מעטילען־בלוי אין G6PD־לאַבאָראַטאָריע־טעסטן: וואָס דער פֿאַרבשטאָף טוט טאַקע

אַ סטודענט באַטראַכט צוויי פּראָבירגלאָזלעך נאָך דער אינקובאַציע. איינס האָט אָנגענומען די דערוואַרטע פֿאַרב. דאָס אַנדערע נישט. דער סטודענט שליסט דערפֿון, אַז דער צווייטער פּאַציענט האָט אַ מאַנגל אין גלוקאָז־6־פֿאָספֿאַט־דעהידראָגענאַז. דער אויספֿיר קען זײַן ריכטיק, אָבער דער געדאַנק־גאַנג שפּרינגט איבער דעם באַגריף וואָס מאַכט דעם טעסט מעגלעך. גאָרנישט אינעם פּראָבירגלאָזל מעסט דעם ענזים דירעקט. דער טעסט מעסט וואָס דער ענזים פּראָדוצירט, מיט מעטילען־בלוי ווי אַ פֿאַרמיטלער.

ווען דער אומדירעקטער מעכאַניזם ווערט קלאָר, הייבן די פּראָצעדור, די קאָנטראָלן און די לאַנגע רשימה פֿון פֿאַלשע רעזולטאַטן אָן אויסזען ווייניקער ווילקירלעך.

דער קורצער ענטפֿער

מעטילען־בלוי אין G6PD־טעסטן איז אַ רעדאָקס־אינדיקאַטאָר. דער ענזים G6PD פּראָדוצירט NADPH, און NADPH־אָפהענגיקע סיסטעמען רעדוצירן בלויען מעטילען־בלוי צו זײַן פֿאַרבלאָזער לעוקאָ־פֿאָרעם, אָדער נוצן אים צו איבערפֿירן עלעקטראָנען. נאָרמאַלע ענזים־אַקטיוויטעט גיט אַן עפֿעקטיווע רעדוקציע. אַ מאַנגל אין אַקטיוויטעט גיט אַ פּאַמעלעכע אָדער אומפֿולשטענדיקע רעדוקציע. דאָס איז דער גאַנצער סיגנאַל.

צוויי היסטאָרישע מעטאָדן נוצן דעם זעלבן פֿאַרבשטאָף, אָבער האָבן אַנדערע ענדפּונקטן. ווען מען האַלט זיי באַזונדער, פֿאַרשווינדט ס׳רובֿ פֿון דער צעמישונג.

צוויי טעסטן, איין פֿאַרבשטאָף, אַנדערע ענדפּונקטן

דער ערשטער איז דער דירעקטער מעטילען־בלוי־רעדוקציע־טעסט, באַשריבן דורך Sass און זײַנע קאָלעגן און שפּעטער אָפּגעשאַצט דורך Gibbs. דאָ איז דער ענדפּונקט דער פֿאַרבשטאָף אַליין: אָקסידירטער בלויער מעטילען־בלוי ווערט רעדוצירט צו פֿאַרבלאָזן לעוקאָמעטילען־בלוי, און דער טעמפּאָ פֿון דער ענדערונג שפּיגלט אָפּ די פֿעיִקייט צו פּראָדוצירן NADPH. דער אָריגינעלער אַרטיקל וועגן דער זיפּונג איז אינדעקסירט אויף PubMed אונטער Sass און מיטאַרבעטער (1966).

דער צווייטער איז דער Brewer־מעטהעמאָגלאָבין־רעדוקציע־טעסט. נאַטריום־ניטריט אָקסידירט ערשט העמאָגלאָבין צו ברוינעם מעטהעמאָגלאָבין. דערנאָך דינט מעטילען־בלוי ווי אַ פֿאַרמיטלער בײַם איבערפֿירן עלעקטראָנען: רעדוצירטער מעטילען־בלוי גיט איבער רעדוקציע־עקוויוואַלענטן צו מעטהעמאָגלאָבין און פֿאַרוואַנדלט אים צוריק אין רויטן העמאָגלאָבין. דער זעעוודיקער ענדפּונקט איז דעריבער ברוין קעגן רויט, נישט בלוי קעגן פֿאַרבלאָז. דער אָריגינעלער מעטאָד איז דערשינען אינעם בולעטין פֿון דער וועלט־געזונט־אָרגאַניזאַציע (Brewer און מיטאַרבעטער, 1960).

