ሜቲሊን ብሉ በማይቶኮንድሪያ ላይ ያለውን ተጽዕኖ መለካት፦ ኦክስጅን፣ ATP እና የሽፋን ፖቴንሻል

አንድ ላቦራቶሪ የመተንፈስ አቅማቸው የተዳከመ ማይቶኮንድሪያዎች ላይ ሜቲሊን ብሉ ጨምሮ የኦክስጅን ፍጆታ ሲጨምር አየ እንበል። በቀላሉ ሊጻፍ የሚችለው ድምዳሜ ቀለሙ የማይቶኮንድሪያን ተግባር ወደ ቀድሞው መለሰ የሚል ነው። ይህ ድምዳሜ ግን ስህተት ሊሆን ይችላል። የኦክስጅን ፍሰት፣ የATP ውህደት እና የሽፋን ፖቴንሻል ሦስት የተለያዩ ጽንሰ ሐሳቦች ናቸው። ምትኬ መፍጠር፣ ማመሳሰል እና ማጋራት በአንድ የደመና ማከማቻ አቃፊ ላይ እንደሚሠሩ ሁሉ፣ እነዚህም በአንድ የሕዋስ አካል ውስጥ ይከናወናሉ፦ እርስ በርሳቸው ይዛመዳሉ፣ ግን በተለያዩ መርሆች ይመራሉ። አንዱን ከሌላው ጋር ከቀላቀሉ፣ ሁሉም መለኪያዎች በቴክኒክ ደረጃ ትክክል ቢሆኑም ትርጓሜው ይሳሳታል።

ሜቲሊን ብሉ በሚለካው ሥርዓት ውስጥ ራሱ ስለሚሳተፍ፣ ይህ ግራ መጋባት የመከሰት ዕድሉ ከፍ ያለ ነው። በኦክሲዴሽን–ሪዳክሽን፣ ማለትም ሬዶክስ፣ ዑደት ውስጥ በመሳተፍ ከሰንሰለቱ ቀዳሚ ክፍሎች ኤሌክትሮኖችን ይቀበላል፣ ለቀጣይ ክፍሎችም ያስተላልፋል። በኃይል የተሞሉ ማይቶኮንድሪያዎች ውስጥ የሚከማች፣ በስብ የሚሟሟ አዎንታዊ አዮንም ነው። እንዲሁም ከተለመዱ መርማሪዎች ጋር በተመሳሳይ የሞገድ ርዝመት ክልሎች ብርሃን የሚወስድና የሚያመነጭ ጥልቅ ሰማያዊ ውህድ ነው። አንድ ብቻ መለኪያ እነዚህን ሁሉ መለየት አይችልም። በቡዳፔስት የማይቶኮንድሪያ ጥናቶች ውስጥ የታየው አስተማማኝ አሠራር፣ የኦክስጅን ፍሰትን፣ የATP ውህደት ፍጥነትን፣ የሽፋን ፖቴንሻልን እና የሃይድሮጅን ፐሮክሳይድ ልቀትን በጋራ መለካት ነው፤ በእያንዳንዱም ደረጃ ለቀለሙ ተስማሚ የሆኑ የቁጥጥር ሙከራዎች ያስፈልጋሉ።

የመተንፈስ መለኪያ የኦክስጅን ፍሰትን እንጂ የኃይል ምርትን አይለካም

ከፍተኛ ልየታ ያለው የመተንፈስ መለኪያ፣ Oroboros Oxygraph ቢጠቀምም ሆነ Seahorse ከሕዋስ ውጭ ያለውን ፍሰት የሚተነትን መሣሪያ፣ አንድ ነገር ብቻ ይነግራል፦ ኦክስጅን በምን ፍጥነት ኤሌክትሮኖችን እየተቀበለ እንደሆነ። በእያንዳንዱ ኤሌክትሮን ስንት ፕሮቶኖች እንደተገፉ፣ ምን ያህል የኤሌክትሮኬሚካል ግራዲየንት እንደተጠበቀ፣ ወይም ATP ሲንቴዝ ያንን ግራዲየንት እንደተጠቀመበት አይነግርም።

