મગજની ઈજા માટે મેથિલિન બ્લુ: પ્રાક્લિનિકલ પુરાવાને સમજવા

માથા પરનો પ્રહાર, અવરોધાયેલી ધમની અને ધીમે વિકસતો ચેતાતંત્રનો ક્ષયકારી રોગ—આ બધાનું અંતિમ પરિણામ એક જ ફરિયાદ હોઈ શકે છે: મગજ પાસે પોતાનું કામ કરવા માટે જરૂરી ઊર્જા હવે નથી. આ સમાન અંતિમ પરિણામને કારણે જ એક સંયોજન આ ત્રણેય ક્ષેત્રોના સાહિત્યમાં વારંવાર જોવા મળે છે. પરંતુ સમાન અંતિમ પરિણામનો અર્થ સમાન ખ્યાલ નથી. ઈજા પહેલાં અપાયેલી સારવાર, ઈજા પછીના એક કલાકમાં અપાયેલી સારવાર અને જેના પરિણામો મહિનાઓ પછી માપવામાં આવે એવી સારવાર જુદા વિચારોની કસોટી કરે છે, ભલે સિરીંજમાં એક જ વાદળી પ્રવાહી હોય.

આ લેખ તે સાહિત્યના ઈજાને લગતા ભાગ પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરે છે. તે પ્રાણીઓના પ્રયોગોમાં મગજની ઈજા માટે મેથિલિન બ્લુનો અર્થ શું છે તેની સમીક્ષા કરે છે, આઘાતજન્ય ઈજાને સ્ટ્રોક અને દીર્ઘકાલીન ચેતાતંત્રના ક્ષયથી અલગ પાડે છે, અને દર્શાવે છે કે ડોઝ આપવાનો સમય અભ્યાસો વચ્ચેના મોટા ભાગના તફાવતોને કેમ સમજાવે છે.

ત્રણ પ્રકારની ઈજા, ઊર્જાની એક જ નિષ્ફળતા

આ મોડેલોને જોડતી કાર્યપદ્ધતિ માઇટોકોન્ડ્રિયાની અંદર છે. સામાન્ય રીતે, ATP ઉત્પન્ન કરવા માટે ઇલેક્ટ્રૉન ઇલેક્ટ્રૉન પરિવહન શૃંખલામાંથી આગળ વધે છે, અને સ્વસ્થ શૃંખલા પ્રતિક્રિયાશીલ ઑક્સિજન પ્રજાતિઓને નિયંત્રણમાં રાખે છે. ઈજા પછી શૃંખલાના કેટલાક ભાગો ખોરવાય છે, ATPનું ઉત્પાદન ઘટે છે અને મુક્ત રેડિકલનું ઉત્પાદન વધે છે. 2018ની Molecular Neurobiology સમીક્ષા મેથિલિન બ્લુને વૈકલ્પિક ઇલેક્ટ્રૉન વાહક તરીકે વર્ણવે છે: તે NADHમાંથી ઇલેક્ટ્રૉન સ્વીકારે છે અને તેમને સાયટોક્રોમ c સુધી પહોંચાડે છે, જે કોમ્પ્લેક્સ IVની પ્રવૃત્તિ વધારે છે અને શૃંખલાનો શરૂઆતનો ભાગ ક્ષતિગ્રસ્ત હોય ત્યારે પણ ATPનું સંશ્લેષણ પુનઃસ્થાપિત કરે છે.

નોંધાયેલા આંકડા ચોક્કસ છે. કોષો અને પેશીના પાતળા કાપની પ્રયોગાત્મક તૈયારીઓમાં કોમ્પ્લેક્સ IVની પ્રવૃત્તિ 30થી 100 ટકા વધી હતી, અને ઑક્સિજનનો વપરાશ પણ તે પ્રમાણે વધ્યો હતો. આ સૂચવે છે કે વધારાના ઇલેક્ટ્રૉન રેડિકલ તરીકે લીક થવાને બદલે ઉપયોગી કામ કરતા હતા. ઉંદરોના સ્ટ્રોક મોડેલમાં, સારવારના 24 કલાક પછી અસરગ્રસ્ત વિસ્તારમાં ATPનું ઉત્પાદન સારવાર ન અપાયેલા પ્રાણીઓ કરતાં લગભગ 30 ટકા વધુ હતું. 2022ની Biochemistry (Moscow) સમીક્ષા તેના અનુગામી પરિણામો પણ ઉમેરે છે: ઓછો ઑક્સિડેટિવ તણાવ, ઓછી ચેતાતંત્રની બળતરા, ઓછું એપોપ્ટોસિસ, તેમજ મોનોઅમાઇન ઑક્સિડેઝ, નાઇટ્રિક ઑક્સાઇડ સિન્થેઝ, માઇટોકોન્ડ્રિયાનું નવસર્જન, ઑટોફેજી અને ખોટી રીતે વળેલા પ્રોટીનના એકત્રીકરણ પર અસરો.

