EMB agarra eta MacConkey agarra: medioen hautaketa eta interpretazioa

Ikasle batek ur-lagin bera bi plakatan ereiten du. Batean, distira metaliko berdea duten kolonia ilunak agertzen dira. Bestean, halo lausoa duten kolonia arrosa biziak agertzen dira. Bi plakak hodi beretik inokulatu ziren, elkarren ondoan inkubatu ziren eta ordu berean irakurri ziren. Ikasleak galdetzen du zein plaka dagoen zuzen.

Bi plakak daude zuzen. Galdera desberdinei erantzuten diete. Nahasmena bi medioak hesteetako bakterioak aztertzeko bahe trukagarritzat hartzetik dator. Helburu bera dute, hau da, organismo enteriko Gram negatiboak hautatzea eta laktosa hartzitzen dutenak hartzitzen ez dutenetatik bereiztea, baina helburu hori kimika eta logika bisual desberdinekin gauzatzen dute. Oinarrian dauden bi kontzeptuak ulertzen dituzunean, plaka hautatzea eta koloniak irakurtzea ohiko jarduera bihurtzen dira.

Erantzun laburra

EMB agarrak bi tindagai erabiltzen ditu, eosina Y eta metileno urdina, eta biek eginkizun bikoitza dute: Gram positiboen hazkundea inhibitzen dute eta azido asko sortzen duten organismoen inguruan hauspeatzen dira, kolonia ilunak sortuz; Escherichia coli-ren kasuan, klasikoki, distira metaliko berdea agertzen da. MacConkey agarrak eginkizunak bereizten ditu: behazun-gatzek eta kristal bioletak Gram positiboak inhibitzen dituzte, laktosak hartzidurarako substratua ematen du, eta gorri neutroak azidoa adierazten du kolonia arrosa edo gorri gisa. Helburua E. coli-ren ustezko identifikazio bisual nabarmena egitea bada, EMB egokia da. Helburua laktosa hartzitzen dutenak hartzitzen ez dutenetatik arrosa eta koloregabe gisa argi bereiztea bada, batez ere gorozki- edo gernu-lan-fluxuetan, MacConkey errazagoa izan ohi da irakurtzeko. Plaka batek ere ez du organismo bat kolorearen bidez soilik identifikatzen.

EMB: aldi berean hautatu eta adierazten duten tindagaiak

EMB kontzeptuak hautaketa eta adierazpena molekula beretan biltzen ditu. ASMren eosina-metileno urdin agarrerako protokoloak EMB medio selektibo eta diferentzial gisa deskribatzen du; tindagaien bikoteak Gram positibo askoren hazkundea inhibitzen du, eta laktosaren hartzidurak tindagaiak xurgatzea eta hauspeatzea eragiten du. Levine formulazio estandar batek peptona, laktosa, fosfatoa, eosina Y, metileno urdina eta agarra ditu, Levine EMB agarrerako FDA BAM metodoan zerrendatzen den bezala. Kontuan izan EMB errezeta zaharrago batzuek sakarosa ere gehitzen zutela laktosarekin batera; Levine EMBk, aldiz, laktosa du baina ez sakarosarik. Beraz, erregistratu zure laborategian zein formulazio erabiltzen den.

EMB irakurtzeak tindagaien portaera irakurtzea esan nahi du. Laktosaren hartzidura biziak nahikoa azido sortzen du tindagai ugari hauspeatzeko; horrek E. coli-ri erdigune urdin-beltz ilunak ematen dizkio eta, kasu klasikoan, argi islatuan distira metaliko berdea. Hartzitzaile ahulagoak, hala nola Enterobacter eta Klebsiella, normalean kolonia mukoidetan hazten dira, arrosatik morera bitartekoak, distira hori gabe. Hartzitzen ez duten organismoak, hala nola Salmonella, Shigella eta Proteus, oro har, koloregabeko edo zeharrargizko kolonietan hazten dira, tindagaiak hauspeatzeko behar den azido-jario bortitza sortzen ez dutelako. Gram positiboak normalean inhibitu egiten dira, nahiz eta inhibizio-maila anduiaren eta produktuaren arabera aldatu. Tindagaiak prestatzeko kimika osoa, metileno urdina zergatik den lehenik eta behin tindagai kationikoa barne, tindagai-formulazioei buruzko beste eztabaida bati dagokio, eta mikroskopiaren testuinguru orokorra tindaketa-metodoen atlas batean dago. Artikulu honek plaken hautaketa eta irakurketa ditu ardatz.

