میتھیلین بلیو اور ALS: مختلف تجرباتی ماڈلز میں نتائج کیوں مختلف ہوتے ہیں

میتھیلین بلیو اور ALS تلاش کریں تو دو ایسے دعوے ملتے ہیں جو بظاہر ایک دوسرے کی تردید کرتے ہیں۔ ایک کہتا ہے کہ نیلے رنگ کے اس مادے نے ALS کے ماڈلز میں عصبی خلیوں کی حفاظت کی۔ دوسرا کہتا ہے کہ ALS والے چوہے میں اس نے کوئی اثر نہیں دکھایا۔ دونوں دعوے حقیقی تحقیقی مقالوں کا حوالہ دیتے ہیں، اور دونوں مقالے سنجیدہ توجہ کے مستحق ہیں۔ جب ہر تجربے کے پیچھے موجود تصور واضح کر دیا جائے تو یہ تضاد ختم ہو جاتا ہے: دعوے کی حد وہی ہے جو ماڈل کی ہے۔

کیڑے میں حاصل ہونے والا نتیجہ کیڑے کے بارے میں دعویٰ ہے۔ لاروا مرحلے کی مچھلی میں حاصل ہونے والا نتیجہ لاروا مرحلے کی مچھلی کے بارے میں دعویٰ ہے۔ جب تک کسی ممالیہ میں بیماری کے پورے سفر کا مطالعہ اس کی تائید نہ کرے، ان میں سے کوئی بھی مریض کے بارے میں دعویٰ نہیں ہے۔ یہ مضمون سب سے زیادہ حوالہ دیے جانے والے دو مقالوں کا ساتھ ساتھ موازنہ کرتا ہے، تاکہ آپ دیکھ سکیں کہ ان کے نتائج مختلف کیوں ہیں۔

ایک جدول میں دونوں تجربات

پڑھتے ہوئے اس جدول کو سامنے رکھیں۔ مطالعات کے درمیان ہر اہم فرق اس میں موجود ہے۔

جینیات مختلف ہے، انواع مختلف ہیں، دوا دینے کا راستہ مختلف ہے، وقت مختلف ہے، اور اختتامی پیمانے مختلف ہیں۔ جینیاتی ساخت پانچ فرقوں میں سے صرف ایک ہے، اس لیے یہ دو مطالعات ثابت نہیں کر سکتے کہ میتھیلین بلیو ALS کے کسی ایک حیاتیاتی راستے پر منتخب طور پر کام کرتا ہے۔ یہ ایک زیادہ محدود مگر پھر بھی مفید بات ثابت کرتے ہیں: سادہ ماڈلز میں ابتدائی، براہِ راست تعرض کے تحت ہونے والی نمایاں بہتری، کسی ممالیہ میں طویل مدتی زبانی استعمال کے دوران بیماری کے سفر میں منتقل نہیں ہوئی۔

مثبت نتیجہ: کیڑوں اور مچھلیوں کے مطالعے نے کیا دکھایا

کیڑوں اور مچھلیوں کے 2012 کے مطالعے میں کیڑوں کے حرکی عصبی خلیوں میں تغیر یافتہ انسانی TDP-43 یا FUS کی پیداوار کروائی گئی، اور مچھلی کے جنینوں میں تغیر یافتہ انسانی mRNA داخل کیا گیا۔ یہ پروٹین کی زہریلی تاثیر کے ماڈلز ہیں۔ یہ دنوں کے دوران حرکت اور عصبی خلیوں کی شکل پر تغیر یافتہ پروٹین کے زہریلے اثرات پیدا کرتے ہیں، نہ کہ برسوں پر محیط بالغ انسانوں میں ALS کا مکمل سفر۔