צו רופֿן דעם Brewer־אַסיי אַ טעסט פֿון פֿאַרבשטאָף־אַנטפֿאַרבונג איז כעמיש אומפּינקטלעך. דער פֿאַרבשטאָף גייט דורך אַ ציקל; דער העמאָגלאָבין בײַט זײַן פֿאַרב. דער דיאַגראַם אונטן ווײַזט ביידע רעאַקציע־וועגן.

די אונטערליגנדיקע רעאַקציע

G6PD קאַטאַליזירט דעם ערשטן אָקסידאַטיוון שריט אינעם פּענטאָז־פֿאָספֿאַט־וועג:

Glucose-6-phosphate + NADP+ becomes 6-phosphogluconolactone + NADPH + H+

רײַפֿע רויטע בלוטצעלן זענען שטאַרק אָפהענגיק פֿון דעם וועג פֿאַר NADPH, ווי באַהאַנדלט אין Blood דורך Luzzatto און זײַנע קאָלעגן (2020). NADPH האַלט גלוטאַטיאָן אין אַ רעדוצירטן צושטאַנד און באַשיצט די צעל קעגן אָקסידאַטיוון שאָדן. מעטילען־בלוי ווערט אַ טייל פֿון דער סיסטעם ווי אַן עלעקטראָן־אַקצעפּטאָר. גענוג G6PD גיט גענוג NADPH, וואָס גיט אַן עפֿעקטיווע רעדוקציע. אַ נידעריקער G6PD־ניוואָ צעברעכט די קייט בײַ איר ערשטן רינג.

טראַכט וועגן דעם פֿאַרבשטאָף ווי וועגן אַ ברענוואַרג־מאָסער, נישט דעם מאָטאָר. ער גיט אָן די פֿאַרזאָרגונג מיט NADPH. אַלץ אַנדערש וואָס בײַט די פֿאַרזאָרגונג, אָדער די אָפּלעזונג, קען רירן די ווײַזער אָן קיין ענדערונג אינעם גען.

ווי די Brewer־טיפּ־פּראָצעדור גייט צו

די רעאַגענט־רעצעפּטן האָבן זיך געביטן במשך פֿון די יאָרצענדליקער, דעריבער טאָר מען נישט פֿאַרטוישן אַ באַשרײַבונג פֿאַר לערן־צוועקן מיט אַ קלינישן פּראָטאָקאָל. יעדע לאַבאָראַטאָריע פֿאָלגט איר אייגענער וואַלידירטער סטאַנדאַרד־אַרבעטספּראָצעדור. מיט דעם וואָרענונג אַרבעט דער קלאַסישער אופֿן מיט פּראָבירגלאָזלעך אַזוי, אין אַ פֿאָרעם דאָקומענטירט מיט דרײַ פּראָבירגלאָזלעך און אַן אינקובאַציע פֿון 3 שעה אין דער דאָזיקער פֿאַרעפֿנטלעכטער דורכפֿירונג:

1. פּאַציענט־פּראָבירגלאָזל: גאַנץ בלוט צוזאַמען מיט גלוקאָז, נאַטריום־ניטריט און מעטילען־בלוי. ניטריט שאַפֿט מעטהעמאָגלאָבין, גלוקאָז שפּײַזט דעם מעטאַבאָליזם פֿון די רויטע בלוטצעלן, און דער פֿאַרבשטאָף שטעלט צו דעם NADPH־אָפהענגיקן איבערפֿיר־מעכאַניזם.
2. אָקסידירטער קאָנטראָל: בלוט צוזאַמען מיט ניטריט און גלוקאָז, אָבער אָן מעטילען־בלוי. ער ווײַזט דעם ברוינעם מעטהעמאָגלאָבין־ענדפּונקט, דעם מוסטער פֿון אַ מאַנגל.
3. העמאָגלאָבין־קאָנטראָל: בלוט צוזאַמען מיט וואַסער. ער ווײַזט דעם רויטן העמאָגלאָבין־ענדפּונקט, דעם נאָרמאַלן מוסטער.
4. אינקובירט אַלע פּראָבירגלאָזלעך בײַ בערך 37 C, געוויינטלעך פֿאַר 3 שעה, מיט אַ מילדער מישונג.
5. פֿאַרדינט אַ קליינעם אַליקוואָט פֿון יעדן פּראָבירגלאָזל אין דיסטילירט וואַסער, כּדי צו צעלאָזן די צעלן און מאַכן דעם פֿאַרב־פֿאַרגלײַך קלאָר אָפּלעזלעך.
6. פֿאַרגלײַכט דעם פּאַציענט־פּראָבירגלאָזל מיט די צוויי קאָנטראָלן. אַ צוריקקער צו רויט ווײַזט אָן אַ באַדײַטנדיקע רעדוקציע־פֿעיִקייט. אויב די פֿאַרב בלײַבט נאָענט צו ברוין, קען דאָס אָנווײַזן אויף אַ שטאַרקן מאַנגל.

