Тэст аднаўлення метыленавага сіняга ў рубцовай вадкасці

Выпускніца тэлефануе з фермы, трымаючы ў руцэ прабірку з сіняй вадкасцю. Яна дадала метыленавы сіні ў рубцовую вадкасць дзесяць хвілін таму, але сіні колер яшчэ застаецца. Яна пытаецца, ці трэба даць карове больш фарбавальніка.

Гэтае пытанне выяўляе памылковае разуменне тэсту. Пры тэсце аднаўлення метыленавага сіняга ў рубцовай вадкасці фарбавальнік дадаюць у прабірку, а ніколі не ўводзяць жывёле. Увесь аналіз адбываецца ў прабірцы. Час, за які знікае сіні колер, дае інфармацыю пра мікробы ў гэтай пробе, а не пра лячэнне, патрэбнае жывёле.

Блытаніна зразумелая, бо метыленавы сіні сустракаецца ў трох розных ветэрынарных кантэкстах. Гэты артыкул размяжоўвае іх і паказвае, як інтэрпрэтаваць час аднаўлення разам з pH, станам найпрасцейшых, якасцю адбору пробы і клінічнымі прыкметамі.

Што насамрэч вымярае тэст

Метыленавы сіні мае сіні колер у акісленым стане і амаль бясколерны ў адноўленым. Свежая рубцовая вадкасць здаровай жывёлы мае моцную аднаўленчую здольнасць, бо анаэробныя бактэрыі актыўна ферментуюць корм. Калі дадаць у такую вадкасць невялікую колькасць фарбавальніка, бактэрыяльны метабалізм прыводзіць да знікнення колеру за некалькі хвілін.

Такім чынам, прынцып просты: актыўная анаэробная мікрафлора хутка абясколервае фарбавальнік, а неактыўная або пашкоджаная — павольна. Кароткі час азначае большую аднаўленчую здольнасць гэтай пробы. Падоўжаны час паказвае на прыгнечаную мікробную актыўнасць, калі проба была правільна адабраная і апрацаваная.

Тэст не вымярае акісляльна-аднаўленчы патэнцыял рубца непасрэдна. У метадычным даследаванні на буйной рагатай жывёле, дзе тэст аднаўлення параўноўвалі з прамымі вымярэннямі ў мілівольтах, не выявілі лінейнай карэляцыі паміж часам аднаўлення і вымераным акісляльна-аднаўленчым патэнцыялам. Аўтары прыйшлі да высновы, што гэтыя два паказчыкі нельга лічыць узаемазаменнымі вымярэннямі адной і той жа велічыні. Поўнае параўнанне выкладзена на PubMed. Разглядайце тэст аднаўлення як функцыянальную пробу мікробнай папуляцыі, а не як танную замену электроду.

У апісанні простага парушэння стрававання ў жвачных у Merck/MSD падоўжаны час аднаўлення разглядаецца ў сукупнасці з адхіленнямі pH рубца і зніжэннем колькасці найпрасцейшых. Ніводзін асобны паказчык не вызначае дыягназ. Яго вызначае сукупнасць прыкмет.

Стандартная працэдура непасрэдна каля жывёлы

Пратаколы розных навучальных устаноў крыху адрозніваюцца, таму запісвайце дакладныя аб’ёмы і тэмпературу, якія выкарыстоўваеце, і параўноўвайце вынікі толькі ў межах аднаго пратаколу. Адзін з шырока распаўсюджаных навучальных варыянтаў:

Адбярыце прынамсі ад 10 да 20 mL свежай рубцовай вадкасці, мінімізуючы прымесь сліны, кантакт з паветрам і ахаладжэнне. Правядзіце тэст без затрымкі.
Прыгатуйце 0.03 працэнта раствору метыленавага сіняга, што адпавядае 0.3 mg на mL.
Дадайце фарбавальнік у колькасці 5 працэнтаў ад аб’ёму вадкасці. Гэта 1.0 mL фарбавальніка на 20 mL вадкасці або 0.5 mL фарбавальніка на 10 mL вадкасці. У абодвух выпадках суадносіны вадкасці і фарбавальніка складаюць 20 да 1.
Пакіньце другую прабірку з вадкасцю з той жа пробы без дадання фарбавальніка як кантроль колеру.
Асцярожна змяшайце, адразу ўключыце таймер і падтрымлівайце тэмпературу прабіркі блізкай да тэмпературы цела, прыкладна ад 37 да 39 градусаў Цэльсія ў залежнасці ад мясцовага пратаколу.
Запішыце час, праз які колер вадкасці ў доследнай прабірцы стане такім жа, як у кантрольнай. На мяжы з паветрам можа захоўвацца тонкае сіняе кольца, бо кісларод там зноў акісляе фарбавальнік. Не чакайце знікнення гэтага кольца.

