מעסטן רעאַקטיווע זויערשטאָף־מינים אין עקספּערימענטן מיט מעטילען־בלוי

צוויי לאַבאָראַטאָריעס פֿירן דורך וואָס יעדע רופֿט אַן אַנטיאָקסידאַנט־עקספּערימענט מיט מעטילען־בלוי. איינע באַריכטעט אַז דער פֿאַרבשטאָף פֿאַרמינערט רעאַקטיווע זויערשטאָף־מינים. די אַנדערע באַריכטעט אַז ער שאַפֿט זיי. ביידע ווײַזן קלאָרע דאָזע־רעאַקציע־קורוועס. ביידע זענען אויפֿריכטיק. דער אונטערשייד איז נישט קיין שווינדל אָדער אומקאָמפּעטענץ. די צוויי גרופּעס האָבן געמאָסטן פֿאַרשיידענע זאַכן אונטער פֿאַרשיידענעם ליכט, מיט זאָנדן וואָס ענטפֿערן אויף פֿאַרשיידענע פֿראַגעס, און דערנאָך באַשריבן ביידע ענטפֿערס מיטן זעלבן וואָרט: ROS.

מעטילען־בלוי איז אַ מאָלעקול וואָס איז שווער פּינקטלעך צו מעסטן, ווײַל זי באַטייליקט זיך אין דער כעמיע וואָס זי זאָל אָבסערווירן. אין דער פֿינצטערניש פֿירט זי עלעקטראָנען צווישן דאָנאָרן און אַקסעפּטאָרן און קערט זיך צוריק צו איר אָנהייב־פֿאָרעם, גרייט אויף נאָך אַ ציקל. אונטער ליכט ווערט זי אַ פֿאָטאָסענסיביליזאַטאָר און דערגרייכט אַן עקסציטירטן טריפּלעט־צושטאַנד, פֿון וועלכן זי קען איבערגעבן ענערגיע צו זויערשטאָף כּדי צו שאַפֿן סינגלעט־זויערשטאָף, אָדער אַריבערפֿירן עלעקטראָנען כּדי צו שאַפֿן ראַדיקאַלן און וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד. יעדער זאָנד וואָס מען לייגט אַרײַן אין דעם סיסטעם קען ווערן אָקסידירט, רעדוצירט, אויסגעבלייכט אָדער אָפּטיש פֿאַרדעקט דורך דעם פֿאַרבשטאָף אַליין. דעריבער איז די ערשטע פֿראַגע בײַ יעדן ROS־מעס־רעזולטאַט קיינמאָל נישט וואָס די צאָל איז. זי איז וואָס דער אַנאַליז טאַקע דערקענט, און וואָס דער פֿאַרבשטאָף טוט מיטן אַנאַליז.

Amplex Red: אַ קאַליברירטער וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד־אַנאַליז

די קאָמבינאַציע פֿון מעטילען־בלוי און Amplex Red איז די מערסט באַגרינדעטע פּאָרונג אין דער דאָזיקער ליטעראַטור, ווען מען שטעלט זי ריכטיק אויף. די כעמיע איז ספּעציפֿיש: כריין־פּעראָקסידאַזע ניצט וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד צו אָקסידירן דעם Amplex־סובסטראַט צו אַ פֿלואָרעסצירנדיקן פּראָדוקט, רעזאָרופֿין, מיט אַ סטאָיכיאָמעטריע פֿון בערך איינס צו איינס. פּעראָקסיד פֿון דער מוסטער ווערט פֿלואָרעסצענץ אינעם דעטעקטאָר. קיין אַנדערער מיטגליד פֿון דער קאַנאָנישער ROS־משפּחה טרײַבט נישט די דאָזיקע רעאַקציע דירעקט.

דער באַשטימענדיקער מעלה איז קאַליבראַציע. אַ פֿאַרזיכטיקער פֿאָרשער ניצט באַקאַנטע פּעראָקסיד־סטאַנדאַרטן אינעם זעלבן בופֿער, מיט די זעלבע קאָנצענטראַציעס פֿון פּעראָקסידאַזע און סובסטראַט, דער זעלבער אינקובאַציע־צײַט און די זעלבע אָפּטישע אײַנשטעלונגען, און לייענט דערנאָך די מוסטערן לויט דער קורווע. אין דער שטודיע פֿון איזאָלירטע מוח־מיטאָכאָנדריעס, אויף וועלכער די דאָזיקע מעטאָדע באַזירט זיך, האָבן די מחברים געטאָן פּונקט דאָס: זיי האָבן צוגעגעבן באַקאַנטע קוואַנטיטעטן פּעראָקסיד בײַם סוף פֿון יעדן דורכגאַנג, און די צאָלן ווערן באַריכטעט ווי ראַטעס אין פּיקאָמאָלן פּער מינוט פּער מיליגראַם פּראָטעין, אַנשטאָט אַרביטרערע פֿלואָרעסצענץ־איינסן. דאָס איז וואָס פֿאַרוואַנדלט אַ לײַכטן אין אַ מעסטונג.

