মিথিলিন ব্লু আৰু কোষীয় বাৰ্ধক্য: ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ পৰীক্ষাবোৰে কি জোখে

এটা সাধাৰণ ভুল ব্যাখ্যা এনেধৰণৰ। এখন গৱেষণাপত্ৰই জনায় যে মিথিলিন ব্লুৱে কালচাৰত সংবৰ্ধিত ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ কোষসমষ্টিৰ দ্বিগুণীকৰণৰ সংখ্যা 20ৰো অধিক বৃদ্ধি কৰিছে। সেয়ে এজন পাঠকে সিদ্ধান্ত লয় যে ই বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত কোষ আঁতৰায় বা মানুহৰ আয়ুসো একে পৰিমাণে বৃদ্ধি কৰে। এই সিদ্ধান্ত স্বাভাৱিক যেন লাগে। কিন্তু দুটা পৃথক দিশত ই ভুল।

মূল সমস্যাটো সংখ্যাগত নহয়, ধাৰণাগত। কোষসমষ্টিৰ দ্বিগুণীকৰণ, কোষীয় বাৰ্ধক্যৰ সূচক আৰু টেলোমিয়াৰৰ পৰিমাপে প্ৰত্যেকেই পৃথক প্ৰশ্নৰ উত্তৰ দিয়ে। মিথিলিন ব্লুৰ ফাইব্ৰোব্লাষ্ট-সম্পৰ্কীয় গৱেষণাক পৰীক্ষাগাৰৰ পাত্ৰত থকা এটা কোষপ্ৰকাৰৰ বাৰ্ধক্য অৱস্থাত প্ৰৱেশ পলম হোৱাৰ অধ্যয়ন হিচাপে পঢ়াই উত্তম; মাইটোকণ্ড্ৰিয়াৰ পৰিমাপেও ইয়াক সমৰ্থন কৰে। ইতিমধ্যে বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত হোৱা কোষ বাছি বাছি আঁতৰোৱাৰ পৰা এইটো পৃথক, আৰু জীৱদেহৰ বাৰ্ধক্যৰ পৰাও পৃথক। এই পাৰ্থক্যৰ বিস্তৃত প্ৰসংগ মাইটোকণ্ড্ৰিয়াৰ ইলেক্ট্ৰন পৰিবহনে কোষৰ শক্তি কেনেদৰে গঢ় দিয়ে আৰু মিথিলিন ব্লুৰ গৱেষণাৰ দাবীবোৰ কেনেদৰে ব্যাখ্যা কৰিব লাগে, তাৰ অংশ।

কোষসমষ্টিৰ দ্বিগুণীকৰণে ইতিহাস গণনা কৰে, যৌৱন নহয়

বেছিভাগ মূল ফলাফল IMR90 কোষৰ পৰা আহিছে। এইবোৰ স্বাভাৱিক মানৱ ভ্ৰূণৰ হাওঁফাওঁৰ ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ এটা কোষধাৰা, যাৰ প্ৰতিলিপি-বিভাজনৰ ক্ষমতা সীমিত। IMR90 ফাইব্ৰোব্লাষ্টত মিথিলিন ব্লু আৰু প্ৰতিলিপি-বিভাজনমূলক আয়ুসৰ প্ৰাৰম্ভিক অধ্যয়নত নিৰ্দিষ্ট সূচী অনুসৰি কালচাৰবোৰ নতুন পাত্ৰলৈ স্থানান্তৰ কৰা হৈছিল আৰু বিভাজন বন্ধ নোহোৱালৈকে কোষসমষ্টিৰ সঞ্চিত দ্বিগুণীকৰণ নথিভুক্ত কৰা হৈছিল। 100 nM-ক কেন্দ্ৰীয় মাত্ৰা হিচাপে লৈ নেনোম’লাৰ স্তৰত কৰা প্ৰয়োগে বিভাজন বন্ধ হোৱাৰ আগতে কালচাৰবোৰত 20ৰো অধিক অতিৰিক্ত দ্বিগুণীকৰণ সম্ভৱ কৰিছিল।