Акісляльна-аднаўленчая хімія метыленавага сіняга тлумачыць, чаму кісларод тут мае значэнне. Інтэнсіўнае ўстрэсванне, шырокая адкрытая прабірка або доўгая затрымка спрыяюць пранікненню кіслароду і захоўваюць сіні колер фарбавальніка даўжэй, чым гэта было б у самім рубцы. Па той жа прычыне важныя дэталі тэхнікі адбору рубцовай вадкасці без забруджвання. Сліна разбаўляе пробу і павышае pH, таму пры адборы праз страўнікавы зонд многія клініцысты адкідаюць першую порцыю, калі аб’ём гэта дазваляе.

Што вымяраюць розныя назіранні

Час аднаўлення адказвае толькі на адно пытанне. Прыведзеная ніжэй ацэнка стану рубца паказвае, што дае кожнае назіранне каля жывёлы. Улічвайце ўвесь радок, а не адну ячэйку.

Назіранне	Што яно вымярае	Тыповы вынік пры абследаванні каля жывёлы	Частыя фактары, якія скажаюць вынік
Час аднаўлення метыленавага сіняга	Функцыянальная аднаўленчая актыўнасць анаэробных бактэрый у пробе	У буйной рагатай жывёлы часта ад 2 да 6 хвілін; у авечак і коз часта хутчэй, пры гэтым 6 хвілін выкарыстоўваюць як практычную мяжу дастатковай актыўнасці, а час больш за 10 хвілін лічаць выражаным адхіленнем	Халодная, даследаваная з затрымкай, насычаная паветрам або разбаўленая сліной проба; недахоп субстрату пасля працяглай анарэксіі; антымікробныя прэпараты, уведзеныя праз рот; параўнанне пры розных суадносінах фарбавальніка або тэмпературах
pH рубца	Хімічнае асяроддзе, кіслотная або шчолачная нагрузка	У буйной рагатай жывёлы на грубых кармах часта каля 6.0–7.2; у дапаможніках па дробных жвачных часта прыводзяць прыкладна 6.5–7.5; рацыён і час пасля кармлення змяняюць значэнне	Прымесь сліны павышае pH у пробах, адабраных страўнікавым зондам; страта вуглякіслага газу пасля адбору; кармленне збожжам зніжае pH
Колькасць і рухомасць найпрасцейшых	Захаванасць папуляцыі інфузорый, асабліва буйных формаў, адчувальных да парушэнняў	Шмат арганізмаў розных памераў з актыўным накіраваным рухам у цёплай свежай кроплі	Ахаладжэнне запавольвае рух; цяжкі ацыдоз можа прывесці да знікнення найпрасцейшых; затрымка стварае ўражанне млявасці ў нармальнай пробе
Пах, колер і кансістэнцыя	Характар ферментацыі і забруджванне	Вадкасць са слабым араматычным пахам, зеленавата-карычневая, злёгку вязкая	Гніласны або кіслы пах пры цяжкім дысбіёзе; вадзяністая вадкасць або вадкасць з вялікай прымессю сліны пасля няякаснага адбору
Скарачэнні рубца і апетыт	Функцыя перадстраўнікаў і спажыванне корму на ўзроўні ўсёй жывёлы	Рэгулярныя скарачэнні і стабільнае перажоўванне жуйкі ў бадзёрай жывёлы	Нядаўняя змена рацыёну, боль, абязводжванне, сістэмнае захворванне

Галоўнае — разглядаць табліцу ў цэлым. Падоўжаны час аднаўлення разам з млявымі найпрасцейшымі, адхіленнем pH і слабымі скарачэннямі паказвае на сапраўднае прыгнечанне мікробнай актыўнасці. Асобны падоўжаны час у бадзёрай жывёлы, якая перажоўвае жуйку і мае актыўных найпрасцейшых, хутчэй паказвае на праблему з пробай, а не з рубцом. Паўтарыце адбор, перш чым прымаць меры.

Інтэрпрэтацыя часу з улікам pH і анамнезу

Рацыён задае зыходны ўзровень. Рацыёны з вялікай доляй канцэнтратаў хутка ферментуюцца і могуць абясколерваць фарбавальнік прыкладна за хвіліну, тады як пры кармленні сенам гэта можа займаць некалькі хвілін нават у здаровых жывёл. Таму кароткі час сам па сабе не сведчыць пра лепшае здароўе. Ён сведчыць пра тое, што большая колькасць субстрату, здольнага да ферментацыі, сустрэлася з актыўнымі мікробамі.

Цяжкая перагрузка збожжам парушае гэтую простую заканамернасць. Спачатку ферментацыя вугляводаў можа быць інтэнсіўнай, затым пашкоджанне кіслатой прыгнятае нармальную мікрафлору і найпрасцейшых, а час аднаўлення падаўжаецца. Таму адно з навучальных правілаў сцвярджае, што тэст невалідны пры pH рубца ніжэй прыкладна за 5.5. На гэтым этапе мікрафлора, якую даследуюць, ужо змянілася.

