Artikel
Die metileenblou-reduksietoets vir melk: beginsel en beperkings
’n Student hou twee buise met melk omhoog. Een het binne ’n uur wit geword. Een het vyf uur lank blou gebly. Sy wys na die blou een en sê dit is veilig om te drink.
Daardie gevolgtrekking verraai ’n verkeerde denkraamwerk. Die metileenblou-melktoets bepaal nie veiligheid nie. Dit toon hoe vinnig die mikrobiese populasie in daardie buis die redokspotensiaal onder vaste toestande verlaag. ’n Stadige resultaat beteken lae algehele metaboliese aktiwiteit in die monster. Dit sê niks oor watter organismes teenwoordig is, of ’n patogeen onder hulle is, of of die melk korrek gepasteuriseer is nie.
Die onderskeid is belangrik omdat die toets oortuigend lyk. Blou verdwyn. ’n Horlosie gee ’n getal. Getalle lok oorinterpretasie uit. Hierdie artikel behou die nuttige interpretasie en sluit die onveilige een uit.
Wat reduksie werklik meet
Metileenblou is blou wanneer dit geoksideer is en byna kleurloos wanneer dit tot leukometileenblou gereduseer word. Vars melk bevat opgeloste suurstof, wat die kleurstof blou hou. Bakterieë wat respireer en fermenteer, verbruik daardie suurstof en stel reducerende verbindings vry. Wanneer die redokspotensiaal ver genoeg daal, neem die kleurstof elektrone op en verloor dit sy kleur. Die Universiteit van Guelph se suiwelmikrobiologieteks beskryf dieselfde volgorde as suurstofverwydering gevolg deur die vorming van reducerende stowwe tydens bakteriële metabolisme.
Klassieke werk in die Journal of Dairy Science beskryf dit as ’n proses in twee stadiums: die flora put eers die suurstof uit, waarna melkbestanddele die kleurstof vinnig reduseer. Die metileenblou-reduksietoets vir melk moet dus eerder as ’n funksionele toets van gesamentlike metaboliese aktiwiteit verstaan word, nie as ’n selteller nie. Die redoksgedrag van metileenblou verduidelik die chemie agter daardie omskakeling.
Suurstof keer die eindpunt om. Gereduseerde leukokleurstof wat aan lug blootgestel word, oksideer weer en word weer blou. Skud, uitgiet, wye buise en ’n groot lugruimte bo die vloeistof vertraag dus die resultaat. ’n Dun blou ring bly dikwels by die lugoppervlak sigbaar nadat die res van die vloeistof in die buis kleurloos geword het. Standaardprosedures aanvaar daardie ring eerder as om te wag dat dit verdwyn.
Die tipe organisme voeg ’n tweede vertekening by. Koliforme en baie melksuurorganismes reduseer die kleurstof vinnig. Baie psigrotrofe en termoduriese organismes reduseer dit stadig of feitlik glad nie. Twee melkmonsters met dieselfde plaattelling kan ure uitmekaar hul blou kleur verloor. Daardie feit alleen sluit die omskakeling van tyd na koloniegetalle uit.
’n Beheerde laboratoriumprosedure
Veld- en handboekweergawes verskil in besonderhede, dus is ’n resultaat slegs geldig binne die metode wat dit opgelewer het. ’n Konvensionele weergawe vir ’n voedsellaboratorium verloop soos volg:
- Versamel rou melk met minimale belugting en verkoel dit dadelik. Meng dit deur die houer liggies om te keer voordat ’n monster geneem word.
- Plaas 10 mL melk in ’n steriele buis saam met 1 mL kleurstofwerkoplossing. Een wyd gebruikte werkkonsentrasie is 0.005 persent kleurstof, met ’n melk-tot-kleurstofverhouding van 10 tot 1.
- Prop die buis toe, keer dit twee keer liggies om en plaas dit binne minute in ’n waterbad. Tipiese inkubasie is by 35 tot 38 grade Celsius, afhangend van die betrokke standaard. Teken aan watter een jy volg.
- Beskerm die buise teen lig tydens inkubasie, aangesien lig reduksie versnel.
- Neem ’n lesing op 30 minute en daarna met vaste tussenposes. Die eindpunt is die tyd wanneer die buis met ’n gekookte-melkverwysing ooreenstem of die kleurverlies bereik wat die prosedure omskryf.
- Hou ’n onbehandelde buis van dieselfde melk as ’n visuele kontrole waar die metode dit vereis.
Die FAO se melktoetshandleiding gee ’n uitdruklike veldweergawe van hierdie volgorde met 10 mL melk plus 1 mL kleurstof, die toemaak met ’n prop, ligte omkering, inkubasie naby 37 tot 38 grade en lesings elke 30 minute. Die kontrolebuise gebruik gekookte melk om die natuurlike reducerende stelsel te vernietig en ’n verwysingspunt vir die kleurvergelyking te bied.
Die skema hierbo omskryf die beheergrens. Dieselfde volumes, dieselfde kleurstof, dieselfde temperatuur, dieselfde menging, dieselfde beskerming teen lig, dieselfde eindpuntreël. Verander enige een en die tyd verander daarmee saam. Daarom is tuisweergawes wat ’n arbitrêre kleurstofkonsentrasie gebruik nie met laboratoriumgraderings vergelykbaar nie.
Wat reduksietyd aandui
’n Langer tyd beteken laer algehele aktiwiteit onder die vermelde toestande. ’n Korter tyd beteken hoër algehele aktiwiteit. Tabelle vir suiwelonderrig koppel benaderde graderings aan daardie tye, byvoorbeeld 5 of meer uur as baie goed en minder as 30 minute as swak in een skema wat van BIS afgelei is.