એટલે ખ્યાલ સરળ છે. ઈજા ઇલેક્ટ્રૉનના સામાન્ય માર્ગને અવરોધે છે, અને મેથિલિન બ્લુ વૈકલ્પિક માર્ગ આપે છે. ત્યાર પછીની દરેક બાબત કઈ ઈજા છે, ક્યારે આપવામાં આવ્યું છે અને કેવી રીતે માપવામાં આવ્યું છે તેના પર આધારિત છે.

આઘાતજન્ય ઈજા એ સ્ટ્રોક નથી

મગજની આઘાતજન્ય ઈજાના મોડેલમાં બળ એકસાથે લાગે છે. પ્રાથમિક નુકસાન યાંત્રિક હોય છે: પેશીઓ ફાટે છે, રક્તવાહિનીઓ તૂટે છે અને થોડી મિનિટોમાં રક્ત-મગજ અવરોધ ખુલ્લો થઈ જાય છે. મેથિલિન બ્લુ સંભવતઃ પછી કલાકો અને દિવસો દરમિયાન આવતી ગૌણ અસરને પ્રભાવિત કરી શકે છે, જ્યારે બચેલી પેશીઓના માઇટોકોન્ડ્રિયા નિષ્ફળ થવા લાગે છે, બળતરા ફેલાય છે અને સોજો વધે છે. આ અભ્યાસોમાં માપવામાં આવતા પરિણામો એ જ ક્રમ દર્શાવે છે: ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તારનું ઘનફળ, મગજમાં પાણીનું પ્રમાણ, પ્રહારની નજીક ચેતાકોષોનું અસ્તિત્વ, અને પછીની વર્તણૂક, જેમ કે હલનચલનની પુનઃપ્રાપ્તિ અથવા ભૂલભુલામણીમાં માર્ગ શોધવાનું શીખવું.

સ્ટ્રોક અથવા સમગ્ર મગજના ઇસ્કીમિયા મોડેલમાં નુકસાનની પ્રક્રિયા તેનાથી વિપરીત હોય છે. રક્તપ્રવાહ અટકે છે, થોડી મિનિટોમાં ઊર્જાની નિષ્ફળતા થાય છે અને પ્રવાહ ફરી શરૂ થવાથી પોતાની અલગ પુનઃરક્તપ્રવાહજન્ય ઈજા થાય છે. અહીં ડોઝ આપવાનો સમય રક્તવાહિનીની ઘટના સાથે જોડાયેલો હોય છે, ઘણી વાર અવરોધ અથવા પુનઃરક્તપ્રવાહની થોડી મિનિટોમાં. માપવામાં આવતા પરિણામો કલાકોથી લઈને એક કે બે દિવસમાં પેશીઓની તાત્કાલિક સ્થિતિનું પરિમાણ આપે છે: ઇન્ફાર્ક્ટનું કદ, રક્તપ્રવાહ અને શરૂઆતની કાર્યાત્મક પુનઃપ્રાપ્તિ. સ્ટ્રોક અંગેના સાહિત્યમાં એક પદ્ધતિ પૂર્વસારવારની છે—પ્રાણીઓને રક્તવાહિની અવરોધાય તે પહેલાં ડોઝ આપવામાં આવે છે. તે નિવારણની એવી કસોટી કરે છે જેનું માનવોમાં નૈતિક રીતે અનુકરણ માથાની ઈજાનો કોઈ પ્રયોગ કરી શકતો નથી.

