מעטילען־בלוי אין זעבראַפֿיש־פֿאָרשונג: אַ צוגאָב פֿאַרן האַלטן די פֿיש און אַן עקספּערימענטעלער שטערפֿאַקטאָר

וואַסער פֿאַר זעבראַפֿיש־אייער איז אָפֿט אַ ביסל בלוי, און כּמעט קיינער פֿאַרשרײַבט נישט פֿאַרוואָס. דער פֿאַרבשטאָף איז מעטילען־בלוי, צוגעגעבן קעגן פֿונגוס, און רובֿ פּראָטאָקאָלן באַהאַנדלען אים ווי אַ הינטערגרונט. דאָ איז הינטערגרונט נישט דער ריכטיקער באַגריף. בעסער איז: אַן עקספּערימענטעלער פֿאַקטאָר וואָס איז נישט אויסגערעכנט — עפּעס וואָס איז פֿאַראַן אין די באַהאַנדלטע שאַלן און פֿעלט אין די קאָנטראָלן, איז פֿאַרמאַקאָלאָגיש אַקטיוו בײַ די געניצטע קאָנצענטראַציעס, און קען טוישן דווקא די ענדפּונקטן וואָס דער עקספּערימענט מעסט.

דער אונטערשייד שטעלט אין אָרדענונג אַלץ וואָס קומט ווײַטער. די געוויינטלעכע באַניץ קעגן פֿונגוס בײַם האַלטן די פֿיש איז איין פֿראַגע. צי דער צוגאָב איז נייטראַל לגבי אײַער אַנאַליז איז אַן אַנדערע. די לעצטיקע זעבראַפֿיש־ליטעראַטור ענטפֿערט אויף דער ערשטער באַרויִקנדיק, און אויף דער צווייטער — אומבאַקוועם.

וואָס די ריכטליניעס שרײַבן טאַקע פֿאָר

עס איז נישטאָ קיין איינציקער סטאַנדאַרט, און דאָס איז אַ טייל פֿונעם פּראָבלעם. די ריכטליניעס פֿונעם Canadian Council on Animal Care דערלויבן 0.5 mg/L, אָדער 0.00005%, אין דער טראַנספּאָרט־לייזונג פֿאַר אייער און לאַרוון, כּדי צו פֿאַרמינערן פֿונגוס־וואַקסן. אייראָפּעיִשע ריכטליניעס פֿאַר לאַבאָראַטאָריע־חיות באַשרײַבן עמבריאָנען וואָס מע האַלט אין אַ מעדיום וואָס אַנטהאַלט אָפֿט די זעלבע 0.00005%. דער E3־רעצעפּט פֿון Cold Spring Harbor שרײַבט פֿאָר צוויי מאָל אַזוי פֿיל, 1 mg/L אָדער 0.0001%, ווי אַ באַשטאַנדטייל פֿונעם רעצעפּט. קעגן דעם שטייט אַ בולט אויסלאָזונג: די OECD־ריכטליניע פֿאַרן טאַקסיסיטעט־טעסט אויף פֿיש־עמבריאָנען שרײַבט פֿאָר ווידער צוגעגרייט פֿאַרדינונגס־וואַסער און דעם טעסט־כעמיקאַל, אָן קיין רעקאָמענדאַציע פֿאַר מעטילען־בלוי — סײַ אין איר ווערסיע פֿון 2013, סײַ אין דער שפּעטערדיקער רעוויזיע. אַזוי ציט איין לאַבאָראַטאָריע אויף זעבראַפֿיש־עמבריאָנען אין בלויעם וואַסער מיט מעטילען־בלוי פֿון די ערשטע לעבן־שעהען אָן, אַן אַנדערע פֿירט דורך דעם רעגולאַטאָרישן עמבריאָנען־טעסט אין קלאָרן וואַסער, און ביידע רופֿן זייער מעדיום נאָרמאַל. ווער עס פֿאַרגלײַכט רעזולטאַטן צווישן לאַבאָראַטאָריעס, אָדער פֿאַראייניקט היסטאָרישע קאָנטראָלן, ירשנט די דאָזיקע אומאיינהייטלעכקייט.

צו געבן קאָנטעקסט פֿאַר די קאָנצענטראַציעס: 0.00005% איז בערך 1.56 מיקראָמאָלאַר, און 0.0001% בערך 3.13 מיקראָמאָלאַר. דאָס זענען נידעריקע צאָלן, און מע קען זיך גרינג פֿאַרפֿירן צו לייענען זיי ווי צו נידעריק צו האָבן אַ באַדײַטונג. די ווײַטערדיקע שטודיעס פּרוּוון דווקא די הנחה, בײַ דווקא די קאָנצענטראַציעס.