የቃላት አጠቃቀም አስፈላጊ ነው። በተነጠሉ ማይቶኮንድሪያዎች ውስጥ፣ ADP ሳይኖር የምላሽ ግብዓት መኖሩ ከፕሮቶን ማፍሰስ ጋር የተያያዘ መተንፈስን ይሰጣል፤ ከማሟያ መጠን ADP ጋር ያለ ግብዓት የኦክሲዴቲቭ ፎስፎሪሌሽን አቅምን ይሰጣል፤ የማለያያ ውህድን መጠን በደረጃ መጨመር ደግሞ ከፍተኛውን የኤሌክትሮን ማስተላለፍ አቅም ያሳያል። ባልተነኩ ሕዋሳት ውስጥ ተመጣጣኝ የSeahorse መለኪያዎች መሠረታዊ መተንፈስ፣ ለኦሊጎማይሲን ምላሽ የሚሰጥ ከATP ጋር የተያያዘ መተንፈስ፣ የፕሮቶን ማፍሰስ፣ በFCCP የሚወሰን ከፍተኛ መተንፈስ፣ እና ሮቴኖንና አንቲማይሲን ቢጨመሩም የሚቀጥል ከማይቶኮንድሪያ ውጭ ያለ የኦክስጅን ፍጆታ ናቸው። የAgilent Mito Stress Test ማዕቀፍ እንደሚያብራራው፣ የSeahorse ውጤቶችን ሁኔታ 3 እና ሁኔታ 4 ብሎ መጥራት የናሙናው ዝግጅት የማይደግፈውን ትክክለኛነት ያመለክታል።

ሜቲሊን ብሉ፣ ብዙ ኦክስጅን ማለት ብዙ ኃይል ነው የሚለውን የተለመደ ግንኙነት ያፈርሳል። በተነጠሉ የአንጎል ማይቶኮንድሪያዎች ላይ በተደረገው ጥናት መሠረት፣ በተነጠሉ የጊኒ ፒግ አንጎል ማይቶኮንድሪያዎች ውስጥ ከ100 nM እስከ 1 uM ያለ ቀለም፣ ግሉታሜት ከማሌት ጋር፣ ሱክሲኔት እና አልፋ-ግሊሰሮፎስፌት ግብዓቶች ሲሆኑ በዕረፍት ሁኔታ ያለውን የኦክስጅን ፍጆታ ጨምሯል። በአልፋ-ግሊሰሮፎስፌት ጊዜ ጭማሪው በግምት 64 በመቶ ነበር፤ ሆኖም በጤናማ ማይቶኮንድሪያዎች ውስጥ በADP የሚነቃቃ መተንፈስ በመሠረቱ አልተለወጠም። ከፕሮቶን ማፍሰስ ጋር የተያያዘው መተንፈስ ሲጨምር፣ በADP የተነቃቃው ፍሰት ስላልተለወጠ፣ የተሰላው የመተንፈስ ቁጥጥር ሬሾ ይቀንሳል። ይህ መቀነስ ቀለሙ ማይቶኮንድሪያዎችን ጎድቷል ማለት አይደለም። ቀለሙ በመደበኛው መተንፈስ ላይ ኦክስጅን የሚጠቀም የሬዶክስ ዑደት ጨምሯል ማለት ነው። ጭማሪውን ብቻ የሚያሳይ የሜቲሊን ብሉ ኦክስጅን ፍጆታ ሙከራ፣ እውነተኛ ኬሚካላዊ ሂደትን ለክቷል፣ ነገር ግን ስለ ኃይል ጥበቃ ምንም አልተናገረም።

የተግባር መመለስ ሙከራዎችም ይህንኑ ልዩነት በትልቅ ደረጃ ያሳያሉ። ኮምፕሌክስ I ሲታገድ፣ የኦክስጅን ፍሰት በግምት ሦስት እጥፍ ሲመለስ፣ የATP ውህደት ግን ወደ 1.5 እጥፍ ብቻ ተመልሷል። ወደ ኤሌክትሮዱ የደረሰው ኦክስጅን ጨምሯል። ለATP ምርት የዋለው ድርሻ ግን አነስተኛ ነበር። ኦክሲዴቲቭ ፎስፎሪሌሽን ተሻሽሏል የሚል ማንኛውም ድምዳሜ የATP መረጃንም ይፈልጋል፤ ከሁሉ የሚመረጠው በኦክስጅን አሃድ የሚመረት ATP ሬሾን ማቅረብና ለመከፋፈያው የተጠቀሙበትን አተረጓጎም መግለጽ ነው።