Die variasie is die les. ’n Resultaat van 5 uur het geen universele gradering nie. Dit behoort aan die prosedure wat dit omskryf het. Die verdedigbare verslagformaat is dus:
MBRT is gelyk aan X uur volgens die genoemde metode, wat met daardie metode se gradering ooreenstem.
Dit is nooit MBRT is gelyk aan X kolonievormende eenhede per mL nie. Riglyne wat van Standard Methods afgelei is, bepaal dat kleurstofreduksieresultate nie as bakteriegetalle gerapporteer moet word nie. Die eenvoudige kleurprosedure met metileenblou beantwoord ook ’n ander vraag, aangesien dit selvorm onder die mikroskoop wys eerder as algehele aktiwiteit in ’n buis.
Tabel van interpretasies en beperkings
Hierdie tabel is die oorspronklike verwysing vir die artikel. Lees elke ry volledig van links na regs. Geen enkele sel staan op sy eie nie.
| Waarneming of bewering | Wat dit aandui | Wat dit nie kan bewys nie | Belangrikste versteurende faktore |
|---|---|---|---|
| Vinnige verlies van blou, minder as 2 uur in een roumelkskema | Hoë reducerende aktiwiteit, wat met ’n hoë mikrobiese lading of swak houvermoë strook | Spesies, presiese telling, toksiene of mislukte pasteurisasie | Warm berging, koliformryke flora, lig, lae kleurstofdosis |
| Tussentyd, 2 tot 4 uur | Matige aktiwiteit; gradering slegs binne die genoemde skema | Veiligheid of afwesigheid van stadige reduseerders | Hoë inkubasietemperatuur, verskille in belugting, vetskeiding |
| Stadige reduksie, 5 of meer uur | Lae algehele aktiwiteit in daardie skema | Afwesigheid van patogene, pasteurisasie of chemiese veiligheid | Antibiotikaresidue, preserveermiddels, ekstra opgeloste suurstof, hoë kleurstofdosis |
| Blou ring bly aan die oppervlak terwyl die res kleurloos word | Heroksidasie by die luggrensvlak, ’n normale randeffek | Mislukte toets of onvolledige reaksie | Wye buis, los prop, herhaalde oopmaak vir inspeksie |
| Wit buis ná inkubasie van verhitte melk | Veranderde reducerende stelsel plus oorlewende aktiwiteit | Dat verhitting gelykstaande aan gevalideerde pasteurisasie was | Hitteskade, herstel tydens inkubasie, latere kontaminasie |
| Enige enkele MBRT-waarde wat sonder ’n metode aangehaal word | Toetstoestande onbekend | Enige gradering of telling | Kleurstofformulering, verhouding, temperatuur, menging en eindpuntreël is almal ongerapporteer |
Groeigebaseerde kontroles, soos bakteriële kultuurmedia, bly die roete na telling en isolasie. Die reduksiebuis doen sifting. Die plaat identifiseer en tel.
Wat die toets nie oor veiligheid kan bewys nie
’n Stadige resultaat kan nie die afwesigheid van patogene bewys nie. ’n Patogeen wat teenwoordig is in ’n dosis wat klinies saak maak, kan min tot die algehele suurstofverbruik bydra. Patogeenopsporing hoort by organismespesifieke metodes, wat die huidige Standard Methods as ’n afsonderlike terrein van algemene kwaliteitsifting hanteer.
Dit kan nie pasteurisasie bevestig nie. Verifikasie van hittebehandeling gebruik alkaliese fosfatasetoetsing of ’n ander gevalideerde metode volgens Codex se riglyne vir suiwelhigiëne. ’n Wit of blou buis sê niks oor die tyd-temperatuurgeskiedenis van die lot nie.
Dit kan nie voedselveiligheid sertifiseer nie. Veiligheid hang af van patogene, voorafgevormde toksiene, geneesmiddelresidue, chemiese kontaminante, kouekettinggeskiedenis en kontaminasie ná monsterneming. Codex hanteer suiwelveiligheid as ’n ketting van beheermaatreëls eerder as een siftingsresultaat.
’n Voedsellaboratoriumkonteks is nie tuistoetsing nie
In ’n suiwellaboratorium word die toets gebruik om inkomende melk te sif, verskaffers oor tyd te vergelyk of redoksmikrobiologie onder toesig te onderrig. Monsters is naspeurbaar. Reagense is gestandaardiseer. Temperature word aangeteken. Afval word deur die laboratorium se afvalverwyderingstelsel hanteer.
Tuistoetsing het niks hiervan nie. Kombuisvolumes is benaderd. Kleurstofkonsentrasies wat aanlyn verkoop word, wissel wyd. Inkubasie vind dikwels in ’n warm vertrek plaas eerder as in ’n gekalibreerde bad. Die kleurverandering gebeur steeds, wat die resultaat betroubaar laat voel terwyl elke beheermaatreël wat dit betekenis gegee het, ontbreek.
Die ernstiger risiko is gedrag. ’n Blou buis tuis moedig die drink van rou melk aan wat ’n laboratorium steeds vir plaattellings, patogeensifting en residutoetse sou stuur. Die metileenbloutoets vir melk is ontwerp om rou melk by ontvangs te gradeer, nie om melk vir verbruik goed te keur nie. Vinniger resasuriensifting het dieselfde beperking: ’n vinniger kleurlesing, maar steeds geen antwoord oor patogene nie.
’n Bondige reël vir die laboratoriumwerkbank
Standaardiseer kleurstof, verhouding, temperatuur, menging, lig en eindpunt. Rapporteer tyd met die metodenaam en gradering. Interpreteer die minute saam met bergingsgeskiedenis, floratipe, residue en die gehalte van monsterneming. ’n Kort tyd dui op aktiwiteit wat ondersoek moet word. ’n Lang tyd sertifiseer nooit veiligheid nie.