דרײַ פּרטים פֿון דער שטודיע זענען ווערט נאָכצומאַכן. ערשטנס, האָבן די מחברים באַשטעטיקט דעם סיגנאַל מיט קאַטאַלאַזע, וואָס צעשטערט פּעראָקסיד. די העכערונג פֿון פֿלואָרעסצענץ וואָס מעטילען־בלוי האָט אַרויסגערופֿן האָט זיך אָפּגעשטעלט ווען מען האָט צוגעגעבן קאַטאַלאַזע, און אַזוי באַשטעטיקט אַז דער סיגנאַל איז געווען פּעראָקסיד און נישט אַן אָפּטישער אַרטעפֿאַקט. צווייטנס, האָבן זיי דירעקט געפּרוּווט די באַלײַכטונג דורך באַגרענעצן דעם עקסציטאַציע־שטראַל מיט אַ לאָדן, אַזוי אַז די מוסטערן האָבן באַקומען איין אַכטל פֿון דער נאָרמאַלער ליכט־דאָזע, און דער סיגנאַל איז געפֿאַלן מיט בלויז נײַן פּראָצענט. מער ווי נײַנציק פּראָצענט פֿונעם פּעראָקסיד וואָס זיי האָבן באַריכטעט איז געווען אומאָפּהענגיק פֿונעם מעס־ליכט. דריטנס, האָבן זיי באַזונדער געמאָסטן דאָס באַזײַטיקן פּעראָקסיד מיט אַן עלעקטראָד און געפֿונען אַז דער פֿאַרבשטאָף האָט סײַ פֿאַרגרעסערט די פּראָדוקציע, סײַ פֿאַרלאַנגזאַמט דאָס באַזײַטיקן. אַ זאָנד וואָס באַריכטעט בלויז נעץ־פֿלואָרעסצענץ וואָלט צונויפֿגעמישט די צוויי ווירקונגען.

דער אַנאַליז האָט נאָך אַלץ אופֿנים ווי ער קען דורכפֿאַלן, און מעטילען־בלוי ברענגט עטלעכע פֿון זיי אַרויס. דער פֿאַרבשטאָף אַבזאָרבירט ברייט איבער דעם זעלבן רויטן ספּעקטראַלן געגנט וווּ רעזאָרופֿין עמיטירט, אַזוי אַז בײַ הויכע פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציעס קען די מוסטער פֿאַרדעקן איר אייגענעם סיגנאַל דורך אינערלעכע פֿילטער־עפֿעקטן. דעריבער דאַרפֿן די סטאַנדאַרטן אַנטהאַלטן די זעלבע פֿאַרבשטאָף־קאָנצענטראַציע ווי די מוסטערן. Amplex Red קען אויך דורכגיין פֿאָטאָאָקסידאַציע פֿון זיך אַליין, און זײַן פּראָדוקט רעזאָרופֿין קען אַרײַנטרעטן אין פֿאָטאָרעדאָקס־ציקלען וואָס שאַפֿן סופּעראָקסיד און פּעראָקסיד. דאָס איז זייער וויכטיק ווען דער עקספּערימענט באַלײַכט אויך אַ פֿאָטאָסענסיביליזאַטאָר. די פּראַקטישע לייזונג איז ערשט צו באַשטראַלן די מעטילען־בלוי־מוסטערן און דערנאָך אַנאַליזירן אַליקוואָטן מיט Amplex־רעאַגענטן אין דער פֿינצטערניש, אַנשטאָט צו באַלײַכטן דעם פֿאַרבשטאָף און דעם זאָנד צוזאַמען. צום סוף, סופּעראָקסיד־דיסמוטאַזע פֿאַרמינערט נישט פּשוט אַן Amplex־סיגנאַל: דאָס פֿאַרוואַנדלען סופּעראָקסיד אין פּעראָקסיד קען אים העכערן. אַן SOD־קאָנטראָל וואָס פֿאַרגרעסערט די פֿלואָרעסצענץ איז נישט דורכגעפֿאַלן. ער האָט אידענטיפֿיצירט סופּעראָקסיד ווי אַ מין וואָס שטייט פֿריִער אין דער רעאַקציע־קייט.

