Ці выклікае метыленавы сіні рак? Таксікалагічныя дадзеныя

Метыленавы сіні даваў сігналы аб узнікненні пухлін у доўгатэрміновых эксперыментах на жывёлах і станоўчыя вынікі ў некалькіх лабараторных тэстах на пашкоджанне генетычнага матэрыялу. Гэтыя вынікі заслугоўваюць увагі. Яны не вызначаюць верагоднасць таго, што ў чалавека пасля канкрэтнага ўздзеяння разаўецца рак.

Ацэнка IARC, апублікаваная ў 2016 годзе, аднесла метыленавы сіні да групы 3, што азначае немагчымасць класіфікаваць яго канцэрагеннасць для чалавека. Рабочая група не мела дадзеных пра рак у людзей і ацаніла доказы на жывёлах як абмежаваныя. Група 3 не азначае даказанай бясшкоднасці. У той жа час вынік даследавання на жывёлах не робіць кожны выпадак уздзеяння на чалавека даказанай прычынай раку.

Тры пытанні, якія патрабуюць асобных адказаў

Канцэрагеннасць датычыцца развіцця пухлін. Доўгатэрміновае даследаванне на жывёлах можа выявіць заканамернасці ўзнікнення пухлін пасля вызначанага ўздзеяння. Генатаксічнасць датычыцца пашкоджання генетычнага матэрыялу або звязаных з гэтым клетачных працэсаў. Станоўчы тэст на мутацыі дае папераджальны сігнал, але не падлічвае непасрэдна выпадкі раку ў людзей. Рызыка для чалавека датычыцца верагоднасці шкоды пры рэальных умовах уздзеяння.

Для гэтых пытанняў патрэбныя розныя вымярэнні. Падлік бактэрыяльных мутантаў, даследаванне клетак крыві мышэй і дыягностыка пухлін пры некрапсіі не з'яўляюцца ўзаемазаменнымі канчатковымі паказчыкамі. Таксама эксперымент па лячэнні, які паказвае, што рэчыва пашкоджвае ракавыя клеткі, не вызначае, ці можа паўторнае ўздзеянне ініцыяваць пухліны ў здаровай тканцы. Асобнае абмеркаванне метыленавага сіняга ў даследаваннях раку разглядае сцвярджэнні пра лячэнне.

Параўнанне даследаванняў: фактычнае хранічнае ўздзеянне

У асноўным эксперыменце выкарыстоўваўся трыгідрат метыленавага сіняга, які ўводзілі ў 0.5% водным растворы метылцэлюлозы метадам пероральнага зандавання — дакладна адмеранага ўвядзення праз трубку ў страўнік. Кожная група дозы ў хранічным даследаванні ўключала 50 самцоў і 50 самак кожнага віду. Паводле справаздачы аб даследаванні Аўэрбаха і калег, увядзенне праводзілі пяць дзён на тыдзень на працягу двух гадоў.

У табліцы захаваны высновы NTP для асобных відаў. Колькасці пазначаны ў міліграмах выпрабаванага матэрыялу на кілаграм масы цела жывёлы ў дні ўвядзення, а не як рэкамендацыі для чалавека. Жывёлы ў групах з нулявой дозай атрымлівалі носьбіт.

Мадэль	Групы доз, mg/kg	Шлях увядзення і працягласць	Выснова NTP і адпаведны вынік
Самцы пацукоў F344/N	0, 5, 25, 50	Пероральнае зандаванне; пяць дзён/тыдзень; два гады	Некаторыя доказы: павялічылася колькасць адэном астраўковых клетак падстраўнікавай залозы і сукупных выпадкаў адэномы/карцыномы.
Самкі пацукоў F344/N	0, 5, 25, 50	Той жа рэжым	Пры гэтых умовах доказаў канцэрагеннай актыўнасці не выяўлена.
Самцы мышэй B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Пероральнае зандаванне; пяць дзён/тыдзень; два гады	Некаторыя доказы: павялічылася колькасць карцыном тонкай кішкі і сукупных выпадкаў адэномы/карцыномы. Злаякасная лімфома таксама магла быць звязаная з уздзеяннем.
Самкі мышэй B6C3F1	0, 2.5, 12.5, 25	Той жа рэжым	Неадназначныя доказы: нязначнае павелічэнне выпадкаў злаякаснай лімфомы.

