Maqola
Qonni binafsha rangga bo‘yash usulini kim ishlab chiqqan? Metilen ko‘ki, Malachowski, Romanowsky va Giemsa
Eozin qizil. Metilen ko‘ki ko‘k. Ikkalasini aralashtirib, aralashmani quritilgan qon surtmasiga surtsangiz, surtmaning ayrim qismlari binafsha rangga kiradi.
Hamma qismi emas. Yaxshi tayyorlangan preparatda oq qon hujayralarining yadrolari qizil-binafsha rangga kiradi, bezgak paraziti ichidagi xromatin ham shu rangni oladi, atrofdagi qizil qon hujayralari esa pushti, sitoplazma esa kulrang-ko‘k bo‘lib qoladi. Hujayra turlarini bir-biridan ajratib turadigan narsa aynan shu binafsha rangdir.
Ikkala idishning hech birida binafsha rang yo‘q. Bu rang faqat metilen ko‘kining muayyan parchalanish mahsuloti buyum oynasida eozin bilan uchrashganda paydo bo‘ladi. 1880- va 1890-yillarda esa hech kim bu mahsulotning nima ekanini u yoqda tursin, mavjudligini ham bilmas edi. Bu rangni izlagan kishilar sof bo‘lmagan bo‘yoqlar bilan, yolg‘iz ishlagan. Ikki oy tokchada turgan idishning ichida nima borligini aniqlashning ishonchli usuli yo‘q edi.
Shu sababli sarlavhadagi savolga asosli javob bittadan ko‘p va shu sababli javob 2011-yilda o‘zgargan.
Aralashma bilan birga o‘zgargan ko‘rinish
Bo‘yash usuli birdaniga ixtiro qilinmagan. U bosqichma-bosqich shakllangan. Aralashmaga kiritilgan har bir o‘zgarish ko‘z bilan ko‘rish mumkin bo‘lgan aynan bitta yangi ma’lumotni bergan. Bu ma’lumotlarning ketma-ketligi tarixni tushunishning eng ravshan yo‘lidir.
| Yil | Idishda nima bor edi | Nimani ko‘rish mumkin edi |
|---|---|---|
| 1865 | Wilhelm Erb qonga qo‘llagan birinchi sintetik bo‘yoq — pikrin kislotasi | Ayrim qizil qon hujayralari ichidagi to‘rsimon naqsh. |
| 1876 | BASFda Heinrich Caro va Adolf von Baeyer yaratgan metilen ko‘ki | Robert Koch qo‘lida — sil batsillalari. Qon hujayralari bitta ko‘k tusda. |
| 1880 | Metilen ko‘ki va kislotali fuksin, Ehrlichning neytral bo‘yash usuli | Qizil qon hujayralari va eozinofil granulalari qizil, yadrolar to‘q ko‘k, limfotsit sitoplazmasi och ko‘k, ikkala bo‘yoqni ham singdirgan granulalar esa to‘q binafsha. Hujayra shuning uchun neytrofil deb ataladi. Oq qon hujayralarini turlari bo‘yicha birinchi marta sanash. |
| 1888 | Metilen ko‘ki va eozin. Czesław Chęciński | Parazitning o‘zi: ko‘k moychechak shaklidagi ko‘rinishlar (Plasmodium malariae) va o‘roqsimon ko‘rinishlar (P. falciparum gametotsitlari). Uning yadrosi emas. |
| 1890 | Ko‘proq metilen ko‘ki, kamroq spirt va kaliy gidroksid. Albert Plehn | Kengroq va to‘qroq ranglar diapazoni, jumladan pushti qizil qon hujayralari va pushti eozinofil granulalari. Hali ham faqat qizil va ko‘k. |
| 1890 | Eozin va boraks bilan ishqoriy qilingan metilen ko‘ki. Ernst Malachowski | Parazit ichidagi qizil-binafsha xromatin, sitoplazmadan ajralib ko‘ringan yadro. Ataylab olingan va uning ta’kidlashicha, takrorlash mumkin bo‘lgan natija. |
| 1891 | Eozin va ikki oydan ortiq turgan, mog‘orlagan idishdagi metilen ko‘ki. Dmitri Romanowsky | Xuddi shu binafsha rang, bir marta, boshqalar takrorlay olmagan usul bilan. |
