Maqola
Katta qorin suyuqligida metilen ko‘kining qaytarilish testi
Yaqinda o‘qishni bitirgan mutaxassis qo‘lida ko‘k rangli probirka bilan fermadan qo‘ng‘iroq qiladi. U o‘n daqiqa oldin katta qorin suyuqligiga metilen ko‘ki qo‘shgan, ammo ko‘k rang hali ham yo‘qolmagan. U sigirga yana bo‘yoq berish kerakmi, deb so‘raydi.
Bu savol test haqidagi noto‘g‘ri tasavvurni ko‘rsatadi. Katta qorin suyuqligida metilen ko‘kining qaytarilish testida bo‘yoq probirkaga qo‘shiladi, hech qachon hayvonga berilmaydi. Sinovning barchasi probirkada kechadi. Ko‘k rang qanchalik tez yo‘qolishini o‘lchash hayvonga qanday davolash kerakligini emas, shu namunadagi mikroblar haqida ma’lumot beradi.
Chalkashlikni tushunsa bo‘ladi, chunki metilen ko‘ki veterinariyada uchta alohida vaziyatda qo‘llanadi. Ushbu maqola ularni bir-biridan ajratib, qaytarilish vaqtini pH, protozoalar, namuna olish sifati va klinik belgilar bilan birga qanday talqin qilishni ko‘rsatadi.
Test aslida nimani o‘lchaydi
Metilen ko‘ki oksidlangan holatda ko‘k, qaytarilgan holatda esa deyarli rangsiz bo‘ladi. Sog‘lom hayvondan olingan yangi katta qorin suyuqligi kuchli qaytaruvchi xususiyatga ega, chunki anaerob bakteriyalar ozuqani faol fermentlaydi. Bunday suyuqlikka oz miqdorda bo‘yoq aralashtirilganda, bakteriyalar metabolizmi bir necha daqiqa ichida rangni yo‘qotadi.
Demak, ishlash tamoyili oddiy: faol anaerob mikroflora ko‘k rangni tez, sust yoki zararlangan mikroflora esa sekin yo‘qotadi. Qisqa vaqt shu namunaning qaytarish qobiliyati yuqoriroq ekanini bildiradi. Namuna to‘g‘ri olingan va saqlangan bo‘lsa, vaqtning uzayishi mikrob faolligi pasayganini ko‘rsatadi.
Bu test katta qorinning oksidlanish-qaytarilish potensialini bevosita o‘lchamaydi. Qoramollarda tekshirish usullariga oid bir tadqiqot qaytarilish testini millivoltlarda bevosita o‘lchash bilan solishtirgan. Unda qaytarilish vaqti bilan o‘lchangan oksidlanish-qaytarilish potensiali o‘rtasida chiziqli korrelyatsiya topilmagan va bu ikki natijani bir ko‘rsatkichning o‘zaro almashtiriladigan o‘lchovlari deb hisoblamaslik kerak, degan xulosa chiqarilgan. Taqqoslashning to‘liq xulosasi PubMed sahifasida keltirilgan. Qaytarilish testini arzon elektrod sifatida emas, mikrob populyatsiyasining funksional sinovi sifatida tushuning.
Merck/MSD qo‘llanmasidagi kavsh qaytaruvchilarda oddiy hazm buzilishi tavsifi uzaygan qaytarilish vaqtini katta qorin pH qiymatining me’yordan chetga chiqishi va protozoalar sonining kamayishi bilan birgalikda ko‘rib chiqadi. Bitta ko‘rsatkichning o‘zi tashxis uchun yetarli emas. Ko‘rsatkichlarning umumiy manzarasi muhim.
Hayvon yonida bajariladigan standart tartib
Protokollar ta’lim muassasalariga qarab biroz farqlanadi, shuning uchun qo‘llagan aniq hajmlar va haroratni qayd eting hamda natijalarni faqat shu protokol doirasida taqqoslang. Keng o‘rgatiladigan usullardan biri quyidagicha:
- So‘lak aralashishi, havo bilan aloqa va sovishni imkon qadar kamaytirgan holda kamida 10 dan 20 mL gacha yangi katta qorin suyuqligini oling. Darhol tekshiring.
- 0.03 foizli metilen ko‘ki eritmasini tayyorlang; bu har bir mL da 0.3 mg degani.