Практычны арыенцір для інтэрпрэтацыі спалучэнняў:

Нармальны pH з аднаўленнем прыкладна на працягу 6 хвілін указвае на функцыянальна актыўную мікрафлору.
Нармальны pH з істотна падоўжаным аднаўленнем указвае на неактыўнасць праз анарэксію, уплыў антымікробных прэпаратаў або праблемы з якасцю пробы.
Высокі pH з падоўжаным аднаўленнем часта назіраецца пасля працяглай анарэксіі пры недахопе субстрату, але ўлічвайце магчымасць прымесі сліны пры адборы зондам.
Нізкі pH са зніжанай актыўнасцю найпрасцейшых выклікае падазрэнне на дысбіёз, звязаны з вугляводамі. Тут дапамагаюць рэкамендацыі па інтэрпрэтацыі pH рубца. Значэнні ніжэй за 5.5 разам з прыгнечаннем агульнага стану паказваюць хутчэй на перагрузку збожжам і цяжкі ацыдоз, чым на простае парушэнне стрававання.

Заўсёды запісвайце нядаўняе ўвядзенне тэтрацыклінаў праз рот, выкарыстанне кармавых іанафораў, працяглае сістэмнае ўжыванне антымікробных прэпаратаў, рэзкія змены рацыёну, працягласць анарэксіі і спажыванне вады. Дапаможнік MSD асобна папярэджвае, што тэтрацыкліны, уведзеныя праз рот, могуць істотна прыгнятаць мікрафлору рубца. Іанафоры мэтанакіравана змяняюць бактэрыяльныя папуляцыі. Без гэтага анамнезу падоўжаны час немагчыма інтэрпрэтаваць.

Якасць адбору пробы заслугоўвае такой жа ўвагі. Кантраляванае даследаванне паказала, што пробы, адабраныя страўнікавым зондам, мелі вышэйшы pH і ніжэйшае ўтрыманне лятучых тлустых кіслот, чым пробы, адабраныя праз канюлю ў тых жа жывёл, пераважна праз прымесь сліны. Праз 60 хвілін пасля адбору час аднаўлення значна падаўжаўся пры кожным даследаваным аб’ёме, прычым малыя пробы былі найбольш уразлівыя. Адбірайце прынамсі 10 mL, праводзьце даследаванне на працягу 30 хвілін, выконвайце тэст аднаўлення адным з першых, захоўвайце пробу цёплай і мінімізуйце кантакт з паветрам.

Тры прымяненні, якія нельга блытаць

Адзін і той жа фарбавальнік, тры розныя сістэмы.

Па-першае, апісаны тут аналіз рубцовай вадкасці. Узор — адабраная рубцовая вадкасць. Фарбавальнік дадаюць in vitro ў канцэнтрацыі 0.03 працэнта. Канчатковы паказчык — час да абясколервання. Мэта — ацэнка мікробнай аднаўленчай актыўнасці.

Па-другое, увядзенне метыленавага сіняга жывой жвачнай жывёле. Вядомы прыклад — унутрывеннае лячэнне нітратнага або нітрытнага таксікозу з метгемаглабінеміяй, калі прэпарат аднаўляе функцыянальны гемаглабін. Тут дзейнічаюць правілы адносна дозы, лекавай формы, рэшткавых колькасцей і тэрмінаў чакання. Гэтае рашэнне не мае нічога агульнага з вымярэннем часу ў прабірцы. Калі фарбавальнік выкарыстоўваюць як трасер in vivo ў пэўнай працэдуры, важна тое, куды ён перамяшчаецца, а не тое, як хутка мікробы рубца яго аднаўляюць.

Па-трэцяе, тэст аднаўлення ў малацэ. Узор — малако. Фарбавальнік дадаюць у пробу малака. Хуткае знікненне сіняга колеру звычайна паказвае на большую мікробную актыўнасць і горшую захавальнасць, а павольнае аднаўленне — на лепшую якасць. Гэты тэст адносіцца да харчовай мікрабіялогіі і праверкі якасці малака, а не да ветэрынарнай ацэнкі рубца, і ён не з’яўляецца падлікам бактэрый.

Дакладныя назвы дапамагаюць пазбегнуць памылак: час аднаўлення ў рубцовай вадкасці, сістэмнае лячэнне метыленавым сінім або яго выкарыстанне як трасера і тэст аднаўлення ў малацэ. Правіла бяспекі змяшчаецца ў адным сказе. Фарбавальнік для аналізу рубцовай вадкасці застаецца ў лабараторнай прабірцы, а гэтую прабірку ўтылізуюць. Для правядзення тэсту яго ніколі не ўводзяць жывёле.

Кароткае правіла для выкліку на ферму

Стандартызуйце канцэнтрацыю фарбавальніка на ўзроўні 0.03 працэнта і суадносіны 1 частка фарбавальніка да 20 частак вадкасці, даследуйце свежую вадкасць пры тэмпературы, блізкай да тэмпературы цела, параўноўваючы яе з кантрольнай пробай без фарбавальніка, і інтэрпрэтуйце час у хвілінах разам з pH, рухомасцю найпрасцейшых, якасцю адбору, рацыёнам, прэпаратамі, скарачэннямі рубца, апетытам, калам і станам гідратацыі. Асобны лік ніколі не дыягнастуе парушэнне стрававання. Дыягназ вызначае ўзгодненая сукупнасць прыкмет.