Karanta kamannin kolonin E. coli da sauran koloni a agar EMB

Ɗalibi ya shafa wani samfurin da ba a san abin da yake ba a layuka a kan agar eosin methylene blue, ya bar shi ya yi girma a na'urar renon ƙwayoyin cuta tsawon dare, sannan ya dawo ya tarar da farantin da ke ɗauke da koloni masu duhu da koren ƙyalli. Abin da ya rubuta a littafin bayanansa shi ne "E. coli, an tabbatar." Wannan rubutun ya yi da'awar da ta wuce abin da farantin zai iya tabbatarwa. Farantin yana nuna siffar girma da fermenteshin a ƙarƙashin wasu takamaiman yanayi. Gane jinsin ƙwayar cuta da'awa ce ta daban da ke buƙatar hujja ta daban.

Wannan jagorar tana ɗaukar sakamakon agar EMB a matsayin aikin fassara. Tana bayyana tushen yadda yake aiki, tana bi ta kundin hotunan faranti na misali tare da samfuran kwatanci, kuma tana bayyana lokutan da hoton da ake samu a littattafan koyarwa ke iya ruɗarwa.

Tunanin da ke bayan farantin

Agar EMB yana zaɓar nau'ikan ƙwayoyin cuta da kuma bambanta su. Rinin eosin Y da methylene blue suna hana yawancin ƙwayoyin cuta masu Gram positive girma, don haka wannan matsakaicin reno yana fifita girman masu Gram negative. Waɗannan rinai kuma suna aiki a matsayin alamomi: idan ƙwayar cuta ta yi fermenteshin sukarin da ke akwai kuma ta samar da isasshen asid a wurin, kolonin yana shan rini sosai ya koma shuɗi mai shunayya mai duhu zuwa shuɗi-baƙi. Idan samar da asid ya yi ƙarfi sosai, saman kolonin zai iya nuna koren ƙyalli kamar na ƙarfe wanda yake sauyawa da kusurwar kallo. Tsarin aikin ASM na farantin agar eosin methylene blue yana bayyana wannan haɗin zaɓe da bambantawa kuma yana ba da hotunan kwatanci don koyarwa.

Wani bayani yana da muhimmanci kafin karanta kowane sakamako: duba nau'in haɗin sinadaran da ake amfani da shi. Tsohon haɗin Holt Harris Teague yana ɗauke da lactose da sucrose, yayin da Levine EMB yake ɗauke da lactose kawai. Ƙwayar cuta da ke yin fermenteshin sucrose amma ba lactose ba, kamar yawancin samfuran Serratia marcescens da aka ware, na iya nuna kamanni daban a waɗannan nau'ikan biyu. Takardun masana'anta na matsakaican reno na EMB sun bayyana wannan bambancin haɗin sinadaran a sarari. Rubuta sunan masana'anta da nau'in haɗin sinadaran a littafin bayanai tare da sakamakon.

Agar EMB da aka shirya amma ba a sanya ƙwayoyin cuta a cikinsa ba yawanci yana da launin ja-kasa zuwa ja-shunayya, wani lokaci da ɗan koren launi ko ƙananan ƙwayoyin sinadaran da suka taru. Wannan launin tushe ba girman ƙwayoyin cuta ba ne. Kwatanta duk abin da aka karanta da farantin da ba a sanya ƙwayoyin cuta a cikinsa ba ko launin tushe da aka rubuta, kuma karanta farantin farko bayan kimanin 18 zuwa 24 hours na reno a yanayi mai iska a 35 zuwa 37 C, sai dai idan tsarin koyarwar ya ƙayyade wani abu dabam. Tsawaita lokacin reno na iya sauya kamannin fermenteshin.

Yadda ake duba farantin

Yi amfani da nau'ikan haske biyu. Da farko, duba farantin da hasken da yake dawowa daga samansa ko hasken da yake zuwa daga gefe, sannan karkatar da shi: ƙyallin ƙarfen yana sauyawa da kusurwar kallo kuma yana iya bayyana ko ɓacewa. Sannan duba shi da hasken da yake ratsa shi domin tantance launin koloni da wuraren tsakiyarsu masu duhu. Yi amfani da koloni da suka rabu sosai da juna, domin cunkoso da kolonin da ke maƙwabtaka suna sauya taruwar asid a wurin kuma suna iya rage launi ko ƙara masa ƙarfi. Tarin hotunan ASM yana nuna wannan kai tsaye: E. coli a renon gaurayen ƙwayoyin cuta na iya rasa ƙyallin da ake tsammani saboda ƙwayoyin cutar da ke kewaye da shi suna sauya yanayin asid.