ઈજાને લગતા સાહિત્યમાં સ્ટ્રોકના પરિણામો સૌથી મજબૂત છે, અને તેમાં લાભ ન જોવા મળ્યો હોય એવું સૌથી સ્પષ્ટ પરિણામ પણ સામેલ છે. મધ્ય મસ્તિષ્ક ધમની એક કલાક સુધી અવરોધાયેલી રહ્યા પછી પુનઃરક્તપ્રવાહના સમયે મેથિલિન બ્લુ અપાયેલા ઉંદરોમાં, દિવસ 2 પર ઇન્ફાર્ક્ટ 30 ટકા નાના હતા, અને જોખમમાં રહેલા કેન્દ્રિય વિસ્તાર તથા તેની આસપાસના પેનમ્બ્રાનો વધુ ભાગ બચ્યો હતો (Shen, 2013). કાયમી અવરોધના એક અભ્યાસમાં જોખમમાં રહેલી પેશીઓનું ઇન્ફાર્ક્ટમાં રૂપાંતર ધીમું પડ્યું હતું, પરંતુ તપાસાયેલા બેમાંથી કોઈ પણ ડોઝ પર 24 કલાકે ઇન્ફાર્ક્ટના અંતિમ ઘનફળમાં ઘટાડો થયો નહોતો (Rodriguez, 2014). અવરોધના ત્રીજા અભ્યાસમાં મધ્યમ ડોઝે ઇન્ફાર્ક્ટનું કદ લગભગ અડધું થયું હતું અને ઇસ્કીમિયાગ્રસ્ત મગજમાં માઇટોકોન્ડ્રિયાની અતિસૂક્ષ્મ રચના તથા મિટોફેજીનું સીધું દસ્તાવેજીકરણ થયું હતું. સાથે અપેક્ષાથી વિપરીત એવી વિગત પણ નોંધાઈ હતી કે નેક્રોસિસ ઘટતાં માપવામાં આવેલું એપોપ્ટોસિસ વધ્યું હતું (Di, 2015). અને સમગ્ર મગજના ઇસ્કીમિયામાં, ઓછા ડોઝનું સતત ઇન્ફ્યુઝન આપવાથી સંવેદનશીલ હિપ્પોકેમ્પસના CA1 વિસ્તારમાં સાયટોક્રોમ c ઑક્સિડેઝની પ્રવૃત્તિ, ATPનું સ્તર અને માઇટોકોન્ડ્રિયાના પટલનો વિદ્યુતવિભવ પુનઃસ્થાપિત થયો હતો, ત્યાંના ચેતાકોષો જળવાયા હતા અને અવકાશીય સ્મૃતિનું રક્ષણ થયું હતું (Lu, 2016). CA1નું આ માપન થોડું રોકાઈને વિચારવા જેવું છે: ઈજાગ્રસ્ત મગજની અંદરથી મળેલા ATP અને શ્વસન શૃંખલાના સીધા આંકડા, જે TBI અંગેના સાહિત્યમાં મોટા ભાગે માપવાને બદલે અનુમાનવામાં આવે છે.

દીર્ઘકાલીન ચેતાતંત્રનો ક્ષય આ બંનેથી અલગ છે. અલ્ઝાઇમર, પાર્કિન્સન અને હન્ટિંગ્ટન રોગના મોડેલોમાં પ્રાણીઓને અઠવાડિયાં અથવા મહિનાઓ સુધી ડોઝ આપવામાં આવે છે અને પ્રોટીનનું એકત્રીકરણ, ડોપામાઇનની પ્રક્રિયા અથવા ધીમે થતો જ્ઞાનાત્મક ઘટાડો માપવામાં આવે છે. પ્રહારના દિવસો પછી માપવામાં આવેલા ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તાર સાથે આ પરિણામોને લગભગ કંઈ જ લેવાદેવા નથી. એક કૉલમનું પરિણામ બીજી કૉલમમાં લાગુ પાડતા વાચકો એવા તારણને એવી સીમા પાર લઈ જાય છે જેને પ્રયોગોએ ક્યારેય પાર કરી જ નથી. ચેતાતંત્રના ક્ષય અંગેના સાહિત્ય માટેની અમારી માર્ગદર્શિકા લાંબી સમયરેખાવાળા તે અભ્યાસોને તેમના પોતાના સંદર્ભમાં રાખે છે, અને માત્ર સ્ટ્રોકને લગતા પુરાવા સાથેની સરખામણી રક્તવાહિનીના અવરોધવાળી પ્રયોગરચનાઓને પ્રહારવાળી પ્રયોગરચનાઓથી વિગતવાર અલગ પાડે છે.

