Uzrokuje li metilensko plavilo rak? Toksikološki dokazi

Metilensko plavilo pokazalo je signale tumora u dugotrajnim pokusima na životinjama i pozitivne rezultate u nekoliko laboratorijskih testova genetskog oštećenja. Ti nalazi zaslužuju pozornost. Oni ne utvrđuju vjerojatnost da će osoba razviti rak nakon određene izloženosti.

IARC-ova procjena objavljena 2016. svrstala je metilensko plavilo u skupinu 3, što znači da se njegova karcinogenost za ljude nije mogla klasificirati. Radna skupina nije imala podatke o raku kod ljudi te je dokaze iz pokusa na životinjama ocijenila ograničenima. Skupina 3 ne znači da je tvar dokazano bezopasna. Jednako tako, nalaz u životinja ne znači da je svaka izloženost ljudi dokazani uzrok raka.

Tri pitanja koja zahtijevaju zasebne odgovore

Karcinogenost se odnosi na razvoj tumora. Dugotrajna studija na životinjama može otkriti obrasce pojave tumora nakon definirane izloženosti. Genotoksičnost se odnosi na oštećenje genetskog materijala ili povezane stanične događaje. Pozitivan test mutacija predstavlja signal upozorenja, ali ne pokazuje izravno broj slučajeva raka kod ljudi. Rizik za ljude odnosi se na vjerojatnost štetnog učinka u stvarnim uvjetima izloženosti.

Ta pitanja zahtijevaju različita mjerenja. Brojanje bakterijskih mutanata, ispitivanje krvnih stanica miševa i dijagnosticiranje tumora pri nekropsiji nisu međusobno zamjenjive krajnje točke. Jednako tako, terapijski pokus koji pokazuje da neka tvar oštećuje stanice raka ne utvrđuje može li ponavljana izloženost pokrenuti nastanak tumora u zdravom tkivu. Zaseban tekst o metilenskom plavilu u istraživanju raka obrađuje tvrdnje o liječenju.

Usporedba studija: stvarne kronične izloženosti

U središnjem pokusu korišten je trihidrat metilenskog plavila, primijenjen u 0.5% vodenoj metilcelulozi oralnom gavažom, odnosno odmjerenom primjenom kroz sondu u želudac. Svaka skupina s određenom dozom u kroničnoj studiji sadržavala je 50 mužjaka i 50 ženki svake vrste. Primjena se provodila pet dana tjedno tijekom dvije godine, prema izvješću o studiji Auerbacha i suradnika.

Tablica zadržava NTP-ove zaključke specifične za pojedine vrste. Količine su miligrami ispitivanog materijala po kilogramu tjelesne mase životinje na dane doziranja, a ne preporuke za ljude. Životinje s dozom nula primale su vehikulum.

Model	Skupine doza, mg/kg	Put primjene i trajanje	Zaključak NTP-a i relevantni nalaz
Mužjaci štakora F344/N	0, 5, 25, 50	Oralna gavaža; pet dana/tjedno; dvije godine	Neki dokazi: povećali su se adenomi stanica otočića gušterače te kombinirana učestalost adenoma/karcinoma.
Ženke štakora F344/N	0, 5, 25, 50	Isti raspored	Nema dokaza o karcinogenoj aktivnosti u tim uvjetima.
Mužjaci miševa B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Oralna gavaža; pet dana/tjedno; dvije godine	Neki dokazi: povećali su se karcinom tankog crijeva te kombinirana učestalost adenoma/karcinoma. Maligni limfom također je možda bio povezan.
Ženke miševa B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Isti raspored	Nejasni dokazi: granično povećanje malignog limfoma.

„Neki dokazi” NTP-ova je kategorija za pozitivan eksperimentalni nalaz koji je slabiji od „jasnih dokaza”. „Nejasni” opisuje nalaz koji nije siguran. Te kategorije izražavaju snagu dokaza, a ne postotni rizik niti rangiranje jačine karcinogenog djelovanja.

Rezultat kod mužjaka štakora nije pokazivao ravnomjerno rastući obrazac. Adenom ili karcinom otočića gušterače pojavio se u 4/50 kontrolnih životinja te u 9/50, 14/50 i 8/50 životinja pri rastućim dozama. Objavljeni rad navodi statističku značajnost samo za srednju dozu. Zbog toga jednostavno tumačenje u obliku pravocrtnog porasta nije točno; rezultat ne dokazuje da je najviša doza bila zaštitna. Adenom je benigni tumor, dok je karcinom maligni. Kombinirana krajnja točka ne smije se opisivati kao da je svaki zabilježeni tumor bio rak.

Zašto različiti sažeci zvuče proturječno

Trenutačne informacije o propisivanju lijeka PROVAYBLUE navode nalaze na gušterači kod mužjaka štakora, ali ne opisuju neoplastične nalaze povezane s lijekom kod miševa. Istraživački rad navodi da povećanja neoplazmi kod miševa nisu bila statistički značajna, uz napomenu o pozitivnim trendovima. NTP je unatoč tome miševima dodijelio gore prikazane kategorije.