DCFDA: אַ נישט־ספּעציפֿישער אָקסידאַציע־אינדיקאַטאָר

די פּאָרונג פֿון מעטילען־בלוי און DCFDA איז דער מקור פֿון רובֿ פֿון דער צעמישונג. DCFH-DA איז אַ פֿאָרשטאָף וואָס מען פֿירט אַרײַן אין צעלן. עסטעראַזעס אינעווייניק אין דער צעל באַזײַטיקן זײַנע אַצעטאַט־גרופּעס און לאָזן איבער נישט־פֿלואָרעסצירנדיקן DCFH, און אָקסידאַציע פֿון DCFH גיט פֿלואָרעסצירנדיקן DCF. עס איז פֿאַראַן אַ לאַנגע רשימה פֿון זאַכן וואָס אָקסידירן אים: הידראָקסיל־ראַדיקאַלן, פּעראָקסידאַזע־ און העמע־צווישןפּראָדוקטן, שטיקשטאָף־דיאָקסיד, היפּאָכלאָריקע זויער און ראַדיקאַלן וואָס שטאַמען פֿון פּעראָקסיניטריט. וואַסערשטאָף־פּעראָקסיד אַליין אָקסידירט אים נישט דירעקט מיט קיין נוצלעכער ראַטע; פּעראָקסיד־אָפּהענגיקע פֿלואָרעסצענץ דאַרף בדרך־כּלל אײַזן, העמע־פּראָטעינען אָדער פּעראָקסידאַזע־כעמיע אינעם פּראָצעס.

די קריטיק וואָס יעדער מעטאָדן־אָפּטייל זאָל ציטירן שטאַמט פֿון דער אַנאַליז פֿון DCFH ווי אַ זאָנד דורך Kalyanaraman און זײַנע קאָלעגן, ווי עס ווערט צונויפֿגעפֿאַסט אין דער מוח־מיטאָכאָנדריעס־שטודיע וואָס האָט פֿאַרוואָרפֿן DCFDA צוליב דעם. זיי האָבן געוויזן אַז דער פֿאַרבשטאָף רעאַגירט פּאַמעלעך, מיט אַן אומבאַשריבן סטאָיכיאָמעטריע, אָן גילטיקער קאַליבראַציע, און אויך מיט פֿאַרבינדונגען וואָס זענען נישט ROS. דער זאָנד פֿאַרשטאַרקט אויך דאָס וואָס ער מעסט: אָקסידאַציע פֿון DCFH דורך אָפּגעבן איין עלעקטראָן שאַפֿט אַ DCF־ראַדיקאַל וואָס רעאַגירט מיט זויערשטאָף און שאַפֿט סופּעראָקסיד, וואָס ווערט דורך דיסמוטאַציע פֿאַרוואַנדלט אין נאָך פּעראָקסיד. די מעסטונג שאַפֿט טיילווײַז אַליין די כעמיע וואָס זי באַריכטעט.