איין היסטאָרישע רעצעפּט האָט גענוצט בערך 1 mL בלוט מיט רעאַגענטן בײַ בערך 180 mM נאַטריום־ניטריט, 280 mM דעקסטראָז און 0.4 mM מעטילען־בלוי. באַטראַכט די צאָלן ווי אַ בײַשפּיל פֿון דער ליטעראַטור, נישט ווי אַן אַלגעמיין גילטיקע ספּעציפֿיקאַציע.

אויסלייענען דעם רעזולטאַט

אַ קוואַליטאַטיווע זיפּונג אונטערשיידט בעסטן אַרום 30 ביז 40 פּראָצענט פֿון דער נאָרמאַלער אַקטיוויטעט, ווי באַהאַנדלט אין דער דאָזיקער איבערזיכט אין Malaria Journal וועגן די לעכער אין דער דערקענונג פֿון G6PD־מאַנגל. אַ נאָרמאַלער זיפּונג־רעזולטאַט מיינט דעריבער, אַז דער אַסיי האָט נישט דערקענט אַ שווערן מאַנגל. ער באַשטעטיקט נישט אַ גאָר נאָרמאַלע אַקטיוויטעט.

פֿאַרוואָס זיפּונג קען פֿאַרפֿירן

רעטיקולאָציטאָז נאָך העמאָליז איז דער קלאַסישער פֿאַלש־נאָרמאַלער רעזולטאַט. יונגע רויטע בלוטצעלן און רעטיקולאָציטן האָבן מער G6PD ווי אַלטע צעלן. בעת אַן אַקוטער העמאָליטישער עפּיזאָד קענען די עלטסטע צעלן מיטן גרעסטן מאַנגל שוין זײַן צעשטערט, און עס בלײַבט אַ יונגע צעל־פּאָפּולאַציע וועמענס אַקטיוויטעט ווערט געמעסטן ווי נאָרמאַל. די זעלבע ביאָלאָגיע פֿאַרפֿירט אויך קוואַנטיטאַטיווע אַסייען, נישט בלויז פֿאַרבשטאָף־זיפּונגען.

אַ לעצטיקע בלוטטראַנספֿוזיע פֿאַרדעקט אַ מאַנגל, ווײַל די רויטע בלוטצעלן פֿונעם דאָנאָר ברענגען אַרײַן זייער אייגענעם ענזים אין דער פּראָבע. Mayo Clinic Laboratories רעכנט אויס טראַנספֿוזיע צווישן די סיבות פֿון אומפֿאַרלאָזלעכע ענזים־רעזולטאַטן, צוזאַמען מיט רעטיקולאָציטאָז און שטערונג פֿון לעוקאָציטן.

העטעראָזיגאָטע פֿרויען זענען דער שווערסטער פֿאַל. צופֿעליקע אינאַקטיוואַציע פֿונעם X־כראָמאָסאָם שאַפֿט אַ געמיש פֿון נאָרמאַלע רויטע בלוטצעלן און צעלן מיט אַ מאַנגל, און די אַלגעמיינע אַקטיוויטעט קען ליגן ערגעץ צווישן אַ שווערן מאַנגל און אַ כּלומרשט נאָרמאַלן ניוואָ. קוואַליטאַטיווע זיפּונגען פֿאַרפֿעלן אָפֿט פֿענאָטיפּן מיט צווישן־ניוואָ־אַקטיוויטעט. די WHO־דאָקומענטאַציע וועגן G6PD־טעסטן באַהאַנדלט די באַגרענעצונג אין פּרטים.

דער עלטער פֿון דער פּראָבע, די לאַגערונג־טעמפּעראַטור, די סוביעקטיווקייט פֿונעם וויזועלן ענדפּונקט, דער העמאַטאָקריט און די קוואַליטעט פֿון די רעאַגענטן לייגן צו אַנאַליטישן ראַש צו די דאָזיקע ביאָלאָגישע השפּעות.

