دودھ کے لیے میتھیلین بلیو کا اختزالی ٹیسٹ: اصول اور حدود

ایک طالبہ دودھ کی دو ٹیسٹ ٹیوبیں اٹھاتی ہے۔ ایک کا رنگ ایک گھنٹے میں سفید ہو گیا۔ دوسری پانچ گھنٹے تک نیلی رہی۔ وہ نیلی ٹیوب کی طرف اشارہ کر کے کہتی ہے کہ یہ دودھ پینے کے لیے محفوظ ہے۔

یہ نتیجہ اخذ کرنا ٹیسٹ کے بارے میں غلط تصور کو ظاہر کرتا ہے۔ دودھ کا میتھیلین بلیو ٹیسٹ اس کے محفوظ ہونے کی جانچ نہیں کرتا۔ یہ بتاتا ہے کہ مقررہ حالات میں اس ٹیوب کے خرد نامیوں کی آبادی ریڈوکس پوٹینشل کو کتنی تیزی سے کم کرتی ہے۔ دیر سے آنے والا نتیجہ نمونے میں مجموعی استحالہ جاتی سرگرمی کے کم ہونے کو ظاہر کرتا ہے۔ یہ نہیں بتاتا کہ کون سے جاندار موجود ہیں، ان میں کوئی مرض زا جاندار ہے یا نہیں، یا دودھ کو درست طریقے سے پاسچرائز کیا گیا تھا یا نہیں۔

یہ فرق اس لیے اہم ہے کہ ٹیسٹ بظاہر قائل کرنے والا لگتا ہے۔ نیلا رنگ غائب ہو جاتا ہے۔ گھڑی ایک عدد دیتی ہے۔ اعداد سے ان کے مطلب سے زیادہ نتائج اخذ کرنا آسان ہوتا ہے۔ یہ مضمون نتیجے کی مفید تشریح واضح کرتا ہے اور اس کی غیر محفوظ تشریح سے روکتا ہے۔

اختزال دراصل کیا ناپتا ہے

میتھیلین بلیو تکسید شدہ حالت میں نیلا ہوتا ہے اور لیوکومیتھیلین بلیو میں اختزال ہونے پر تقریباً بے رنگ ہو جاتا ہے۔ تازہ دودھ میں حل شدہ آکسیجن موجود ہوتی ہے، جو رنگ کو نیلا رکھتی ہے۔ تنفس اور تخمیر کرنے والے بیکٹیریا اس آکسیجن کو استعمال کرتے ہیں اور اختزال کرنے والے مرکبات خارج کرتے ہیں۔ جب ریڈوکس پوٹینشل کافی کم ہو جاتا ہے تو رنگ الیکٹران قبول کرتا ہے اور بے رنگ ہو جاتا ہے۔ یونیورسٹی آف گیلف کی ڈیری خرد حیاتیات کی درسی کتاب بھی اسی ترتیب کو بیان کرتی ہے: پہلے آکسیجن ختم ہوتی ہے، پھر بیکٹیریا کے استحالے کے دوران اختزال کرنے والے مادے بنتے ہیں۔

جرنل آف ڈیری سائنس میں شائع شدہ کلاسیکی تحقیق اسے دو مرحلوں پر مشتمل عمل قرار دیتی ہے: پہلے خرد نامیوں کی آبادی آکسیجن ختم کرتی ہے، پھر دودھ کے اجزا رنگ کا تیزی سے اختزال کرتے ہیں۔ اس لیے دودھ کے میتھیلین بلیو اختزالی ٹیسٹ کو خلیوں کی گنتی کے بجائے مجموعی استحالہ جاتی سرگرمی کی فعلی جانچ سمجھنا زیادہ درست ہے۔ میتھیلین بلیو کا ریڈوکس رویہ اس تبدیلی کے پیچھے موجود کیمیا کی وضاحت کرتا ہے۔

