Glas methylen a sglerosis ymledol: beth a brofwyd yn yr ymchwil ar anifeiliaid

Chwiliwch am las methylen ar gyfer MS a byddwch yn dod o hyd i bapurau sy'n edrych fel pe baent yn ateb yr un cwestiwn. Nid ydynt. Rhoddodd un papur las methylen i lygod sâl fel triniaeth. Ni wnaeth y llall drin unrhyw anifail ag ef o gwbl. Defnyddiodd las methylen fel staen glas ar dafelli tenau o linyn y cefn fel y gallai patholegydd weld myelin o dan ficrosgop.

Dyma'r syniad sy'n sail i'r erthygl gyfan. Mae gan y lliw ddwy rôl mewn bioleg, ac nid oes dim yn gyffredin rhyngddynt heblaw'r botel. Fel ymgeisydd am gyffur, caiff ei roi mewn dos i anifail byw, a'r cwestiwn yw a yw'r clefyd yn newid. Fel staen, caiff ei roi ar feinwe farw sydd wedi'i sefydlogi ar ôl yr arbrawf, a'r cwestiwn yw sut olwg oedd ar y feinwe. Os na sylwch ar y gwahaniaeth hwnnw, byddwch yn darllen adran dulliau patholeg fel pe bai'n ganlyniad triniaeth.

Beth yw EAE, mewn termau syml

Enseffalomyelitis awtoimiwn arbrofol, a dalfyrrir fel arfer yn EAE, yw'r model anifeiliaid safonol ar gyfer agweddau ar sglerosis ymledol. Mae ymchwilydd yn imiwneiddio llygoden sy'n dueddol o ddatblygu'r cyflwr â darn o brotein myelin ynghyd â chynorthwywr imiwnedd cryf. Yna mae'r system imiwnedd yn ymosod ar system nerfol ganolog yr anifail ei hun. Mae'r llygoden yn datblygu gwendid sy'n ymledu i fyny'r corff ac sy'n hawdd ei sgorio ar raddfa 0 i 5, o gynffon llipa i barlys yr aelodau ôl.

Mae hwylustod y sgorio hwnnw'n esbonio pam mae EAE yn boblogaidd, a hefyd pam y gall gamarwain. Mae MS mewn pobl yn datblygu ohono'i hun, yn cynnwys ystod ehangach a llai pendant o dargedau, ac yn cynhyrchu symptomau optig, synhwyraidd, gwybyddol, serebelaidd a motor mewn cwrs sy'n ailwaelu neu'n gwaethygu'n raddol. Mae EAE yn atgynhyrchu mecanweithiau penodol megis llid, dadfyelineiddio ac anaf i acsonau o dan amodau rheoledig. Nid yw'n atgynhyrchu MS ar raddfa fach. Gall darllenwyr sydd am ddeall y fframwaith cyffredinol adolygu sut y credir bod glas methylen yn gweithredu ar lefel y gell cyn barnu unrhyw honiad am glefyd penodol.

Defnyddiodd y ddau bapur isod antigenau EAE gwahanol hefyd, ac mae hynny'n bwysig. Ysgogodd yr astudiaeth driniaeth glefyd â MOG35-55, peptid byr o glycoprotein oligodendrocytau myelin. Ysgogodd yr astudiaeth batholeg glefyd â MP4, cyfuniad o ddarnau o brotein basig myelin a phrotein proteolipid. Mae'r dewis o straen ac antigen yn newid ble mae briwiau'n ymddangos a sut mae llid yn ymddwyn, felly nid dau ailadroddiad o un arbrawf yw'r ddwy astudiaeth.

Y map: o'r model i'r cwestiwn i'r cyfyngiadau

Cadwch y tabl hwn ar agor. Dyma'r cyfeirnod gwreiddiol ar gyfer yr erthygl hon. Mae pob rhes yn nodi pa gwestiwn clinigol y gall y model fynd i'r afael ag ef, beth a fesurwyd mewn gwirionedd, a ble mae'r gallu i gymhwyso'r canfyddiadau i bobl yn dod i ben.

Gall unrhyw un sy'n gwirio'r pennawd nesaf ailddefnyddio'r un colofnau gyda chymorth sut i ddarllen astudiaethau cyn-glinigol: gofynnwch am y rhywogaeth a'r antigen, rôl y cyfansoddyn, y mesurau canlyniad, ac a yw'r canlyniad yn disgrifio cwrs clefyd neu gyflwr meinwe ar un adeg.