የATP ሙከራዎች የውህደት ፍጥነትን ይለካሉ፤ ያለው ጠቅላላ መጠን ይህንን ሊተካ አይችልም

የATP ሙከራ ሌላ ጥያቄ ይመልሳል፦ በአንድ የጊዜ አሃድ ምን ያህል ATP ይመረታል? በደቂቃዎች ሂደት የሚከታተል የፋየርፍላይ ሉሲፈሬዝ ብርሃን ልቀት ወይም በ340 nm የሚነበብ የሄክሶኪኔዝና የግሉኮስ-6-ፎስፌት ዲሃይድሮጂኔዝ የተጣመረ ሙከራ፣ ከጊዜ ጋር የሚለወጥ መለኪያ ስለሆነ ፍጥነትን ይሰጣል። በአንድ የመጨረሻ ነጥብ የሚለካ ጠቅላላ ATP ግን ያለውን መጠን ብቻ ይሰጣል። ይህ መጠን ውህደት ሲቀነስ ፍጆታ የሚቀረውን ስለሚያንጸባርቅ፣ ብቻውን ስለ ኦክሲዴቲቭ ፎስፎሪሌሽን ብዙ አይነግርም።

የቡዳፔስት ቡድን የአዴኒሌት ኪኔዝ እንቅስቃሴን በማፈን የተጣመረውን ኢንዛይማዊ ዘዴ ተጠቅሟል። ከ1 እስከ 2 uM ያለ ሜቲሊን ብሉ፣ በሮቴኖን እና በአንቲማይሲን በተያዙ ማይቶኮንድሪያዎች ውስጥ የATP ምርትን በመጠኑ ግን በስታቲስቲክስ ጉልህ በሆነ ሁኔታ እንደጨመረ አግኝቷል። ይህ እውነተኛ የተግባር መመለስ ነው፣ ግን ከፊል ነው። የTEGDMA መርዛማነት ጥናት በሌላ ሞዴል ተመሳሳይ ዓይነት ውጤት አግኝቷል፦ 5 mM የጥርስ ሞኖመር TEGDMA፣ ከኮምፕሌክስ I ጋር የተያያዘውን መተንፈስ ከ286 የፍሰት አሃዶች ገደማ ወደ 28 አውርዶታል፤ 2 uM ቀለም ደግሞ ወደ 86 ገደማ መልሶታል።

ቀለም ያለው የሬዶክስ ውህድ ሲጠቀሙ፣ ሁለት የቁጥጥር ሙከራዎች መተው አይቻልም። በመጀመሪያ፣ ከተለካው የATP ውህደት ምን ያህሉ በATP ሲንቴዝ ላይ እንደሚመረኮዝ ለማወቅ ኦሊጎማይሲን ይጠቀሙ። ሁለተኛ፣ ሕዋሳት በሌሉበት የታወቀ መጠን ATP፣ ሙሉ የምላሽ ቅልቅል እና በሙከራው የተጠቀሙባቸውን ትክክለኛ የቀለም ማጎሪያዎች በማከል፣ የተጨመረው ATP ምን ያህል ተመልሶ እንደሚለካ ይፈትሹ። ቢያንስ 0፣ 100 nM፣ 300 nM፣ 1 uM እና 2 uM ይካተቱ። ቀለሙ የተለቀቀውን ብርሃን ሊወስድ፣ ምልክት ሰጪውን ኢንዛይም ሊያግድ ወይም የምላሽ ቅልቅሉን የሬዶክስ ኬሚስትሪ ሊለውጥ ይችላል። አጠቃላይ የሉሲፈሬዝ ሙከራ መመሪያ በትክክል እንደዚህ ያለ ጣልቃ ገብነትን ለመለየት ባዮኬሚካላዊ ተጨማሪ የማጣሪያ ሙከራዎችን ይመክራል። የብርሃን ልቀት መዳከም ብዙውን ጊዜ በከፍተኛ ማጎሪያዎች የባሰ ስለሚሆን፣ 1 uM ከመለኪያ አርቲፋክት ነጻ ነው ብለው አያስቡ።