آکسیجن آخری نقطے پر ہونے والی تبدیلی کو پلٹ دیتی ہے۔ اختزال شدہ لیوکو رنگ ہوا کے سامنے آنے پر دوبارہ تکسید ہوتا ہے اور پھر نیلا ہو جاتا ہے۔ اس لیے ہلانے، انڈیلنے، چوڑی ٹیوبوں اور دودھ کے اوپر زیادہ خالی جگہ کی وجہ سے نتیجہ آنے میں تاخیر ہوتی ہے۔ ٹیوب کے اندر دودھ کا بیشتر حصہ بے رنگ ہو جانے کے بعد بھی ہوا سے متصل سطح پر اکثر ایک باریک نیلا حلقہ باقی رہتا ہے۔ معیاری طریقۂ کار اس حلقے کو قبول کرتے ہیں اور اس کے غائب ہونے کا انتظار نہیں کرتے۔

جانداروں کی قسم نتیجے میں ایک اور فرق پیدا کرتی ہے۔ کولی فارم اور لیکٹک ایسڈ پیدا کرنے والے بہت سے جاندار رنگ کا تیزی سے اختزال کرتے ہیں۔ کم درجہ حرارت پر بڑھنے والے بہت سے جاندار اور حرارت برداشت کرنے والے جاندار اس کا آہستہ اختزال کرتے ہیں یا تقریباً بالکل نہیں کرتے۔ پلیٹ پر یکساں تعداد والے دودھ کے دو نمونوں کا نیلا رنگ ختم ہونے کے اوقات میں کئی گھنٹوں کا فرق ہو سکتا ہے۔ صرف یہی حقیقت وقت کو کالونیوں کی تعداد میں تبدیل کرنے کو نامناسب ثابت کرتی ہے۔

تجربہ گاہ میں ایک کنٹرول شدہ طریقۂ کار

عملی میدان اور درسی کتابوں میں بیان کردہ طریقوں کی تفصیلات مختلف ہوتی ہیں، اس لیے کوئی نتیجہ صرف اسی طریقے کے دائرے میں معتبر ہوتا ہے جس سے وہ حاصل کیا گیا ہو۔ غذائی تجربہ گاہ میں استعمال ہونے والا ایک روایتی طریقہ یہ ہے:

1. کچے دودھ کا نمونہ اس طرح جمع کریں کہ اس میں کم سے کم ہوا شامل ہو، اور اسے فوراً ٹھنڈا کریں۔ نمونہ لینے سے پہلے برتن کو نرمی سے الٹ کر ملائیں۔
2. ایک جراثیم سے پاک ٹیوب میں 10 mL دودھ اور 1 mL استعمال کے لیے تیار رنگ کا محلول ڈالیں۔ بڑے پیمانے پر استعمال ہونے والی ایک عملی غلظت 0.005 فیصد رنگ ہے، جس میں دودھ اور رنگ کا تناسب 10 سے 1 ہوتا ہے۔
3. ٹیوب پر ڈاٹ لگائیں، اسے دو بار نرمی سے الٹیں، اور چند منٹ کے اندر آبی حمام میں رکھ دیں۔ منتخب کردہ معیار کے مطابق انکیوبیشن کا معمول کا درجہ حرارت 35 سے 38 ڈگری سیلسیس ہوتا ہے۔ آپ جس معیار کی پیروی کر رہے ہیں اسے درج کریں۔
4. انکیوبیشن کے دوران ٹیوبوں کو روشنی سے محفوظ رکھیں، کیونکہ روشنی اختزال کو تیز کرتی ہے۔
5. 30 منٹ پر مشاہدہ کریں، پھر مقررہ وقفوں سے مشاہدات کریں۔ آخری نقطہ وہ وقت ہے جب ٹیوب کا رنگ ابلے ہوئے دودھ کے تقابلی نمونے جیسا ہو جائے یا طریقۂ کار میں مقرر کردہ حد تک رنگ ختم ہو جائے۔
6. جہاں طریقۂ کار اس کا تقاضا کرے، بصری کنٹرول کے طور پر اسی دودھ کی ایک ایسی ٹیوب رکھیں جس میں کوئی محلول شامل نہ کیا گیا ہو۔

FAO کی دودھ کی جانچ کی رہنما کتاب اس ترتیب کا ایک واضح عملی طریقہ دیتی ہے، جس میں 10 mL دودھ کے ساتھ 1 mL رنگ، ڈاٹ لگانا، نرمی سے الٹنا، تقریباً 37 سے 38 ڈگری پر انکیوبیشن، اور ہر 30 منٹ بعد مشاہدہ شامل ہیں۔ اس کی کنٹرول ٹیوبوں میں ابلا ہوا دودھ استعمال ہوتا ہے تاکہ قدرتی اختزالی نظام ختم ہو جائے اور رنگ کے موازنے کے لیے ایک مقررہ حوالہ مل سکے۔