Goiko irudia ilustratiboa da. Espero beharreko logika bisuala erakusten du: EMBn distira duten kolonia ilunak, mota mukoide arrosak eta mota zurbilak; MacConkeyn, berriz, mota arrosak eta zurbilak. Erabili eredua ikasteko, eta gero egiaztatu interpretazio bakoitza argazkiz dokumentatutako kontrolekin eta zure lan-mahaian dagoen medio zehatzaren produktu-fitxarekin.

MacConkey: eginkizunak bereizita, arau bisual sinpleagoa

MacConkey kontzeptuak eginkizun bakoitza osagai bereizi bati esleitzen dio. ASMren MacConkey agar protokoloak ikuspegi selektibo eta diferentzial bera aurkezten du, eta MacConkey agarrerako FDA BAM metodoak osagai funtzionalak zerrendatzen ditu: peptonak, laktosa, behazun-gatzak, gatza, gorri neutroa, kristal bioleta eta agarra. Behazun-gatzek eta kristal bioletak Gram positiboak inhibitzen dituzte. Laktosak hartzidurarako substratua ematen du. Gorri neutroak pH-adierazle gisa jarduten du, azidoa sortzen den tokian arrosatik gorrira aldatuz; hartzitzaile indartsuen inguruan, batzuetan, behazun hauspeatua ere agertzen da.

Irakurketa-araua nahita sinplea da: arrosak laktosa hartzitzailea esan nahi du; koloregabeak edo zurbilak, berriz, hartzitzen ez duena. E. coli arrosatik gorrira agertzen da, askotan behazun-hauspeakin halo batekin. Klebsiella eta Enterobacter arrosa agertzen dira, eta sarritan mukoide, kapsulen ondorioz. Salmonella, Shigella, Proteus eta beste bazilo Gram negatibo asko koloregabe agertzen dira. Irakaskuntza-laborategietan bada beste abantaila bat: behazun-gatzek normalean Proteus-en sakabanatze-hazkundea murrizten dute; horregatik, kolonia isolatuak errazago lortzen dira MacConkeyn medio ez-selektiboetan baino. Hala ere, inhibizioa ez da erabatekoa, eta gatzik gabeko alternatibak daude sakabanatze-hazkundea kontrolatzea lehentasuna denean.

Tindagaiek horrela jokatzearen arrazoi molekularra kargarekin eta egiturarekin lotuta dago. Metileno urdina fenotiazina-tindagai kationiko bat da, eta haren egiturak eta propietateek azaltzen dute bakterio-azalera azidoekiko duen afinitatea; afinitate bera dago EMBko eremu azidoetan hauspeatzen denean.

Konparazioa begiratu batean

Irakurri taula erabaki-prozedura gisa. Ariketak ikasleei hartzidura-indarraren gradientea eta mutur nabarmen bat erakustea behar badu, EMBk hori erakusten du. Ariketak baieztapen biokimikoaren aurretik bereizketa bitar azkarra behar badu, MacConkeyk hori erakusten du.

Zein medio zein laginetarako

Gorozki-jatorriko koliformeen edo E. coli-ren ustezko identifikazioa lantzeko ur-ariketetan, EMB erakargarria da distira bisualki bereizgarria delako. MacConkeyk ere Gram negatibo enterikoak lantzen ditu eta historikoki uretan erabili izan da, baina plaka batek ere ez du ordezkatzen araudiak ezarritako ur-azterketa metodoa; probaren arabera, metodo horrek modified mTEC edo MI bezalako medioak zehaztu ditzake. Egiaztatu zure laborategiak jarraitu behar duen metodoa.

Gorozkien antzeko laginetan hartzitzaileak ez-hartzitzaileetatik bereizteko, MacConkey izaten da bietatik erabilgarriena. Salmonella edo Shigella bilatzeko gorozki-lan praktikoetan, normalean, XLD edo Hektoen enteric bezalako medio enteriko selektiboagoak ere gehitzen dira, MacConkey bakarrik erabili beharrean.