גאָרנישט פֿון דעם מאַכט DCFDA אומנוצלעך. עס מאַכט אים אַ זיפּונג־טעסט, נישט אַן אידענטיפֿיקאַציע. אַן העכערונג פֿון DCF־פֿלואָרעסצענץ מיינט אַז די אָקסידאַנט־אָפּהענגיקע אָקסידאַציע פֿונעם זאָנד האָט זיך פֿאַרגרעסערט. עס מיינט נישט אַז פּעראָקסיד האָט זיך פֿאַרגרעסערט, און זיכער נישט אַז די גאַנץ־קוואַנטיטעט ROS האָט זיך פֿאַרגרעסערט — אַ קוואַנטיטעט וואָס קיין איינציקער זאָנד מעסט נישט. פֿריִערדיקע אַרבעט מיט מעטילען־בלוי וואָס האָט זיך פֿאַרלאָזט אויף DCF־אָקסידאַציע בײַ קאָנצענטראַציעס העכער איין מיקראָמאָלאַר האָט באַריכטעט פּראָאָקסידאַנטע ווירקונגען, בשעת אַנדערע סיסטעמען אין דער זעלבער תּקופֿה האָבן באַריכטעט שוץ קעגן צעל־טויט אַרויסגערופֿן דורך פּעראָקסיד. ביידע אָבסערוואַציעס קענען זײַן אמת וועגן דעם זעלבן פֿאַרבשטאָף אין פֿאַרשיידענע רעדאָקס־קאָנטעקסטן, און דער DCF־רעזולטאַט אַליין קען נישט זאָגן וועלכער אָקסידאַנט האָט געטראָגן דעם סיגנאַל. די וויכטיקייט פֿון דער פֿריִערדיקער אַרבעט מיט מוח־מיטאָכאָנדריעס איז אַז זי האָט פֿאַרביטן דעם זיפּונג־טעסט מיט אַ קאַליברירטער פּעראָקסיד־מעסטונג און דירעקט געפֿונען די באַלעסטונג: אַפֿילו הונדערט נאַנאָמאָלאַר פֿאַרבשטאָף האָט פֿאַרגרעסערט די פּעראָקסיד־פֿרײַזעצונג עטלעכע מאָל איבער אַלע געפּרוּווטע סובסטראַטן און רעספּיראַציע־צושטאַנדן.

DCFDA האָט נאָך אַן אײַנפֿאַל וואָס איז ספּעציפֿיש פֿאַר מעטילען־בלוי. דער פֿאַרבשטאָף איז שטאַרק קאָלירט און רעדאָקס־אַקטיוו, אַזוי אַז ער קען אויסבלייכן פֿלואָרעסצענץ, אונטערדריקן עמיסיע אָדער אָקסידירן די זאָנד־כעמיע אומאָפּהענגיק פֿון צעלולערע ROS. אַ צעל־פֿרײַער קאָנטראָל מיט פֿאַרבשטאָף און זאָנד, אָבער אָן צעלן, איז נישט קיין אָפּציאָנעלע באַצירונג. דאָס איז דער עקספּערימענט וואָס זאָגט אײַך צי דער פֿאַרבשטאָף רעאַגירט מיטן זאָנד.

ספּין־כאַפּונג און זויערשטאָף־אויפֿנאַם: אידענטיטעט און פֿלוס

וווּ די פֿלואָרעסצירנדיקע זאָנדן באַריכטן אַז עפּעס אָקסידירבאַרס איז דערשינען, באַריכטעט עלעקטראָן־ספּין־רעזאָנאַנץ מיט ספּין־כאַפּערס עפּעס נענטער צו וואָס עס איז געווען. די קלאַסישע שטודיע פֿון מעטילען־בלוי־פֿאָטאָכעמיע האָט געניצט ESR צו דערקענען דעם אַסקאָרבאַט־ראַדיקאַל פֿון פֿאַרבשטאָף, אַסקאָרבאַט און ליכט, און דערנאָך געוויזן פּעראָקסיד־שאַפֿונג אין זויערשטאָף־אויפֿנאַם־עקספּערימענטן און אײַזן־קאַטאַליזירטע שאַפֿונג פֿון הידראָקסיל־ראַדיקאַלן אין ספּין־כאַפּונג־דורכגאַנגען. יעדע טעכניק האָט געענטפֿערט אויף דער פֿראַגע וואָס די אַנדערע האָבן נישט געקענט: ESR האָט געגעבן די אידענטיטעט פֿונעם ראַדיקאַל, זויערשטאָף־אויפֿנאַם האָט געגעבן דעם רעאַקציע־פֿלוס אומאָפּהענגיק פֿון יעדן פֿלואָרעסצירנדיקן זאָנד, און די קאָמבינאַציע האָט געוויזן אַז סײַ סינגלעט־זויערשטאָף־, סײַ ראַדיקאַל־וועגן האָבן געאַרבעט אינעם זעלבן באַלײַכטטן סיסטעם.

יענער רעזולטאַט פֿון 1984 לייענט זיך נאָך אַלץ ווי אַ וואָרענונג־עטיקעט. מיט באַלײַכטונג און אַ רעדוצירנדיקן אַגענט האָט דער פֿאַרבשטאָף געשאַפֿן פּעראָקסיד, און מיט אײַזן האָט דער סיסטעם פּראָדוצירט דעם הידראָקסיל־ראַדיקאַל, דעם מערסט רעאַקטיוון מין אין דער גרופּע. די מחברים האָבן דאָס פֿאַרבונדן מיט אַסקאָרבאַט אינעם אויג און געשטעלט אין פֿראַגע אומפֿאַרזיכטיקן אָפֿטאַלמישן באַניץ. הײַנטיקע לייענער זאָלן באַמערקן די באַדינגונגען: ליכט פּלוס אַ רעדוצירנדיקער אַגענט פּלוס אײַזן. נעמט אַוועק וועלכן עס איז איינעם פֿון די דרײַ, און דער רעאַקציע־וועג ווערט שוואַכער אָדער פֿאַרשווינדט.