TBI મોડેલોએ ખરેખર શું કર્યું

મગજની આઘાતજન્ય ઈજામાં મેથિલિન બ્લુનો કોઈ માનવ પરીક્ષણ અભ્યાસ પ્રકાશિત થયો નથી. TBIનો આખો પુરાવાસંગ્રહ પ્રાણીઓ પરના સંશોધનનો છે, મુખ્યત્વે ઉંદરો અને નાના ઉંદરો પરનો. તે થોડાક પ્રયોગોની આસપાસ કેન્દ્રિત છે, જેમનો ઉલ્લેખ કરવો જરૂરી છે, કારણ કે તેમની વિગતો એવી રીતે અલગ પડે છે જેને સારાંશો ભૂંસી નાખે છે.

નિયંત્રિત કોર્ટેક્સ પ્રહારના સૌથી પ્રારંભિક અભ્યાસમાં હળવા પ્રહારના એક કલાક પછી ઉંદરોને નસ મારફતે 1 mg/kg અને પછી ત્રણ કલાકે 0.5 mg/kg આપવામાં આવ્યું હતું (Watts, 2014). બે અઠવાડિયાંના અનુસરણ દરમિયાન સારવાર અપાયેલા પ્રાણીઓમાં MRI પર ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તારનું ઘનફળ ઓછું જ રહ્યું હતું. ચાલવાની કસોટીમાં પગ મૂકવાની ભૂલો દિવસ 1, 2 અને 7 પર નોંધપાત્ર રીતે ઘટી હતી, પરંતુ દિવસ 14 પર નહીં. દિવસ 14 પર સૂક્ષ્મદર્શક હેઠળ ઈજાગ્રસ્ત કોર્ટેક્સમાં ક્ષય પામતા ચેતાકોષોની ગણતરી પ્રતિ દૃશ્યક્ષેત્ર 270 સામે 368 હતી, અને અસામાન્ય નિસલ સ્ટેઇનિંગની ગણતરી 41 સામે 73 હતી. બીજા શબ્દોમાં, શરૂઆતમાં રક્ષણ જોવા મળ્યું, પરંતુ બીજા અઠવાડિયા સુધીમાં વર્તણૂકનો લાભ ઘટતો ગયો.

ફેલાયેલી ઈજાની એક પ્રયોગરચનામાં નાના ઉંદરોમાં મધ્યરેખા પર પ્રવાહીના દબાણનો આઘાત આપવામાં આવ્યો હતો અને અડધા કલાકની અંદર નસ મારફતે 2 mg/kgનો એક જ ડોઝ અપાયો હતો (Fenn, 2015). સારવાર અપાયેલા પ્રાણીઓમાં બળતરાસંબંધિત જનીનોની અભિવ્યક્તિ ઓછી સક્રિય હતી, બળતરાસંબંધિત માઇક્રોગ્લિયા ઓછા હતા, દેખીતો સોજો ઓછો હતો અને દિવસ 7 પર અવસાદ જેવી વર્તણૂક નહોતી. લાભ ન જોવા મળેલા પરિણામો પણ એટલાં જ મહત્ત્વના છે: ઈજાએ પોતે મગજમાં પાણીનું પ્રમાણ માત્ર થોડું જ વધાર્યું હતું, અને મેથિલિન બ્લુ શરીરના વજનમાં ઘટાડો કે હલનચલનના સંકલનની ખામી અટકાવી શક્યું નહોતું. બળતરા ઓછી કરવી એ સંપૂર્ણ રક્ષણ આપવા સમાન નથી.