לייענער וואָס קומען פֿון פֿיש־האַלטונג אַנשטאָט פֿון דער לאַבאָראַטאָריע טרעפֿן די זעלבע מאָלעקול אין אַן אַנדער סבֿיבֿה, וואָס ווערט באַהאַנדלט אין דעם אַקוואַריום־וועגווײַזער צו מעטילען־בלוי. די כעמיע איז די זעלבע; די באַשרײַבונג ווי דער פֿאַרבשטאָף פֿירט עלעקטראָנען דורך צעלן דערקלערט פֿאַרוואָס אַ רעדאָקס־אַקטיווע פֿאַרבינדונג באַווײַזט זיך כּסדר אין אַרטיקלען וועגן מעטאַבאָליזם. דאָס וואָס קומט ווײַטער באַציט זיך ספּעציפֿיש אויף זעבראַפֿיש־אייערוואַסער מיט מעטילען־בלוי.

מעטאַבאָליזם: דער עפֿעקט קערט איבער זײַן ריכטונג לויטן שטאַפּל

די שטודיע וואָס גיט די מערסטע אינפֿאָרמאַציע האָט אויסגעשטעלט נאָרמאַל אַנטוויקלענדיקע זעבראַפֿיש פֿון דער ערשטער לעבן־טאָג ביז 5 טעג נאָך דער באַפֿרוכטונג און געמאָסטן דעם אָקסידאַטיוון מעטאַבאָליזם אויף יעדן שטאַפּל, ווי עס באַשרײַבט דער פּובליקירטער באַריכט וועגן די עמבריאָנען־מעטאַבאָליזם־עקספּערימענטן. עס לוינט זיך צו באַשרײַבן דעם מוסטער פּינקטלעך, ווײַל ער קערט איבער זײַן ריכטונג.

בײַ 1 טאָג נאָך דער באַפֿרוכטונג איז דער באַזאַלער זויערשטאָף־פֿאַרברויך געשטיגן אין די אויסגעשטעלטע עמבריאָנען בײַ ביידע קאָנצענטראַציעס פֿאַר פֿיש־האַלטונג. בײַ 2 טעג איז דער מיטאָכאָנדריאַלער מעמבראַן־פּאָטענציאַל אין דער אויבערפֿלאַך־שיכט פֿון די לאַרוון געווען העכער בײַ אויסשטעלונגען צו 0.00005%, 0.0001% און 0.0003%. ביז 4 ביז 5 טעג, נאָכן אויסשלופּן, האָט זיך די ריכטונג איבערגעקערט: דער אָקסידאַטיווער ענערגיע־אויסגאַב איז געפֿאַלן, סײַ ווען די אויסשטעלונג איז געווען כּסדרדיק זינט דער באַפֿרוכטונג, סײַ ווען זי איז געווען בלויז אַקוט פֿון טאָג 3 ביז טאָג 4. אין פּאַראַלעל האָבן זיך פֿאַרמינערט טראַנסקריפּטן פֿאַר אונטעראיינסן פֿון מיטאָכאָנדריאַלע אָטעמונגס־קאָמפּלעקסן בײַ ביידע 1 און 4 טעג, צוזאַמען מיט טראַנסקריפּטן פֿאַרבונדן מיט סטעראָידאָגענעז און גלוקאָנעאָגענעז.

צוויי נאָך אָבסערוואַציעס מאַכן דאָס בילד שאַרפֿער. בײַ דער העכערער קאָנצענטראַציע פֿאַר פֿיש־האַלטונג איז דאָס אויסשלופּן געשען אַ ביסל פֿריִער: בײַ 2 טעג זענען די אויסגעשטעלטע עמבריאָנען געווען פֿאָרויס, און ביז טאָג 3 האָבן די קאָנטראָלן זיי דערגרייכט. און די סטרעס־אַקס אַליין האָט אויסגעזען אומבאַשעדיקט: ווען מע האָט אונטערגעוואָרפֿן 5־טאָגיקע לאַרוון אַ סטרעס־גורם דורך דרייענדיקער וואַסער־באַוועגונג, איז דער קאָרטיזאָל אין גאַנצן קערפּער געשטיגן נאָרמאַל אין ביידע גרופּעס. דער פֿאַרבשטאָף איז דעריבער נישט קיין אַלגעמיינער אַנטוויקלונגס־סם בײַ די דאָזיקע דאָזעס, און ער פֿאַרפֿלאַכט נישט יעדן פֿיזיאָלאָגישן ענטפֿער. ער טוישט דעם ענערגיע־מעטאַבאָליזם לויטן אַנטוויקלונגס־שטאַפּל: אַרויף פֿאַרן אויסשלופּן און אַראָפּ דערנאָך.

