Metileno urdina eta Bartonella: laborategiko aurkikuntzak eta ebidentzia klinikoaren mugak

Hazkuntza-plaka batek eta paziente batek hitz bera partekatzen dute, infekzioa, baina ez kontzeptu bera. Plakan, infekzioa agar gaineko kolonien zenbaketa da. Pazientean, zelulen eta odol-hodien barruko bakterioak dira, odolean eta ehunetan zehar mugitzen diren farmakoak, eta lanaren zati bat egiten duen immunitate-sistema. Biak nahastuz gero, laborategiko kopuru deigarri batek tratamendu baten itxura hartzen du. Bereizita mantenduz gero, kopuru hori benetan dena bihurtzen da: hurrengo esperimentua egiteko arrazoia.

Bereizketa hori egitea da metileno urdinari eta Bartonella-ri buruzko berrikuspen honen zeregin osoa. Ikerketa-talde bereko bi laborategi-ikerketak metileno urdina probatu zuten hazten ari ez zen Bartonella henselae-ren aurka. Biek jarduera handia jakinarazi zuten beiran eta plastikoan. Bietako bakar batek ere ez zuen pertsonarik aztertu.

Zergatik probatzen duten ikertzaileek fase geldikorra

Antibiotikoen proba gehienetan hazten ari diren zelulak erabiltzen dira. Eredu horrek kasu zailago bat uzten du kanpoan: zatitzeari utzi dioten zelulak, hazten ari diren kideak hiltzen dituzten farmakoak jasateko gai direnak.

Bartonella-k gorputzean iraun dezake, baita eritrozitoen eta zelula endotelialen barruan ere. Horregatik, taldeak galdetu zuen zein farmako baimenduk hil dezaketen B. henselae fase geldikorrean sartu ondoren. Hazten ari diren zelulen aurkako MIC baxu batek ez zuen fase geldikorreko zelulen heriotza aurreikusten. Rifanpizinak MIC oso baxua zuen, baina zelula geldikor gutxi hiltzen zituen; MIC balio handiagoak zituzten konposatuek, berriz, ondo hiltzen zituzten. Horrelako artikuluak irakurtzeko metodo orokor bat nahi duten irakurleek metileno urdinari buruzko ikerketak irakurtzeko gidan aurkituko dute.

Lehen baheketa: Li eta lankideak, 2019

Antibiotics aldizkarian argitaratutako 2019ko fase geldikorreko baheketak andui bakarra erabili zuen, B. henselae JK53, Schneider medioan hazia, ehuneko 10eko behi-fetuaren serumarekin, 37 C-an eta ehuneko 5eko CO2arekin. Egun bateko kultiboek, nagusiki, sakabanatutako eta zatitzen ari ziren zelulak zituzten. Bost eguneko kultiboak, mL-ko 10 ber 8 kolonia-eratzeko unitate ingurukoak, fase geldikortzat hartu ziren eta agregatu ikusgarriak zituzten.

Saiakuntzan SYBR Green I eta propidio ioduroa erabili ziren, zelula bizien eta isopropanolez hildako zelulen nahasteekin kalibratuta. Metileno urdinak kolore bizia duenez, emaitza positiboak mikroskopiaz baieztatu ziren, eta ondoren odol-agarreko kolonien zenbaketaz, ebaluazio-irizpide zorrotzagoa baita.

1,581 farmako baimendu 50 mikromolarrean probatuta, metileno urdinak ehuneko 16ko bideragarritasuna utzi zuen plaka-irakurgailuaren arabera, eta ehuneko 25ekoa mikroskopiaren arabera. Daptomizinak ehuneko 21eko emaitza izan zuen; hainbat azolek, ehuneko 22 eta 27 artekoa; gentamizinak, ehuneko 32koa; eritromizinak, ehuneko 66koa; eta ziprofloxazinoak, ehuneko 74koa. Pirbinio pamoatoak jarduera handiagoa erakusten zuen irakurgailuan, baina ezin izan zen mikroskopiaz ebaluatu, berezko fluoreszentzia zuelako.