«Некаторыя доказы» — гэта катэгорыя NTP для станоўчага эксперыментальнага выніку з меншай сілай доказаў, чым «ясныя доказы». «Неадназначныя» азначае нявызначаны вынік. Гэтыя катэгорыі адлюстроўваюць сілу доказаў, а не працэнт рызыкі або рэйтынг канцэрагеннай актыўнасці.

Вынік у самцоў пацукоў не паказваў раўнамернага росту з павелічэннем дозы. Адэнома або карцынома астраўковых клетак падстраўнікавай залозы назіралася ў 4/50 жывёл кантрольнай групы і ў 9/50, 14/50 і 8/50 жывёл пры паслядоўным павелічэнні дозы. У апублікаванай працы статыстычная значнасць адзначана толькі для сярэдняй дозы. Таму простае апісанне як прамой залежнасці ад дозы было б недакладным; гэта таксама не даказвае, што найвышэйшая доза мела ахоўны эфект. Адэнома — дабраякасная пухліна, а карцынома — злаякасная. Сукупны канчатковы паказчык нельга апісваць так, нібы кожная ўлічаная пухліна была ракам.

Чаму розныя рэзюмэ гучаць супярэчліва

Актуальная інструкцыя па медыцынскім ужыванні PROVAYBLUE паведамляе пра змены ў падстраўнікавай залозе самцоў пацукоў, але не апісвае звязаных з прэпаратам неапластычных змен у мышэй. У навуковай працы сказана, што павелічэнне колькасці наватвораў у мышэй не было статыстычна значным, хоць адзначаліся станоўчыя тэндэнцыі. Тым не менш NTP прысвоіла даследаванням на мышах катэгорыі, паказаныя вышэй.

Аналіз даследаванняў на жывёлах IARC удакладняе важнае статыстычнае адрозненне: вынікі па пухлінах кішэчніка ў самцоў мышэй паказвалі значныя тэндэнцыі ў залежнасці ад дозы, але асобныя групы, якія атрымлівалі дозы, не мелі значных адрозненняў пры папарных параўнаннях з кантрольнай групай. Праверка агульнай заканамернасці па розных дозах адрозніваецца ад асобнай праверкі кожнай групы. Варта захоўваць фармулёўкі першакрыніцы, а не зводзіць усе гэтыя вынікі да «ў мышэй развіўся рак» або «даследаванне на мышах было адмоўным». Ніводзін з гэтых вынікаў не дае вымеранай частаты раку ў людзей.

Параўнанне даследаванняў: паказчыкі пашкоджання генетычнага матэрыялу

Раздзел пра генетычную таксікалогію ў Technical Report 540 NTP апісвае іншы набор эксперыментаў. S9 — гэта лабараторная сумесь, якая змяшчае ферменты печані і выкарыстоўваецца для мадэлявання метабалічнай актывацыі. Яе прысутнасць не ператварае клетачны тэст у даследаванне ўздзеяння на ўвесь арганізм.

