Метилен көгі және шашыранды склероз: жануарларға жүргізілген зерттеулерде не тексерілді

MS кезінде метилен көгін қолдану туралы іздесеңіз, бір сұраққа жауап беретіндей көрінетін мақалаларды табасыз. Бірақ олар бір сұраққа жауап бермейді. Бір зерттеуде ауру тышқандарға ем ретінде метилен көгі берілген. Екіншісінде онымен ешбір жануар емделмеген. Онда патолог миелинді микроскоппен көре алуы үшін жұлынның жұқа кесінділеріне метилен көгі көк бояғыш ретінде қолданылған.

Бүкіл мақаланың негізгі ойы — осы. Биологияда бұл бояғыштың екі рөлі бар, ал олардың ортақ тұсы — тек бір құтыдан алынатыны. Дәріге үміткер зат ретінде ол тірі жануарға белгілі дозада енгізіледі де, аурудың өзгеретін-өзгермейтіні тексеріледі. Бояғыш ретінде ол тәжірибеден кейін тіршілігі тоқтаған, бекітілген тінге жағылады да, тіннің қандай күйде болғаны зерттеледі. Осы айырмашылықты ескермесеңіз, патологияны зерттеу әдістері бөлімін емдеу нәтижесі сияқты қабылдайсыз.

EAE деген не: қарапайым түсіндірме

Эксперименттік аутоиммундық энцефаломиелит, әдетте EAE деп қысқартылады, — шашыранды склероздың кейбір қырларын зерттеуге арналған стандартты жануар моделі. Зерттеуші бейім тышқанды миелин ақуызының фрагменті және күшті адъювант арқылы иммундап, иммундық жауап туындатады. Содан кейін иммундық жүйе жануардың өз орталық жүйке жүйесіне шабуылдайды. Тышқанда төменнен жоғары қарай таралатын әлсіздік дамиды; оны құйрықтың салбырауынан артқы аяқтардың салдануына дейінгі 0 мен 5 аралығындағы шкала бойынша бағалау оңай.

Бағалаудың осы қолайлылығы EAE моделінің неліктен кең қолданылатынын да, неліктен жаңылыстыруы мүмкін екенін де түсіндіреді. Адамдағы MS өздігінен пайда болады, нысаналары анағұрлым кең әрі нақты шектелмеген және қайталамалы немесе үдемелі ағымда көру, сезімталдық, таным, мишық қызметі мен қимылға қатысты белгілер туғызады. EAE бақыланатын жағдайда қабыну, демиелинизация және аксон зақымы сияқты жекелеген механизмдерді қайталайды. Ол MS-тің кішірейтілген көшірмесі емес. Жалпы түсінік алғысы келетін оқырмандар қандай да бір ауруға қатысты жеке тұжырымды бағаламас бұрын, метилен көгінің жасушалық деңгейде қалай әсер етеді деп есептелетінін қарастыра алады.

Төмендегі екі зерттеуде EAE туындату үшін әртүрлі антигендер қолданылған, бұл да маңызды. Емдеу зерттеуінде ауру миелин олигодендроцит гликопротеинінен алынған қысқа пептид — MOG35-55 арқылы туындатылған. Патология зерттеуінде миелиннің негізгі ақуызы мен протеолипид ақуызының бөліктері біріктірілген MP4 қолданылған. Штамм мен антигенді таңдау зақым ошақтарының қай жерде пайда болатынын және қабынудың қалай жүретінін өзгертеді, сондықтан бұл екі зерттеу бір тәжірибенің екі рет қайталануы емес.

Бағдар: модель, сұрақ және шектеулер

Осы кестені көз алдыңызда ұстаңыз. Бұл — мақаладағы негізгі анықтамалық кесте. Әр жол модель қандай клиникалық сұраққа жауап бере алатынын, іс жүзінде не өлшенгенін және қорытындыларды адамға қолдану қай жерде шектелетінін көрсетеді.

Келесі тақырыпатты тексеретін кез келген оқырман клиникаға дейінгі зерттеулерді қалай оқу керектігі туралы нұсқаулықтың көмегімен осы бағандарды қайта пайдалана алады: жануардың түрі мен антигені қандай, қосылыстың рөлі қандай, нәтиже көрсеткіштері қандай және нәтиже аурудың ағымын көрсете ме, әлде тіннің бір сәттегі күйін ғана көрсете ме — осыны сұраңыз.

Емдеу нәтижесі: затты енгізу нені өзгертті

Journal of Neuroimmunology журналындағы 2016 жылғы емдеу зерттеуінде жасы шамамен 8–10 апталық C57BL/6 ұрғашы тышқандары қолданылған; әр тышқан 250 микрограмм MOG35-55 арқылы иммундалған. EAE туындатылғаннан кейін жануарлар кездейсоқ түрде метилен көгі берілетін топқа немесе емделмейтін EAE тобына бөлініп, клиникалық балдар шамамен 30-күнге дейін бақыланған.