Haɗa samfuran kwatanci duk lokacin da aikin koyarwar ya ba da dama. Tarin da aka saba amfani da shi wajen koyarwa shi ne E. coli ATCC 25922 domin siffar shuɗi-baƙi da ƙyallin ƙarfe, wata ƙwayar cuta marar fermenteshin kamar Salmonella Typhimurium ATCC 14028 ko Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 domin siffar rashin launi, da wata mai Gram positive kamar Enterococcus faecalis ko Staphylococcus aureus domin gwajin kwatanci na hana girma, kamar yadda aka jera a jadawalin tabbatar da inganci na EMB na yau da kullum. Idan samfurin kwatanci mai nuna sakamako tabbatacce ba shi da ƙyalli, fara zargin yanayin reno, cunkoso, ko haɗin sinadaran kafin ka zargi samfurin da ba a san shi ba.

Kundin hotunan faranti na misali

Faranti da ke ƙasa hotunan misali ne da aka ƙirƙira, ba hotunan renon ƙwayoyin cuta na gaske ba. Suna nuna tsarin kamannin da za a nema, ba takamaiman launin kowane nau'in ƙwayar cuta ba. Kwatanta su da hotunan kwatanci na ASM da kuma faranti na gaske daga ɗakin gwaje-gwajen koyarwa.

Faranti 1: Escherichia coli a agar EMB, mai yin fermenteshin lactose da ƙarfi

E. coli a agar EMB yawanci yana da launin shunayya mai duhu zuwa shuɗi-baƙi, sau da yawa da tsakiya mai duhu da koren ƙyalli kamar na ƙarfe saboda samar da asid da ƙarfi. Ƙyallin shi ne sanannen abin da ɗalibai suke nema, amma a ɗauke shi a matsayin hujjar goyon baya maimakon ma'anar da ke tantance ƙwayar cutar. Ƙarfin ƙyalli yana bambanta da nau'in ƙwayar cuta, lokacin reno, yawan koloni, da kusurwar kallo. Rashin ƙyalli ba ya kore yiwuwar E. coli, kuma koloni mai duhu ba tare da ƙyalli ba na iya nuna wasu masu fermenteshin da dama. Zaɓi koloni da ya rabu sosai da sauran domin kowane aikin da zai biyo baya, maimakon karantawa daga ɓangaren da ya yi cunkoso.

Faranti 2: Klebsiella pneumoniae a agar EMB, mai fermenteshin da santsi kamar majina

Klebsiella pneumoniae a agar EMB yawanci yana samar da manyan koloni masu walƙiya da santsi kamar majina, masu launin ruwan hoda-shunayya zuwa kasa-shunayya, sau da yawa da tsakiya mai duhu amma galibi ba tare da ƙyallin ƙarfe mai ƙarfi ba. Irin wannan siffa tana faruwa ga masu fermenteshin da suke da alaƙa da shi, kamar Enterobacter. Santsin da yake kama da majina da girman koloni suna daga cikin abubuwan da ake karantawa: ƙaramin koloni mai ruwan hoda da yake shimfiɗe ba ya da nauyin hujja iri ɗaya da babban koloni mai tudu da santsi kamar majina. Kamar yadda yake ga E. coli, farantin yana nuna yiwuwar wata siffar fermenteshin, kuma sanya suna a matakin jinsi yana buƙatar tabbatarwar gwaje-gwajen halittar sinadarai da aka bayyana a ƙasa.

Faranti 3: Salmonella a agar EMB da sauran marasa fermenteshin, koloni marasa launi

Salmonella a agar EMB da sauran ƙwayoyin cuta masu alaƙa da shi waɗanda ba sa yin fermenteshin lactose, ciki har da Shigella da yawancin samfuran Pseudomonas da aka ware, yawanci suna girma a matsayin koloni marasa launi, masu ɗan ratsa haske, ko masu launin amber mai haske. Wasu haɗin sinadaran da yanayi suna ba da ɗan launin ruwan hoda, don haka koloni mai ruwan hoda mai haske ba lallai ne ya zama mai fermenteshin ba. EMB ba ya bambanta Salmonella da Shigella ko da sauran marasa fermenteshin; wannan bambantawar aikin gwaje-gwajen da za su biyo baya ne. Haka kuma, an rubuta samun nau'ikan Salmonella masu iya fermenteshin lactose da koloni masu ƙyallin ƙarfe irin na E. coli, wanda yake ƙara nuna dalilin da ya sa faranti guda ba zai iya yanke hukunci na ƙarshe ba.

Faranti 4: Serratia marcescens da tarkon haɗin sinadaran

Serratia marcescens ya cancanci sashe na kansa domin ɗalibai sukan yi tsammanin koloni ja sannan su fassara farantin ba daidai ba. Yawancin samfuran da aka ware daga gwaje-gwajen asibiti ba sa yin fermenteshin lactose, don haka a Levine EMB sukan bayyana da launi mai haske ko mai rauni. Saboda samfura da yawa suna yin fermenteshin sucrose, haɗin sinadaran da yake ɗauke da sucrose na iya nuna launi mafi duhu ko martani da ya fi alaƙa da asid. Kada kuma a yi tsammanin sanannen jan launin prodigiosin a 35 zuwa 37 C; samar da wannan launi ba abin dogaro ba ne a zafin na'urar reno. Idan tsarin aiki ya ambaci Serratia marcescens a agar EMB, duba wane haɗin sinadaran maganar ta ɗauka ana amfani da shi. Wani bita kan sarrafa sinadarai a Serratia yana taƙaita tsarin rashin fermenteshin lactose da bambancin fermenteshin sucrose da ke haifar da wannan tarko.