কোষসমষ্টিৰ এটা দ্বিগুণীকৰণ হৈছে হিচাপ ৰখাৰ একক। কোষসমষ্টি আনুমানিকভাৱে কিমানবাৰ দুগুণ হৈছে, ই সেয়া নথিভুক্ত কৰে। কোনো একক কোষ বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত, সাময়িকভাৱে নিষ্ক্ৰিয়, বিভেদিত নে মৃত, সেয়া ই পোনপটীয়াকৈ নজনায়। কোষবোৰে অধিক সময় বিভাজনৰ সক্ষমতা ধৰি ৰখাৰ বাবে, চাপৰ ফলত কম কোষৰ বিভাজন আগতীয়াকৈ বন্ধ হোৱাৰ বাবে, বা পৰিস্থিতিয়ে বৃদ্ধি কৰিব পৰা উপ-কোষসমষ্টি বাছনি কৰাৰ বাবে কালচাৰত দ্বিগুণীকৰণৰ সংখ্যা বাঢ়িব পাৰে। কেৱল এই গণনাই সেই পথবোৰ পৃথক কৰিব নোৱাৰে।

সেইবাবেই দ্বিগুণীকৰণৰ গণনাৰ সৈতে সূচকবোৰো ব্যৱহাৰ কৰা হয়। গণনাই কয় কোষবৃদ্ধি কিমান দিন চলিল। সূচকবোৰে কয় বিভাজন বন্ধ হোৱা বা জীয়াই থকা কোষবোৰে কি অৱস্থাত প্ৰৱেশ কৰিলে।

পৰিমাপৰ নিৰ্দেশিকা: প্ৰতিটো সূচকে কি জনায়

কালচাৰত কোষীয় বাৰ্ধক্য হৈছে কেইবাটাও স্বতন্ত্ৰ পৰিমাপ মিলাই চিনাক্ত কৰা এটা ফেনোটাইপ। কোনো এটা ৰঞ্জন বা প্ৰ’টিনে অকলে ইয়াক প্ৰমাণ নকৰে।

DNA সংশ্লেষণ হ্ৰাসৰ সৈতে বৃদ্ধি বন্ধ হোৱা। BrdU বা EdU-ৰ অন্তৰ্ভুক্তি কমা, চেপেটা আকৃতি আৰু পুনৰ প্লেটিং কৰাৰ পিছত বৃদ্ধি নোহোৱাৰ জৰিয়তে স্থায়ী বৃদ্ধি-স্থগিত অৱস্থা পৰীক্ষা কৰা হয়। ইয়াৰ দ্বাৰা বাৰ্ধক্যজনিত বৃদ্ধি-স্থগিত অৱস্থাক সাময়িক নিষ্ক্ৰিয়তাৰ পৰা পৃথক কৰা হয়।

কোষীয় বাৰ্ধক্য-সম্পৰ্কীয় বিটা গেলেক্টোচিডেজ। SA-beta-gal ৰঞ্জনে pH 6.0ৰ ওচৰত লাইছ’জোমৰ সক্ৰিয়তা দেখুৱায়। লাইছ’জোমৰ ভৰ বৃদ্ধি পোৱাৰ লগে লগে বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত ফাইব্ৰোব্লাষ্টত প্ৰায়ে এই ৰঞ্জনৰ ফল ধনাত্মক হয়। ই কেৱল বাৰ্ধক্যৰ বাবে নিৰ্দিষ্ট নহয়, সেয়ে কোষবৃদ্ধি আৰু আণৱিক সূচকৰ সৈতে ইয়াক ব্যাখ্যা কৰা হয়।

p16 আৰু p21 পথ। p16-এ CDK4 আৰু CDK6 তথা RB পথৰ জৰিয়তে কাম কৰে। p21 প্ৰায়ে p53-ৰ জৰিয়তে প্ৰেৰিত হয়। এইবোৰৰ স্তৰ বঢ়াই বৃদ্ধি-স্থগিত অৱস্থাৰ সমৰ্থন কৰে, কিন্তু কোনোটো প্ৰ’টিনেই কেৱল কোষীয় বাৰ্ধক্যৰ সৈতে জড়িত নহয়।

