મિથિલીન બ્લુ અને મલ્ટિપલ સ્ક્લેરોસિસ: પ્રાણી સંશોધનમાં શું તપાસવામાં આવ્યું

MS માટે મિથિલીન બ્લુ શોધો તો એવા સંશોધનપત્રો મળે છે જે જાણે એક જ પ્રશ્નનો જવાબ આપતા હોય. હકીકતમાં એવું નથી. એક સંશોધનપત્રમાં બીમાર ઉંદરોને સારવાર તરીકે મિથિલીન બ્લુ આપવામાં આવ્યું હતું. બીજામાં કોઈ પણ પ્રાણીને તેનાથી સારવાર આપવામાં આવી જ નહોતી. તેમાં કરોડરજ્જુના પાતળા કાપ પર વાદળી રંજક તરીકે મિથિલીન બ્લુ વપરાયું હતું, જેથી પેથોલોજિસ્ટ માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ માયેલિન જોઈ શકે.

આ સમગ્ર લેખનો મુખ્ય વિચાર છે. જીવવિજ્ઞાનમાં આ રંજકની બે ભૂમિકાઓ છે, અને બોટલ સિવાય તેમની વચ્ચે કંઈ સામાન્ય નથી. સંભવિત દવા તરીકે તેને જીવંત પ્રાણીને આપવામાં આવે છે અને પ્રશ્ન એ હોય છે કે રોગમાં ફેરફાર થાય છે કે નહીં. રંજક તરીકે તેને પ્રયોગ પછી મૃત, સ્થિરીકૃત પેશી પર લગાવવામાં આવે છે અને પ્રશ્ન એ હોય છે કે પેશી કેવી દેખાતી હતી. જો આ ભેદ ધ્યાનમાં ન લો, તો તમે પેથોલોજીની પદ્ધતિઓના વિભાગને સારવારનું પરિણામ સમજીને વાંચશો.

સરળ શબ્દોમાં EAE શું છે

એક્સપેરિમેન્ટલ ઑટોઇમ્યૂન એન્સેફાલોમાયેલાઇટિસ, જેને સામાન્ય રીતે ટૂંકમાં EAE કહે છે, તે મલ્ટિપલ સ્ક્લેરોસિસના કેટલાક પાસાં માટેનું પ્રમાણભૂત પ્રાણી મોડેલ છે. સંશોધક સંવેદનશીલ ઉંદરને માયેલિન પ્રોટીનનો એક અંશ અને શક્તિશાળી એડજ્યુવન્ટ આપીને રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા પ્રેરે છે. ત્યારબાદ રોગપ્રતિકારક તંત્ર પ્રાણીની પોતાની કેન્દ્રીય ચેતાતંત્ર પ્રણાલી પર હુમલો કરે છે. ઉંદરમાં નીચેથી ઉપર તરફ વધતી નબળાઈ વિકસે છે, જેને ઢીલી પૂંછડીથી લઈને પાછળના અંગોના લકવા સુધી 0 થી 5ના માપક્રમ પર સરળતાથી ગુણ આપી શકાય છે.

ગુણાંકન કરવાની આ સગવડ સમજાવે છે કે EAE શા માટે લોકપ્રિય છે અને શા માટે તે ગેરમાર્ગે પણ દોરી શકે છે. માનવોમાં MS આપમેળે ઉદ્ભવે છે, તેમાં વધુ વ્યાપક અને ઓછી સ્પષ્ટ રીતે વ્યાખ્યાયિત લક્ષ્યો સામેલ હોય છે, અને તે પુનરાવર્તિત કે પ્રગતિશીલ રોગક્રમમાં દૃષ્ટિ, સંવેદના, જ્ઞાનાત્મક કાર્ય, લઘુમસ્તિષ્ક અને હલનચલન સંબંધિત લક્ષણો પેદા કરે છે. EAE નિયંત્રિત પરિસ્થિતિઓમાં સોજો, ડિમાયેલિનેશન અને અક્ષતંતુની ઇજા જેવી પસંદ કરેલી પ્રક્રિયાઓનું પુનરુત્પાદન કરે છે. તે MSનું નાનું સ્વરૂપ પુનઃસર્જિત કરતું નથી. સામાન્ય માળખું સમજવા ઇચ્છતા વાચકો કોઈ એક રોગ અંગેના દાવાનું મૂલ્યાંકન કરતાં પહેલાં મિથિલીન બ્લુ કોષીય સ્તરે કેવી રીતે કાર્ય કરે છે એવું માનવામાં આવે છે તેની સમીક્ષા કરી શકે છે.