የሽፋን ፖቴንሻል መርማሪዎች የቀለም ስርጭትን እንጂ ፍሰትን አይለኩም

ሳፍራኒን O፣ TMRM እና TMRE፣ ሮዳሚን 123 እና JC-1 ሁሉም ሽፋንን ማለፍ የሚችሉ አዎንታዊ አዮኖች ናቸው። በኤሌክትሮኬሚካላዊ ሚዛን መሠረት፣ አሉታዊ ክፍያ ባለው ማትሪክስ ውስጥ ይከማቻሉ። ስለዚህ የጠቅላላው ናሙና ፍሎረሰንስ መርማሪው የት እንደሚገኝ በማሳየት ፖቴንሻሉን በተዘዋዋሪ ይነግራል። ከእነዚህ አንዳቸውም ATP ወይም የኤሌክትሮን ፍሰትን አይለኩም።

እያንዳንዱ መርማሪ የሚመረጥለት የናሙና ዝግጅት አለው። ሳፍራኒን O ለተነጠሉ ማይቶኮንድሪያዎች እና ሽፋናቸው እንዲያሳልፍ ለተደረጉ ሕዋሳት ይስማማል። ብዙውን ጊዜ በ2 uM አካባቢ፣ በ495 nm አካባቢ የማነቃቂያ እና በ585 nm አካባቢ የልቀት ሞገድ ርዝመት ይጠቀማል፤ መርማሪው ወደ ውስጥ መግባቱ የጠቅላላውን ናሙና ፍሎረሰንስ በሚለውጥበት የብርሃን ልቀት ማዳከም ሁኔታ ይሠራል። TMRM እና TMRE ባልተነኩ ሕዋሳት ውስጥ በዝቅተኛ ናኖሞላር መጠን፣ የብርሃን ልቀት በማይዳከምበት ሁኔታ ይስማማሉ። በዚህ ሁኔታ የሽፋን ፖቴንሻል መቀነስ ቀለሙን ከውስጥ ያስወጣል፣ የማይቶኮንድሪያ ፍሎረሰንስም ይቀንሳል፤ በከፍተኛ መጠን ግን ቀለሙ የራሱን ብርሃን ልቀት በማዳከም የምልክቱን አቅጣጫ ሊገለብጥ ይችላል። JC-1 አመቺ የአረንጓዴ ከቀይ ሬሾ ይሰጣል፣ ግን በተጨመረው መጠን እና በማይቶኮንድሪያ መጠን ላይ ይመረኮዛል። ስለዚህ ለመጠናዊ ሥራ በጥንቃቄ ከተቆጣጠረ TMRM ያነሰ ተስማሚነት አለው። እነዚህ ጥቅሞችና ገደቦች በስፋት በሚጠቀሱት የማይቶኮንድሪያ ሽፋን ፖቴንሻል መርማሪዎች ግምገማ ውስጥ ተጠቃለዋል።

ሜቲሊን ብሉ በትክክል በሙከራው ውስጥ በሚጠቀሙባቸው ማጎሪያዎች ላይ የብርሃን ጣልቃ ገብነት ያመጣል። ከ600 እስከ 665 nm አካባቢ ያሉት የብርሃን መውሰድ ክልሎቹ ከመርማሪዎች ቀይ ልቀት ጋር ይደራረባሉ። ስለዚህ በናሙናው ውስጥ ብርሃን ተወስዶ የመጣራት ተጽዕኖ፣ የብርሃን ልቀት መዳከም እና የማነቃቂያ ብርሃን መወሰድ ሁሉም ሊከሰቱ ይችላሉ። ቀለሙ ራሱም ሁለተኛ፣ በስብ የሚሟሟ አዎንታዊ አዮን ነው፤ የራሱ ስርጭትም ከሚለካው ፖቴንሻል ጋር ይለወጣል። መፍትሔው በተለያዩ መለኪያዎች ማረጋገጥና ባዶ የቁጥጥር ናሙናዎችን መጠቀም ነው፦ መርማሪው ብቻ፣ ቀለሙ ብቻ፣ መርማሪው ከእያንዳንዱ የቀለም ማጎሪያ ጋር፣ FCCP በመጠቀም ፖቴንሻሉን ሙሉ በሙሉ ማስወገድ እንደ ዜሮ ማጣቀሻ፣ እና ከተቻለ በብርሃን ባህሪው የተለየ ሁለተኛ መርማሪ። ኮምፕሌክስ IIIን በማለፍ ስለሚከናወን ሂደት የተደረገው ጥናት ይህን ምሳሌ አሳይቷል፤ ከአንቲማይሲንና ማይክሶቲያዞል እገዳ በኋላ የሽፋን ፖቴንሻል መመለስን በሳፍራኒን O እና በTMRM ደግሞ ለክቶ፣ በውጤቱ አቅጣጫ ተመሳሳይ መመለስ አግኝቷል። አንድ የብርሃን ምልክት ሰጪ ፍንጭ ነው። ሁለት ገለልተኛ ምልክት ሰጪዎች ግን ማስረጃ ናቸው።