علاج بہت جلد شروع کیا گیا۔ کیڑے انڈوں سے نکلنے کے وقت سے میتھیلین بلیو والے آگر پر بڑھے۔ مچھلی کے جنینوں کو بارآوری کے 24 گھنٹے بعد سے رات بھر دوا کے محلول میں رکھا گیا، اور تقریباً دو دن بعد ان کے رویّے کی جانچ کی گئی۔ دوا اور عصبی خلیے کے درمیان خون اور دماغ کی رکاوٹ اس طرح حائل نہیں تھی جیسے کسی ممالیہ میں ہوتی ہے، اور نہ پلازما میں اور نہ دماغ میں دوا کی سطح ناپی گئی۔

ان حالات میں اثرات بڑے اور یکساں تھے۔ 6 اور 60 μM دونوں نے TDP-43 اور FUS والے کیڑوں میں عمر کے ساتھ بڑھنے والے فالج کو کم کیا۔ بالغ ہونے کے 12ویں دن، علاج نہ پانے والے TDP-43 کیڑوں میں تقریباً 80 فیصد مفلوج تھے، جبکہ انڈے سے نکلنے کے وقت سے علاج پانے والے کیڑوں میں یہ شرح تقریباً 10 فیصد تھی۔ سیناپس کی ایک جانچ نے بھی اسی سمت اشارہ کیا: TDP-43 والے کیڑے الڈیکارب کے لیے غیر معمولی طور پر حساس تھے، جو عصبی اور عضلاتی ترسیل کی جانچ کرنے والی دوا ہے، اور میتھیلین بلیو نے ان کے ردِعمل کو دوبارہ معمول کے قریب کر دیا۔ انحطاط کا شکار حرکی عصبی خلیوں کے شاخ نما حصوں کی تعداد کم ہوئی، اور سب سے واضح اثر 60 μM پر تھا۔ مچھلیوں میں چھونے سے شروع ہونے والی تیراکی میں خاصی بہتری آئی اور چھوٹے ہو چکے حرکی ایکسون 30 یا 60 μM پر دوبارہ معمول کی لمبائی کے قریب بڑھے، اگرچہ بحالی مکمل نہیں بلکہ جزوی تھی۔

تکسیدی دباؤ کے اعدادوشمار ضدِ تکسیدی تشریح سے مطابقت رکھتے تھے۔ تغیر یافتہ کیڑوں اور مچھلیوں میں فعال آکسیجن کے پیمانے بڑھے ہوئے تھے، جو علاج کے ساتھ کم ہوئے، اور میتھیلین بلیو پانے والے عام کیڑے تکسید بڑھانے والے مادے کے سامنا کرنے پر علاج نہ پانے والے کیڑوں سے کہیں زیادہ دیر زندہ رہے۔ لیکن دو حدود اہم ہیں۔ تغیر یافتہ TDP-43 اور FUS پروٹین کی مجموعی سطحیں کم نہیں ہوئیں، اور مطالعے میں پروٹین کے تجمعات کی مقدار براہِ راست نہیں ناپی گئی، اس لیے یہ تجمعات کے خاتمے کو ثابت کیے بغیر عملی بحالی دکھاتا ہے۔ جو لوگ جانتے ہیں کہ ریڈوکس اور مائٹوکانڈریا سے متعلق مفروضے عموماً کیسے پیش کیے جاتے ہیں، انہیں اس طریقۂ کار کو شواہد سے تائید یافتہ سمجھنا چاہیے، مگر حتمی طور پر طے شدہ نہیں۔

وقت سب سے زیادہ سبق آموز پہلو تھا۔ جب مصنفین نے علاج شروع کرنے کے لیے بالغ ہونے کے 5ویں دن تک انتظار کیا، تو 12ویں دن فالج کی شرح تقریباً 55 فیصد تھی، جبکہ انڈے سے نکلنے کے وقت سے علاج کے ساتھ یہ تقریباً 10 فیصد تھی۔ دوا وہی، کیڑا وہی، تغیر وہی، مگر اثر بہت کم۔ ظاہر ہونے والے فائدے کا بڑا حصہ ابتدائی حفاظتی تعرض سے وابستہ تھا۔