זיפּונג איז נישט קיין דיאַגנאָז

אַ זיפּונג־רעזולטאַט וואָס ווײַזט אַ מאַנגל, אַ צווישן־ניוואָ אָדער אַ סתּירה מיטן קלינישן בילד פֿאָדערט אַ קוואַנטיטאַטיוון G6PD־ענזים־אַסיי. WHO באַטראַכט טעמפּעראַטור־קאָנטראָלירטע קוואַנטיטאַטיווע ספּעקטראָפֿאָטאָמעטריע ווי דעם רעפֿערענץ־אופֿן. אין דעם אַסיי לייגט מען צו גלוקאָז־6־פֿאָספֿאַט און NADP+ צו אַ העמאָליזאַט פֿון רויטע בלוטצעלן, און מען נאָכפֿאָלגט דעם געשאַפֿענעם NADPH דורך דער שטײַגנדיקער אַבסאָרבאַנץ בײַ 340 nm. דער טעמפּאָ פֿון דער ענדערונג איז פּראָפּאָרציאָנעל צו דער ענזים־אַקטיוויטעט, געוויינטלעך נאָרמאַליזירט לויט העמאָגלאָבין ווי איינסן פּער גראַם. די איצטיקע קליניש־לאַבאָראַטאָרישע פּראַקטיק ווערט צונויפֿגעפֿאַסט אינעם Mayo־טעסטקאַטאַלאָג־איינטראָג פֿאַר G6PD־אַקטיוויטעט.

בײַ דער אויסטײַטשונג ניצט מען דעם רעפֿערענץ־ראַם וואָס די לאַבאָראַטאָריע האָט וואַלידירט, אָפֿט אין באַציִונג צו דער נאָרמאַלער אַקטיוויטעט אין דער פּאָפּולאַציע. אַ מאַנגל ווערט געוויינטלעך באַהאַנדלט אַרום דעם שוועל פֿון 30 פּראָצענט, און צווישן־ניוואָ־אַקטיוויטעט ליגט העכער אים. די WHO־צילפּראָדוקט־פּראָפֿילן פֿאַר G6PD־טעסטן (2022) שטעלן פֿאָר דעם דיאַגנאָסטישן ראַם. אויב אַ לעצטיקע העמאָליז אָדער טראַנספֿוזיע מאַכט די פֿענאָטיפּ־באַשטימונג אומפֿאַרלאָזלעך, חזרט איבער דעם טעסט נאָך דעם ווי די פּאָפּולאַציע פֿון רויטע בלוטצעלן דערגרייכט ווידער אַ גלײַכגעוויכט. מאָלעקולאַרע טעסטן קענען צוגעבן אינפֿאָרמאַציע, אָבער נישט פֿאַרבײַטן די ענזים־מעסטונג.

אַ גרענעץ וואָס איז כּדאַי צו האַלטן

מעטילען־בלוי אין די דאָזיקע אַסייען איז אַ עקס־וויוואָ־לאַבאָראַטאָריע־רעאַגענט. דער פֿאַקט געהערט צו אַן אַנדער דיסקוסיע ווי די זיכערקייט פֿון געבן מעטילען־בלוי אַ פּאַציענט, וואָס ווערט באַהאַנדלט אין די אנווײַזונגען וועגן קאָנטראַינדיקאַציעס פֿאַר מעטילען־בלוי. די ביאָכעמיע פֿאַרבינדט זיי, ווײַל דער מעדיקאַמענט איז אויך אָפהענגיק פֿון NADPH־אָפהענגיקער רעדוקציע, אָבער אַ פֿאַרבשטאָף אין אַ פּראָבירגלאָזל איז נישט קיין דאָזע אינעם בלוטשטראָם. פֿאַר קאָנטעקסט וועגן דעם ווי דער פֿאַרבשטאָף אַרבעט ווי אַ פֿאַרבמיטל אין אַן אַנדער סבֿיבֿה, זעט די פּרינציפּן פֿון פֿאַרבונג מיט מעטילען־בלוי, און וועגן דער כעמישער משפּחה צו וועלכער ער געהערט — רעדאָקס־פֿאַרבשטאָפֿן אין דער לאַבאָראַטאָריע.

זיפּונג פֿרעגט צי די רעדוקציע־פֿעיִקייט זעט אויס אומגעשטערט. באַשטעטיקונג פֿרעגט וויפֿל ענזים עס איז טאַקע דאָ. דער פֿאַרבשטאָף דינט גוט דער ערשטער פֿראַגע, בתּנאי אַז קיינער פֿאָדערט נישט פֿון אים צו ענטפֿערן אויף דער צווייטער.