុងសំណាកថ្លា phase contrast និង differential interference contrast ឬ DIC ធ្វើឱ្យសំណាកអាចមើលឃើញតាមភាពខុសគ្នានៃលក្ខណៈអុបទិករបស់វា។ វាអាចបង្ហាញកោសិកាដែលនៅរស់ និងមិនបានជ្រលក់ពណ៌ ប្រសិនបើមីក្រូទស្សន៍មានសមាសធាតុដែលត្រូវការ។

ជម្រើសនេះរក្សាសំណាកឱ្យគ្មានសារធាតុពណ៌ ប៉ុន្តែវាផ្លាស់ប្តូរប្រភេទព័ត៌មានដែលអាចទទួលបាន។ អ្នកអាចតាមដានគែម ឬចលនាមួយ ដោយមិនដឹងថាម៉ូលេគុលណាបង្កើត contrast នោះទេ។ ប្រសិនបើសំណួរគឺទីតាំងរបស់ម៉ូលេគុល សូមជ្រើសរើសវិធីសាស្ត្រសម្គាល់ដែលសមស្របជំនួសវិញ។

សម្រាប់ DNA ក្នុងនុយក្លេអ៊ែរ ការប្រៀបធៀប DAPI និង Hoechst stains របស់ Invitrogen បែងចែកការប្រើ DAPI ដែលជាទូទៅប្រើជាមួយកោសិកាដែលបាន fixation ពី Hoechst 33342 ដែលអាចឆ្លងកាត់កោសិកាបានច្រើនជាង និងត្រូវបានពេញនិយមសម្រាប់ការសម្គាល់កោសិកាដែលនៅរស់។ ទាំងពីរត្រូវការឧបករណ៍ fluorescence។ មួយណាក៏មិនមែនជាសារធាតុជំនួសដោយផ្ទាល់សម្រាប់សារធាតុពណ៌ brightfield ដែលមានពណ៌ឡើយ។

ចាត់ទុកការប៉ះពាល់សារធាតុពណ៌ និងពន្លឺជាលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍។ ប្រៀបធៀបសំណាកដែលបានជ្រលក់ពណ៌ និងមិនបានជ្រលក់ពណ៌ នៅពេលអាកប្បកិរិយារបស់កោសិកាគឺជាអ្វីដែលអ្នកកំពុងវាស់។

កោសិកាពណ៌ក្រហមមិនមានន័យថាជាកោសិកាងាប់ដោយស្វ័យប្រវត្តិទេ

SYTO 9 និងប្រូពីឌីយ៉ូម អាយអូឌីត ត្រូវបានប្រើជាគូជាញឹកញាប់ ដើម្បីវាយតម្លៃភាពគង់វង្សនៃភ្នាសបាក់តេរី។ សៀវភៅណែនាំ BacLight ភ្ជាប់ភ្នាសដែលនៅគង់វង្សជាមួយការជ្រលក់ពណ៌បៃតង និងភ្នាសដែលខូចជាមួយការជ្រលក់ពណ៌ក្រហម។ ការបកស្រាយនោះត្រូវការការផ្ទៀងផ្ទាត់សម្រាប់សំណាកជាក់លាក់។

ការសិក្សាឆ្នាំ 2019 ដោយ Rosenberg និងសហការី បង្ហាញពីបញ្ហានេះ។ នៅក្នុង biofilm របស់ E. coli ដែលមានអាយុ 24 ម៉ោងលើកញ្ចក់ក្នុង phosphate-buffered saline ប្រហែល 96% នៃកោសិកាមើលទៅមានសញ្ញាវិជ្ជមានចំពោះប្រូពីឌីយ៉ូម អាយអូឌីតនៅទីតាំងដើម។ ប៉ុន្តែអ្នកនិពន្ធបានប៉ាន់ប្រមាណថា 82% អាចដាំលូតលាស់បានបន្ទាប់ពីប្រមូល។ រូបភាព confocal បានបង្ហាញកោសិកាដែលមានផ្នែកខាងក្នុងពណ៌បៃតងនៅក្រោមសម្ភារៈដែលបានជ្រលក់ពណ៌ក្រហម ដែលបង្ហាញថាអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរនៅក្រៅកោសិកាអាចរួមចំណែកដល់សញ្ញាដែលនាំឱ្យយល់ច្រឡំ។