નાના ઉંદરોના બે અભ્યાસોએ એક જ સમયપત્રક વાપર્યું—એક કલાકે 1 mg/kg, છ કલાકે 0.5 mg/kg અને પછી ત્રણ દિવસ સુધી રોજ ડોઝ—અને કાર્યપદ્ધતિની સમજને આગળ વધારી. કોર્ટેક્સ પ્રહારના મોડેલમાં સારવારથી 24 કલાકે, 72 કલાકે અને દિવસ 14 પર ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તારનું ઘનફળ ઘટ્યું હતું, સાથે ચેતાકોષો જળવાયા હતા અને ઑટોફેજીના સૂચકો વધ્યા હતા (Zhao, 2016). પ્રવાહીના દબાણના આઘાતવાળા મોડેલમાં તેણે ચેતાકોષોનું એપોપ્ટોસિસ ઘટાડ્યું હતું, લીક થતા રક્ત-મગજ અવરોધને વધુ અખંડ બનાવ્યો હતો અને બે અઠવાડિયાં દરમિયાન ન્યુરોલોજિકલ સ્કોરમાં સુધારો કર્યો હતો (Shen, 2019). જોકે, Zhaoના અભ્યાસમાં 72 કલાક સુધીમાં મગજના પાણીના પ્રમાણમાં કોઈ તફાવત જોવા મળ્યો નહોતો, અને Shenના અભ્યાસમાં દિવસ 1 અને 3 પર રોટારોડ કસોટીના પ્રદર્શનમાં કોઈ તફાવત નહોતો. ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તાર અને કોષોના અસ્તિત્વસંબંધિત પરિણામોમાં ફેરફાર થયો; સોજો અને શરૂઆતના હલનચલનસંબંધિત પરિણામો હંમેશાં તેની સાથે બદલાયા નહીં.

સમયની દૃષ્ટિએ ખાસ ધ્યાન ખેંચતો પ્રયોગ મોડેથી ડોઝ આપવાનો હતો (Watts, 2016). એ જ પ્રહાર મોડેલનો ઉપયોગ કરીને પ્રથમ ડોઝ ઈજાના 24 કલાક પછી સુધી આપવામાં આવ્યો નહોતો. દિવસ 2 સુધીમાં મોડેથી સારવાર અપાયેલા જૂથમાં ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તારનો ઘટાડો શરૂઆતના કલાકોમાં સારવાર અપાયેલા પ્રાણીઓ જેટલો હતો, અને આ ઘટાડો દિવસ 7 અને 14 પર પણ જળવાયો હતો. વર્તણૂકસંબંધિત સંકેત નબળો હતો: મોડેથી સારવાર અપાયેલા જૂથમાં પગ મૂકવાની ભૂલોમાં સુધારો આંકડાકીય રીતે નોંધપાત્ર ન હતો, માત્ર વલણરૂપ હતો. એક પ્રયોગશાળા, એક મોડેલ, એક 24 કલાકની સમયમર્યાદા. આ ખરેખર એવો પુરાવો છે કે સમયમર્યાદા શરૂઆતના કલાકોથી આગળ સુધી વિસ્તરે છે, અને એ દાવા માટેનો આખો પુરાવો પણ આટલો જ છે. અન્યત્ર વપરાતા ‘વિલંબિત’ શબ્દની ગૂંચવણ ધ્યાનમાં રાખો: વિલંબિત ચેતારક્ષણને કેન્દ્રમાં રાખતા શીર્ષકવાળી રશિયન અભ્યાસશ્રેણીમાં 30 મિનિટે ડોઝ આપવામાં આવ્યો હતો, અને ત્યાં ‘વિલંબિત’નો અર્થ મોડેથી શરૂઆત નહીં, પરંતુ લાંબા સમય સુધી ટકતાં પરિણામો હતો.

ઉંદરોમાં સ્થાનિક ઈજાનો એક નાનો અભ્યાસ સમયનું ચિત્ર બીજી બાજુથી પૂરું કરે છે: ઈજાના તરત પહેલાં ડોઝ આપવાથી અને તેના 30 મિનિટ પછી ડોઝ આપવાથી, બંનેમાં અંગોની કાર્યક્ષમતાની ખામી ઓછી થઈ હતી (Stelmashook, 2019). પ્રયોગશાળામાં પૂર્વસારવાર ચોક્કસ એટલા માટે કામ કરે છે કે પ્રયોગશાળા ઈજાનો સમય નક્કી કરે છે.