אויפֿפֿירונג: פֿאַרוואָס צוויי שטודיעס שטימען נישט איבער, און פֿאַרוואָס ביידע קענען זײַן ריכטיק

די ליטעראַטור וועגן אויפֿפֿירונג זעט אויס סתּירותדיק ביז מע שטעלט די אויסשטעלונגס־פּלענער איינס לעבן דאָס אַנדערע. איין שטודיע וועגן אַנטוויקלונגס־ און אויפֿפֿירונגס־זיכערקייט האָט אויסגעשטעלט עמבריאָנען פֿון בערך 6 שעה נאָך דער באַפֿרוכטונג צו קאָנצענטראַציעס ביז 10 מיקראָמאָלאַר, טעגלעך באַנײַט די לייזונגען ביז טאָג 4, דערנאָך אַריבערגעפֿירט די לאַרוון אין אַ מעדיום אָן פֿאַרבשטאָף אויף טעג 5 און 6, און געפּרוּווט די לאָקאָמאָציע אין אַ ליכט־פֿינצטער־טעסט אויף טאָג 6. דער רעזולטאַט: קיין באַטײַטנדיקער עפֿעקט אויף שטאַרבלעכקייט, אויסשלופּן אָדער מאָרפֿאָלאָגיע, און קיין באַהאַנדלונגס־עפֿעקט אויף לאָקאָמאָציע. די מחברים האָבן מיט אַ גוטן יסוד רעקאָמענדירט 10 מיקראָמאָלאַר ווי אַן אויבערגרענעץ אונטער זייערע באַדינגונגען.

אַ צווייטע גרופּע, מיט טייל פֿון די זעלבע מחברים ווי אין דער מעטאַבאָליזם־שטודיע, האָט דורכגעפֿירט די אויסשטעלונג אַזוי ווי פֿיש־האַלטונג אַרבעט טאַקע: דער פֿאַרבשטאָף איז געווען פֿאַראַן פֿון 2 ביז 3 שעה נאָך דער באַפֿרוכטונג אָן, מיט אַ טעגלעכער טיילווײַזער באַנײַונג, און די אויפֿפֿירונג איז געמאָסטן געוואָרן בעת דער אויסשטעלונג איז נאָך אָנגעגאַנגען אָדער באַלד נאָך איר. בײַ די זעלבע געוויינטלעכע קאָנצענטראַציעס האָבן לאַרוון געוויזן פֿאַרמינערטע לאָקאָמאָציע אין אַ 24־שעהדיקן טעסט, וואָס מע האָט געקענט איבערחזרן בײַ פֿאַרשידענע שטאַמען און אין פֿאַרשידענע לאַבאָראַטאָריעס. די שטודיע וועגן פֿאַרמישונג פֿון אויפֿפֿירונגס־רעזולטאַטן האָט פֿאַרבונדן דעם עפֿעקט מיטן סעראָטאָנערגישן טאָן, אין הסכּם מיט דער באַקאַנטער אינהיביציע פֿון מאָנאָאַמין־אָקסידאַז דורך דעם פֿאַרבשטאָף. דאָס מערסטע זאָגנדיקע איז געווען אַז עמבריאָנען־מעדיום מיט מעטילען־בלוי האָט פֿאַרדעקט דעם דערוואַרטעטן לאָקאָמאָטאָרישן ענטפֿער צום SSRI פֿלואָקסעטין. אַ סקרינינג־טעסט אין בלויעם וואַסער קען דעריבער פֿאַרפֿעלן אַ מעדיקאַמענט־עפֿעקט וואָס קלאָר וואַסער וואָלט אַנטפּלעקט.

עס איז נישטאָ קיין אמתע סתּירה. אַ פֿאַרבינדונג קען נישט איבערלאָזן קיין דערקענבאַרן רעשט־עפֿעקט צוויי טעג נאָכן אויסוואַשן אין איין טעסט, און נאָך אַלץ זײַן אַקטיוו ווען זי איז פֿאַראַן אין אַן אַנדערן. די פּראַקטישע אויסלייגונג איז אַז דער נול־רעזולטאַט גיט אַ יסוד פֿאַר אַן אויבערגרענעץ פֿון דער קאָנצענטראַציע, נישט פֿאַר אַ טענה פֿון נייטראַלקייט. דער פּאָזיטיווער רעזולטאַט באַשרײַבט דעם ריזיקאָ וואָס איז וויכטיק: אַן אַקטיווע אויסשטעלונג בעת דער מעסטן־פּעריאָד, אין דווקא דעם צוזאַמענשטעל וואָס רובֿ לאַבאָראַטאָריעס ניצן.