ភាគរយទាំងនោះពិពណ៌នាអំពីការវាស់វែងខុសៗគ្នាលើសំណាករបស់ការសិក្សានោះ មិនមែនជាកត្តាកែតម្រូវសកលទេ។ មេរៀនដែលអាចប្រើបានគឺត្រូវពិនិត្យថាអ្វីបានបង្កើតសញ្ញា។ នៅក្នុង biofilm សារធាតុពណ៌សម្រាប់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរអាចរកឃើញសម្ភារៈនៅខាងក្រៅកោសិកា ក៏ដូចជានៅក្នុងកោសិកាដែលខូច។ សម្រាប់សេចក្តីសន្និដ្ឋានអំពីភាពនៅរស់ អ្នកស្រាវជ្រាវណែនាំឱ្យប្រើការវាស់វែងបំពេញបន្ថែម ដូចជាការដាំវប្បធម៌ ឬសកម្មភាពមេតាបូលីស ខណៈទទួលស្គាល់ថាវិធីនីមួយៗមានដែនកំណត់។

ពិនិត្យថាជម្រើសជំនួសមានអ្វីខ្លះពិតប្រាកដ

វិធីសាស្ត្រជ្រលក់ពណ៌ជំនួសមួយអាចនៅតែមានមេទីលីនប្លូ។ Giemsa ជាឧទាហរណ៍៖ Merck ពិពណ៌នាផលិតផលរបស់ខ្លួនថាជា សូលុយស្យុង azure-eosin-methylene-blue ដែលមានបំណងប្រើសម្រាប់កម្មវិធីរួមមានស្មៀរឈាម និងខួរឆ្អឹង។ វាអាចជាវិធីសាស្ត្រផ្សេងសម្រាប់សំណាកផ្សេង ប៉ុន្តែវាមិនបំពេញតម្រូវការដែលចង់ដកមេទីលីនប្លូចេញទេ។

ប្រសិនបើការដកសារធាតុមួយចេញជាផ្នែកនៃការពិសោធន៍ សូមពិនិត្យអត្តសញ្ញាណ និងរូបមន្តសារធាតុប្រតិកម្ម មុនពេលប្រៀបធៀបរូបភាព។ មគ្គុទ្ទេសក៍អំពី methyl blue, methylene blue និងសារធាតុពណ៌ដែលមានឈ្មោះស្រដៀងគ្នា ពន្យល់ពីភាពខុសគ្នានៃឈ្មោះ។

ផ្ទៀងផ្ទាត់ការជំនួស មុនពេលប្រើលទ្ធផល

សម្រាប់វិធីសាស្ត្រថ្មី សូមធ្វើការប្រៀបធៀបតូចមួយដោយប្រើសំណាកតំណាង និងការត្រួតពិនិត្យសមស្រប។ រក្សាការកំណត់មីក្រូទស្សន៍ឱ្យអាចប្រៀបធៀបគ្នាបាននៅពេលអាចធ្វើបាន។ កត់ត្រារូបមន្តសារធាតុប្រតិកម្ម ការរៀបចំសំណាក ការប៉ះពាល់ និងលក្ខខណ្ឌថតរូប ដើម្បីឱ្យរូបភាពដែលមើលទៅប្រសើរជាងអាចត្រូវបានស៊ើបអង្កេត មិនមែនគ្រាន់តែជ្រើសយកដោយចំណូលចិត្តប៉ុណ្ណោះ។

វាយតម្លៃភាពជោគជ័យធៀបនឹងសំណួរដើម។ សម្រាប់រូបសណ្ឋាន សូមវាយតម្លៃថាតើគែមកោសិកា និងការរៀបចំនៅតែអាចបកស្រាយបានឬអត់។ សម្រាប់ការសម្គាល់នុយក្លេអ៊ែរ សូមវាយតម្លៃទីតាំងសញ្ញា និងផ្ទៃខាងក្រោយ។ សម្រាប់ភាពនៅរស់ សូមទាមទារភស្តុតាងលើសពីការបែងចែកពណ៌ដែលមើលទៅស្អាត។ មគ្គុទ្ទេសក៍ទូលំទូលាយអំពី ការជ្រលក់ពណ៌មេទីលីនប្លូ និងការប្រើប្រាស់ក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ពន្យល់ពីរបៀបដែលការសង្កេត និងការរៀបចំសំណាកទាក់ទងគ្នា។

ជ្រើសរើសជម្រើសជំនួសដែលរក្សាការវាស់វែងដែលអ្នកត្រូវការ។ ពណ៌គ្រាន់តែជាលក្ខណៈមួយនៃរូបភាពដែលទទួលបានប៉ុណ្ណោះ។