15-күннен 30-күнге дейін ем алған тышқандардың клиникалық балдары EAE бақылау тобынан статистикалық тұрғыдан едәуір төмен болған, P мәні 0.01-ден аз болған. Жұлын талдауы да осы бағыттағы нәтижелерді көрсеткен: ем алған жануарларда қабыну инфильтрациясы, демиелинизация және аксондардың жоғалуы азырақ болған.

Зерттеудің ерекшелігі — сигналдық көрсеткіштер жиынтығы. Емдеу AMPK белсендірілуін және SIRT1 экспрессиясын арттырып, қабынудың негізгі реттегіштерінің бірі NF-kB белсендірілуін бәсеңдеткен. Жүре пайда болған иммунитет тұрғысынан ол Th17 жауабын азайтып, Treg жауабын күшейткен. Сондықтан ұсынылған тізбек мынадай: метилен көгі AMPK пен SIRT1-ге әсер етеді, одан NF-kB сигналдары төмендейді, қабынуға қатысатын Th17-ден реттеуші Treg-ге қарай ығысу жүреді, тін зақымы жеңілдейді, нәтижесінде балдар төмендейді.

Бұл тізбек — түсіндірме, дәлелденген себеп-салдар реті емес. Зерттеу дәрінің қолданылуы, сигналдардың өзгеруі және аурудың жеңілдеуі қатар жүргенін көрсетеді. Ол бүкіл әсерді AMPK пен SIRT1 қамтамасыз ететінін дәлелдемейді. Сондай-ақ ашық индекстелген мәтінде килограмға шаққандағы нақты миллиграмм дозасы, енгізу жолы, басталған күні немесе ұзақтығы тек аңдатпаға сүйеніп енгізу сызбасын қайталауға жеткілікті анық берілмеген. Сату бетінде осы мақалаға қатысты келтірілген кез келген доза санын, егер ол толық мәтіннің әдістер бөліміне сілтеме жасамаса, расталмаған деп қарастырыңыз. Осы бастапқы иммундық сигнал кейін клиникалық деректермен расталды ма дегенді тексеру үшін метилен көгі бойынша адамдарға қатысты кеңірек дәлелдер қорын қарау керек.

Патология нәтижесі: алты айдағы тіндер нені көрсетті

PLoS ONE журналындағы 2015 жылғы MP4 зерттеуінде толық Фрейнд адъювантындағы 200 микрограмм MP4 арқылы иммундалған C57BL/6 ұрғашы тышқандары қолданылған; көкжөтел токсині иммундау күні және 48 сағаттан кейін қайта берілген. Ешбір жануар метилен көгін дәрі ретінде алмаған. Тін бекітіліп, құю ортасына енгізілгеннен кейін жұлынның бір микрометрлік көлденең кесінділері жарық микроскопиясы үшін метилен көгімен боялған, ал ұсақ бөлшектерді көру үшін вентролатералды жолға электрондық микроскопия жүргізілген.

Тін үлгілері үш кезеңде алынған: жедел кезеңнің шарықтау шегінде 7 тышқаннан, басталғаннан кейін үш ай өткенде 5 тышқаннан және алты ай өткенде 10 тышқаннан. Осы кезеңдердегі орташа клиникалық балдар дерлік бірдей болған: 0 мен 5 аралығындағы шкалада шамамен 1.7–1.8. Ал тіндер басқа жағдайды көрсеткен. Тек миелині зақымданған талшықтардың саны жедел кезеңнің шарықтау шегіндегі бір шаршы миллиметрге шамамен 569,000 талшықтан алты айдағы шамамен 1,496,000 талшыққа дейін өскен; жедел және ұзақ мерзімді кезеңдерді салыстыруда айырмашылық статистикалық маңызды болып, P мәні 0.027-ге тең болған. Миелин мен аксон қатар зақымданған жағдайлар алты айға қарай шамамен екі есе артқан. Қайта миелинденіп жатқан талшықтар әр кезеңде бір пайыздан төмен болып қалған; бұл қалпына келуге деген үмітті байыппен бағалауға мәжбүр ететін дерек.

Аксон зақымы U тәрізді үлгімен өзгерген: жедел кезеңнің шарықтау шегінде жоғары, үш айда төменірек, ал алты айда ең жоғары болған. Ол митохондриялардың ісінуімен және нейрофиламенттер арасындағы арақашықтықтың азаюымен байланысты болған. Бағалаушылар клиникалық балдар мен кезеңді білмеген, бұл клиникалық балдар жалғасып жатқан құрылымдық зақымды толық көрсетпеген деген түсіндірмені нығайтады.