ሦስት የናሙና ዝግጅቶች፣ ሦስት የተለያዩ ጥያቄዎች

የተነጠሉ ማይቶኮንድሪያዎች፣ ሽፋናቸው እንዲያሳልፍ የተደረጉ ሕዋሳት እና ያልተነኩ ሕዋሳት፣ በአንድ ሙከራ ላይ እርስ በርሳቸው ሊተኩ የሚችሉ የስሜት ችሎታ ቅንብሮች አይደሉም። የተለያዩ የአሠራር መርሆች ያሏቸው የተለያዩ ጽንሰ ሐሳቦች ናቸው።

የተነጠሉ ማይቶኮንድሪያዎች፣ የሕዋስ ውጫዊ ሽፋንን፣ ሳይቶሶልን እና የኔትወርክ አወቃቀርን እያስወገዱ፣ የኤሌክትሮን ማስተላለፊያ ሰንሰለትን፣ ውስጣዊ ሽፋንን እና የማትሪክስ የሥራ አካላትን ይጠብቃሉ። የዚህ ማስወገድ ዓላማም ይህ ነው፦ ግብዓቶች፣ ADP፣ አጋጆች እና የቀለም ማጎሪያዎች በትክክል ስለሚወሰኑ፣ የሚሠራውን የምላሽ መንገድ መለየት ይቻላል። ነገር ግን የተፈጥሮ ግብዓት አቅርቦት፣ የምልክት ልውውጥ እና የኃይል ፍላጎት ይጠፋሉ።

ሽፋናቸው እንዲያሳልፍ የተደረጉ ሕዋሳት፣ ከውጭ የሚጨመሩ ግብዓቶችና ADP በተከፈተው የሕዋስ ሽፋን እንዲያልፉ እያደረጉ፣ ማይቶኮንድሪያዎችን በአብዛኛው የሕዋስ አወቃቀራቸው ውስጥ ያቆያሉ። በሕዋስ አውድ ውስጥ የግብዓት–ምላሽ መንገድ ጉድለትን ለመለየት ተገቢው መሣሪያ ናቸው። ሽፋኑን ከመጠን በላይ እንዲያሳልፍ ማድረግ የማይቶኮንድሪያውን ውጫዊ ሽፋን ይጎዳል፣ በሳይቶሶል ያለውም ቁጥጥር ታጥቦ ይወጣል።

ያልተነኩ ሕዋሳት ሁሉንም ይጠብቃሉ፦ የሕዋስ ሽፋን እንቅፋት፣ በሳይቶሶል ያሉ ኤሌክትሮን ሰጪ ውህዶች፣ በሕዋሱ ውስጥ የሚገኙ ግብዓቶች መጓጓዣ፣ የማይቶኮንድሪያ ኔትወርክ እና የATP ፍላጎት። ከፊዚዮሎጂ ጋር በጣም የቀረቡ፣ የአሠራር ዘዴን ከመለየት ግን በጣም የራቁ ናቸው። ምክንያቱም የቀለሙ ወደ ሕዋስ መግባት፣ ኤሌክትሮን መቀበል እና በተለየ ቦታ መከማቸት ሁሉም ማይቶኮንድሪያዎች በተግባር ለምን ያህል ቀለም እንደሚጋለጡ ይወስናሉ።