זויערשטאָף־עלעקטראָדן פֿאַרדינען זייער אָרט אויף אַן אַנדער אופֿן. אַן עלעקטראָד פֿונעם Clark־טיפּ מעסט נעץ־זויערשטאָף־פֿאַרברויך, וואָס באַשטעטיקט אַז רעדאָקס־כעמיע געטריבן דורך דעם פֿאַרבשטאָף פֿאַרברויכט מאָלעקולאַרן זויערשטאָף, און גיט קינעטיק וואָס קיין פֿלואָרעסצענץ־אַרטעפֿאַקט קען נישט נאָכמאַכן. ער אידענטיפֿיצירט נישט דעם פּראָדוקט. פּעראָקסיד, סופּעראָקסיד, וואַסער און דאָס צעפֿאַלן פֿון סינגלעט־זויערשטאָף פֿאַרברויכן אַלע זויערשטאָף. פֿלוס אָן אידענטיטעט איז אַזוי אומפֿולשטענדיק ווי אידענטיטעט אָן פֿלוס, און דערפֿאַר פּאָרן די שטאַרקע פֿאָרשונג־אַרבעטן דעם עלעקטראָד מיט אַ קאַליברירטן פּעראָקסיד־אַנאַליז אָדער אַ כאַפּער.

פֿאַר וואָס אַנטיאָקסידאַנט־רעזולטאַטן שטימען נישט איבער

לייגט די דרײַ מעס־רעזולטאַטן איינס נעבן צווייטן, און די אָנזעעוודיקע סתּירות אין דער מעטילען־בלוי־ליטעראַטור ווערן קלאָר ווי אונטערשיידן אין מעטאָדן צוזאַמען מיט דרײַ ביאָלאָגישע פֿאַקטן.

ערשטנס, איז דער פֿאַרבשטאָף סײַ אַן עלעקטראָן־טראַנספּאָרטער, סײַ אַ פּעראָקסיד־מקור. דורכן אָפּפֿירן עלעקטראָנען פֿון די רעספּיראַציע־ערטער וווּ זויערשטאָף וואָלט אַנדערש געוואָרן סופּעראָקסיד, קען ער פֿאַרמינערן איין ROS־מין, בשעת זײַן רעדוצירטע פֿאָרעם רעדוצירט זויערשטאָף דירעקט צו פּעראָקסיד און פֿאַרגרעסערט אַן אַנדערן. אַ לאַבאָראַטאָריע וואָס אַרבעט מיט מיטאָכאָנדריאַלער רעדאָקס־כעמיע און דער ראָלע פֿונעם פֿאַרבשטאָף ווי אַן אַרומגאַנג־וועג זאָל דעריבער דערוואַרטן זאָנד־אָפּהענגיקע ענטפֿערס: אַ סופּעראָקסיד־סענסיטיווער מעס־רעזולטאַט פֿאַלט, בשעת אַ פּעראָקסיד־מעס־רעזולטאַט שטײַגט אין דער זעלבער קיוועטע.

