Članak
Test redukcije metilenskog modrila u buragovoj tekućini
Nedavno diplomirana veterinarka zove s farme s plavom epruvetom u ruci. Prije deset minuta dodala je metilensko modrilo u buragovu tekućinu, a plava je boja još prisutna. Pita treba li kravi dati još bojila.
To pitanje otkriva pogrešno shvaćanje. U testu redukcije metilenskog modrila u buragovoj tekućini bojilo se dodaje u epruvetu, nikada u životinju. Cijeli se test odvija u epruveti. Mjerenje brzine nestajanja plave boje govori nešto o mikrobima u tom uzorku, a ne o liječenju koje je životinji potrebno.
Zabuna je razumljiva jer se metilensko modrilo pojavljuje u trima različitim veterinarskim kontekstima. Ovaj ih članak razdvaja i pokazuje kako tumačiti vrijeme redukcije zajedno s pH vrijednošću, protozoama, kvalitetom uzorkovanja i kliničkim znakovima.
Što test zapravo mjeri
Metilensko modrilo plavo je u oksidiranom stanju, a gotovo bezbojno u reduciranom stanju. Svježa buragova tekućina zdrave životinje ima snažnu redukcijsku sposobnost jer anaerobne bakterije aktivno fermentiraju hranu. Kada se u takvu tekućinu umiješa mala količina bojila, bakterijski metabolizam uklanja boju u nekoliko minuta.
Načelo je, dakle, jednostavno: aktivna anaerobna flora brzo uklanja plavu boju, a neaktivna ili oštećena flora uklanja je polako. Kratko vrijeme znači veću redukcijsku sposobnost tog uzorka. Produljeno vrijeme upućuje na smanjenu mikrobnu aktivnost, pod uvjetom da je uzorak pravilno prikupljen i obrađen.
Test ne mjeri izravno redoks-potencijal buraga. Istraživanje metoda na govedima, u kojem je test redukcije uspoređen s izravnim mjerenjima u milivoltima, nije utvrdilo linearnu korelaciju između vremena redukcije i izmjerenog redoks-potencijala. Zaključeno je da ih ne treba smatrati zamjenjivim očitanjima iste varijable. Sažetak cjelovite usporedbe dostupan je na PubMedu. Test redukcije promatrajte kao funkcionalni test mikrobne populacije, a ne kao jeftinu elektrodu.
Merck/MSD-ov opis jednostavne indigestije u preživača svrstava produljeno vrijeme redukcije u isti obrazac s abnormalnim pH buraga i smanjenim brojem protozoa. Nijedna pojedinačna vrijednost ne postavlja dijagnozu. Postavlja je obrazac nalaza.
Standardni postupak uz životinju
Protokoli se neznatno razlikuju među ustanovama, pa zabilježite točne volumene i temperaturu koje upotrebljavate te uspoređujte rezultate samo unutar istog protokola. Jedna često podučavana inačica glasi:
- Prikupite najmanje 10 do 20 mL svježe buragove tekućine uz što manju primjesu sline, izloženost zraku i hlađenje. Test provedite što prije.
- Pripremite metilensko modrilo koncentracije 0.03 posto, što odgovara 0.3 mg po mL.
- Dodajte bojilo u količini od 5 posto volumena tekućine. To znači 1.0 mL bojila na 20 mL tekućine ili 0.5 mL bojila na 10 mL tekućine. U oba slučaja omjer tekućine i bojila iznosi 20 prema 1.
- Drugu epruvetu s tekućinom iz istog uzorka bez dodanog bojila zadržite kao kontrolu boje.
- Nježno promiješajte, odmah pokrenite mjerač vremena i držite epruvetu blizu tjelesne temperature, oko 37 do 39 stupnjeva Celzija, ovisno o lokalnom protokolu.
- Zabilježite vrijeme do trenutka kada boja testnog uzorka odgovara kontroli. Tanak plavi prsten na površini u dodiru sa zrakom može ostati prisutan jer kisik ondje ponovno oksidira bojilo. Nemojte čekati da taj prsten nestane.