અહીં ડોઝ બાબતે શિસ્ત મહત્ત્વની છે. સમીક્ષાઓ ઓછા ડોઝને માઇટોકોન્ડ્રિયાના શ્વસનને ઉત્તેજિત કરનારા અને ઊંચા ડોઝને અવરોધક તરીકે વર્ણવે છે—મેથિલિન બ્લુની ઔષધક્રિયામાં જોવા મળતો એ જ દ્વિચરણીય આકાર. એટલે પરિણામોનો અર્થ વધુ વાદળી દ્રવ્ય એટલે વધુ પુનઃપ્રાપ્તિ એવો કરી શકાય નહીં. દરેક અભ્યાસ વક્રના એક બિંદુની કસોટી કરે છે. ડોઝ-પ્રતિસાદની સમજૂતી વિવિધ મોડેલોમાં તે વક્રને અનુસરે છે, અને સલામતી તથા આડઅસરોની રૂપરેખા ઊંચા ડોઝ તેના બદલે શું કરે છે તે સમજાવે છે.

આ કોષ્ટકની પંક્તિઓની સરખામણી કરો: એક જ સંયોજન, ત્રણ જુદી સમયરેખાઓ. નિવારણ મધ્યની પંક્તિમાં આવે છે, તાત્કાલિક સારવાર પ્રથમ બેમાં અને વિલંબિત પરિણામો પ્રથમ તથા ત્રીજીમાં.

નિવારણ, તાત્કાલિક સારવાર, વિલંબિત પરિણામો

નિવારણનો દાવો સહેલાઈથી ગેરસમજ ઊભી કરે છે. ઇસ્કીમિયા મોડેલોમાં રક્તવાહિની અવરોધાય તે પહેલાં ડોઝ અપાયેલા પ્રાણીઓની સ્થિતિ વધુ સારી રહે છે, અને એ પરિણામ ક્યારેક એવી રીતે ટાંકવામાં આવે છે જાણે મેથિલિન બ્લુ કોઈ પણ મગજને ભવિષ્યના કોઈ પણ નુકસાનથી બચાવતું હોય. તે એવું કંઈ દર્શાવતું નથી. તે દર્શાવે છે કે વૈકલ્પિક ઇલેક્ટ્રૉન માર્ગ માટે તૈયાર કરાયેલા માઇટોકોન્ડ્રિયા પૂર્વનિર્ધારિત રક્તપ્રવાહના અભાવને વધુ સારી રીતે સહન કરે છે. કોઈ માથાની ઈજાનો સમય નક્કી કરતું નથી.

TBIના પુરાવા તાત્કાલિક સારવાર પર કેન્દ્રિત છે. પ્રહાર પછીના કલાકોમાં ડોઝ આપવાથી હજુ વિકસી રહેલી ગૌણ ઈજાની પ્રક્રિયાને લક્ષ્ય બનાવવામાં આવે છે: ઊર્જાની નિષ્ફળતા, ઑક્સિડેટિવ તણાવ, બળતરા અને સોજો. અહીં ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તાર અને સોજાના માપોમાં થતો સુધારો ખરેખર સારવારની અસર છે, પરંતુ તે એક પ્રક્રિયાની સારવાર છે, ફાટેલી પેશીઓને પૂર્વવત્ કરવાનું નથી.

વિલંબિત પરિણામો ત્રીજો ખ્યાલ છે. ઈજાના અઠવાડિયાં પછી માપવામાં આવતી વર્તણૂક, અથવા ક્ષયકારી મોડેલમાં મહિનાઓ પછી માપવામાં આવતી પ્રોટીનની પ્રક્રિયા, એ પ્રશ્નનો જવાબ આપે છે કે શરૂઆતનું રક્ષણ ટક્યું હતું કે ધીમી પ્રક્રિયાઓએ પોતાની દિશા બદલી હતી. 24 કલાકે નાનો ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તાર, 24 કલાક મોડેથી આપેલા ડોઝ પછી વર્તણૂકમાં આંકડાકીય રીતે નોંધપાત્ર ન હોય એવું વલણ, અને સતત ડોઝ આપ્યાના મહિનાઓ પછી ભૂલભુલામણીની કસોટીમાં સુધારો—આ ત્રણ જુદા દાવા છે, જેમના પુરાવાના માપદંડ પણ ત્રણ જુદા છે. હાલમાં માત્ર પ્રથમ દાવો જ એકથી વધુ વખત પોતાનો માપદંડ પાર કરે છે.