- Suyuqlik hajmining 5 foizi miqdorida bo‘yoq qo‘shing. Ya’ni 20 mL suyuqlikka 1.0 mL yoki 10 mL suyuqlikka 0.5 mL bo‘yoq qo‘shiladi. Har ikkala holatda ham suyuqlikning bo‘yoqqa nisbati 20 ga 1 bo‘ladi.
- Rang nazorati uchun ayni namunadan olingan, bo‘yoq qo‘shilmagan suyuqlikni ikkinchi probirkada saqlang.
- Ohista aralashtiring, darhol taymerni ishga tushiring va probirkani tana haroratiga yaqin, mahalliy protokolga qarab taxminan 37 dan 39 Selsiy darajagacha haroratda tuting.
- Sinov probirkasidagi rang nazorat probirkasidagi rangga tenglashguncha o‘tgan vaqtni qayd eting. Havo bilan tutash yuzada yupqa ko‘k halqa saqlanib qolishi mumkin, chunki u yerda kislorod bo‘yoqni qayta oksidlaydi. Bu halqaning yo‘qolishini kutmang.
Metilen ko‘kining oksidlanish-qaytarilish kimyosi bu yerda kislorod nega muhimligini tushuntiradi. Kuchli chayqatish, og‘zi keng ochiq probirka yoki uzoq kechikish kislorod kirishiga imkon beradi va bo‘yoq katta qorinning o‘zidagidan uzoqroq ko‘k holatda qoladi. Shu sababli katta qorin suyuqligini ifloslantirmasdan olish texnikasi tafsilotlari ham muhim. So‘lak namunani suyultiradi va pH qiymatini oshiradi, shuning uchun oshqozon zondi ishlatilganda ko‘plab klinik mutaxassislar, hajm yetarli bo‘lsa, dastlabki qismini tashlab yuboradi.
Turli kuzatuvlar nimani o‘lchaydi
Qaytarilish vaqti faqat bitta savolga javob beradi. Quyidagi katta qorinni baholash jadvali hayvon yonida bajariladigan har bir kuzatuv qanday ma’lumot berishini ko‘rsatadi. Bitta katakni emas, butun qatorni hisobga oling.
| Kuzatuv | Nimani o‘lchaydi | Hayvon yonida odatda kuzatiladigan holat | Natijani chalg‘ituvchi odatiy omillar |
|---|---|---|---|
| Metilen ko‘kining qaytarilish vaqti | Namunadagi anaerob bakteriyalarning funksional qaytarish faolligi | Qoramollarda ko‘pincha 2 dan 6 daqiqagacha; qo‘y va echkilarda ko‘pincha tezroq, bunda 6 daqiqa yetarli faollik uchun amaliy chegara, 10 daqiqadan ortiq vaqt esa me’yordan yaqqol chetga chiqish deb olinadi | Sovuq, kechiktirilgan, havoga duchor bo‘lgan yoki so‘lak bilan suyultirilgan namuna; uzoq davom etgan ishtahasizlikdan keyin substratning kamligi; og‘iz orqali berilgan mikroblarga qarshi preparatlar; bo‘yoq nisbatlari yoki haroratlari turlicha bo‘lgan natijalarni taqqoslash |
| Katta qorin pH qiymati | Kimyoviy muhit, kislota yoki ishqor yuklamasi | Dag‘al ozuqa bilan boqiladigan qoramollarda ko‘pincha 6.0 dan 7.2 gacha; mayda kavsh qaytaruvchilar haqidagi manbalarda ko‘pincha taxminan 6.5 dan 7.5 gacha keltiriladi; ratsion va oziqlantirishdan keyin o‘tgan vaqt qiymatni o‘zgartiradi | Oshqozon zondi bilan olingan namunalarga so‘lak aralashishi pH qiymatini oshiradi; namuna olingandan keyin karbonat angidridning chiqib ketishi; donli ozuqa berish pH qiymatini pasaytiradi |
| Protozoalar soni va harakatchanligi | Kiprikli protozoalar populyatsiyasining saqlanganligi, ayniqsa buzilishlarga sezgir yirik shakllarning holati | Iliq, yangi tomchida turli kattalikdagi ko‘plab organizmlarning faol, yo‘nalgan harakati | Sovish harakatni sekinlashtiradi; og‘ir atsidoz protozoalarni yo‘q qilishi mumkin; kechikish me’yoriy namunani sust ko‘rsatadi |
| Hid, rang va konsistensiya | Fermentatsiya xususiyati va ifloslanish | Biroz xushbo‘y, yashilimtir jigarrang, yengil qovushqoq suyuqlik | Og‘ir disbiozda chirigan yoki nordon hid; noto‘g‘ri namuna olishdan keyin suvsimon yoki ko‘p so‘lak aralashgan suyuqlik |
| Katta qorin qisqarishlari va ishtaha | Hayvonning umumiy old oshqozon faoliyati va ozuqa iste’moli | Tetik hayvonda muntazam qisqarishlar va barqaror kavsh qaytarish | Yaqinda ratsionning o‘zgarishi, og‘riq, suvsizlanish, tizimli kasallik |
Asosiy mazmun shu jadvalda. Uzaygan qaytarilish vaqti, sust protozoalar, me’yordan chetga chiqqan pH va kuchsiz qisqarishlar birgalikda mikrob faolligi haqiqatan pasayganini ko‘rsatadi. Tetik, kavsh qaytarayotgan va protozoalari faol hayvonda faqat qaytarilish vaqtining uzayishi katta qorindan ko‘ra namunaga bog‘liq muammoni ko‘rsatadi. Chora ko‘rishdan oldin qayta namuna oling.