اوپر دیا گیا خاکہ ان شرائط کو واضح کرتا ہے جنہیں یکساں رکھنا ضروری ہے۔ یکساں حجم، یکساں رنگ، یکساں درجہ حرارت، ملانے کا یکساں طریقہ، روشنی سے یکساں تحفظ، اور آخری نقطے کا یکساں اصول۔ ان میں سے کوئی ایک شرط بدلیں تو وقت بھی بدل جاتا ہے۔ اسی لیے گھر پر کیے جانے والے ٹیسٹ، جن میں رنگ کی کوئی من مانی غلظت استعمال ہوتی ہے، تجربہ گاہی درجات سے قابلِ موازنہ نہیں ہوتے۔

اختزال کا وقت کیا ظاہر کرتا ہے

زیادہ وقت مقررہ حالات میں کم مجموعی سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے۔ کم وقت زیادہ مجموعی سرگرمی کو ظاہر کرتا ہے۔ ڈیری کی تدریسی جدولیں ان اوقات کو تخمینی درجات دیتی ہیں۔ مثال کے طور پر، BIS سے اخذ کردہ ایک نظام میں 5 یا زیادہ گھنٹے کو بہت اچھا اور 30 منٹ سے کم کو ناقص قرار دیا جاتا ہے۔

درجہ بندی کا یہی اختلاف اصل سبق ہے۔ 5 گھنٹے کے نتیجے کا کوئی عالمگیر درجہ نہیں ہے۔ اس کا تعلق اسی طریقۂ کار سے ہے جس نے اسے متعین کیا ہے۔ اس لیے رپورٹ کی قابلِ دفاع صورت یہ ہے:

مخصوص طریقے کے تحت MBRT برابر ہے X گھنٹے، جو اسی طریقے کے متعلقہ درجے سے مطابقت رکھتا ہے۔

یہ کبھی بھی یوں نہیں ہوتا کہ MBRT برابر ہے فی mL کالونی بنانے والی X اکائیاں۔ اسٹینڈرڈ میتھڈز سے اخذ کردہ رہنمائی کے مطابق رنگ کے اختزال کے نتائج کو بیکٹیریا کی تعداد کے طور پر رپورٹ نہیں کرنا چاہیے۔ میتھیلین بلیو سے سادہ رنگ آمیزی کا طریقۂ کار بھی ایک مختلف سوال کا جواب دیتا ہے، کیونکہ وہ ٹیوب میں مجموعی سرگرمی کے بجائے خردبین کے ذریعے خلیوں کی شکل دکھاتا ہے۔

تشریح اور حدود کی جدول

یہ جدول اس مضمون کا اصل حوالہ ہے۔ ہر قطار کو مکمل پڑھیں۔ کسی ایک خانے کی معلومات کو الگ سے استعمال نہیں کیا جا سکتا۔

بڑھوتری پر مبنی جانچ، جیسے بیکٹیریا کے کلچر میڈیا، اب بھی تعداد معلوم کرنے اور جانداروں کو الگ کرنے کا طریقہ ہیں۔ اختزالی ٹیوب ابتدائی چھان بین کرتی ہے۔ پلیٹ شناخت اور گنتی کرتی ہے۔

یہ ٹیسٹ محفوظ ہونے کے بارے میں کیا ثابت نہیں کر سکتا

دیر سے آنے والا نتیجہ مرض زا جانداروں کی عدم موجودگی ثابت نہیں کر سکتا۔ طبی لحاظ سے اہم مقدار میں موجود کوئی مرض زا جاندار مجموعی آکسیجن کی کھپت میں بہت کم حصہ ڈال سکتا ہے۔ مرض زا جانداروں کی شناخت کے لیے مخصوص جاندار سے متعلق طریقے درکار ہوتے ہیں، جنہیں موجودہ اسٹینڈرڈ میتھڈز عمومی معیار کی ابتدائی جانچ سے الگ شعبہ قرار دیتا ہے۔