| 1898 dan 1902 gacha | Xloroform bilan ajratib olingan polixrom bo‘yoq (Nocht); metanol (Jenner); cho‘kmani spirtda qayta eritish (Leishman, Reuter, Wright); glitserin qo‘shilgan, aniq o‘lchangan bo‘yoqlar (Giemsa) | Kerak paytda olinadigan binafsha rang, boshqa laboratoriyada ham bir xil natija beradigan mahsulotda. Polixromlangan bo‘yoqsiz Jenner varianti binafsha rang bermagan. |
| 1940 dan 1943 gacha | Lillie, Roe va Wilcox tarkibiy qismlarni ajratib, har birini alohida sinagan | Binafsha rangni hosil qiladigan qism aralashmaning o‘zi emas, Azure B ekanligi. |
Eng muhim narsa — oxirgi ustundagi qonuniyat. Har bir yutuq ranglar diapazonini kengaytirgan, har bir kengayish esa yana bitta tuzilmani ko‘rinadigan qilgan. Binafsha rang usulning shunchaki bezagi emas; u parazit borligini ko‘rish bilan uning nimalardan tuzilganini ko‘rish o‘rtasidagi farqdir. Bo‘yoqning o‘zi BASF bo‘yoq fabrikasidan tibbiyotga qanday kirib kelgani alohida hujjatlarga ega bo‘lgan kengroq tarixdir. Yuqoridagi to‘liq ketma-ketlik, har bir bandning manbasi bilan birga, manbalar havolalari berilgan hissa qo‘shganlar xronologiyasi sifatida saqlanadi.
Rasm: ayni oltita aralashma idishda nima bo‘lgani va undan qanday natija chiqqani shaklida tasvirlangan. Doiralarda bo‘yoqlar, ostidagi bloklarda esa bu bo‘yoqlar qon surtmasida hosil qila oladigan ranglar ko‘rsatilgan. 1890-yilgacha hech birida qizil-binafsha blok yo‘q, undan keyin esa hammasida bor.
Boraksni ataylab ishlatgan kishi
Ernst Malachowski Breslauda, hozirgi Wrocławda shifokor bo‘lgan. U faoliyatini xususiy amaliyotda va hamkasbi bilan boshqargan kichik klinikada o‘tkazgan, laboratoriya ishlarini esa bo‘sh vaqtida bajargan. U 1857-yil 12-martda Strzelnoda tug‘ilgan, Breslau universitetida tibbiyot o‘qigan va 1882–1887-yillarda o‘sha paytda Germaniyadagi ikkinchi eng katta shifoxona bo‘lgan All Saints shifoxonasining ichki kasalliklar bo‘limida assistent bo‘lib ishlagan.
U 1888-yilda Chęciński va Plehnning ikki bo‘yoqli usulidan boshlagan. 1889-yilda tayyorlangan bir preparatda plazmodiy yadrosining xromatini sitoplazmadan boshqacha bo‘yalishini ko‘rgan, ammo keyin bu natijani takrorlay olmagan. U metilen ko‘kini kislotali qilishga urinib ko‘rgan, bu esa vaziyatni yomonlashtirgan. Uni boraks bilan ishqoriy qilishga urinib ko‘rganida, usul har safar ishlagan. U usulni 1890-yil 15-iyunda omma oldida namoyish qilgan va 1891-yil avgustda boraks qo‘shish ko‘rsatmasini ham o‘z ichiga olgan batafsilroq tavsifini e’lon qilgan. U bo‘yash yigirma to‘rt soat davom etishini va natijalarni osongina takrorlash mumkinligini qayd etgan.
Diagnostika laboratoriyasida yigirma to‘rt soat uzoq vaqt hisoblanadi, uning maqolasida esa parazit yadrosining binafsha-qizil rangiga batafsil to‘xtalinmagan. Sababi nima bo‘lishidan qat’i nazar, 1898-yilda Nocht buni yana qilmaguncha, hech kim metilen ko‘kini ataylab ishqoriy qilishni davom ettirmagan. Malachowski qon bo‘yash haqida boshqa hech qachon yozmagan.