Hazten ari zen B. henselae-ren aurkako metileno urdinaren MICa mL-ko 0.08 eta 0.16 mikrogramo artekoa zen. Bost eguneko zelula geldikorren aurka, mL-ko 5 mikrogramorekin, kolonia-kopurua detektatzeko moduko koloniarik ez izateraino jaitsi zen esposizioko egun baten ondoren, daptomizinaren eta pirbinio pamoatoaren emaitzekin bat etorriz, bakoitza probatutako kontzentrazioan. Denboran zeharreko heriotza neurtzeko beste saiakuntza batean mL-ko 10 mikrogramo erabili ziren. Horiek laborategiko esposizio-mailak dira, ez dosiak, eta artikuluak hala aurkezten ditu. Gizakietan aipatutako plasmako kontzentrazio maximo bat, mL-ko 3.9 mikrogramo ingurukoa, testuinguru gisa baino ez da agertzen artikuluan. Metileno urdinaren farmakozinetikaren ikuspegi orokorrak azaltzen du zergatik ezin den plasmako balio bat ehunetako balio gisa interpretatu.

Artikuluak bi muga esplizitu ditu. Ez zegoen biofilm-eredurik, eta ez ziren metileno urdinaren konbinazioak probatu. Bost eguneko agregatuak fase geldikorreko kultibo likidoan sortutako multzoak ziren, ez baliozkotutako biofilm-esperimentu bat. Egileek animaliekin, konbinazioekin eta biofilmekin ikertzeko eta beste Bartonella espezie batzuetan probak egiteko eskatu zuten.

Konbinazioak eta biofilmetik eratorritako zelulak: Zheng eta lankideak, 2020

BMC Microbiology aldizkarian argitaratutako 2020ko jarraipen-ikerketak andui eta medio berak mantendu zituen, baina sei eguneko kultibo geldikorrak erabili zituen, eta lehen artikuluak ez zituen bi elementu gehitu zituen: bi farmakoko konbinazioak eta biofilmetik eratorritako zelulen eredu bat.

Farmakoak banaka, denak mL-ko 5 mikrogramoko kontzentrazioan eta 24 orduz erabilita, metileno urdinak mL-ko 3.2 bider 10 ber 4 kolonia-eratzeko unitate utzi zituen; kontrolak, berriz, 2.8 bider 10 ber 10 inguru zituen. Ziprofloxazinoak, gentamizinak eta nitrofurantoinak kolonia gutxiago utzi zituzten une berean. Hori ez dator bat 2019ko emaitzarekin: maila nominal berak ez zuen detektatzeko moduko koloniarik utzi egun baten ondoren. Kultiboaren adina, dentsitatea eta manipulazioa desberdinak ziren; beraz, bakterioak hiltzeko efektua errepikatu zen, baina ez neurri berean. Saiakuntza batetik bestera gertatutako aldaketa hori da segurtasunaren eta interakzioen ohiko egiaztapenetan laborategiko potentzia eta efektu klinikoa bereizteko arrazoietako bat.

Konbinazioen baheketa da gehien aipatzen den zatia. Osagai bakoitzaren kontzentrazioa mL-ko 5 mikrogramotan finkatu zen. Bai azitromizinaren eta metileno urdinaren konbinazioak, bai rifanpizinaren eta metileno urdinarenak ez zuten fase geldikorreko kolonia detektagarririk utzi 24 orduren buruan; ziprofloxazinoa zuten bi bikoteek ere ez, eta lau horiek bakarrik lortu zuten hori probatutako 25 bikoteen artean. Ez zen sinergia-analisi formalik egin; beraz, termino zuzena baldintza horietan aktiboa den konbinazioa da, ez frogatutako sinergia.

Biofilm-esperimentuak desegindako biofilm gazte batetik berreskuratutako zelulak probatu zituen, ez biofilm heldu eta osorik batean sartzeko gaitasuna. Kultiboak bost egunez hazi ziren, putzu-plaketan diluitu eta beste bost egunez hazi ziren, kristal bioletaz tindatuta baieztatu ziren, eta gero arraspatuz jaso ziren farmakoen eraginpean jarri aurretik. mL-ko 5 mikrogramotan, metileno urdinak bakarrik kolonia-kopurua 2.3 bider 10 ber 2ra jaitsi zuen 6. egunerako; banakako farmako onenen artean egon zen, baina emaitza ez zen zero izan. Metileno urdina zuten bi konbinazioek zero lortu zuten 6. egunerako, eta ziprofloxazinoa zuten bi konbinazioek ere bai.