નીચેના બે સંશોધનપત્રોમાં EAE માટે જુદા એન્ટિજન પણ વપરાયા હતા, અને તે મહત્વનું છે. સારવાર અભ્યાસમાં માયેલિન ઓલિગોડેન્ડ્રોસાઇટ ગ્લાયકોપ્રોટીનમાંથી મળતા ટૂંકા પેપ્ટાઇડ MOG35-55થી રોગ પ્રેરવામાં આવ્યો હતો. પેથોલોજી અભ્યાસમાં માયેલિન બેઝિક પ્રોટીન અને પ્રોટિયોલિપિડ પ્રોટીનના ભાગોના સંયોજન MP4થી રોગ પ્રેરવામાં આવ્યો હતો. ઉંદરની વંશરેખા અને એન્ટિજનની પસંદગીથી ઘા ક્યાં દેખાય છે અને સોજો કેવી રીતે વર્તે છે તે બદલાય છે, એટલે આ બે અભ્યાસો એક જ પ્રયોગનાં બે પુનરાવર્તનો નથી.

રૂપરેખા: મોડેલથી પ્રશ્ન અને પછી મર્યાદાઓ સુધી

આ કોષ્ટક સામે રાખો. તે આ લેખ માટેનો મૂળ સંદર્ભ છે. દરેક પંક્તિ જણાવે છે કે મોડેલ કયા ક્લિનિકલ પ્રશ્નને સંબોધી શકે છે, ખરેખર શું માપવામાં આવ્યું હતું અને તારણોને માનવો પર લાગુ કરવાની મર્યાદા ક્યાં આવે છે.

આગળની કોઈ સમાચાર શીર્ષક તપાસતી વ્યક્તિ પ્રીક્લિનિકલ અભ્યાસો કેવી રીતે વાંચવાની મદદથી આ જ કૉલમો ફરી વાપરી શકે છે: પ્રજાતિ અને એન્ટિજન કયાં હતાં, સંયોજનની ભૂમિકા શું હતી, પરિણામમાપો કયા હતાં અને પરિણામ રોગનો સમયક્રમ દર્શાવે છે કે પેશીની એક સમયબિંદુની સ્થિતિ, તે પૂછો.

સારવારનું પરિણામ: દવા આપવાથી શું બદલાયું

Journal of Neuroimmunologyમાં પ્રકાશિત 2016ના સારવાર અભ્યાસમાં આશરે 8 થી 10 અઠવાડિયાંની માદા C57BL/6 ઉંદરો વપરાઈ હતી, જેમને દરેક ઉંદર દીઠ 250 micrograms MOG35-55 આપીને રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા પ્રેરવામાં આવી હતી. રોગ પ્રેર્યા પછી EAE ધરાવતા પ્રાણીઓને યાદૃચ્છિક રીતે મિથિલીન બ્લુ જૂથ અથવા સારવાર વગરના EAE જૂથમાં વહેંચવામાં આવ્યા, અને લગભગ 30મા દિવસ સુધી ક્લિનિકલ ગુણાંકનું નિરીક્ષણ કરાયું.

15મા દિવસથી 30મા દિવસ સુધી સારવાર અપાયેલા ઉંદરોના ક્લિનિકલ ગુણાંક EAE નિયંત્રણ જૂથ કરતાં નોંધપાત્ર રીતે ઓછા હતા, જેમાં P 0.01 કરતાં ઓછું હતું. કરોડરજ્જુનું વિશ્લેષણ પણ એ જ દિશા દર્શાવતું હતું: સારવાર અપાયેલા પ્રાણીઓમાં સોજા સંબંધિત કોષીય ઘૂસણખોરી, ડિમાયેલિનેશન અને અક્ષતંતુનું નુકસાન ઓછું હતું.