Yaqin vaqtgacha u haqda juda kam narsa ma’lum bo‘lganining sababi sirli emas, arxivlarga bog‘liq. Tibbiy adabiyotlarda uning hayotidan deyarli hech qanday iz qolmagan, saqlanib qolgan ma’lumotlar esa bitta yo‘l orqali yetib kelgan. Uning qizi Marie 1939-yilda Germaniyadan Londonga ketgan, Britaniya armiyasida xizmat qilgan va Kanadaga ko‘chib o‘rnashgan. Uning oilaviy hujjatlar to‘plami oxir-oqibat Nyu-Yorkdagi Leo Baeck institutiga kelib tushgan. Uning akasi Leo Birinchi jahon urushida halok bo‘lgan. Opasi Eva 1942-yil aprelda Breslaudan Izbica tranzit lageriga deportatsiya qilingan va qaytib kelmagan. Onasi Hedwig ham xuddi shunday deportatsiyani kutish o‘rniga 1942-yil 22-aprelda o‘z joniga qasd qilgan. Malachowski bularning barchasidan oldin, 1934-yilda vafot etgan.
Bunday yakun topgan oila tarixiga keyinchalik havola berilmay qo‘yadi. Malachowskini bo‘yash usuli rivojlanishi tarixiga qaytargan, ikkalasi ham 2011-yilda chop etilgan ikki maqola Poznań va Wrocławdagi arxiv hujjatlari hamda Nyu-Yorkdagi Mariening hujjatlari asosida tayyorlangan.
Mog‘orlagan idish va omadli rus
Dmitri Romanowsky Sankt-Peterburgdagi Harbiy tibbiyot akademiyasida tibbiyot o‘qigan va faoliyatining katta qismini bezgakni o‘rganishga bag‘ishlagan. 1890-yilda u qog‘ozdagi tavsifiga ko‘ra Chęciński usuliga deyarli bir xil bo‘lgan usulni e’lon qilgan: o‘zgartirilmagan metilen ko‘ki va eozin, faqat eozin biroz ko‘proq.
1891-yil sentabrda u o‘z nomini mashhur qilgan usulni e’lon qilgan. Muhim tafsilot esa ko‘rsatmalar orasida yashirinib qolgan edi. Eng yaxshi natijalarni u die vorräthige Methylenlösung — ikki oydan ortiq turgan va ustida mog‘or o‘sgan metilen ko‘kining zaxira eritmasidan olgan. Mog‘or va turish muddati bo‘yoqni qisman demetillagan edi. Romanowsky buni bilmagan va nazorat qila olmagan, uning usulini sinagan boshqa tadqiqotchilar esa binafsha rangni ololmagan. Uning dissertatsiyasi Sankt-Peterburgda 1891-yil iyunda topshirilgan, shu sababli odatiy tarixiy bayonda 1891-yil kashfiyot yili deb qaraladi.
Malachowskining namoyishi esa bundan bir yildan ko‘proq oldin, 1890-yil iyunda bo‘lgan va uning usuli ataylab ko‘zlangan natijani bergan.
Nega usul boshqa kishining nomi bilan atalgan
Malachowski foydasiga dalillarni Kristine Krafts, Ernst Hempelmann va Barbara Oleksyn jamlagan. Ular to‘rt narsaga tayanadi. Ommaviy namoyish sanasi: 1891-yil sentabrga qarshi 1890-yil iyun. Tasodifiy degan so‘zga qarshi ataylab degan so‘z. Malachowski o‘z usulini boraks qo‘shish tafsilotigacha e’lon qilgani, Romanowsky usuli esa nazorat qilinmaydigan omilga bog‘liq bo‘lgani. Va plazmodiy yadrosining tavsifi uni ko‘rsatib bergan binafsha rang bilan birga amalda yetti yil adabiyotlardan yo‘qolib ketgani, chunki hech kim tasodifiy olingan variantni takrorlay olmagani.
Ular xulosani ochiq aytadi. Biografik maqolada ular kashfiyotning bunday nisbat berilishini «adolatning buzilishi» deb ataydi va 1978-yilda «ehtimol, bu bo‘yash usullari oilasini Malachowski usullari deb atashimiz kerak» deb yozgan Ralph Lilliedan iqtibos keltiradi.