צווייטנס, איז פּעראָקסיד בײַ נידעריקע דאָזעס אַ סיגנאַל, נישט בלויז שאָדן. די שטודיע פֿון מײַז־מוח־מיטאָכאָנדריעס וואָס האָט נאָכגעפֿאָלגט דער פֿריִערדיקער אַרבעט האָט געפֿונען פּעראָקסיד־שאַפֿונג שוין בײַ בלויז פֿופֿציק נאַנאָמאָלאַר פֿאַרבשטאָף, אָן מיטאָכאָנדריאַלע DNA־ליזיעס בײַ טעראַפּעווטישע ניוואָען, מיט שוץ קעגן ראָטענאָן־אַרויסגערופֿענע ליזיעס נאָך פֿאָרבאַהאַנדלונג. נאָר בײַ הונדערט מיקראָמאָלאַר, ווײַט העכער דעם טעראַפּעווטישן ראַיאָן, האָט דער פֿאַרבשטאָף געשעדיקט אויסגעקליבענע DNA־פֿראַגמענטן, און רויט ליכט פּלוס צוואַנציק מיקראָמאָלאַר פֿאַרבשטאָף האָט פּראָדוצירט סינגלעט־זויערשטאָף וואָס האָט געשעדיקט אַלע געפּרוּווטע פֿראַגמענטן. דער פֿאָרגעלייגטער מעכאַניזם איז האָרמעטיש: אַ מילדע פּעראָקסיד־פּראָדוקציע אַקטיווירט Nrf2־פֿאַרבונדענע אַנטיאָקסידאַנטע פֿאַרטיידיקונגען און מיטאָכאָנדריאַלע ביאָגענעסיס, אַזוי אַז אַ קורצטערמיניקער פּראָאָקסידאַנטער מעס־רעזולטאַט גייט פֿאָרויס אַ לענגער־טערמיניקן אַנטיאָקסידאַנטן רעזולטאַט. אַן אַנאַליז אָפּגעלייענט נאָך איין שעה און אַן אַנאַליז אָפּגעלייענט נאָך איין טאָג קענען נישט שטימען איבער, ווײַל די ביאָלאָגיע האָט זיך געביטן צווישן זיי.

דריטנס, באַשטימט ליכט וועלכע מאָלעקול איז בכלל פֿאַראַן. באַלײַכטונג דעמעטילירט דעם פֿאַרבשטאָף אין דער ריכטונג פֿון Azure B און פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן, און די מיקראָסקאָפּ־לאַמפּ איבער אַ שיסל איז גענוג צו פֿאָטאָסענסיביליזירן אים. עקספּערימענטן אין דער פֿינצטערניש און באַלײַכטטע עקספּערימענטן זענען פֿאַרשיידענע עקספּערימענטן, און דער אָפּטייל וועגן קאָנטראָלן פֿאַר באַלײַכטונג און באַהאַנדלונג פֿונעם פֿאַרבשטאָף אין יעדן פּראָטאָקאָל זאָל זיי אַזוי באַהאַנדלען.

אַ מינימאַלער קאָנטראָל־סעט, און ווי צו לייענען יעדע טענה

דער פֿאַרגלײַך אונטן איז דער אָריגינעלער רעפֿערענץ־מאַטעריאַל פֿאַר דעם אַרטיקל. איידער איר נעמט אָן וועלכן עס איז ROS־רעזולטאַט מיט מעטילען־בלוי, קאָנטראָלירט וועלכע ריי די מחברים האָבן אויסגעפֿילט און וועלכע זיי האָבן איבערגעהיפּט.

פֿון דעם פֿאָלגט אַ פּראַקטישע לייענ־רעגל. Amplex מיט פּעראָקסידאַזע, קאַליברירט און מיט אַ קאַטאַלאַזע־קאָנטראָל, איז אַ באַווײַז וועגן פּעראָקסיד. DCFDA איז אַ באַווײַז וועגן נישט־ספּעציפֿישער זאָנד־אָקסידאַציע און גאָרנישט מער. ספּין־כאַפּונג מיט קאָנטראָלן וואָס ניצן ראַדיקאַל־פֿאַנגערס איז אַ באַווײַז וועגן דער אידענטיטעט פֿון ראַדיקאַלן. זויערשטאָף־אויפֿנאַם איז אַ באַווײַז וועגן פֿלוס. אַ זאַץ וואָס טענהט מער ווי זײַן אַנאַליז קען שטיצן, ווי זיכער ער זאָל נישט זײַן אָנגעשריבן, איז אַ זאַץ וועגן דעם זאָנד, נישט וועגן דעם פֿאַרבשטאָף. פֿאַרבונדענע דיסקוסיעס וועגן דאָזע־אָפּהענגיקייט און דעם האָרמעטישן ראַיאָן, מיטאָכאָנדריאַלן עלעקטראָן־פֿלוס, שטערונגען אין אַנאַליזן פֿון געפֿאַרבטע מוסטערן און אַרטעפֿאַקטן פֿון מיקראָסקאָפּ־באַלײַכטונג ברייטערן אויס יעדן פֿון די דאָזיקע פּונקטן, און יעדער בלײַבט גילטיק אַמאָל זײַן אָרטהאַלטער־רעפֿערענץ ווערט פֿאַרביטן.