אַ רעדאָקס־פֿאַרבשטאָף אין אַ רעדאָקס־טעסט

נאָך איין פּאַסטקע פֿאַרדינט אַן אייגענעם פּאַראַגראַף, ווײַל זי פֿאַרקרימט דעם מעסטן־אינסטרומענט אַנשטאָט פֿון דער חיה. דער Alamar Blue־טעסט פֿאַר ענערגיע־אויסגאַב איז אַליין רעדאָקס־כעמיע: רעזאַזורין ווערט רעדוצירט צו פֿלואָרעסצירנדיקן רעזאָרופֿין. מעטילען־בלוי איז אויך רעדאָקס־כעמיע. אין קאָנטראָלן אָן צעלן האָבן ביידע קאָנצענטראַציעס פֿאַר פֿיש־האַלטונג אַ ביסל, אָבער באַטײַטנדיק, פֿאַרמינערט די Alamar Blue־פֿלואָרעסצענץ נאָך 24 שעה. אין די עקספּערימענטן מיט חיות האָט מען די אויסגעשטעלטע עמבריאָנען געוואַשן כאָטש דרײַ מאָל אין אַ מעדיום אָן פֿאַרבשטאָף פֿאַרן טעסט, און דער ביאָלאָגישער עפֿעקט אין אויסגעשלופּטע לאַרוון איז געווען גרעסער ווי די שטערונג אָן צעלן. ביידע זאַכן זענען דעריבער אמת: געוואַשענע חיות טראָגן אַן אמתן מעטאַבאָלישן עפֿעקט, און דער נישט־אויסגעוואַשענער פֿאַרבשטאָף לייגט דערצו אַ דירעקטן כעמישן אַרטעפֿאַקט. די קאָנטראָלן מוזן צעטיילן די צוויי, אַנדערש האָט קיין איינע פֿון די צאָלן נישט קיין באַדײַטונג. אַלגעמיינע ריכטליניעס וועגן לייענען רעזולטאַטן פֿון פֿאַרבשטאָף־באַזירטע טעסטן זענען דאָ גילטיק מיט אויסערגעוויינטלעכער שטאַרקייט.

צײַטליניע פֿון אַנטוויקלונגס־שטאַפּלען

דער אָריגינעלער אינהאַלט־עלעמענט פֿאַר דעם אַרטיקל. די קאָנצענטראַציעס זענען די צוויי סטאַנדאַרט־ווערטלעך פֿאַר פֿיש־האַלטונג, 0.00005% און 0.0001%, סײַדן עס ווערט אַנדערש אָנגעגעבן.

דער מוסטער צו געדענקען איז אַ פֿריִערדיקע שטײַגונג און אַ שפּעטערדיקער פֿאַל אין מעטאַבאָלישע ענדפּונקטן, מיט אויפֿפֿירונגס־עפֿעקטן בעת דער אויסשטעלונג און אָן דערקענבאַרע עפֿעקטן נאָך דער רייניקונג אין דעם איינעם טעסט וואָס האָט דאָס געפּרוּווט.

טשעקליסט פֿאַרן פּלאַנירן קאָנטראָלן

דער צווייטער אָריגינעלער אינהאַלט־עלעמענט. ניצט אים ווען זעבראַפֿיש־פּראָטאָקאָלן מיט מעטילען־בלוי פֿאַרבינדן זיך מיט אַן עקספּערימענט.