নিঃসৰণৰ অৱস্থা। কোষীয় বাৰ্ধক্য-সম্পৰ্কীয় নিঃসৰণ ফেনোটাইপ, বা SASP, বুলিলে চাইট’কাইন, কেম’কাইন, বৃদ্ধিকাৰক আৰু প্ৰ’টিয়েজৰ নিঃসৰণত হোৱা পৰিৱৰ্তনক বুজায়। SASP কাৰকসমূহৰ RNA বা প্ৰ’টিন পৰীক্ষাই কোষবোৰে চুবুৰীয়া কোষলৈ কেনেদৰে সংকেত পঠিয়ায়, সেয়া বৰ্ণনা কৰে। এইবোৰে প্ৰতিলিপি-বিভাজনৰ ক্ষমতা পোনপটীয়াকৈ জোখে নহয়।

জাৰক পদাৰ্থ আৰু মাইটোকণ্ড্ৰিয়াৰ পৰিমাপ। মিথিলিন ব্লুৰ গৱেষণাপত্ৰবোৰে মাইটোকণ্ড্ৰিয়া-সম্পৰ্কীয় এটা স্তৰ যোগ কৰে: কমপ্লেক্স IV-ৰ পৰিমাণ আৰু সক্ৰিয়তা, অক্সিজেন ব্যৱহাৰ, হিম সংশ্লেষণ, ঝিল্লীৰ ভৰ, ঝিল্লীৰ বিভৱ, ATP আৰু জাৰক পদাৰ্থৰ সংকেত। এইবোৰে বৃদ্ধি বন্ধ হোৱাত পলমৰ সৈতে দেখা দিয়া বিপাকীয় অৱস্থা বৰ্ণনা কৰে। ইহঁতে অকলে কোষীয় বাৰ্ধক্য নিৰ্ধাৰণ নকৰে, কিন্তু প্ৰস্তাৱিত কাৰ্যপ্ৰণালী পৰীক্ষা কৰে। NAD(P)H-এ মিথিলিন ব্লুক বিজাৰিত কৰে আৰু চাইট’ক্ৰ’ম c-এ ইয়াক পুনৰ জাৰিত কৰে—এই ৰিডক্স চক্ৰৰ আৰ্হিটো একেখন ৰিডক্স চক্ৰ আৰু কম জাৰক উৎপাদনৰ মাজৰ সম্পৰ্ক দেখুওৱা IMR90 অধ্যয়নত বৰ্ণনা কৰা হৈছে। মাত্ৰা আৰু বিতৰণৰ সৈতে জড়িত যুক্তি মিথিলিন ব্লুৰ ফাৰ্মাক’লজি আৰু কলাত ইয়াৰ সংস্পৰ্শৰ আলোচনাত সামৰি লোৱা হৈছে।

টেলোমিয়াৰৰ ক্ষয়ৰ হাৰ। সঠিক এককটো হৈছে কেইবা সপ্তাহ ধৰি প্ৰতিটো দ্বিগুণীকৰণত হেৰুওৱা বেছ-পেয়াৰৰ সংখ্যা, কোনো এটা সময়বিন্দুত দৈৰ্ঘ্য নহয়। ক্ষয় লেহেমীয়া হোৱাৰ অৰ্থ হৈছে প্ৰতিটো প্ৰতিলিপি-বিভাজনত কম চুটি হোৱা। ইয়াৰ অৰ্থ দীঘল হোৱা নহয়, আৰু টেলোমিয়াৰত সামান্য পৰিৱৰ্তন হ’লেও চাপে IMR90 কোষৰ বিভাজন বন্ধ কৰিব পাৰে।

ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ তিনিটা পৰীক্ষা-পৰিকল্পনাৰ তুলনা

এই পৃষ্ঠাৰ মৌলিক উপস্থাপন হৈছে তলৰ তুলনাটো। ইয়াত কোষৰ প্ৰকাৰ, সংস্পৰ্শ, পৰিমাপ আৰু সীমাবদ্ধতা একেলগে দেখুওৱা হৈছে।