વિશિષ્ટ ભાગ સંકેતપ્રક્રિયાઓનું પરીક્ષણ-સમૂહ હતો. સારવારથી AMPKની સક્રિયતા અને SIRT1ની અભિવ્યક્તિ વધી, અને સોજાની પ્રક્રિયાના મુખ્ય સ્વિચરૂપ NF-kBની સક્રિયતા દબાઈ. અનુકૂલિત રોગપ્રતિકારક તંત્રમાં તેણે Th17 પ્રતિક્રિયા ઘટાડી અને Treg પ્રતિક્રિયા મજબૂત કરી. તેથી સૂચવાયેલ કડી આ છે: મિથિલીન બ્લુથી AMPK અને SIRT1, ત્યારબાદ ઓછી NF-kB સંકેતપ્રક્રિયા, પછી સોજાકારક Th17થી નિયમનકારી Treg તરફ ફેરફાર, ત્યારબાદ પેશીની ઓછી ઇજા અને અંતે ઓછા ગુણાંક.

આ કડી એક અર્થઘટન છે, સાબિત થયેલો કારણ-પરિણામ ક્રમ નથી. અભ્યાસ દર્શાવે છે કે દવા, સંકેતોમાં ફેરફાર અને રોગમાં સુધારો એકસાથે જોવા મળ્યા હતા. તે સાબિત કરતો નથી કે સમગ્ર લાભ AMPK અને SIRT1 દ્વારા જ થાય છે, અને જાહેર રીતે સૂચિબદ્ધ લખાણમાં ચોક્કસ milligram per kilogram માત્રા, આપવાનો માર્ગ, શરૂઆતનો દિવસ અથવા સમયગાળો એટલી સ્પષ્ટતાથી આપવામાં આવ્યાં નથી કે માત્ર સારાંશ પરથી જ સારવારપદ્ધતિનું પુનરુત્પાદન કરી શકાય. વેચાણ પૃષ્ઠ પર આ સંશોધનપત્ર વિશે ટાંકવામાં આવેલી કોઈ પણ માત્રાને અચકાસેલી ગણો, સિવાય કે તે સંપૂર્ણ લખાણની પદ્ધતિઓનો સંદર્ભ આપે. આ પ્રારંભિક રોગપ્રતિકારક સંકેત આગળ જઈને ક્યારેય ક્લિનિકલ માહિતીમાં વિકસ્યો હતો કે નહીં તે તપાસવા માટે મિથિલીન બ્લુ અંગેનો વ્યાપક માનવ પુરાવાસંગ્રહ જોવો જોઈએ.

પેથોલોજીનું પરિણામ: છ મહિનાની પેશીએ શું દર્શાવ્યું

PLoS ONEમાં પ્રકાશિત 2015ના MP4 અભ્યાસમાં માદા C57BL/6 ઉંદરો વપરાઈ હતી. તેમને સંપૂર્ણ ફ્રોઇન્ડ એડજ્યુવન્ટમાં 200 micrograms MP4 આપીને રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા પ્રેરવામાં આવી હતી, અને તે જ દિવસે તેમજ ફરી 48 કલાક પછી પર્ટુસિસ ટોક્સિન આપવામાં આવ્યું હતું. કોઈ પણ પ્રાણીને દવા તરીકે મિથિલીન બ્લુ મળ્યું નહોતું. સ્થિરીકરણ અને એમ્બેડિંગ પછી પ્રકાશ માઇક્રોસ્કોપી માટે કરોડરજ્જુના એક micrometer જાડાઈના આડા કાપ મિથિલીન બ્લુથી રંગવામાં આવ્યા હતા; વધુ સૂક્ષ્મ વિગતો માટે વેન્ટ્રોલેટરલ ટ્રેક્ટની ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોસ્કોપી કરવામાં આવી હતી.