આ પુરાવા શું દર્શાવી શકતા નથી

ઉપરનાં દરેક પરિણામ સાથે એક જ મર્યાદા જોડાયેલી છે. ઉંદરવર્ગીય પ્રાણીઓના માઇટોકોન્ડ્રિયા મેથિલિન બ્લુને જે રીતે પ્રતિસાદ આપે છે તે માનવ માઇટોકોન્ડ્રિયામાં પણ શક્ય હોઈ શકે, પરંતુ નિયંત્રિત તીવ્રતાના પ્રહાર પછી થોડી મિનિટોમાં નસ મારફતે ડોઝ અપાયેલો ઉંદર, પડી જવાના કલાકો પછી ઇમરજન્સી વિભાગમાં પહોંચતી વ્યક્તિ સમાન નથી. એનેસ્થેસિયા, ઈજાની નિયંત્રિત ગંભીરતા, યુવાન સ્વસ્થ પ્રાણીઓ અને ટૂંકું અનુસરણ—આ બધું તારણોને અન્ય સંદર્ભમાં લાગુ કરવાની શક્યતા મર્યાદિત કરે છે. મેથિલિન બ્લુ અંગે વિસ્ફોટજન્ય ઈજાનો કોઈ અભ્યાસ જ નથી, તેથી લશ્કરી વાચકો માટે સૌથી સુસંગત ઈજાના પ્રકાર અંગે જ સૌથી ઓછા પુરાવા છે.

અહીં પ્રાણીઓના ડોઝને માનવો માટે રૂપાંતરિત કરવાની કોઈ પદ્ધતિ પણ આપવામાં આવી નથી. પ્રાણીઓ અંગેનું સાહિત્ય પ્રયોગાત્મક નિયંત્રણ માટે પસંદ કરાયેલા ડોઝ સાથે નસ મારફતે અને પેટની પેરીટોનિયલ ગુહા મારફતે આપવાના માર્ગો વાપરે છે, છૂટક વેચાણમાં મળતાં મોઢેથી લેવાતા ટીપાં નહીં. આ અભ્યાસોમાંનું કંઈ પણ માનવો માટે સારવારનું ડોઝ-સમયપત્રક નક્કી કરતું નથી, અને અહીં કંઈ પણ માથાની ઈજાની પ્રમાણભૂત સંભાળ સાથે મેથિલિન બ્લુની કસોટી કરતું નથી.

એટલે નિખાલસ સારાંશ એક ફકરામાં સમાઈ જાય છે. ઉંદરવર્ગીય પ્રાણીઓમાં, મગજની આઘાતજન્ય અથવા ઇસ્કીમિક ઈજાના સમયની આસપાસ અપાયેલું મેથિલિન બ્લુ માઇટોકોન્ડ્રિયાનું ઊર્જા ઉત્પાદન જાળવે છે, અને તે જળવાયા પછી નાના ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તારો તથા પુનઃપ્રાપ્તિના વધુ સારા સ્કોર જોવા મળે છે. પ્રહારના એક અભ્યાસમાં પ્રથમ ડોઝ 24 કલાક મોડેથી અપાયો હોવા છતાં ક્ષતિગ્રસ્ત વિસ્તાર પરની અસરનો અમુક ભાગ જળવાયો હતો. ઈજાગ્રસ્ત માનવ મગજમાં આમાંથી કંઈ થાય છે કે નહીં તેની કસોટી થઈ નથી, અને TBI તથા સ્ટ્રોક અંગેનું સાહિત્ય જુદા સમયને જુદા પરિણામોના માપ સામે તપાસે છે. આ પુરાવાના આધારે નિશ્ચિતતા વેચનાર કોઈ પણ વ્યક્તિ એવો ઘટક ઉમેરી રહી છે જે પ્રયોગોમાં ક્યારેય હતો જ નહીં.