Lan-fluxu klinikoa imitatzen duen gernuaren irakaskuntza-praktikarako, parekatu MacConkey odol-agarrarekin. MacConkeyk Gram negatiboen lehen bereizketa ematen du; odol-agarrak, berriz, MacConkeyk inhibitzen dituen organismoak berreskuratzen ditu. Parekatze hori ohikoa da gernu-kulturaren prestaketari buruzko deskribapen klinikoetan.

Kontzeptuak soilik irakasteko, erabili biak. EMBk irakasten du hartzidura-indarrak garrantzia duela eta molekula batek bi eginkizun izan ditzakeela. MacConkeyk diseinu modularra irakasten du: hautatzailea, substratua eta adierazlea bereizita mantentzea. E. coli ezagun bat, Klebsiella aerogenes ezagun bat eta Salmonella ezagun bat bi medioetan elkarren ondoan ereiten dituzten ikasleek gutxitan nahasten dituzte berriro bi logikak.

Ikasturte guztietan errepikatzen diren irakurketa-akatsak

Akats ohikoena kolorearen arabera soilik identifikatzea da. MacConkeyn arrosa izatea E. coli, Klebsiella, Enterobacter edo beste hartzitzaile bat izan daiteke. Koloregabea izatea Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas edo beste ez-hartzitzaile bat izan daiteke. Kolorea baheketa-fenotipo bat da, eta ondorengo baieztapen-lana gidatzen du, hala nola Gram tindaketa, oxidasa, panel biokimikoak edo tresna bidezko identifikazioa; ez da espezie-izen bat.

Bigarren akatsa distirarik ezari gehiegizko esanahia ematea da. Benetako E. coli kolonia batzuek, batez ere isolatuek, distira metaliko gutxi edo batere ez dute sortzen EMBn. Distirarik ezak ez du E. coli baztertzen, eta distirak ez du frogatzen. Hartu distira ustezko arrasto gisa.

Hirugarren akatsa adin desberdineko plakak alderatzea da. Laktosa berandu hartzitzen duten organismo batzuk arrosa bihur daitezke MacConkeyn inkubazio luzearen ondoren, eta horrek hartzitzailearen eta ez-hartzitzailearen arteko bereizketa garbia lausotzen du. Irakurri laborategiak zehaztutako orduan eta erregistratu inkubazio-denbora emaitzarekin batera.

Laugarren akatsa hazkunde mistoa organismo bakar gisa irakurtzea da. Kolonia arrosa baten ondoan dagoen kolonia koloregabe batek bi fenotipo adierazten ditu, ez tarteko bat. Hautatu ondo isolatutako koloniak eta landu morfotipo bakoitza bereizita. Testura mukoideak antzeko tranpa bat sortzen du: Klebsiella zein Enterobacter mukoide ager daitezke, beraz, kapsulak bakarrik ez du izena zehazten. Lehen Enterobacter aerogenes gisa irakasten zen organismoa gaur egun Klebsiella aerogenes gisa sailkatzen da; horrek azaltzen du zergatik ematen duten desadostasunaren itxura taula zaharrek eta etiketa berriek.

Kontrolak eta amaierako araua

Erabili argazkiz dokumentatutako edo kontrol freskoak saio bakoitzean: E. coli hartzitzaile indartsuaren erreakziorako, Klebsiella aerogenes hartzidura mukoiderako distira klasikorik gabe, Salmonella andui bat ez-hartzitzaile koloregabearen erreakziorako, eta Staphylococcus aureus zure produktu zehatzean Gram positiboen inhibizioa baieztatzeko. Egokitu andui-zenbakiak eta onarpen-irizpideak fabrikatzailearen produktu-fitxara, selektibitatea behazunaren, kristal bioletaren eta tindagai-edukiaren arabera aldatzen delako.

Gogoratu esaldi bat lan-mahaian. EMBk hautatu eta aldi berean adierazten duten tindagaiak erabiltzen ditu; horrek E. coli-ren seinale ikusgarri nabarmena ematen du, irakurketa sotilago baten truke. MacConkeyk hautaketa eta adierazpena bereizten ditu; horrek arrosa eta zurbilaren arteko bereizketa argia ematen du, hartzidurari buruzko xehetasun gutxiagoren truke. Hautatu galderaren kontzeptuarekin bat datorren medioa, baieztatu kolorea proba egokiekin, eta bi plakak elkarren aurka aritzeari utzi eta elkar osatzen hasten dira.