ત્રણ તબક્કે પેશીના નમૂના લેવાયા: તીવ્ર રોગની ચરમ અવસ્થાએ 7 ઉંદરોમાંથી, શરૂઆતના ત્રણ મહિના પછી 5 ઉંદરોમાંથી અને શરૂઆતના છ મહિના પછી 10 ઉંદરોમાંથી. આ તબક્કાઓના સરેરાશ ક્લિનિકલ ગુણાંક લગભગ સરખા દેખાતા હતા, 0 થી 5ના માપક્રમ પર લગભગ 1.7 થી 1.8. પેશી અલગ વાત દર્શાવતી હતી. માત્ર માયેલિનને થયેલું નુકસાન તીવ્ર રોગની ચરમ અવસ્થાએ લગભગ 569,000 તંતુ પ્રતિ square millimeterથી વધીને છ મહિને લગભગ 1,496,000 થયું હતું; તીવ્ર અવસ્થા અને લાંબા ગાળાની સરખામણીમાં P 0.027 જેટલું હોવાથી તફાવત નોંધપાત્ર હતો. માયેલિન અને અક્ષતંતુનું સંયુક્ત નુકસાન છ મહિના સુધીમાં લગભગ બમણું થયું. ફરી માયેલિન બનતું હોય એવા તંતુઓ દરેક તબક્કે એક ટકાથી ઓછા રહ્યા, જે સમારકામની આશાઓ માટે ગંભીરતાથી વિચારવા જેવી વિગત છે.

અક્ષતંતુની ઇજાએ U આકારની પેટર્ન અનુસરી: તીવ્ર રોગની ચરમ અવસ્થાએ વધુ, ત્રણ મહિને ઓછી અને છ મહિને સૌથી વધુ. તેનો સંબંધ માઇટોકોન્ડ્રિયાના સોજા અને ન્યુરોફિલામેન્ટ વચ્ચેના ઘટેલા અંતર સાથે હતો. મૂલ્યાંકન કરતી વ્યક્તિને ગુણાંક અને તબક્કાની જાણ નહોતી, જે એ અર્થઘટનને મજબૂત બનાવે છે કે ક્લિનિકલ ગુણાંક ચાલુ માળખાકીય નુકસાનને ઓછું દર્શાવતા હતા.

MS વિશે વાંચતા વાચક માટે આ અસંગતિ અભ્યાસનું સાચું યોગદાન છે. અક્ષમતાનો ગુણાંક સ્થિર હોવાનો અર્થ પેશી સ્થિર હતી એવો નહોતો. તે એ પણ દર્શાવે છે કે આ સંશોધનપત્ર મિથિલીન બ્લુ અને MSની સારવાર અંગેના કોઈ દાવાને સમર્થન કેમ આપી શકતો નથી. તેમાં સમયની અસર તપાસવામાં આવી હતી, સારવારની નહીં.

શા માટે કોઈ પણ અભ્યાસ દર્દીઓમાં લાભ સ્થાપિત કરતો નથી

દરેક સંશોધનપત્રને એવું સમજો કે તે એક સંકુચિત પ્રશ્નનો સારો જવાબ આપે છે, પરંતુ દર્દીઓ સંબંધિત પ્રશ્નનો બિલકુલ જવાબ આપતો નથી.

પ્રથમ, કારણ અલગ છે. નિર્ધારિત એન્ટિજન અને એડજ્યુવન્ટથી EAE ઇરાદાપૂર્વક પ્રેરવામાં આવે છે. માનવોમાં MS આપમેળે વિકસે છે, જેમાં T કોષો, B કોષો, જન્મજાત રોગપ્રતિકારક તંત્ર અને સ્થાનિક ગ્લિયા સહિતની વધુ વ્યાપક રોગપ્રતિકારક પ્રણાલી સામેલ હોય છે. ઉંદરમાં MOG તરફ ઝુકેલી પ્રતિક્રિયા બદલતું સંયોજન માનવની આ વધુ વ્યાપક પ્રતિક્રિયાને પણ બદલે એવું જરૂરી નથી.