যিকোনো এটা শাৰীতকৈ শাৰীবোৰৰ মাজত দেখা পোৱা ধৰণটো অধিক গুৰুত্বপূৰ্ণ। কম মাত্ৰাৰ মিথিলিন ব্লু বাৰে বাৰে অধিক দীঘলীয়া কোষবৃদ্ধিৰ সময়সীমা, কমপ্লেক্স IV-ৰ অধিক সক্ৰিয়তা, জাৰক পদাৰ্থৰ কম সংকেত আৰু উন্নত আকৃতিৰ সৈতে জড়িত দেখা যায়। পৰীক্ষা-পৰিকল্পনাটো সময়ৰ সৈতে অনুসৰণভিত্তিক হৈ থাকে: বিভাজিত হৈ থকা কোষেৰে আৰম্ভ কৰা, বৃদ্ধি চলি থাকোঁতে প্ৰয়োগ কৰা, আৰু বিভাজন কিমান দিন চলি থাকে সেয়া নথিভুক্ত কৰা। এই গঠনে পলম হোৱাৰ দাবী সমৰ্থন কৰিব পাৰে। পৃথক পৰিকল্পনা অবিহনে ই অপসাৰণৰ দাবী সমৰ্থন কৰিব নোৱাৰে।

কোষীয় বাৰ্ধক্য পিছুৱাই দিয়া মানেই বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত কোষ আঁতৰোৱা নহয়

পলম হোৱাৰ অৰ্থ হৈছে বিভাজিত হৈ থকা কোষবোৰে বিভাজন বন্ধ কৰাৰ আগতে অধিক সময় বিভাজন অব্যাহত ৰাখে। অপসাৰণ, যাক প্ৰায়ে চেনোলাইটিক প্ৰভাৱ বুলি কোৱা হয়, তাৰ অৰ্থ হৈছে ইতিমধ্যে বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত হোৱা কোষ বাছি বাছি নিধন কৰা বা সিহঁতৰ সংখ্যা হ্ৰাস কৰা, অথচ ওচৰৰ বৃদ্ধি কৰি থকা কোষবোৰ জীয়াই থাকে।

মিথিলিন ব্লুৰ ফাইব্ৰোব্লাষ্ট-সম্পৰ্কীয় সাহিত্যই প্ৰথম গঠনটো পৰীক্ষা কৰে। কালচাৰবোৰে বৃদ্ধি কৰি থকা অৱস্থাত আৰম্ভ কৰে, ধাৰাবাহিক পেচেজৰ সময়ত প্ৰয়োগ পায় আৰু পিছত বৃদ্ধি-স্থগিত অৱস্থাত উপনীত হয়। সেয়ে SA-beta-gal, p16, p21 আৰু SASP কাৰকৰ দৰে সূচক পিছত দেখা দিয়ে বা এটা নিৰ্দিষ্ট পেচেজত কম স্তৰত দেখা যায়। আৰম্ভণিৰ সময় পিছলৈ গ’লেই এই ধৰণৰ ফল আশা কৰা যায়। ই কোনো প্ৰতিষ্ঠিত বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত কোষ আঁতৰোৱা হৈছিল বুলি প্ৰমাণ নকৰে।

চেনোলাইটিক দাবীৰ বাবে বেলেগ পৰীক্ষা-ব্যৱস্থাৰ প্ৰয়োজন হ’ব: প্ৰথমে কালচাৰ এটাক নিশ্চিতভাৱে বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত অৱস্থালৈ নিয়া, তাৰ পিছত যৌগটো প্ৰয়োগ কৰা, আৰু তাৰ পিছত কোষৰ জীৱনক্ষমতা আৰু মৃত্যুৰ পোনপটীয়া পৰিমাপৰ সৈতে বৃদ্ধি কৰি থকা নিয়ন্ত্ৰণ কোষৰ তুলনাত সেই বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত কোষবোৰৰ নিৰ্বাচিত হ্ৰাস দেখুওৱা। কেৱল কোনো সূচক কমা যথেষ্ট নহয়, কাৰণ কোষ নোহোৱা নোহোৱাকৈও সূচকৰ প্ৰকাশ সলনি হ’ব পাৰে, আৰু বাকী থকা বৃদ্ধি কৰি থকা কোষবোৰে গোটেই পাত্ৰটো ভৰাই পেলাব পাৰে। উদ্ধৃত চাৰিটা উৎসৰ কোনোটোৱেই মিথিলিন ব্লুৰ বাবে এই নিৰ্বাচিত কোষ-হ্ৰাসৰ পৰিকল্পনা ব্যৱহাৰ কৰা নাই। সেয়ে সঠিক বৰ্ণনা হৈছে ইন ভিট্ৰ’ অৱস্থাত কোষীয় বাৰ্ধক্য পলম কৰা বা বাৰ্ধক্য-বিৰোধী সক্ৰিয়তা, চেনোলাইটিক সক্ৰিয়তা নহয়। এই পাৰ্থক্যৰ জাৰণজনিত চাপৰ দিশটো কোষবোৰে প্ৰতিক্ৰিয়াশীল অক্সিজেন প্ৰজাতি কেনেদৰে নিয়ন্ত্ৰণ কৰেত অধিক ব্যাখ্যা কৰা হৈছে।