Redoks-kemija metilenskog modrila objašnjava zašto je kisik ovdje važan. Snažno protresanje, široko otvorena epruveta ili dugo odgađanje omogućuju ulazak kisika i održavaju bojilo plavim dulje nego što bi ostalo u samom buragu. Pojedinosti pravilne tehnike prikupljanja buragove tekućine važne su iz istog razloga. Slina razrjeđuje uzorak i povisuje pH, pa pri prikupljanju želučanom sondom mnogi kliničari odbacuju prvi dio uzorka kada količina to dopušta.
Što mjere različita opažanja
Vrijeme redukcije odgovara samo na jedno pitanje. Procjena buraga u nastavku pokazuje što doprinosi svako opažanje uz životinju. Koristite cijeli redak, a ne jednu ćeliju.
| Opažanje | Što mjeri | Uobičajen nalaz uz životinju | Česti čimbenici koji utječu na tumačenje |
|---|---|---|---|
| Vrijeme redukcije metilenskog modrila | Funkcionalna redukcijska aktivnost anaerobnih bakterija u uzorku | U goveda često 2 do 6 minuta; u ovaca i koza često kraće, pri čemu se 6 minuta uzima kao praktična granična vrijednost za odgovarajuću aktivnost, a vremena dulja od 10 minuta izrazito su abnormalna | Hladan uzorak, odgođeno testiranje, izloženost zraku ili razrjeđivanje slinom; malo supstrata nakon dugotrajne anoreksije; oralni antimikrobni lijekovi; usporedba različitih omjera bojila ili temperatura |
| pH buraga | Kemijsko okruženje, kiselo ili lužnato opterećenje | U goveda hranjenih voluminoznom krmom često oko 6.0 do 7.2; priručnici za male preživače često navode oko 6.5 do 7.5; hranidba i vrijeme proteklo od hranjenja mijenjaju vrijednost | Primjesa sline povisuje pH uzoraka prikupljenih želučanom sondom; gubitak ugljikova dioksida nakon prikupljanja; hranidba žitaricama snižava pH |
| Broj i pokretljivost protozoa | Očuvanost populacije trepetljikaša, osobito velikih oblika osjetljivih na poremećaje | Brojni organizmi različitih veličina sa živahnim usmjerenim kretanjem u toploj svježoj kapi | Hlađenje usporava kretanje; teška acidoza može ukloniti protozoe; odgađanje pregleda čini normalan uzorak tromim |
| Miris, boja i konzistencija | Značajke fermentacije i kontaminacija | Blago aromatična, zelenkastosmeđa, blago viskozna tekućina | Truležan ili kiseo miris pri teškoj disbiozi; vodenasta tekućina ili tekućina s velikom primjesom sline nakon lošeg prikupljanja |
| Kontrakcije buraga i apetit | Funkcija predželudaca i unos hrane na razini cijele životinje | Redovite kontrakcije i ujednačeno preživanje u živahne životinje | Nedavna promjena obroka, bol, dehidracija, sistemska bolest |
Bit je u tablici. Produljeno vrijeme redukcije zajedno s tromim protozoama, abnormalnim pH i slabim kontrakcijama upućuje na stvarno smanjenu mikrobnu aktivnost. Izolirano produljeno vrijeme u živahne životinje koja preživa i ima vrlo pokretljive protozoe upućuje na problem s uzorkom, a ne s buragom. Ponovite prikupljanje prije poduzimanja mjera.
Tumačenje vremena uz pH i anamnezu
Hranidba određuje početnu vrijednost. Obroci bogati koncentratima brzo fermentiraju i mogu ukloniti boju za otprilike jednu minutu, dok obroci na bazi sijena mogu zahtijevati nekoliko minuta, čak i u zdravih životinja. Stoga kratko vrijeme samo po sebi ne dokazuje bolje zdravlje. Dokazuje da je više fermentabilnog supstrata došlo u dodir s aktivnim mikrobima.
Teško preopterećenje žitaricama narušava taj jednostavan odnos. Početna fermentacija ugljikohidrata može biti intenzivna, a zatim oštećenje uzrokovano kiselinom potiskuje normalnu floru i protozoe te se vrijeme redukcije produljuje. Zato jedno nastavno pravilo navodi da test nije valjan kada je pH buraga niži od približno 5.5. U tom trenutku flora koja se testira već se promijenila.
Praktičan vodič za obrasce nalaza:
- Normalan pH uz redukciju unutar približno 6 minuta upućuje na funkcionalno aktivnu floru.