غیر مؤثر نتیجہ: SOD1 والے چوہوں کے مطالعے نے کیا دکھایا

چوہوں کے 2011 کے مطالعے نے ایک زیادہ سخت نظام میں زیادہ مشکل سوال پوچھا۔ کونجینک SOD1 G93A چوہوں میں بیماری پچھلی ٹانگوں کے لرزنے سے چلنے میں خرابی اور خود کو سیدھا کرنے کے انعکاس کے ختم ہونے تک، اور پھر پہلے سے متعین آخری اختتامی نقطے تک بڑھتی ہے۔ علاج علامات ظاہر ہونے سے پہلے 45ویں دن شروع ہوا اور روزانہ جاری رہا، جبکہ مشاہدہ کرنے والے اعصابی حالت کو 0 سے 6 کے پیمانے پر اسکور دیتے رہے۔ یہ بیماری کے پورے سفر کا تجربہ ہے، اس لیے یہ کیڑے میں فالج کی شرح کے کسی بھی منحنی خط کے مقابلے میں ان نتائج سے زیادہ قریب ہے جن کی مریض کو فکر ہوتی ہے۔

اہم نتائج غیر مؤثر تھے۔ مجموعی طور پر علامات کا آغاز کنٹرول گروپ میں 121 دن پر ہوا، جبکہ میتھیلین بلیو کے ساتھ 124 دن پر؛ یہ فرق شماریاتی لحاظ سے نمایاں نہیں تھا۔ آخری مرحلے تک بقا 167 دن کے مقابلے میں 170 دن تھی، اور یہ فرق بھی نمایاں نہیں تھا۔ چند ثانوی تجزیوں میں علاج کے حق میں نتائج ملے: مادہ چوہوں میں آغاز تقریباً 7 دن تاخیر سے ہوا، اور علاج پانے والے جانوروں نے قدرے زیادہ وقت ہلکے مراحل میں اور کم وقت شدید مراحل میں گزارا۔ جنس کے لحاظ سے چھوٹے ذیلی گروہوں اور مراحل کے بہت سے موازنوں کے باعث، یہ نتائج ثبوت کے بجائے مفروضے بنانے کی بنیاد معلوم ہوتے ہیں۔ نہ عصبی خلیوں کی گنتی کی گئی، نہ SOD1 کے تجمع کی جانچ، اور نہ تکسیدی یا التہابی اشاریے ناپے گئے، اس لیے مطالعہ یہ بھی نہیں بتا سکتا کہ دوا اپنے اہداف تک پہنچی اور ناکام ہوئی، یا اس خوراک پر ان پر اثر انداز ہی نہیں ہوئی۔ صرف ایک خوراک آزمائی گئی۔

مصنفین نے خود سب سے بنیادی حد کی نشاندہی کی، جو دونوں سمتوں میں لاگو ہوتی ہے۔ SOD1 G93A کی زیادہ نقول والا ماڈل، SOD1 کی زہریلی تاثیر سے پیدا ہونے والی بیماری کی اچھی نمائندگی کرتا ہے، لیکن SOD1 سے متعلق بیماری خاندانی ALS کا ایک چھوٹا حصہ ہے اور اس کی حیاتیات بیشتر غیر خاندانی بیماری سے مختلف ہے۔ انہوں نے ممکنہ مرکبات کو TDP-43 پر مبنی ممالیہ ماڈلز میں دوبارہ آزمانے کی تجویز دی۔ اس کے بعد یہ تجویز زیادہ پیچیدہ ہو گئی، کیونکہ کیڑوں اور مچھلیوں کے مطالعے کے مصنفین نوٹ کرتے ہیں کہ میتھیلین بلیو کا ایک الگ TDP-43 والے چوہوں کا مطالعہ بھی حرکی نتائج بہتر نہیں کر سکا۔ لہٰذا ایک مرکب ایک TDP-43 نظام میں مضبوط اثر دکھا سکتا ہے اور دوسرے TDP-43 نظام میں بے اثر رہ سکتا ہے۔ نظام کی اہمیت جین جتنی ہی ہے۔