Vaqtni pH va anamnez bilan birga talqin qilish
Boshlang‘ich darajani ratsion belgilaydi. Konsentratlarga boy ratsionlar tez fermentlanadi va bo‘yoq rangini taxminan bir daqiqada yo‘qotishi mumkin, pichanli ratsionlarda esa hatto sog‘lom hayvonlarda ham bir necha daqiqa talab qilinishi mumkin. Shuning uchun qisqa vaqtning o‘zi sog‘liq yaxshiroq ekanini isbotlamaydi. U fermentlanadigan substrat ko‘proq bo‘lganini va unga faol mikroblar ta’sir qilganini ko‘rsatadi.
Donni haddan tashqari ko‘p iste’mol qilishning og‘ir holati bu oddiy qonuniyatni buzadi. Dastlab uglevodlar fermentatsiyasi kuchli bo‘lishi mumkin, keyin esa kislota ta’siridagi zararlanish odatiy mikroflora va protozoalarni susaytiradi, qaytarilish vaqti uzayadi. Shu sababli o‘qitishda qo‘llanadigan qoidalardan biri katta qorin pH qiymati taxminan 5.5 dan past bo‘lsa, test haqiqiy natija bermasligini aytadi. Bunday paytda tekshirilayotgan mikroflora o‘zgargan bo‘ladi.
Ko‘rsatkichlar uyg‘unligini talqin qilish uchun amaliy yo‘riqnoma:
- Me’yoriy pH va taxminan 6 daqiqa ichida qaytarilish mikrofloraning funksional faol ekanini ko‘rsatadi.
- Me’yoriy pH va qaytarilish vaqtining yaqqol uzayishi ishtahasizlik, mikroblarga qarshi preparatlar ta’siri yoki sifati buzilgan namuna tufayli faollik pasayganini ko‘rsatadi.
- Yuqori pH va uzaygan qaytarilish ko‘pincha uzoq davom etgan ishtahasizlikdan keyin, substrat kam bo‘lganda kuzatiladi, ammo zond orqali so‘lak aralashganini ham hisobga oling.
- Past pH va protozoalar faolligining pasayishi uglevodlar bilan bog‘liq disbiozdan xavotir uyg‘otadi. Bu yerda katta qorin pH qiymatini talqin qilish bo‘yicha ko‘rsatmalar yordam beradi. 5.5 dan past qiymatlar hayvonning umumiy holati susayishi bilan birga kuzatilsa, oddiy hazm buzilishidan ko‘ra donni haddan tashqari ko‘p iste’mol qilish va og‘ir atsidozni ko‘rsatadi.
Yaqinda og‘iz orqali berilgan tetratsiklinlar, ozuqadagi ionoforlar, uzoq muddat qo‘llangan tizimli mikroblarga qarshi preparatlar, ratsionning keskin o‘zgarishi, ishtahasizlik davomiyligi va suv iste’molini doimo qayd eting. MSD qo‘llanmasi og‘iz orqali berilgan tetratsiklinlar katta qorin mikroflorasini sezilarli darajada susaytirishi mumkinligi haqida alohida ogohlantiradi. Ionoforlar bakteriya populyatsiyalarini ataylab o‘zgartiradi. Bu anamnezsiz uzaygan vaqtni talqin qilib bo‘lmaydi.