ক্ষণস্থায়ী সংকেতৰ ফলাফলে কথাটো অধিক স্পষ্ট কৰে। 2015ৰ IMR90 গৱেষণাত মিথিলিন ব্লুৱে NAD আৰু NADH-ৰ অনুপাত সাময়িকভাৱে বৃদ্ধি কৰিছিল আৰু AMPK-ৰ ক্ষণস্থায়ী ফছফৰাইলেচন ঘটাইছিল। তাৰ পিছত PGC-1alpha আৰু SURF1 প্ৰেৰিত হৈছিল; দুয়োটাই কমপ্লেক্স IV-ৰ জৈৱগঠনৰ সৈতে জড়িত। AICAR-ৰ দ্বাৰা দীৰ্ঘম্যাদী AMPK সক্ৰিয়কৰণে অতিৰিক্ত দ্বিগুণীকৰণৰ ক্ষেত্ৰত বহু বেয়া ফল দেখুৱাইছিল।

প্ৰতিলিপি-বিভাজনমূলক আয়ুস মানৱ দীৰ্ঘায়ু নহয়

কোষৰ প্ৰতিলিপি-বিভাজনমূলক আয়ুসে নিৰ্দিষ্ট অক্সিজেন, কালচাৰ মাধ্যম আৰু পেচেজৰ ছন্দ থকা নিয়ন্ত্ৰিত পাত্ৰত বিভাজন বন্ধ হোৱাৰ আগৰ দ্বিগুণীকৰণ গণনা কৰে। মানৱ দীৰ্ঘায়ুত দশকজোৰা বিকাশ, ৰোগপ্ৰতিৰোধ, ৰক্তনালীৰ ব্যৱস্থা, ষ্টেম কোষৰ বিশেষ আশ্ৰয়স্থল, আচৰণ আৰু ৰোগ একেলগে জড়িত থাকে। কোনো যৌগে দ্বিতীয়টো সলনি নকৰাকৈ প্ৰথমটো বৃদ্ধি কৰিব পাৰে, আৰু বেছিভাগেই তেনেকুৱাই কৰে।

প্ৰজেৰিয়াৰ ফাইব্ৰোব্লাষ্টত প্ৰজেৰিন সৃষ্টি কৰা এটা নিৰ্দিষ্ট LMNA মিউটেচন থাকে। এই কোষবোৰত খণ্ডিত আৰু কম গতিশীল মাইটোকণ্ড্ৰিয়া, কম ATP, বিকৃত আকৃতিৰ কোষকেন্দ্ৰ আৰু হেটেৰ’ক্ৰ’মাটিনৰ হ্ৰাস দেখা যায়। নেনোম’লাৰ মিথিলিন ব্লুৱে মাইটোকণ্ড্ৰিয়াৰ পৰিমাপ উন্নত কৰিছিল আৰু ঝিল্লীৰ পৰা প্ৰজেৰিন মুক্ত হোৱাকে ধৰি কোষকেন্দ্ৰৰ পৰিমাপসমূহ যথেষ্ট পুনৰুদ্ধাৰ কৰিছিল। এইটো কোষীয় স্তৰত এক উল্লেখযোগ্য উদ্ধাৰ। তথাপি ই ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ ফলাফলহে, আৰু লেখকসকলে প্ৰাণীত পৰীক্ষাক ভৱিষ্যতৰ কাম হিচাপে উল্লেখ কৰিছিল। ৰোগৰ আৰ্হিটো প্ৰজেৰিয়া আৰু অকাল কোষীয় বাৰ্ধক্যৰ আৰ্হিত মিথিলিন ব্লুত অধিক আলোচনা কৰা হৈছে।

