Afoxunarpróf með metýlenbláu í vambarvökva

Nýútskrifaður dýralæknir hringir frá bóndabæ með blátt sýnaglas í hendi. Hún bætti metýlenbláu í vambarvökva fyrir tíu mínútum og blái liturinn er enn til staðar. Hún spyr hvort hún eigi að gefa kúnni meira litarefni.

Spurningin afhjúpar rangan skilning á prófinu. Í afoxunarprófi með metýlenbláu í vambarvökva fer litarefnið í sýnaglasið, aldrei í dýrið. Öll prófunin fer fram í glasinu. Tíminn sem það tekur bláa litinn að hverfa segir eitthvað um örverurnar í sýninu, ekki um meðferð sem dýrið þarf.

Ruglingurinn er skiljanlegur því metýlenblátt kemur við sögu í þremur ólíkum samhengi í dýralækningum. Þessi grein greinir þar á milli og sýnir hvernig túlka má afoxunartímann með hliðsjón af pH, frumdýrum, gæðum sýnatökunnar og klínískum einkennum.

Hvað prófið mælir í raun

Metýlenblátt er blátt þegar það er oxað og nánast litlaust þegar það er afoxað. Ferskur vambarvökvi úr heilbrigðu dýri hefur mikla afoxunargetu vegna þess að loftfirrtar bakteríur eru virkar við gerjun fóðurs. Þegar litlu magni af litarefni er blandað í slíkan vökva hverfur liturinn á fáeinum mínútum vegna efnaskipta bakteríanna.

Meginreglan er því einföld: virk loftfirrt örveruflóra lætur bláa litinn hverfa hratt, en óvirk eða sködduð flóra gerir það hægt. Stuttur tími merkir meiri afoxunargetu í sýninu. Lengdur tími bendir til skertrar örveruvirkni, að því gefnu að sýnataka og meðhöndlun sýnisins hafi verið vönduð.

Prófið mælir ekki oxunar-afoxunarspennu vambarinnar beint. Í aðferðafræðilegri rannsókn á nautgripum, þar sem afoxunarprófið var borið saman við beinar millivoltamælingar, fannst engin línuleg fylgni milli afoxunartíma og mældrar oxunar-afoxunarspennu. Niðurstaðan var að ekki ætti að líta á þetta sem jafngildar mælingar á sömu breytu. Samanburðurinn er tekinn saman á PubMed. Líttu á afoxunarprófið sem virknipróf örverusamfélagsins, ekki sem ódýrt rafskaut.

Í lýsingu Merck/MSD á einföldum meltingartruflunum hjá jórturdýrum er lengdur afoxunartími hluti af sama mynstri og óeðlilegt pH í vömb og fækkun frumdýra. Ekkert stakt gildi staðfestir greininguna. Mynstrið gerir það.

Stöðluð framkvæmd við skoðun dýrs

Verklag er örlítið mismunandi milli kennslustofnana. Skráðu því nákvæmlega rúmmál og hitastig sem þú notar og berðu aðeins saman niðurstöður sem fengnar eru með sama verklagi. Ein útgáfa sem víða er kennd er þessi:

Safnaðu að minnsta kosti 10 til 20 mL af ferskum vambarvökva og lágmarkaðu munnvatnsblöndun, snertingu við loft og kælingu. Prófaðu sýnið án tafar.
Útbúðu 0.03 prósent metýlenblátt, sem er 0.3 mg á mL.
Bættu við litarefni sem nemur 5 prósentum af rúmmáli vökvans. Það eru 1.0 mL af litarefni í 20 mL af vökva, eða 0.5 mL af litarefni í 10 mL af vökva. Hvort tveggja gefur sama hlutfallið, 20 á móti 1 af vökva og litarefni.
Hafðu annað glas með ómeðhöndluðum vökva úr sama sýni til viðmiðunar um lit.
Blandaðu varlega, ræstu tímamælingu strax og haltu glasinu nálægt líkamshita, um 37 til 39 gráður á Celsíus eftir staðbundnu verklagi.
Skráðu tímann þar til litur prófunarglassins samsvarar viðmiðunarglasinu. Þunnur blár hringur getur haldist við yfirborðið þar sem vökvinn snertir loft, því súrefni oxar litarefnið þar aftur. Ekki bíða eftir að sá hringur hverfi.