- Normalan pH uz izrazito produljenu redukciju upućuje na neaktivnost zbog anoreksije, antimikrobnog djelovanja ili narušene kvalitete uzorka.
- Visok pH uz produljenu redukciju često slijedi nakon dugotrajne anoreksije s malo supstrata, ali uzmite u obzir primjesu sline pri uzorkovanju sondom.
- Nizak pH uz smanjenu aktivnost protozoa izaziva sumnju na disbiozu povezanu s ugljikohidratima. Ovdje pomažu smjernice za tumačenje pH buraga. Vrijednosti ispod 5.5 uz opću potištenost životinje ne upućuju na jednostavnu indigestiju, nego na preopterećenje žitaricama i tešku acidozu.
Uvijek zabilježite nedavnu oralnu primjenu tetraciklina, ionofore u hrani, dugotrajnu primjenu sistemskih antimikrobnih lijekova, nagle promjene obroka, trajanje anoreksije i unos vode. Priručnik MSD posebno upozorava da oralni tetraciklini mogu znatno smanjiti aktivnost mikroflore buraga. Ionofori namjerno mijenjaju bakterijske populacije. Bez te anamneze produljeno vrijeme nije moguće protumačiti.
Kvaliteti uzorkovanja treba pridati jednaku važnost. Kontrolirano istraživanje pokazalo je da uzorci prikupljeni želučanom sondom imaju viši pH i niže koncentracije hlapljivih masnih kiselina od uzoraka prikupljenih kroz kanilu u istih životinja, uglavnom zbog sline. Vrijeme redukcije bilo je značajno produljeno 60 minuta nakon prikupljanja pri svim testiranim volumenima, a mali su uzorci bili najviše pogođeni. Prikupite najmanje 10 mL, testirajte unutar 30 minuta, test redukcije provedite među prvim pretragama, održavajte uzorak toplim i smanjite dodir sa zrakom na najmanju moguću mjeru.
Tri primjene koje se ne smiju zamijeniti
Isto bojilo, tri različita sustava.
Prvo, ovdje opisan test buragove tekućine. Uzorak je prikupljena buragova tekućina. Bojilo se dodaje in vitro u koncentraciji od 0.03 posto. Krajnja točka je vrijeme do obezbojenja. Svrha je procjena mikrobne redukcijske aktivnosti.
Drugo, metilensko modrilo primijenjeno živom preživaču. Ustaljen primjer je intravenska terapija toksikoze nitratima ili nitritima s methemoglobinemijom, pri kojoj lijek vraća funkcionalnost hemoglobina. Primjenjuju se pravila o dozi, formulaciji, reziduama i karenciji. Ta odluka nema nikakve veze s mjerenjem vremena u epruveti. Ako se bojilo u određenom postupku upotrebljava kao obilježivač in vivo, načelo se temelji na tome kamo bojilo putuje, a ne na tome koliko ga brzo mikrobi buraga reduciraju.
Treće, test redukcije u mlijeku. Uzorak je mlijeko. Bojilo se dodaje uzorku mlijeka. Brz nestanak plave boje općenito označava veću mikrobnu aktivnost i slabiju trajnost, dok spora redukcija označava bolju kvalitetu. Taj test pripada mikrobiologiji hrane i ispitivanju kvalitete mlijeka, a ne medicini buraga, i nije mjerenje broja bakterija.
Jasno navođenje naziva sprječava pogreške: vrijeme redukcije u buragovoj tekućini, sistemska terapija metilenskim modrilom ili njegova primjena kao obilježivača te test redukcije u mlijeku. Sigurnosno pravilo stane u jednu rečenicu. Bojilo za test buragove tekućine ostaje u laboratorijskoj epruveti, a ta se epruveta zbrinjava. Nikada se ne daje životinji radi provođenja testa.
Sažeto pravilo za poziv s farme
Standardizirajte bojilo na 0.03 posto i 1 dio bojila na 20 dijelova tekućine, testirajte svježu tekućinu blizu tjelesne temperature uz kontrolu bez dodanog bojila te tumačite minute zajedno s pH, pokretljivošću protozoa, kvalitetom prikupljanja, hranidbom, lijekovima, kontrakcijama, apetitom, izmetom i hidracijom. Izoliran broj nikada ne postavlja dijagnozu indigestije. Usklađen obrazac nalaza je postavlja.