બીજું, પ્રગટ સ્વરૂપ અલગ છે. ઉંદરમાં પૂંછડીથી પાછળના અંગો તરફ વધતી નબળાઈ માપવાનું અનુકૂળ સૂચક છે. તે માનવ MSની વિવિધતાને હલનચલન સંબંધિત એક જ આંકડામાં સમાવી દે છે. દવાઓ ઘણી વાર માનવોના રોગક્રમને બદલ્યા વગર ટૂંકા ગાળાના EAE ગુણાંક બદલે છે; તેથી EAE પ્રાથમિક તપાસ અને પ્રક્રિયા સમજવાનું સાધન છે, નાનકડું ક્લિનિક નહીં.

ત્રીજું, દવાના સંપર્ક અને સમય અંગેના પ્રશ્નો હજી ઉકેલાયા નથી. ઉંદરના 30 દિવસના પ્રયોગમાં શરૂઆતથી સતત દવા આપવી એ પહેલેથી રોગ ધરાવતી વ્યક્તિમાં લાંબા ગાળાનો મૌખિક ઉપયોગ નથી, અને કોઈ પણ અભ્યાસે ચેતાતંત્રમાં દવાના સ્તર માપ્યાં નહોતાં. આ કડી વિના પ્રયોગશાળાની પ્લેટ પરની સાંદ્રતા કે ઉંદરમાં આપેલી માત્રાથી માનવ સારવારપદ્ધતિ સુધી પહોંચવાનો કોઈ આધાર નથી.

ચોથું, બંને સંશોધનપત્રો એકબીજાનું પુનરુત્પાદન કરતા નથી. જુદા એન્ટિજન, જુદા પ્રશ્નો, જુદા પરિણામમાપો અને એક કિસ્સામાં તો સારવાર જ નહીં. તેમને MSની સારવાર અંગેના બે સકારાત્મક અભ્યાસ તરીકે એકસાથે ટાંકવું એ શ્રેણીગત ભૂલ છે.

પુરાવાનું મૂલ્યાંકન કરતા વાચકો માટે તેનો અર્થ

આ સંશોધનપત્રોમાં MS માટે મિથિલીન બ્લુનો કોઈ સ્થાપિત પ્રોટોકોલ નથી. સારવાર અભ્યાસ MOG EAEમાં AMPK, SIRT1, NF-kB અને Th17થી Tregના સંતુલન અંગે વધુ સંશોધનને સમર્થન આપે છે. પેથોલોજી અભ્યાસ યાદ અપાવે છે કે ગુણાંક સ્થિર દેખાતા હોય ત્યારે પણ પેશીની ઇજા વધી શકે છે, અને પદ્ધતિઓના વિભાગમાં મિથિલીન બ્લુનો અર્થ ક્યારેક દવાના કબાટને બદલે રંજકની બરણી હોય છે. ચાલુ મલ્ટિપલ સ્ક્લેરોસિસ સંશોધનને અનુસરતા વાચકોએ રંજક અને દવા વચ્ચેનો આ ભેદ ધ્યાનમાં રાખવો જોઈએ. પ્રયોગશાળાના સમાચાર શીર્ષકો પરથી કોઈ પગલું લે તે પહેલાં, લોહી અને પરસ્પર ક્રિયાઓના જોખમો સહિત સુરક્ષાના પ્રશ્નો અંગે મિથિલીન બ્લુની સામાન્ય સુરક્ષા માહિતી સાથે ચિકિત્સક સાથે ચર્ચા થવી જોઈએ.

સાર એક વાક્યમાં સમાવી શકાય છે. ટાંકવામાં આવેલા એક અભ્યાસે MOG EAE ધરાવતા ઉંદરોને મિથિલીન બ્લુ આપ્યું અને સોજો ઘટાડવાની દિશામાં રોગપ્રતિકારક ફેરફાર સાથે રોગની ઓછી તીવ્રતા નોંધાવી, જ્યારે બીજા અભ્યાસે કોઈ દવા આપી નહોતી અને છ મહિના દરમિયાન વધતા માયેલિન તથા અક્ષતંતુના નુકસાનનું દસ્તાવેજીકરણ કરતી વખતે મિથિલીન બ્લુનો ઉપયોગ માત્ર કરોડરજ્જુને રંગવા માટે કર્યો હતો; તેથી આ બે અભ્યાસો મિથિલીન બ્લુ માનવ MSમાં મદદ કરે છે એવું સ્થાપિત કરતા નથી.