Namuna olish sifatiga ham teng darajada ahamiyat berish kerak. Nazoratli tadqiqotda bir xil hayvonlardan oshqozon zondi bilan olingan namunalarda pH yuqoriroq, uchuvchan yog‘ kislotalari esa kanyula orqali olingan namunalardagidan kamroq bo‘lgan; bunga asosan so‘lak sabab bo‘lgan. Namuna olinganidan 60 daqiqa o‘tgach, tekshirilgan barcha hajmlarda qaytarilish vaqti sezilarli uzaygan, eng katta ta’sir kichik namunalarda kuzatilgan. Kamida 10 mL oling, 30 daqiqa ichida tekshiring, qaytarilish testini dastlabki tekshiruvlar qatorida bajaring, namunani iliq tuting va havo bilan aloqani imkon qadar kamaytiring.
Bir-biri bilan chalkashtirmaslik kerak bo‘lgan uchta qo‘llanish
Bir xil bo‘yoq, uchta turli tizim.
Birinchisi — bu yerda bayon qilingan katta qorin suyuqligi sinovi. Tekshiriladigan material — olingan katta qorin suyuqligi. Bo‘yoq in vitro sharoitida 0.03 foizli eritma ko‘rinishida qo‘shiladi. Yakuniy ko‘rsatkich — rangsizlanishgacha o‘tgan vaqt. Maqsad — mikroblarning qaytarish faolligini baholash.
Ikkinchisi — tirik kavsh qaytaruvchi hayvonga metilen ko‘kini berish. Tasdiqlangan misol — metgemoglobinemiya bilan kechadigan nitrat yoki nitrit toksikozida vena ichiga yuboriladigan davolash; bunda preparat gemoglobinning funksional holatini tiklaydi. Doza, preparat shakli, qoldiq moddalar va mahsulotlardan foydalanishdan oldingi kutish muddatiga oid qoidalar amal qiladi. Bu qarorning probirkadagi vaqtni o‘lchashga aloqasi yo‘q. Agar muayyan muolajada bo‘yoq in vivo kuzatuv belgisi sifatida ishlatilsa, asosiy tamoyil katta qorin mikroblari uni qanchalik tez qaytarishi emas, bo‘yoq qayerga borishini kuzatishdir.
Uchinchisi — sutning qaytarilish testi. Tekshiriladigan material — sut. Bo‘yoq sut namunasiga qo‘shiladi. Ko‘k rangning tez yo‘qolishi odatda mikrob faolligi yuqoriroq va saqlanish sifati pastroq ekanini, sekin qaytarilish esa sifat yaxshiroq ekanini bildiradi. U katta qorin tibbiyotiga emas, oziq-ovqat mikrobiologiyasi va sut sifatini tekshirishga tegishli, shuningdek, bakteriyalar sonini aniqlamaydi.
Nomlarni aniq ajratish xatolarning oldini oladi: katta qorin suyuqligining qaytarilish vaqti, metilen ko‘ki bilan tizimli davolash yoki uni kuzatuv belgisi sifatida qo‘llash va sutning qaytarilish testi. Xavfsizlik qoidasi bitta gapga sig‘adi. Katta qorin sinovi uchun mo‘ljallangan bo‘yoq laboratoriya probirkasida qoladi va bu probirka utilizatsiya qilinadi. Testni bajarish uchun u hech qachon hayvonga berilmaydi.
Fermadan qo‘ng‘iroq bo‘lganda qo‘llanadigan qisqa qoida
Bo‘yoqni 0.03 foizli qilib va 20 qism suyuqlikka 1 qism bo‘yoq nisbatida standartlashtiring, yangi suyuqlikni tana haroratiga yaqin haroratda bo‘yoq qo‘shilmagan nazorat namunasi bilan solishtirib tekshiring hamda daqiqalarni pH, protozoalar harakatchanligi, namuna olish sifati, ratsion, dorilar, qisqarishlar, ishtaha, najas va gidratatsiya holati bilan birga talqin qiling. Alohida olingan raqam hech qachon hazm buzilishiga tashxis qo‘ymaydi. Bir-biriga mos keladigan ko‘rsatkichlar majmuasi esa tashxisga asos bo‘ladi.