Осы сәйкессіздік — зерттеудің MS туралы оқитын адам үшін шынайы үлесі. Мүгедектік деңгейін көрсететін балдың тұрақтылығы тіннің де тұрақты күйде екенін білдірмеген. Бұл сондай-ақ осы мақала неге метилен көгімен MS емдеу туралы қандай да бір тұжырымды қолдай алмайтынын көрсетеді. Онда емдеу емес, уақыттың әсері тексерілген.

Неліктен екі зерттеу де пациенттердегі пайданы дәлелдемейді

Әр мақаланы тар ауқымды сұраққа жақсы жауап беретін, бірақ пациентке қатысты сұраққа мүлде жауап бермейтін зерттеу деп қарастырыңыз.

Біріншіден, себептері әртүрлі. EAE белгілі антиген мен адъювант арқылы әдейі туындатылады. Адамдағы MS өздігінен дамиды және оған T жасушалары, B жасушалары, туа біткен иммунитет пен тіндегі глия кіретін кеңірек иммундық жүйе қатысады. Тышқанда MOG-қа бағытталған жауапты өзгертетін қосылыс адамдағы осы кеңірек жауапты міндетті түрде өзгертпейді.

Екіншіден, фенотиптері әртүрлі. Тышқанда құйрықтан артқы аяқтарға қарай таралатын әлсіздік — өлшеуге ыңғайлы көрсеткіш. Ол адамдағы MS-тің алуан түрлілігін бір ғана қимылдық санға сыйғызады. Дәрілер адамдағы ауру ағымын өзгертпестен, қысқа мерзімді EAE балдарын жиі өзгертеді. Сондықтан EAE — кішірейтілген клиника емес, бастапқы іріктеу мен механизмдерді зерттеу құралы.

Үшіншіден, заттың ағзаға түсуі мен қолдану мерзімі анықталмаған. Тышқандарға арналған 30 күндік тәжірибеде ерте басталып, үздіксіз жүргізілген енгізу ауруы қалыптасқан адамның затты ұзақ уақыт ауыз арқылы қолдануымен бірдей емес. Екі зерттеудің ешқайсысы жүйке жүйесіндегі дәрі деңгейін өлшемеген. Осы байланыссыз зертханалық пластинадағы концентрациядан немесе тышқанға берілген дозадан адамға арналған қолдану сызбасына өтуге негіз жоқ.

Төртіншіден, екі зерттеу бірін-бірі қайталамайды. Антигендері, сұрақтары, нәтиже көрсеткіштері әртүрлі, ал біреуінде емдеу мүлде жүргізілмеген. Оларды MS емдеудің оң нәтижесін көрсеткен екі зерттеу ретінде бірге келтіру — әртүрлі санаттарды шатастыру.

Дәлелдерді таразылайтын оқырмандар үшін бұл нені білдіреді

Бұл мақалаларда MS үшін метилен көгін қолданудың негізделген хаттамасы жоқ. Емдеу зерттеуі MOG EAE кезіндегі AMPK, SIRT1, NF-kB және Th17 мен Treg тепе-теңдігін әрі қарай зерттеуге негіз береді. Патология зерттеуі балдар өзгеріссіз көрінгенде де тін зақымы үдеуі мүмкін екенін және әдістер бөліміндегі метилен көгі кейде дәрі қобдишасын емес, бояғыш құтысын білдіретінін еске салады. Шашыранды склероз бойынша жалғасып жатқан зерттеулерді қадағалайтын оқырмандар бояғыш пен дәрінің осы айырмашылығын есте ұстауы керек. Зертханалық жаңалықтарға сүйеніп қандай да бір әрекет жасамас бұрын, қанға және өзара әсерлесулерге қатысты қауіптерді қоса алғандағы қауіпсіздік мәселелерін метилен көгінің қауіпсіздігі туралы жалпы деректермен бірге дәрігермен талқылау қажет.

Негізгі қорытындыны бір сөйлеммен айтуға болады. Сілтеме жасалған бір зерттеуде MOG EAE тышқандарына метилен көгі белгілі дозада енгізіліп, қабынуға қарсы бағыттағы иммундық өзгеріспен қатар аурудың жеңілдегені хабарланған, ал екінші зерттеуде ешқандай зат ем ретінде енгізілмей, метилен көгі алты ай бойы жиналған миелин мен аксон зақымын тіркеу кезінде жұлынды бояу үшін ғана қолданылған, сондықтан бұл екі зерттеу метилен көгінің адамдағы MS-ке көмектесетінін дәлелдемейді.