Faranti 5: samfuran kwatanci da ƙwayoyin cuta da aka hana girma

Ƙwayoyin cuta masu Gram positive kamar Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, da Bacillus gabaɗaya ana hana su girma ko a rage girman su sosai a agar EMB, ko da yake wannan hanawar ba cikakkiya ba ce ga kowane nau'i. Tarin samfuran kwatanci yana tabbatar da sahihancin karantawa: samfurin kwatanci na E. coli ya kamata ya nuna girma mai kyau da launin shuɗi-baƙi da ƙyalli, samfurin kwatanci marar fermenteshin ya kamata ya nuna girma marar launi, kuma samfurin kwatanci na hana girma ya kamata ya nuna girma kaɗan ko babu girma. Idan samfurin kwatanci na hana girma ya girma da kyau, matakin zaɓe ya gaza kuma duk wani karantawa a wannan rukunin faranti abin shakka ne. Hanyoyin rini suna amsa tambaya dabam da matsakaican renon ƙwayoyin cuta; domin ɓangaren yin rini a faifan gilashi na ɗakin gwaje-gwaje, duba kundin hotunan rini da methylene blue.

Kwatanci mai iyaka

Jumloli uku suna taƙaita kamannin da ke ruɗarwa. Duhu ba ya nufin E. coli, domin Klebsiella, Enterobacter, da sauran masu fermenteshin suna samar da tsakiya mai duhu ba tare da ƙyalli ba. Ruwan hoda ba ya nufin Klebsiella, domin masu fermenteshin matsakaici ko a hankali da wasu da ake ɗauka marasa fermenteshin suna bayyana da ruwan hoda ko shunayya mai haske. Ƙyalli ba ya nufin an tabbatar da E. coli, domin sauran masu fermenteshin da ƙarfi suna iya samar da shi. Tsarin koyarwar da hotunansa na renon gaurayen ƙwayoyin cuta suna nuna kowane ɗayan waɗannan gazawar.

Iyakokin tabbatarwa

Agar EMB yana nuna siffar da ta bayyana, ba jinsi ba. Ƙwayoyin cuta daban-daban na iya nuna kamannin koloni iri ɗaya, kuma ƙwayar cuta ɗaya na iya kauce wa hotonta na littafin koyarwa saboda nau'inta, shekarunta, cunkoso, haɗin sinadaran, da yanayin reno. Shi ya sa tsarin aikin koyarwa da na asibiti suke ɗaukar siffar EMB a matsayin alamar zato kawai.

Tsarin aikin ɗalibi da za a iya kare sahihancinsa shi ne: bayyana kolonin da ya rabu da sauran (girma, launi, tsakiya, ƙyalli a hasken gefe, santsi kamar majina), rubuta haɗin sinadaran, lokacin reno da zafinsa, da samfuran kwatanci; sannan sake renon koloni da ya rabu sosai da sauran har a samu tsantsar reno kafin kowane gwajin tabbatarwa. Abubuwan da aka saba yi daga baya sun haɗa da rinin Gram da gwaje-gwajen IMViC domin gano yiwuwar E. coli da ƙwayoyin coliform, TSI ko KIA da tarin gwaje-gwajen halittar sinadarai na takamaiman ƙwayoyin cuta na hanji, tare da gwaje-gwajen seroloji, MALDI TOF, ko wasu hanyoyin ganewa da aka tabbatar da ingancinsu idan aikin ya buƙaci hakan. Domin ƙarin bayani kan matsayin EMB a cikin matsakaican renon ƙwayoyin cuta na hanji masu zaɓe da bambantawa, duba bayanan gabatarwa kan renon ƙwayoyin cuta na hanji da gwaje-gwajen da ke biyo bayan rinin Gram. Game da tambayar abin da shuɗin rini a faifan gilashi zai iya tabbatarwa da wanda ba zai iya ba, kundin hotunan rini da methylene blue yana raba abin da aka gani da hukuncin da aka yanke bisa wannan manufa.

Rubuta abin da aka gani kafin hukunci. "Koloni shuɗi-baƙi masu duhu da koren ƙyalli da ya danganta da kusurwar kallo a Levine EMB bayan 24 hours, wanda ya dace da fermenteshin lactose mai ƙarfi" bayani ne da za a iya kare sahihancinsa. "E. coli, an tabbatar" yana buƙatar matakin tabbatarwa wanda farantin shi kaɗai ba zai iya bayarwa ba.