1. באַריכט דעם פֿאַרבשטאָף ווי אַ רעאַגענט, נישט ווי וואַסער. גיט אָן די קאָנצענטראַציע סײַ אין פּראָצענט סײַ אין מיקראָמאָלאַר, דעם אָנהייב און סוף אין שעה אָדער טעג נאָך דער באַפֿרוכטונג, דעם באַנײַונגס־פּלאַן און דעם אויסוואַש־אינטערוואַל פֿאַר יעדער מעסטונג.
2. פּאַסט צו די קאָנטראָלן צו דער פֿראַגע. אַ שטודיע פֿון דעם טעסט־כעמיקאַל דאַרף קאָנטראָלן אָן פֿאַרבשטאָף; אַ שטודיע פֿון פֿיש־האַלטונג דאַרף גרופּעס אָן פֿאַרבשטאָף קעגן גרופּעס מיט פֿאַרבשטאָף, מיט פֿאַרשריבענע רעזולטאַטן קעגן פֿונגוס, ווײַל קיין איינע פֿון די ציטירטע שטודיעס האָט נישט געמאָסטן די עפֿעקטיווקייט קעגן פֿונגוס.
3. וואַשט פֿאַר רעדאָקס־טעסטן, און באַשטעטיקט דערנאָך. שווענקט כאָטש דרײַ מאָל אין אַ מעדיום אָן פֿאַרבשטאָף און פֿירט פּאַראַלעל דורך אַ קאָנטראָל אָן צעלן מיט פֿאַרבשטאָף פּלוס רעאַגענט, ווײַל דער פֿאַרבשטאָף פֿאַרמינערט דירעקט דעם Alamar Blue־סיגנאַל.
4. באַהאַנדלט אויפֿפֿירונגס־ און מאָנאָאַמין־ענדפּונקטן ווי הויך־ריזיקאָ. שטודיעס פֿון לאָקאָמאָציע, דערשרעק־רעאַקציעס, אַנסט־ענלעכע אויפֿפֿירונג, אַנטידעפּרעסאַנטן און MAO־אינהיביטאָרן זאָלן אויסמײַדן דעם פֿאַרבשטאָף בעת דער מעסטונג אָדער דעמאָנסטרירן נייטראַלקייט פֿאַר דעם ספּעציפֿישן ענדפּונקט; אַן אויסוואַש־פּעריאָד פֿון איין ביז צוויי טעג האָט באַזײַטיקט איין לאָקאָמאָטאָרישן עפֿעקט, אָבער דאָס איז נישט באַוויזן פֿאַר אַנדערע עקספּערימענטעלע פּאַראַדיגמען.
5. באַהאַנדלט מעטאַבאָלישע און מיטאָכאָנדריאַלע ענדפּונקטן ווי הויך־ריזיקאָ אויף יעדן שטאַפּל. זויערשטאָף־פֿאַרברויך, ענערגיע־אויסגאַב, מעמבראַן־פּאָטענציאַל און טראַנסקריפּטן פֿון דער אָטעמונגס־קייט ענדערן זיך בײַ קאָנצענטראַציעס פֿאַר פֿיש־האַלטונג, אין פֿאַרקערטע ריכטונגען פֿאַר און נאָך דעם אויסשלופּן.
6. נעמט נישט איבער נייטראַלקייט פֿון איין עקספּערימענטעלן פּלאַן צו אַן אַנדערן. אַ נול־רעזולטאַט נאָכן אויסוואַשן גילט נישט פֿאַר אָנגייענדיקער אויסשטעלונג; אַ מאָרפֿאָלאָגישער נול־רעזולטאַט גילט נישט פֿאַר מעטאַבאָליזם אָדער אַ מעדיקאַמענט־אינטעראַקציע; אַ רעזולטאַט אין איין שטאַם, טעמפּעראַטור אָדער טעסט־דויער גילט נישט פֿאַר אַנדערע.
7. גיט אָן די ריכטליניע וואָס איר האָט נאָכגעפֿאָלגט און איר אַלטערנאַטיוו. דערמאָנט בפֿירוש די קאָנצענטראַציעס פֿון CCAC, די אייראָפּעיִשע ריכטליניעס אָדער Cold Spring Harbor, און באַמערקט וווּ דער OECD־עמבריאָנען־טעסט לאָזט אויס דעם פֿאַרבשטאָף, כּדי דער לייענער זאָל קענען פֿאַרשטיין די באַדינגונגען פֿון אײַערע חיות.

גאָרנישט פֿון דעם איז אַן אַרגומענט קעגן ניצן דעם פֿאַרבשטאָף כּדי צו האַלטן אייער לעבעדיק. עס איז אַן אַרגומענט קעגן דעם, אַז אַ ברירה אין פֿיש־האַלטונג זאָל אַרײַנקומען אומגעפּרוּווט אין די דאַטן. דאָס בלויע אין דער שאַל איז אַ מאָלעקול מיט אַ פֿאַרמאַקאָלאָגיע, און די עקספּערימענטן וואָס קענען דאָס מערסטע ווערן פֿאַרקרימט זענען דווקא די מעטאַבאָלישע און נעוראָ־אויפֿפֿירונגס־סקרינינגען מיט הויכן דורכפֿלוס, פֿאַר וועלכע יונגע זעבראַפֿיש ווערן הײַנט באַפֿערדיקט. פֿאַרשרײַבט עס, קאָנטראָלירט עס, וואַשט עס אויס איידער איר מעסט, און קאָנטראָלירט דעם טעסט אין וועלכן עס קען שטילערהייט אָנטיילנעמען.