Тэставая сістэма	Фактычныя ўмовы ўздзеяння	Вымераны паказчык і вынік
Тэсты на мутацыі ў бактэрыях, другая выпрабаваная партыя	Salmonella: 0.25–150 µg/plate; E. coli: 0.25–1,500 µg/plate; з S9 печані пацука і без яе	Павелічэнне колькасці мутацый у выпрабаваных штамах.
Культываваныя клеткі яечніка кітайскага хамяка	Тэставанне абменаў паміж сястрынскімі храматыдамі ўключала 0.17–2.5 µg/mL без S9, да 5 µg/mL з S9; пры тэставанні храмасомных аберацый выкарыстоўвалі 4.7–22 µg/mL	Станоўчыя вынікі для абменаў і храмасомных аберацый.
Самцы мышэй, востры эксперымент	Аднаразовая ўнутрыбрушынная ін'екцыя: 25, 50 або 150 mg/kg; узоры праз 48 гадзін	Павелічэння колькасці мікраядзерных эрытрацытаў у касцявым мозгу або крыві не выяўлена.
Самцы і самкі мышэй, паўторны эксперымент	Пероральнае зандаванне: 25, 50, 100 або 200 mg/kg; пяць дзён/тыдзень на працягу трох месяцаў	Павелічэння колькасці мікраядзерных эрытрацытаў у перыферычнай крыві не выяўлена.

Мікраядро — гэта невялікае дадатковае ядзернае ўтварэнне, якое можа адлюстроўваць разрыў або страту храмасомы падчас дзялення клеткі. Адмоўны вынік аналізу клетак крыві адказвае на гэтае канкрэтнае пытанне для даследаваных клетак. Ён не можа выключыць усе віды пашкоджання ДНК ва ўсіх органах. І наадварот, станоўчы тэст на культываваных клетках не паказвае, якой канцэнтрацыі рэчыва дасягнулі тканкі чалавека.

Інструкцыя па медыцынскім ужыванні таксама фіксуе гэтую агульную карціну: станоўчыя тэсты на бактэрыях і культываваных клетках, адмоўныя тэсты на мікраядры ў мышэй. Простае азначэнне метыленавага сіняга як «генатаксічнага» або «негенатаксічнага» адкідвае інфармацыю, важную для інтэрпрэтацыі.

Што гэта азначае для ўздзеяння на чалавека

Гэтыя даследаванні не даюць валідзіраванага штодзённага парога для чалавека, ніжэй за які рызыка раку была б вызначана як бяспечная. Простае дзяленне дозы для пацука на каэфіцыент масы цела не ўлічыла б адрозненні ў усмоктванні, метабалізме, шляху ўвядзення, частаце ўздзеяння або працягласці ўздзеяння на працягу жыцця. Гэта дало б пералічаную велічыню, а не доказ бяспекі.

Двухгадовы эксперымент з пероральным зандаваннем і кароткае нутравеннае ўвядзенне пад медыцынскім наглядам даследуюць розныя пытанні. Гэтае адрозненне не дазваляе рабіць прамую колькасную экстрапаляцыю, але не адмяняе вынікі даследаванняў на жывёлах. Карысная ацэнка пачынаецца з дакладнага вызначэння злучэння і прэпаратыўнай формы, колькасці, шляху ўвядзення, частаты, працягласці і мэты выкарыстання. «Некалькі кропель» не ўказвае ні канцэнтрацыю, ні вымераны аб'ём.

Калі метыленавы сіні ўводзіўся па медыцынскіх паказаннях, адны толькі вынікі даследаванняў пухлін не могуць вызначыць, ці пераважалі карысць гэтага лячэння над рызыкамі. Калі разглядаецца паўторнае неабавязковае выкарыстанне, нявымераную доўгатэрміновую рызыку раку не варта апісваць як нулявую. Больш непасрэдныя пытанні, уключаючы ўзаемадзеянні з лекамі і схільнасць да гемолізу, разглядаюцца ў матэрыяле пра пабочныя эфекты і супрацьпаказанні.

Для далейшага чытання выкарыстоўвайце бібліятэку даследаванняў, каб адрозніваць даследаванні на людзях ад эксперыментаў на жывёлах і клетках. Асноўнае пытанне для кожнай працы — якое ўздзеянне ў ёй даследавалася і які вынік фактычна вымяраўся.