Birinchilik haqidagi da’volarda odatda bo‘lganidek, bu da’vo ham bahsli. Bahsni hal qilishdan ko‘ra uning mohiyatini tushuntirish muhim. Birinchilik haqidagi bahsda avval kashfiyot nimadan iborat bo‘lganini aytish kerak. Agar kashfiyot binafsha rang bo‘lsa, Malachowskining hujjatlashtirilgan namoyishi ertaroq bo‘lgan. Agar kashfiyot e’lon qilingan usul bo‘lsa, ikkala kishi ham 1891-yilda nashr qilgan va usul Romanowsky nomi bilan atalgan. Agar kashfiyot tushuntirish bo‘lsa, hech birining da’vosi asosli emas, chunki ikkalasi ham yetilish demetillanish ekanini bilmagan va rangning umuman nega paydo bo‘lishini tushuntira olmagan. Ommabop bayonlarda aynan shu oxirgi jihat chetlab o‘tiladi. Faol tarkibiy qism hech kim aniqlamagan aralashma edi. Rangni birinchi bo‘lib ataylab hosil qilgan kishi buni retseptning nima qilishini tushungani uchun emas, takrorlash mumkin bo‘lgan tajribaviy retsept asosida qilgan.
2011-yildagi ikki maqola Malachowski foydasiga dalillarning eng to‘liq chop etilgan bayonidir. Ikkalasini ham PubMedda bepul o‘qish mumkin: keng sharh PMID 21235291 sahifasida, biografik maqola esa PMID 21660627 sahifasida. Sharhning PubMed yozuvida unga bildirilgan, o‘sha yilning keyinroq davrida ayni jurnalda 86(5):366 manzilida chop etilgan izoh ham keltirilgan. Bu dalil paydo bo‘lishi bilanoq nashrlarda bahsga sabab bo‘lganini eslatadi.
Bu bahs kimyo haqidagi kelishmovchilik emas. Unda qatnashganlarning barchasi binafsha rang nima ekaniga va uni qaysi tarkibiy qismlar hosil qilishiga rozi. Kelishmovchilik kim birinchi bo‘lib shu natijaga erishgani va hech kim takrorlay olmagan tasodifni umuman natijaga erishish deb hisoblash mumkinmi, degan savol ustida.
Keyingi nomlar nimani qo‘shgan
Agar binafsha rangni birinchi bo‘lib Malachowski hosil qilgan bo‘lsa, nega bo‘yash usuli Romanowsky, Wright va Giemsa nomlarini olgan?
Chunki ixtirochisining qo‘lida bir marta ishlagan bo‘yash aralashmasi hali reagent emas. Keyingi ishlar injiq aralashmani boshqa mamlakatdagi laborant oddiy bir seshanba kuni ham ishlata oladigan vositaga aylantirgan.
Nocht bunga mulohaza yuritish orqali erishgan. Oddiy neytral bo‘yoqdan ishonchli natija ololmagach, u binafsha rang metilen ko‘ki tarkibidagi, ammo metilen ko‘kining o‘zi bo‘lmagan bir moddadan kelib chiqishi kerak, degan xulosaga kelgan va uni izlashga kirishgan. Unna allaqachon eskirgan metilen ko‘ki eritmalari semiz hujayra granulalarini qizilga bo‘yashini payqagan va bo‘yoq yetilganda yangi modda hosil bo‘ladi, degan fikrni ilgari surgan edi. Bernthsen 1885-yilda ishqoriy sharoit metilen ko‘kidan metil guruhlarini ajratishini va bu mahsulotlar hozir azure bo‘yoqlari deb ataladigan moddalar ekanini ko‘rsatgan edi. Nocht faol fraksiyani xloroform bilan ajratib olgan va uni faqat Rot aus Methylenblau, ya’ni metilen ko‘kidan olingan qizil modda deb atay olgan; Michaelis 1901-yilda uni azure I deb nomlagan. Jenner tayyorlash va foydalanish masalasini hal qilgan. Metilen ko‘ki va eozin cho‘kmasini mutlaq metanolda qayta eritish surtmani bo‘yash bilan bir vaqtda fiksatsiya qiladigan yagona barqaror eritmani bergan va issiqlik bilan fiksatsiya qilish zaruratini tugatgan. Leishman va Reuter polixromlangan bo‘yoqni spirtli erituvchi bilan birlashtirib, bir vaqtning o‘zida barqarorlik va binafsha rangga erishgan. Wright 65 °C da o‘n ikki soat inkubatsiya qilish va o‘n kun tindirishni oqimli bug‘da bir soat ishlov berish bilan almashtirgan. Giemsa tasodifiy yetilgan eritmaga tayanishdan butunlay voz kechgan: ma’lum bo‘yoqlarning aniq o‘lchangan miqdorlarini ishlatgan va mahsulot tropik issiqqa bardosh berishi uchun metanolga glitserin qo‘shgan. U sof metilen azure moddasini qanday tayyorlaganini hech qachon e’lon qilmagan. Uni Leypsigdagi Dr Grübler laboratoriyasiga sotgan. Laboratoriya uni azure I nomi bilan bozorga chiqargan va faqat o‘z varianti haqiqiy Giemsa bo‘yog‘i ekanini da’vo qilgan.