یہ پاسچرائزیشن کی تصدیق نہیں کر سکتا۔ حرارتی عمل کی تصدیق کے لیے کوڈیکس کی ڈیری حفظانِ صحت کی رہنمائی کے تحت الکلائن فاسفیٹیز ٹیسٹ یا کوئی دوسرا توثیق شدہ طریقہ استعمال ہوتا ہے۔ سفید یا نیلی ٹیوب یہ نہیں بتاتی کہ اس بیچ کو کتنی دیر تک کس درجہ حرارت پر رکھا گیا تھا۔

یہ غذائی حفاظت کی تصدیق نہیں کر سکتا۔ حفاظت کا انحصار مرض زا جانداروں، پہلے سے بن چکے زہریلے مادوں، ادویات کی باقیات، کیمیائی آلودگیوں، سرد زنجیر کی سابقہ حالت، اور نمونہ لینے کے بعد ہونے والی آلودگی پر ہوتا ہے۔ کوڈیکس ڈیری کی حفاظت کو کنٹرول کے اقدامات کی ایک زنجیر سمجھتا ہے، نہ کہ ابتدائی جانچ کے کسی ایک نتیجے کو۔

غذائی تجربہ گاہ کا استعمال اور گھر پر جانچ مختلف ہیں

ڈیری تجربہ گاہ میں یہ ٹیسٹ وصول ہونے والے دودھ کی ابتدائی جانچ، وقت کے ساتھ فراہم کنندگان کا موازنہ، یا نگرانی میں ریڈوکس خرد حیاتیات کی تدریس کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ نمونوں کا ماخذ اور ریکارڈ معلوم ہوتا ہے۔ ری ایجنٹس معیاری ہوتے ہیں۔ درجہ حرارت درج کیا جاتا ہے۔ فضلہ تجربہ گاہ کے تلفی کے نظام میں جاتا ہے۔

گھر پر جانچ میں یہ انتظامات موجود نہیں ہوتے۔ باورچی خانے میں حجم اندازے سے لیے جاتے ہیں۔ آن لائن فروخت ہونے والے رنگوں کی غلظت میں بہت فرق ہوتا ہے۔ انکیوبیشن اکثر درجہ حرارت کی پیمائش کے لیے درست کیے گئے آبی حمام کے بجائے کسی گرم کمرے میں ہوتی ہے۔ رنگ پھر بھی بدلتا ہے، جس سے نتیجہ قابلِ اعتماد محسوس ہوتا ہے، حالانکہ اسے معنی دینے والی تمام کنٹرول شرائط موجود نہیں ہوتیں۔

زیادہ سنگین خطرہ اس نتیجے پر کیے جانے والے عمل میں ہے۔ گھر میں نیلی رہنے والی ٹیوب کچا دودھ پینے کی ترغیب دیتی ہے، جبکہ تجربہ گاہ اسی دودھ کو اب بھی پلیٹ پر گنتی، مرض زا جانداروں کی جانچ، اور باقیات کی جانچ کے لیے بھیجے گی۔ دودھ کا میتھیلین بلیو ٹیسٹ وصول کیے جانے والے کچے دودھ کی درجہ بندی کے لیے بنایا گیا تھا، اسے پینے کی اجازت دینے کے لیے نہیں۔ ریزازورین سے تیز تر ابتدائی جانچ کی بھی یہی حد ہے: رنگ کا نتیجہ جلد ملتا ہے، مگر مرض زا جانداروں کے بارے میں پھر بھی کوئی جواب نہیں ملتا۔

تجربہ گاہ کی میز کے لیے ایک مختصر اصول

رنگ، تناسب، درجہ حرارت، ملانے کا طریقہ، روشنی اور آخری نقطے کو معیاری بنائیں۔ وقت کے ساتھ طریقے کا نام اور درجہ رپورٹ کریں۔ وقت کی تشریح کرتے ہوئے ذخیرے کی سابقہ حالت، خرد نامیوں کی قسم، باقیات، اور نمونہ لینے کے معیار کو مدنظر رکھیں۔ کم وقت ایسی سرگرمی کی نشاندہی کرتا ہے جس کی مزید تحقیق ضروری ہے۔ زیادہ وقت کبھی بھی محفوظ ہونے کی تصدیق نہیں کرتا۔