ইয়াৰ পৰা পঢ়াৰ বাবে এটা ব্যৱহাৰিক পৰীক্ষা-তালিকা পোৱা যায়।

1. সোধক, প্ৰয়োগ বৃদ্ধি বন্ধ হোৱাৰ আগতে আৰম্ভ হৈছিল নে বৃদ্ধি-স্থগিত অৱস্থা প্ৰতিষ্ঠিত হোৱাৰ পিছত। আগতে আৰম্ভ হোৱাটোৱে পলমৰ দাবী সমৰ্থন কৰে। অপসাৰণৰ দাবীৰ বাবে পিছত প্ৰয়োগ কৰাৰ লগতে নিৰ্বাচিত কোষমৃত্যুৰ তথ্যৰ প্ৰয়োজন।
2. সোধক, নিয়ন্ত্ৰণ গোটৰ দ্বিগুণীকৰণৰ বক্ৰই কি দেখুৱাইছিল। সঞ্চিত দ্বিগুণীকৰণৰ তথ্য অবিহনে সূচকৰ পৰিৱৰ্তন প্ৰসংগহীন হৈ থাকে।
3. কেৱল এটা ৰঞ্জনৰ পৰিৱৰ্তে অন্ততঃ দুটা সূচক-শ্ৰেণীৰ তথ্য বিচাৰক, যেনে কোষবৃদ্ধিৰ লেবেলৰ লগতে p16 বা p21 আৰু SA-beta-gal।
4. সোধক, টেলোমিয়াৰৰ তথ্য কেনেদৰে প্ৰকাশ কৰা হৈছিল। সময়ৰ সৈতে প্ৰতিটো দ্বিগুণীকৰণত হোৱা পৰিৱৰ্তনৰ হাৰ অৰ্থবহ। এটা সময়বিন্দুৰ দৈৰ্ঘ্যৰ ছবিখন নহয়।
5. সোধক, কি কি স্থিৰ ৰখা হৈছিল। পেচেজৰ সময়ত কোষৰ ঘনত্ব, অক্সিজেন, মাধ্যমৰ পৰিৱৰ্তন আৰু নতুন বনাম পুৰণি মিথিলিন ব্লুৰ ষ্টক দ্ৰৱণে ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ বৃদ্ধি বন্ধ হোৱাৰ অৱস্থা সলনি কৰে।

এনেদৰে পঢ়িলে ফাইব্ৰোব্লাষ্ট-সম্পৰ্কীয় সাহিত্যই মিথিলিন ব্লুৰ এটা সুসংগত কিন্তু সীমাবদ্ধ ভূমিকা দেখুৱায়: কম মাত্ৰাৰ এটা ৰিডক্স-সক্ৰিয় যৌগ, যিয়ে কালচাৰত সংবৰ্ধিত মানৱ ফাইব্ৰোব্লাষ্টৰ প্ৰতিলিপি-বিভাজনজনিত বাৰ্ধক্য পলম কৰাৰ লগতে মাইটোকণ্ড্ৰিয়াৰ পৰিমাপ উন্নত কৰে। ইয়াৰ কাৰ্যপ্ৰণালীৰ আটাইতকৈ শক্তিশালী বিস্তৃত তথ্য ক্ষণস্থায়ী শক্তি-সংকেত আৰু কমপ্লেক্স IV-ৰ জৈৱগঠনৰ সৈতে জড়িত। এই গৱেষণাপত্ৰবোৰত বাৰ্ধক্যগ্ৰস্ত কোষ আঁতৰোৱা বা মানুহৰ আয়ুস বৃদ্ধিৰ কোনো প্ৰদৰ্শন নাই।