የTEGDMA ጥናት ሦስቱንም ደረጃዎች ሆን ብሎ ተጠቅሟል፦ ቀለሙ ኦክሲዴሽንንና ፖቴንሻልን እንዴት እንደሚመልስ ለማየት የተነጠሉ የአንጎል ማይቶኮንድሪያዎችን፤ ጉድለቱ ከኮምፕሌክስ I ጋር በተያያዘ የግብዓት ኦክሲዴሽን ላይ መሆኑን በዋናነት ለመለየት ሽፋናቸው እንዲያሳልፍ የተደረጉ የጥርስ ሕብረ ሕዋስ ግንድ ሕዋሳትን፤ እና 2 uM ቀለም በተገታ የኦክስጅን ፍጆታ ላይ ያለውን አጠቃላይ ፊዚዮሎጂያዊ ተጽዕኖ ለማየት ያልተነኩ ግንድ ሕዋሳትን። በተለያዩ የናሙና ዝግጅቶች መካከል የማይቶኮንድሪያ መለኪያዎችን ለሚያነጻጽሩ አንባቢዎች፣ ሜቲሊን ብሉ በመተንፈስ ሰንሰለቱ ውስጥ ኤሌክትሮኖችን እንዴት እንደሚያንቀሳቅስ የሚያብራራው አጋዥ ጽሑፍ ስለ ምላሽ መንገዱ የመነሻ መረጃ ይሰጣል። የሜቲሊን ብሉ የመተንፈስ ጥናቶችን ለማንበብ የሚረዳው መመሪያ ደግሞ የመጠንና የአጋጆች አጠቃቀም አመክንዮን ያብራራል።

በሬዶክስ ምላሾች የሚሳተፍ ቀለም የሚጠይቃቸው የቁጥጥር ሙከራዎች

በሬዶክስ ዑደት የሚሳተፍ ውህድ ከተራ አጋጅ የበለጠ ረጅም የቁጥጥር ሙከራ ዝርዝር ያስፈልገዋል። ምክንያቱም ቀለሙ ብቻውን የሚያከናውነው ኬሚካላዊ ሂደት ባዮሎጂያዊ ሂደት ሊመስል ይችላል።

ለመተንፈስ መለኪያ፣ የመለኪያ ምልክት መንሸራተትን ለማየት ባፈር ብቻ ያለበትን ክፍል፣ ባዮሎጂያዊ ቁስ ሳይኖር ባፈርና ቀለም ያሉበትን ክፍል፣ ቀለሙን ከሙከራው ውስጥ ካለ ማንኛውም ከሕዋስ ውጭ ካለ ኤሌክትሮን ሰጪ ውህድ ጋር ይፈትሹ። ባልተነኩ ሕዋሳት ውስጥ ከማይቶኮንድሪያ ውጭ ያለውን የኦክስጅን ፍጆታ ለመወሰን፣ በመጨረሻ ሮቴኖንና አንቲማይሲን ይጨምሩ። ኤሌክትሮኖችን የተቀበለ ቀለም እነዚያን ኤሌክትሮኖች ወደ ኦክስጅን በማስተላለፍ እንደገና ኦክሲዴሽን እንደሚያደርግና ሃይድሮጅን ፐሮክሳይድ እንደሚፈጥር ልብ ይበሉ። ስለዚህ ኤሌክትሮን ሰጪ የሌለበት፣ ቀለም ብቻ ያለበት ባዶ የቁጥጥር ናሙና፣ NADH ወይም NADPH ሲገኝ ሕዋሳት ሳይኖሩ የሚከሰተውን የኦክስጅን ፍጆታ ዝቅ አድርጎ ይገምታል።