Canlyniad y driniaeth: beth a newidiodd wrth roi dosau

Defnyddiodd yr astudiaeth driniaeth yn y Journal of Neuroimmunology yn 2016 lygod C57BL/6 benywaidd, tua 8 i 10 wythnos oed, a gafodd eu himiwneiddio â 250 micrograms o MOG35-55 fesul llygoden. Ar ôl ysgogi'r cyflwr, neilltuwyd yr anifeiliaid EAE ar hap i grŵp glas methylen neu grŵp EAE heb driniaeth, a dilynwyd eu sgorau clinigol tan tua diwrnod 30.

Roedd y sgorau clinigol yn sylweddol is mewn llygod a gafodd driniaeth nag mewn llygod rheoli EAE o ddiwrnod 15 i ddiwrnod 30, gyda P yn llai na 0.01. Roedd dadansoddiad o linyn y cefn yn dangos yr un patrwm, gyda llai o ymdreiddiad llidiol, llai o ddadfyelineiddio a llai o golled acsonau mewn anifeiliaid a gafodd driniaeth.

Yr elfen nodedig oedd y panel o fesuriadau signalau. Cynyddodd y driniaeth actifadu AMPK a mynegiant SIRT1, ac ataliodd actifadu NF-kB, switsh llidiol canolog. O ran imiwnedd addasol, lleihaodd yr ymateb Th17 a chryfhaodd yr ymateb Treg. Felly, y gadwyn arfaethedig yw glas methylen i AMPK a SIRT1, i lai o signalau NF-kB, i newid o Th17 llidiol tuag at Treg rheoleiddiol, i anaf llai difrifol i feinwe, i sgorau is.

Dehongliad yw'r gadwyn honno, nid dilyniant achosol sydd wedi'i brofi. Mae'r astudiaeth yn dangos bod y cyffur, y newidiadau i'r signalau a'r gwelliant yn y clefyd yn cyd-ddigwydd. Nid yw'n profi bod AMPK a SIRT1 yn gyfrifol am y budd cyfan, ac nid yw'r testun sydd wedi'i fynegeio'n gyhoeddus yn nodi'r union ddos mewn milligram fesul kilogram, y llwybr rhoi, y diwrnod dechrau na'r hyd yn ddigon clir i atgynhyrchu'r drefn o'r crynodeb yn unig. Ystyriwch unrhyw rif dos a ddyfynnir am y papur hwn ar dudalen werthu yn un heb ei wirio oni bai ei fod yn cyfeirio at y dulliau yn y testun llawn. Y sylfaen dystiolaeth ehangach ar las methylen mewn pobl yw'r lle i wirio a ddatblygodd y signal imiwnedd cynnar hwn erioed yn ddata clinigol.

Canlyniad y patholeg: beth a ddangosodd chwe mis o feinwe

Defnyddiodd astudiaeth MP4 yn PLoS ONE yn 2015 lygod C57BL/6 benywaidd a gafodd eu himiwneiddio â 200 micrograms o MP4 mewn cynorthwywr Freund cyflawn ynghyd â thocsin pertwsis ar ddiwrnod yr imiwneiddio ac eto 48 awr yn ddiweddarach. Ni chafodd unrhyw anifail las methylen fel cyffur. Ar ôl sefydlogi a mewnosod y feinwe, staeniwyd darnau traws o linyn y cefn, un micrometer o drwch, â glas methylen ar gyfer microsgopeg golau, a defnyddiwyd microsgopeg electron o'r llwybr fentrolateral i weld manylion mwy manwl.

Samplwyd meinwe ar dri cham: yr uchafbwynt acíwt gyda 7 llygoden, dri mis ar ôl dechrau'r cyflwr gyda 5 llygoden, a chwe mis ar ôl dechrau'r cyflwr gyda 10 llygoden. Roedd y sgorau clinigol cymedrig ar y camau hynny'n edrych bron yn union yr un fath, tua 1.7 i 1.8 ar y raddfa 0 i 5. Roedd y feinwe'n adrodd stori wahanol. Cynyddodd difrod i fyelin yn unig o tua 569,000 o ffibrau fesul square millimeter ar yr uchafbwynt acíwt i tua 1,496,000 ar ôl chwe mis, gyda'r gymhariaeth rhwng y cam acíwt a'r hirdymor yn arwyddocaol ar P yn hafal i 0.027. Roedd difrod cyfunol i fyelin ac acsonau wedi dyblu yn fras erbyn chwe mis. Arhosodd ffibrau a oedd yn cael eu hailfyelineiddio o dan un y cant ar bob cam, manylyn sy'n rhoi gobeithion am atgyweirio mewn persbectif.

Dilynodd anaf i acsonau batrwm siâp U: yn uchel ar yr uchafbwynt acíwt, yn is ar ôl tri mis, ac ar ei uchaf ar ôl chwe mis. Roedd yn cydberthyn â chwyddo mitocondria ac â llai o le rhwng niwroffilamentau. Cynhaliwyd yr asesiad heb wybod y sgôr na'r cam, sy'n cryfhau'r dehongliad bod y sgorau clinigol yn tanamcangyfrif y difrod strwythurol parhaus.