Egileek irakurle arretatsu batek antzemango lituzkeen muga berak nabarmendu zituzten: arraspatutako biofilm gaztea, biofilm zahar eta osorik baten ordez; farmako guztientzako kontzentrazio eroso bakarra, bakoitzaren kontzentrazio maximo errealistaren ordez; azitromizina edo rifanpizina ardatz zuten bikote hautatuak soilik; andui bakarra; animaliarik ez; pazienterik ez. Geroago hiru farmakorekin ikertzea proposatu zen, baina ez zen emaitzarik jakinarazi.

Ikerketen diseinuen konparazioa

Taulak artikulu honen muina laburbiltzen du. Azken zutabearen ezkerrean dagoen guztia kultiboekin egindako lana da. Bi artikuluetako ezer ez dagokio azken zutabeari.

Bartonella ez da Borrelia

Bi artikuluek Borrelia burgdorferi aipatzen dute, Lyme gaixotasunaren espiroketa, tindagaien saiakuntza laborategi berean Borrelia-ren fase geldikorrarekin lehenago egindako lanetik zetorrelako; lan hartan, metileno urdinak eta daptomizinak ere emaitza positiboak izan zituzten. Aurrekari horiek testuinguru erabilgarria eskaintzen dute, baina ohiko akats-iturri ere badira.

Bartonella-ri buruzko bi artikuluetako esperimentu bakar batek ere ez ditu Borrelia eta Bartonella elkarren ondoan probatzen. Organismoak desberdinak dira, medioak desberdinak dira, kontzentrazioak desberdinak dira, eta metileno urdinak Bartonella-ren mintzean izan lezakeen efektua gehiago ikertu beharreko espekulazio gisa aurkeztu zen. Emaitzak ez lirateke espezie batetik bestera estrapolatu behar, eta bi artikuluetako bakar batek ere ez ditu parasitoei buruzko baieztapen orokorrak babesten. Borrelia-ren eta Bartonella-ren zelula iraunkorren konparazioak bi ikerketa-multzoak bereizita mantentzen ditu arrazoi horregatik.

Zergatik ez diren kultiboak protokolo bihurtzen

Ulergarria da metileno urdinaren eta Bartonella-ren protokolo bati buruzko bilaketek interesa piztea. Artikulu hauek erakusten dute esamolde hori zergatik hartu behar den ohartarazpen gisa, eta ez erosketa-zerrenda gisa.

Lehenik, putzu batean mL-ko 5 mikrogramo izatea ez da preskripzio bat. Ez du berekin xurgapenari, banaketari, proteinekiko loturari, zelula barneko sarrerari edo jasangarritasunari buruzko informaziorik. Egileek antibiotikoen kontzentrazio maximoen gutxi gorabeherako batezbesteko gisa aukeratu zuten, eta esan zuten etorkizuneko lanek farmako bakoitza bere maila errealistan erabili beharko luketela.

Bigarrenik, zero koloniak esan nahi du koloniarik ez dagoela agarrean hazteko baldintza horietan, ez ehuna esterila denik. Zelula iraunkorrak, zelula barneko bakterioak eta laginketaren mugak agar-plakatik kanpo geratzen dira.

Hirugarrenik, putzu bat esterilizatzen duten konbinazioek gorputzean huts egin edo kalte egin dezakete. Azitromizina eta metileno urdina, eta rifanpizina eta metileno urdina, laborategiko bikoteak dira, laborategiko esposizioetan. Animalien farmakozinetikarik eta gizakietan lortutako datu kontrolaturik gabe, ez dago dosirik, iraupenik edo onura-arrisku erlaziorik. Aukerak aztertzen ari den edonork klinikari batekin hitz egin beharko luke horiei buruz, eta metileno urdinaren erabilerak noiz behar duen gainbegiratze medikoa berrikusi, plaketako datuetatik inolako ondoriorik atera aurretik.

Artikulu hauek benetan babesten duten ondorio mugatua hau da: metileno urdinak jarduera errepikagarria du hazten ari ez den B. henselae JK53-ren aurka in vitro, baita bi farmakoko laborategiko konbinazioetan ere; konbinazioei eta biofilmetik eratorritako zelulei buruzko emaitzarik sendoenak 2020ko ikerketatik datoz. Gainerako guztia, jarduera horrek gizakien bartonelosian garrantzirik duen barne, probatu gabe dago oraindik.