IARC-ova analiza studija na životinjama pojašnjava važnu statističku razliku: nalazi u crijevima mužjaka miševa pokazivali su značajne trendove ovisne o dozi, ali pojedinačne skupine koje su primale dozu nisu bile značajne u usporedbama parova s kontrolama. Ispitivanje ukupnog obrasca kroz više doza razlikuje se od zasebnog ispitivanja svake skupine. Čitatelji bi trebali zadržati izvor i njegovu formulaciju umjesto da sve te nalaze sažmu kao „miševi su razvili rak” ili „studija na miševima bila je negativna”. Nijedan od tih izvora ne daje izmjerenu stopu raka kod ljudi.

Usporedba studija: krajnje točke genetskog oštećenja

Odjeljak o genetskoj toksikologiji u NTP Technical Report 540 opisuje drukčiji skup pokusa. S9 je laboratorijska smjesa koja sadržava jetrene enzime i koristi se za modeliranje metaboličke aktivacije. Njegova prisutnost ne pretvara stanični test u studiju izloženosti cijelog organizma.

Sustav ispitivanja	Stvarni uvjeti izloženosti	Mjerena krajnja točka i rezultat
Testovi bakterijskih mutacija, druga ispitana serija	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; sa i bez S9 iz jetre štakora	Povećan broj mutacija u ispitivanim sojevima.
Kultivirane stanice jajnika kineskog hrčka	Ispitivanje izmjene sestrinskih kromatida uključivalo je 0.17–2.5 µg/mL bez S9, do 5 µg/mL sa S9; ispitivanje kromosomskih aberacija koristilo je 4.7–22 µg/mL	Pozitivni rezultati izmjene i kromosomskih aberacija.
Mužjaci miševa, akutni pokus	Jedna intraperitonealna injekcija: 25, 50 ili 150 mg/kg; uzorci nakon 48 sati	Nije utvrđeno povećanje mikronukleiranih eritrocita u koštanoj srži ni krvi.
Mužjaci i ženke miševa, ponavljani pokus	Oralna gavaža: 25, 50, 100 ili 200 mg/kg; pet dana/tjedno tijekom tri mjeseca	Nije utvrđeno povećanje mikronukleiranih eritrocita u perifernoj krvi.

Mikronukleus je malo dodatno jezgrino tjelešce koje može odražavati lom kromosoma ili gubitak kromosoma tijekom diobe stanice. Negativan test krvnih stanica odgovara na to konkretno pitanje u uzorkovanim stanicama. Ne može isključiti svaku vrstu oštećenja DNA u svakom organu. Suprotno tome, pozitivan test na kultiviranim stanicama ne govori nam koju su koncentraciju dosegla tkiva neke osobe.

Informacije o propisivanju također bilježe taj ukupni obrazac: pozitivne bakterijske testove i testove na kultiviranim stanicama te negativne mikronukleusne testove kod miševa. Jednostavno nazivanje metilenskog plavila „genotoksičnim” ili „negenotoksičnim” odbacuje informacije važne za tumačenje.

Što to znači za izloženost ljudi

Studije ne daju potvrđen dnevni prag siguran od raka za ljude. Dijeljenje doze za štakore faktorom tjelesne mase ne bi riješilo razlike u apsorpciji, metabolizmu, putu primjene, učestalosti izloženosti ili trajanju tijekom života. Time bi se dobila preračunata količina, a ne dokaz sigurnosti.

Dvogodišnji pokus s gavažom i kratkotrajno intravensko liječenje pod medicinskim nadzorom postavljaju različita pitanja. Ta razlika onemogućuje izravnu brojčanu ekstrapolaciju; ne poništava nalaze iz pokusa na životinjama. Korisna procjena počinje točnim spojem i formulacijom, količinom, putem primjene, učestalošću, trajanjem i razlogom uporabe. „Nekoliko kapi” ne navodi ni koncentraciju ni izmjereni volumen.

Ako je metilensko plavilo primijenjeno iz medicinskog razloga, sami nalazi tumora ne mogu odrediti jesu li koristi tog liječenja nadmašile njegove rizike. Ako se razmatra ponavljana izborna uporaba, neizmjereni dugoročni rizik od raka ne bi trebalo opisivati kao nula. Neposrednija pitanja, uključujući interakcije lijekova i sklonost hemolizi, obrađena su u tekstu o nuspojavama i kontraindikacijama.

Za daljnje čitanje upotrijebite biblioteku istraživanja kako biste razlikovali studije na ljudima od pokusa na životinjama i stanicama. Ključno pitanje za svaki rad jest koju je izloženost ispitivao i koji je ishod stvarno mjerio.