Yr anghysondeb hwnnw yw gwir gyfraniad yr astudiaeth i ddarllenydd sy'n ymddiddori mewn MS. Nid oedd sgôr anabledd sefydlog yn golygu meinwe sefydlog. Mae hefyd yn dangos pam na all y papur hwn gefnogi unrhyw honiad am drin MS â glas methylen. Profodd effaith amser, nid triniaeth.

Pam nad yw'r naill astudiaeth na'r llall yn sefydlu budd i gleifion

Meddyliwch am bob papur fel un sy'n ateb cwestiwn cul yn dda, ond nad yw'n ateb y cwestiwn am gleifion o gwbl.

Yn gyntaf, mae'r achos yn wahanol. Caiff EAE ei ysgogi'n fwriadol ag antigen a chynorthwywr diffiniedig. Mae MS mewn pobl yn datblygu'n ddigymell gyda repertoire imiwnedd ehangach sy'n cynnwys celloedd T, celloedd B, imiwnedd cynhenid a glia preswyl. Nid yw cyfansoddyn sy'n newid ymateb sy'n gogwyddo tuag at MOG mewn llygoden o reidrwydd yn newid yr ymateb dynol ehangach hwnnw.

Yn ail, mae'r ffenoteip yn wahanol. Mae gwendid sy'n ymledu o'r gynffon i'r aelodau ôl mewn llygoden yn fesur cyfleus. Mae'n cywasgu amrywiaeth MS mewn pobl yn un rhif motor. Mae cyffuriau'n newid sgorau EAE tymor byr yn rheolaidd heb newid cwrs y clefyd mewn pobl, a dyna pam mae EAE yn offeryn sgrinio ac ymchwilio i fecanweithiau yn hytrach na chlinig ar raddfa fach.

Yn drydydd, mae cwestiynau am amlygiad ac amseru heb eu datrys. Nid yw rhoi dosau parhaus yn gynnar mewn arbrawf 30 diwrnod ar lygod yr un peth â defnydd hirdymor drwy'r geg gan berson â chlefyd sefydledig, ac ni fesurodd y naill astudiaeth na'r llall lefelau'r cyffur yn y system nerfol. Heb y cysylltiad hwnnw, nid oes pont o grynodiad ar blât neu ddos mewn llygoden i drefn driniaeth mewn person.

Yn bedwerydd, nid yw'r ddau bapur yn atgynhyrchu canfyddiadau ei gilydd. Antigenau gwahanol, cwestiynau gwahanol, mesurau canlyniad gwahanol, ac mewn un achos dim triniaeth o gwbl. Gwall categori yw eu dyfynnu gyda'i gilydd fel dwy astudiaeth gadarnhaol o driniaeth MS.

Beth mae hyn yn ei olygu i ddarllenwyr sy'n pwyso a mesur y dystiolaeth

Nid oes protocol glas methylen sefydledig ar gyfer MS yn y papurau hyn. Mae'r astudiaeth driniaeth yn cefnogi ymchwil bellach i AMPK, SIRT1, NF-kB, a'r cydbwysedd rhwng Th17 a Treg mewn MOG EAE. Mae'r astudiaeth batholeg yn ein hatgoffa y gall anaf i feinwe waethygu tra bod sgorau'n edrych yn ddigyfnewid, a bod glas methylen mewn adran dulliau weithiau'n golygu jar o staen yn hytrach na chwpwrdd meddyginiaethau. Dylai darllenwyr sy'n dilyn ymchwil barhaus i sglerosis ymledol gadw'r gwahaniaeth rhwng staen a chyffur mewn cof. Dylid trafod cwestiynau diogelwch, gan gynnwys risgiau sy'n ymwneud â'r gwaed a rhyngweithiadau, gyda chlinigydd ochr yn ochr â data diogelwch cyffredinol glas methylen cyn i unrhyw un weithredu ar sail penawdau labordy.

Gellir crynhoi'r casgliad mewn un frawddeg. Rhoddodd un astudiaeth a ddyfynnwyd ddosau o las methylen i lygod MOG EAE ac adroddodd glefyd llai difrifol gyda newid gwrthlidiol yn yr ymateb imiwnedd, tra na roddodd yr astudiaeth arall a ddyfynnwyd unrhyw ddosau ac y defnyddiodd las methylen i staenio llinyn y cefn yn unig wrth gofnodi chwe mis o ddifrod cronnol i fyelin ac acsonau, felly nid yw'r ddwy gyda'i gilydd yn sefydlu bod glas methylen yn helpu MS mewn pobl.