کیڑے یا مچھلی میں بہتری مریضوں میں فائدہ کیوں ثابت نہیں کر سکتی

ہر ماڈل کو ایک مختلف سوال کا جواب دینے والا سمجھیں۔

پہلی بات، حیاتیات مختلف ہے۔ TDP-43 اور FUS نیوکلیک ایسڈ سے جڑنے والے پروٹین ہیں، جن کے ان سادہ نظاموں میں مشترک جینیاتی تعاملات ہیں، جبکہ SOD1 کی زہریلی تاثیر جزوی طور پر مختلف، براہِ راست ابتدائی طریقۂ کار سے پیدا ہوتی ہے۔ جو دوا پروٹین کی زہریلی تاثیر سے پیدا ہونے والے ایک دباؤ کو کم کرتی ہے، ضروری نہیں کہ دوسرے کو بھی کم کرے۔ اسی طرح جنینی مرحلے میں پروٹین کی حد سے زیادہ پیداوار کے خلاف کامیابی، بالغوں میں سست رفتار عصبی انحطاط کے خلاف کامیابی کی پیش گوئی نہیں کرتی، جہاں سوزش، گلیائی خلیوں کی شمولیت اور پورے جسم کی حالت میں زوال بھی موجود ہوتے ہیں۔

دوسری بات، دوا سے تعرض مختلف ہے۔ مائیکرومولر ارتکاز والے محلول میں مسلسل تعرض، منہ سے دوا لینے کے برابر نہیں ہے۔ آنتوں میں جذب، پہلے گزر کی میٹابولزم، پلازما پروٹین سے بندھنا، دماغ تک رسائی اور جسم سے اخراج، سب نگلی ہوئی خوراک اور حرام مغز کے حرکی عصبی خلیے کے درمیان آتے ہیں۔ کسی بھی مطالعے نے اعصابی نظام میں دوا کی سطحیں نہیں ناپیں، اس لیے کوئی بھی اپنے ارتکاز کو دوسرے مطالعے کے ارتکاز سے نہیں جوڑ سکتا۔

تیسری بات، وقت مختلف ہے۔ کیڑوں اور مچھلیوں میں فوائد کا زیادہ انحصار اس بات پر تھا کہ مرضیاتی تبدیلیاں جمع ہونے سے پہلے علاج شروع کیا گیا۔ چوہوں میں بھی علاج علامات ظاہر ہونے سے پہلے شروع ہوا، جو مطالعے کی ایک خوبی ہے، لیکن انسانوں میں علاج تقریباً ہمیشہ علامات کے آغاز کے بعد شروع ہوگا، یعنی اس سے بھی بعد میں۔ دو دن کے جنینی جانچ میں حفاظتی اثر کا اشارہ تحقیق کا نقطۂ آغاز ہے، طبی استعمال کا ماڈل نہیں۔

چوتھی بات، اختتامی پیمانے مختلف ہیں۔ 12 دن پر فالج، الڈیکارب کے لیے حساسیت، مائیکرومیٹر میں ایکسون کی لمبائی اور تیراکی کا فاصلہ، ابتدائی حیاتیاتی اثرات کے قریب ظاہری خصوصیات ہیں۔ کسی ممالیہ میں بیماری کا آغاز اور بقا، جسم کے ہر تلافی کرنے والے اور پیچیدگی بڑھانے والے عمل کے مشترکہ اثرات کو سمیٹتے ہیں۔ دوائیں اکثر بقا میں تبدیلی لائے بغیر ابتدائی حیاتیاتی پیمانوں میں تبدیلی پیدا کرتی ہیں، اسی لیے ممالیہ میں کسی واقعے تک کے وقت کو اختتامی پیمانے کے طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔

جو قارئین اگلی سرخی کے لیے جانچ کی فہرست چاہتے ہیں، وہ قبل از طبی مطالعات کو کیسے پڑھیں سے رہنمائی لے سکتے ہیں: پوچھیں کہ جاندار کی نوع کیا تھی، منتقل کیا گیا جین کون سا تھا، خوراک اور دینے کا راستہ کیا تھا، کیا دوا کی سطحیں ناپی گئیں، مرضیاتی تبدیلیوں کے مقابلے میں علاج کب شروع ہوا، اختتامی پیمانہ مختصر مدتی ظاہری خصوصیت تھا یا بیماری کا پورا سفر، اور کیا اثر دوسری تجربہ گاہ میں بھی دہرایا گیا۔ یہ جانچنے کے لیے کہ ان ابتدائی اشاروں میں سے کوئی طبی اعدادوشمار تک پہنچا یا نہیں، میتھیلین بلیو سے متعلق انسانوں کے وسیع تر شواہد ہی دیکھنے چاہییں۔

مریضوں اور خاندانوں کے لیے اس کا کیا مطلب ہے

ان مقالوں سے ALS کے لیے میتھیلین بلیو کا کوئی تسلیم شدہ طریقۂ علاج اخذ نہیں ہوتا۔ مثبت مطالعہ TDP-43 اور FUS کی حیاتیات میں تکسیدی اور سیناپسی طریقۂ کار پر مزید تحقیق کی تائید کرتا ہے۔ غیر مؤثر نتائج والا مطالعہ، SOD1 قسم کی بیماری میں اس تعرض پر طویل مدتی زبانی خوراک سے بیماری کے سفر میں تبدیلی کی توقع کے خلاف شواہد فراہم کرتا ہے۔ دونوں مل کر مختلف ماڈلز کے درمیان عدم مطابقت بیان کرتے ہیں، علاج کی سفارش نہیں۔

حفاظت کے بارے میں بھی وہی محتاط انداز ضروری ہے جو مؤثریت کے بارے میں ہے۔ چوہوں میں ALS کے مطالعات انسانوں کے لیے محفوظ خوراک کے بارے میں کچھ نہیں بتاتے، اور میتھیلین بلیو کے حقیقی خطرات ہیں: G6PD کی کمی میں سرخ خون کے خلیوں کا ٹوٹنا، اور سیروٹونن پر اثر انداز ہونے والی ادویات کے ساتھ استعمال کرنے پر سیروٹونن کی زہریلی کیفیت۔ G6PD کی کمی کا شبہ، اس وقت ڈپریشن کی ادویات کا استعمال، اور ادویات میں کسی بھی مجوزہ تبدیلی پر معالج سے بات ہونی چاہیے۔ اسی طرح تجربہ گاہ کی سرخیوں کی بنیاد پر کوئی قدم اٹھانے سے پہلے میتھیلین بلیو کی حفاظت کے عمومی اعدادوشمار کا جائزہ بھی اس گفتگو کا حصہ ہونا چاہیے۔

خلاصہ ایک جملے میں آ جاتا ہے۔ میتھیلین بلیو نے ابتدائی تعرض کے ساتھ TDP-43 اور FUS والے کیڑوں اور لاروا مرحلے کی مچھلیوں کی ظاہری خصوصیات میں نمایاں بحالی پیدا کی، لیکن SOD1 والے چوہوں کے طویل مدتی زبانی استعمال کے مطالعے میں بیماری کے آغاز یا بقا پر عملاً کوئی فائدہ نہیں دیا؛ اس لیے دیانت دارانہ تشریح یہی ہے کہ یہ ماڈل پر منحصر شواہد ہیں جو مریضوں میں استعمال کی تائید نہیں کرتے۔