Oxunar-afoxunarefnafræði metýlenblás skýrir hvers vegna súrefni skiptir máli hér. Kröftugur hristingur, víðopið glas eða löng bið hleypir súrefni inn og heldur litarefninu bláu lengur en aðstæður í vömbinni sjálfri myndu gera. Atriði varðandi vandaða sýnatöku vambarvökva skipta máli af sömu ástæðu. Munnvatn þynnir sýnið og hækkar pH. Við sýnatöku með magaslöngu fleygja því margir dýralæknar fyrsta hlutanum þegar nægilegt magn fæst.

Hvað mismunandi athuganir mæla

Afoxunartíminn svarar aðeins einni spurningu. Eftirfarandi yfirlit um mat á vömbinni sýnir hverju hver athugun við skoðun bætir við. Notaðu alla röðina, ekki einn reit.

Athugun	Hvað hún mælir	Dæmigerð niðurstaða við skoðun	Algengir truflandi þættir
Afoxunartími metýlenblás	Virka afoxunargetu loftfirrtra baktería í sýninu	Hjá nautgripum oft 2 til 6 mínútur; hjá sauðfé og geitum oft skemmri tími, þar sem 6 mínútur eru notaðar sem hagnýtt viðmið fyrir nægilega virkni og tími yfir 10 mínútum er verulega óeðlilegur	Kalt sýni, töf á prófun, loftað eða munnvatnsþynnt sýni; lítið hvarfefni eftir langvarandi lystarleysi; örverulyf gefin um munn; samanburður milli mismunandi litarefnishlutfalla eða hitastiga
pH í vömb	Efnaumhverfi, sýru- eða basálag	Hjá nautgripum á gróffóðri oft nálægt 6.0 til 7.2; rit um smá jórturdýr nefna oft um 6.5 til 7.5; fæði og tími frá fóðrun breyta gildinu	Munnvatnsblöndun hækkar pH í sýnum teknum með magaslöngu; tap koltvísýrings eftir sýnatöku; kornfóðrun lækkar pH
Fjöldi og hreyfanleiki frumdýra	Ástand samfélags bifdýra, einkum stórra gerða sem eru viðkvæmar fyrir truflunum	Margar lífverur af ýmsum stærðum með kröftugar, stefnumiðaðar hreyfingar í heitum, ferskum dropa	Kæling hægir á hreyfingum; alvarleg sýring getur eytt frumdýrum; töf lætur eðlilegt sýni virðast tregt
Lykt, litur og áferð	Eðli gerjunar og mengun	Lítillega arómatískur, grænbrúnn og örlítið seigfljótandi vökvi	Fúll eða súr lykt við alvarlega röskun á örveruflóru; vatnskenndur vökvi eða mikil munnvatnsblöndun eftir óvandaða sýnatöku
Vambarsamdrættir og matarlyst	Starfsemi formaga og fóðurinntaka dýrsins í heild	Reglulegir samdrættir og stöðugt jórtur hjá hressu dýri	Nýleg breyting á fóðurskammti, verkir, vökvaþurrð, almenn veikindi

Taflan dregur fram aðalatriðið. Lengdur afoxunartími ásamt tregum frumdýrum, óeðlilegu pH og veikum samdráttum bendir til raunverulegrar skerðingar á örveruvirkni. Lengdur tími einn og sér hjá hressu dýri sem jórtrar og hefur virk frumdýr bendir frekar til sýnisins en vambarinnar. Endurtaktu sýnatökuna áður en þú bregst við.

Túlkun tímans með hliðsjón af pH og sögu

Fæðið ræður grunnviðmiðinu. Kjarnfóðurríkir skammtar gerjast hratt og geta látið litarefnið hverfa á um mínútu, en á heyfæði getur það tekið nokkrar mínútur, jafnvel hjá heilbrigðum dýrum. Stuttur tími sannar því ekki einn og sér betri heilsu. Hann sýnir að meira af gerjanlegu hvarfefni hafi mætt virkum örverum.

Alvarleg ofneysla korns rýfur þetta einfalda samband. Gerjun kolvetna getur verið mikil í upphafi, en síðan skerða sýruskemmdir eðlilega örveruflóru og frumdýr, og afoxunartíminn lengist. Þess vegna segir ein kennsluregla að prófið sé ekki gilt þegar pH í vömb er undir um 5.5. Þá hefur flóran sem verið er að prófa breyst.