O‘sha azure moddasining aynan nima ekanligi hanuz bahsli. Ba’zilar uni shunchaki polixromlangan metilen ko‘ki deb hisoblaydi, boshqalar esa unda azure B ko‘p bo‘lganini aytadi. Javob urush sharoitida topilgan. Germaniya bo‘yoqlarini olish imkonsiz bo‘lib qolganda, AQSh Jamoat salomatligi xizmati jamoasi — Ralph Lillie, Maurice Roe va Aimee Wilcox — eng yaxshi bo‘yalish uchta ajratilgan tarkibiy qismdan kelib chiqishini aniqlagan: o‘zgartirilmagan metilen ko‘ki, uning demetillangan parchalanish mahsuloti azure B va eozin. Azure B topib bo‘lmaydigan azure I o‘rnini egallagan va bu uch tarkibiy qism bugun bezgakni aniqlashda ishlatiladigan bo‘yash aralashmasining hamon asosini tashkil etadi.
Bu uch tarkibiy qism buyum oynasida qanday o‘zaro ta’sirlashishining kimyosi alohida savol va boshqa sahifaning mavzusidir. Romanowsky turidagi bo‘yash usullarida bo‘yoqlarning roli va kimyosi sahifasi azure B va eozinning har biri nima qilishini hamda nega bu juftlik ularning hech biri yolg‘iz hosil qilmaydigan rangni berishini tushuntiradi. Mikroskopiya va laboratoriyada qo‘llanish sahifasi esa amaliy tomonni yoritadi: muayyan preparat nimani ko‘rsatishi va muayyan mahsulot siz qo‘llamoqchi bo‘lgan usulga mos kelishini qanday baholash mumkinligi.
Tarixning hanuz dolzarb qismi
Bu hikoyadagi bir tafsilot 1902-yilda o‘z ahamiyatini yo‘qotmagan. Taxminan ellik yil davomida dunyodagi standart bezgak bo‘yog‘ining eng muhim tarkibiy qismi nomi noma’lum aralashma bo‘lgan. U tasodifan paydo bo‘lgan, miqdori idishdan idishga farq qilgan, shu davrning bir qismida uning aynan nima ekanligi tijorat siri bo‘lgan va uning ulushi haqida 1940-yillargacha bahslashilgan. Bo‘yoqdan foydalangan kishilar beparvo bo‘lmagan. Ular idishning ichida nima borligini bilish imkoniga ega bo‘lmagan.
Xuddi shu muammoning zamonaviy ko‘rinishi — materialning faqat bir qismini tavsiflaydigan spetsifikatsiya. USP talablariga muvofiqlik bozorda taklif etiladigan eng yuqori soflikka erishish yo‘lidir, chunki u bitta o‘lchov emas, balki to‘liq e’lon qilingan standartdir: moddaning aynanligini aniqlash, soflik, azure bo‘yoqlari ham kiradigan organik aralashmalar, qoldiq erituvchilar, element aralashmalari, kuydirishdan qolgan qoldiq, mikrobiologik chegaralar va bakterial endotoksinlar. Blupreme metilen ko‘kini farmatsevtik ishlab chiqaruvchidan oladi va to‘liq tahlil sertifikatini e’lon qiladi. Shunda bu ro‘yxatdagi har bir bandni shunchaki da’vo qilish emas, tekshirish mumkin bo‘ladi. Og‘ir metallar bo‘yicha natijani ko‘rsatib, buni USP talablariga muvofiqlik deb ataydigan sertifikat — «yetilgan metilen ko‘ki» deb yorliq qo‘yilgan idishning bugungi muqobili: ehtimol, yaxshi reagentdir, ammo yorliq uning ichida nima borligini aytmaydi.