ለሃይድሮጅን ፐሮክሳይድ፣ መራጭ ካልሆኑ DCFDA ቀለሞች ይልቅ፣ የተመጠነ Amplex UltraRed ከሆርስራዲሽ ፐሮክሲዴዝ ጋር ይምረጡ። በካታሌዝ ያረጋግጡ፣ ቀለሙ በብርሃን የሚነቃቁ ምላሾችን የሚያስከትል ስለሆነም ውጤቱ በብርሃን ላይ ያለውን ጥገኝነት ይፈትሹ። የአንጎል ማይቶኮንድሪያ ጥናት፣ በ100 nM ቀለም ብቻ የፐሮክሳይድ ሸክም ከአራት እጥፍ በላይ እንደጨመረና የማስወገዱ ሂደት እንደዘገየ አግኝቷል። ፐሮክሳይዱም ኤሌክትሮኖችን በተቀበለው ቀለም በቀጥታ የተፈጠረ ሲሆን፣ ሱፐርኦክሳይድ እንደ መካከለኛ ምርት አልተሳተፈም። የመርማሪ ምርጫና የብርሃን ቁጥጥር ዝርዝሮች በቀለም ሙከራዎች ውስጥ ምላሽ ሰጪ የኦክስጅን ዝርያዎችን መለካት በሚለው አጋዥ ጽሑፍ ውስጥ ይገኛሉ። ፐሮክሳይድ መቼ እንደ ምልክት እና መቼ እንደ ሸክም እንደሚሠራ የሚመለከተው ሰፋ ያለ ጥያቄ ደግሞ የሕዋስ ሬዶክስ ሚዛን እና ስለ አንቲኦክሲዳንቶች የሚቀርቡ አባባሎች ጋር ተዳሷል።

ስለ ምላሽ መንገድ ድምዳሜ ለመስጠት፣ ሁለቱንም የኮምፕሌክስ III አጋጅ ቦታዎች ይፈትሹ፦ አንቲማይሲን A በQi ቦታ እና ማይክሶቲያዞል በQo ቦታ፤ በተጨማሪም ሳይያናይድ በመጠቀም በኮምፕሌክስ IV የመጨረሻ ነጥብ ይፈትሹ። ቀደም ያለ የአይጥ አንጎል ጥናት፣ ቀለሙ በሮቴኖን የታገደውን መተንፈስ እንደመለሰ ነገር ግን በአንቲማይሲን የታገደውን እንዳልመለሰ ዘግቧል። በኋላ በሦስት የእንስሳት ዝርያዎች ላይ የተደረገው ጥናት ግን፣ በሁለቱም አጋጆች የታገደው ተግባር በከፊል እንደተመለሰ እና ሳይቶክሮም c በቀጥታ ኤሌክትሮኖችን እንደተቀበለ ማስረጃ አግኝቷል። የታገደውን ክፍል የሚያልፈውን መንገድ እንደተረጋገጠ ሳይሆን፣ ከአዳዲሶቹ መረጃዎች ጋር የሚስማማ እንደሆነ ይመልከቱት። ምክንያቱም የቀለም ማጎሪያ፣ አጋጁ የሚሠራበት ቦታ፣ የግብዓት ሁኔታ እና የቀለም ስርጭት ሁሉም የሚታየውን መንገድ ይቀይራሉ።

የሙከራ ምርጫ ሰንጠረዥ

ጥያቄውን መሠረት አድርገው መለኪያውን ለመምረጥ ይህን ሰንጠረዥ ይጠቀሙ፤ መለኪያውን መሠረት አድርገው ጥያቄውን አይምረጡ።

አሳማኝ ድምዳሜ ለመስጠት የሚያስፈልገው ዝቅተኛ የሙከራ ስብስብ፣ ተመሳሳይ የቀለም ማጎሪያዎችን፣ 100 nM፣ 300 nM፣ 1 uM እና 2 uM፣ በሚከተሉት ሁሉ መፈተሽ ነው፦ ከፕሮቶን ማፍሰስ፣ ADP፣ ኦሊጎማይሲን እና ማለያያ ውህድ ጋር በተያያዙ ሁኔታዎች የኦክስጅን ፍሰት፤ የATP ውህደት ፍጥነት፤ ከተቻለ በሁለት መርማሪዎች የሽፋን ፖቴንሻል፤ እና ከካታሌዝና ከሕዋስ ነጻ የቁጥጥር ሙከራዎች ጋር የተመጠነ የፐሮክሳይድ ልቀት። የተያያዘውን ስብስብ በአንድነት ያቅርቡ፦ የኦክስጅን ፍሰት፣ የATP ምርት ፍጥነት፣ በኦክስጅን አሃድ የሚመረት ATP፣ ፖቴንሻል እና ፐሮክሳይድ። ከእነዚህ አንዱ ቁጥር ብቻውን ሲቀርብ፣ ትርጉም እየፈለገ ያለ መለኪያ ነው።