Hagnýt leiðbeining um mynstur:

Eðlilegt pH ásamt afoxun innan um 6 mínútna bendir til virkrar flóru.
Eðlilegt pH ásamt verulega lengdum afoxunartíma bendir til óvirkni vegna lystarleysis, áhrifa örverulyfja eða gallaðs sýnis.
Hátt pH ásamt lengdum afoxunartíma fylgir oft langvarandi lystarleysi með litlu hvarfefni, en hafðu í huga munnvatnsblöndun við sýnatöku með slöngu.
Lágt pH ásamt skertri virkni frumdýra vekur grun um röskun á örveruflóru tengda kolvetnum. Leiðbeiningar um túlkun pH í vömb hjálpa hér. Gildi undir 5.5 ásamt almennri deyfð benda fremur til ofneyslu korns og alvarlegrar sýringar en einfaldra meltingartruflana.

Skráðu alltaf nýlega gjöf tetracýklína um munn, jónófóra í fóðri, langvarandi gjöf örverulyfja með almennri verkun, skyndilegar breytingar á fóðurskammti, lengd lystarleysis og vatnsinntöku. MSD-handbókin varar sérstaklega við því að tetracýklín gefin um munn geti skert örveruflóru vambar verulega. Jónófórar breyta bakteríusamfélögum með fyrirfram ætluðum hætti. Án þessarar sögu er ekki hægt að túlka lengdan tíma.

Gæði sýnatökunnar eiga að vega jafnþungt. Í rannsókn við stýrðar aðstæður reyndust sýni tekin með magaslöngu hafa hærra pH og minna af rokgjörnum fitusýrum en sýni tekin um vambarkanylju úr sömu dýrum, að mestu vegna munnvatns. Afoxunartíminn hafði lengst marktækt 60 mínútum eftir sýnatöku við öll rúmmál sem prófuð voru, og áhrifin voru mest á lítil sýni. Safnaðu að minnsta kosti 10 mL, prófaðu innan 30 mínútna, gerðu afoxunarprófið snemma, haltu sýninu heitu og lágmarkaðu snertingu við loft.

Þrjár notkunarleiðir sem ekki má rugla saman

Sama litarefni, þrjú ólík kerfi.

Í fyrsta lagi er það prófun vambarvökva sem hér er lýst. Sýnið er vambarvökvi sem hefur verið safnað. Litarefni er bætt við utan líkamans í styrkleikanum 0.03 prósent. Endapunkturinn er tíminn þar til liturinn hverfur. Tilgangurinn er að meta afoxunarvirkni örvera.

Í öðru lagi er það metýlenblátt gefið lifandi jórturdýri. Viðurkennt dæmi er meðferð í æð við nítrat- eða nítríteitrun með methemóglóbíndreyra, þar sem lyfið endurheimtir starfhæft hemóglóbín. Reglur um skammta, lyfjaform, lyfjaleifar og biðtíma afurðanýtingar eiga við. Sú ákvörðun hefur ekkert með tímamælingu í sýnaglasi að gera. Ef litarefnið er notað sem ferilefni í lifandi dýri við tiltekna framkvæmd snýst meginreglan um hvert litarefnið fer, ekki hversu hratt örverur vambarinnar afoxa það.

Í þriðja lagi er það afoxunarpróf mjólkur. Sýnið er mjólk. Litarefni er bætt í mjólkursýnið. Hratt hvarf bláa litarins bendir almennt til meiri örveruvirkni og lakara geymsluþols, en hæg afoxun bendir til betri gæða. Prófið tilheyrir matvælaörverufræði og gæðaprófunum á mjólk, ekki vambarlækningum, og það er ekki bakteríutalning.

Skýr heiti koma í veg fyrir mistök: afoxunartími vambarvökva, metýlenblátt sem meðferð með almennri verkun eða sem ferilefni, og afoxunarpróf mjólkur. Öryggisreglan rúmast í einni setningu. Litarefni fyrir vambarprófið helst í rannsóknarglasinu og glasinu er síðan fargað. Það er aldrei gefið dýrinu til að framkvæma prófið.

Stutt regla fyrir vitjun á bóndabæ

Staðlaðu litarefnið við 0.03 prósent og 1 hluta litarefnis á móti 20 hlutum vökva, prófaðu ferskan vökva nálægt líkamshita með ómeðhöndluðu viðmiðunarsýni og túlkaðu mínúturnar með hliðsjón af pH, hreyfanleika frumdýra, gæðum sýnatöku, fæði, lyfjum, samdráttum, matarlyst, saur og vökvajafnvægi. Stök tala greinir aldrei meltingartruflanir. Samhljóma mynstur gerir það.