مىكروسكوپىيەدە مېتىلېن كۆكىنىڭ ئورنىنى باسىدىغان تاللاشلار: ۋەزىپىگە قاراپ تاللاڭ

ئاددىي باكتېرىيە سۈرتۈلمىسىدە، مەقسەت ھۈجەيرە شەكلىنى كۆرۈش بولسا، كرىستال ۋايولېت مېتىلېن كۆكىنىڭ ئورنىنى ئالالايدۇ. تىرىك ھۈجەيرىلەرگە نىسبەتەن، تېخىمۇ ياخشى تاللاش ھېچقانداق بوياق ئىشلەتمەيدىغان فازا كونتراستى بولۇشى مۇمكىن. تاللاش سىز ئېلىپ بارماقچى بولغان كۆزىتىشكە باغلىق.

ئوخشاش بىر باكتېرىيە كۇلتۇرىسىنى ئىككى ئادەم تەكشۈرۈۋاتىدۇ دەپ پەرەز قىلىڭ. بىرى تاياقسىمان ھۈجەيرىلەرنى يۇمىلاق ھۈجەيرىلەردىن پەرقلەندۈرمەكچى. يەنە بىرى بىر داۋالاشنىڭ باكتېرىيەنى ئۆلتۈرگەن-ئۆلتۈرمىگەنلىكىنى بىلمەكچى. بىرىنچى ئادەمگە ئېنىق سۈرەت بېرىدىغان بوياق ئىككىنچى ئادەمگە ئىشلىتىشكە بولىدىغان جاۋاب بەرمەسلىكى مۇمكىن.

ئورنىنى باسىدىغان ئۇسۇلنى تاللاشتىن بۇرۇن، بۇ جۈملىنى تاماملاڭ: «مەن ___ ئىچىدە ___ نى كۆزىتىشىم كېرەك، ھۈجەيرىلەر بولسا تىرىك قېلىشى كېرەك / تىرىك قېلىشى شەرت ئەمەس.» بۇ جۈملە بوياق ئورۇنداشقا تېگىشلىك ۋەزىپىنى بەلگىلەيدۇ.

ئالدى بىلەن ئەۋرىشكە ۋە سوئالدىن باشلاڭ

ئالدى بىلەن ھۈجەيرىلەرنىڭ تىرىك قېلىشى كېرەك-كېرەك ئەمەسلىكىنى بەلگىلەڭ، ئاندىن كۆزىتىشىڭىز كېرەك بولغان ئالاھىدىلىكنى ئېنىقلاڭ:

• ھۈجەيرىلەر تىرىك قېلىشى كېرەك: ھەرىكەت ياكى شەكىلنى كۆزىتىش ئۈچۈن بوياقسىز فازا كونتراستى ياكى DIC نى ئويلىشىڭ؛ يادرو DNA سى ئۈچۈن فلۇئورېسسېنسىيە بىلەن Hoechst 33342 نى ئويلىشىڭ؛ پەردە پۈتۈنلۈكى ئۈچۈن SYTO 9 بىلەن propidium iodide غا ئوخشاش دەلىللەنگەن تەكشۈرۈش ئۇسۇلىنى تاللاڭ.
• ھۈجەيرىلەرنىڭ تىرىك قېلىشى شەرت ئەمەس: باكتېرىيە مورفولوگىيەسى ئۈچۈن كرىستال ۋايولېت ئاددىي بوياش ياكى نىگروزىن مەنپىي بوياشنى ئويلىشىڭ؛ گرام رېئاكسىيەسى ئۈچۈن تولۇق گرام بوياش ئۇسۇلىنى ئىشلىتىڭ؛ مۇقىملاشتۇرۇلغان ھۈجەيرىلەردىكى يادرو DNA سى ئۈچۈن DAPI فلۇئورېسسېنسىيەسىنى ئويلىشىڭ.

ھەر بىر تارماقنىڭ چەكلىمىسىنى سېلىشتۇرۇش ئۈچۈن بۇ جەدۋەلنى ئىشلىتىڭ. بۇلار ئۇسۇل تاللاشلىرى؛ مەۋجۇت بىر پروتوكولنىڭ ئىچىدە بوتۇلكىلارنى ئۆزئارا ئالماشتۇرۇش كۆرسەتمىسى ئەمەس.

ئاددىي سۈرتۈلمىدە ئۇسۇلنى ئېھتىيات بىلەن ئالماشتۇرۇڭ

ۋەزىپە باكتېرىيە مورفولوگىيەسىنى بىر خىل رەڭدە كۆرۈش بولسا، كرىستال ۋايولېت ئەمەلىي تاللاش بولالايدۇ. FDA نىڭ Bacteriological Analytical Manual قوللانمىسىدا ئاددىي بوياشقا ماس كېلىدىغان ئىككى كرىستال-ۋايولېت فورمۇلاسى كۆرسىتىلگەن. ھۆججەتلەشتۈرۈلگەن فورمۇلا ۋە شۇ فورمۇلانىڭ تەييارلاش ئۇسۇلىنى ئىشلىتىڭ؛ پەقەت بوياقنىڭ نامىلا ئىشلىتىشكە تەييار رېئاگېنتنى بەلگىلەپ بەرمەيدۇ.

كرىستال ۋايولېت گرام بوياشتا ھەم ئىشلىتىلىدۇ، ئەمما بۇ كرىستال ۋايولېت بىلەن ئاددىي بوياشنى گرام بوياشقا ئايلاندۇرمايدۇ. ASM گرام بوياش پروتوكولى دا، پەرقلەندۈرگۈچى نەتىجە كرىستال ۋايولېت، يود، رەڭسىزلەندۈرۈش ۋە قارشى بوياشنىڭ تەرتىپ بويىچە تەسىر قىلىشىغا باغلىق. بۇ باسقۇچلارنى قالدۇرۇپ كېتىش سۈرەت ئارقىلىق نېمىنى بېكىتكىلى بولىدىغانلىقىنى ئۆزگەرتىدۇ. بۇ پەرق ئۈچۈن ئاددىي بوياش بىلەن گرام بوياشنىڭ پەرقى نى كۆرۈڭ.

نىگروزىن سىرتقى سىزىقلارنى كۆرسىتىشنىڭ باشقا بىر يولىنى تەمىنلەيدۇ: ئۇ تەگلىكنى قاراڭغۇلاشتۇرىدۇ، باكتېرىيە ھۈجەيرىلىرى بولسا نىسبەتەن سۇس كۆرۈنىدۇ. Merck نىڭ نىگروزىن كۆرسەتمىلىرى دە ئادەتتىكى ئورنىنى باسقۇچىلار تىزىملىكىدىن چۈشۈپ قېلىشى مۇمكىن بولغان مۇھىم بىر تەپسىلات بار. ئۇنىڭ بەلگىلەنگەن ئىشلىتىش فورمۇلاسى تەركىبىدە فورمالدېھىد بار. شۇڭا، ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆزى بوياق ئالمىغاندەك كۆرۈنسىمۇ، «مەنپىي بوياش» دېگەن سۆزدىن تىرىك ھۈجەيرىلەرگە ماس كېلىدۇ دەپ يەكۈن چىقارغىلى بولمايدۇ. تولۇق فورمۇلا ۋە ئەۋرىشكە تەييارلاش ئۇسۇلىنى تەكشۈرۈڭ.

تىرىك ئەۋرىشكىلەر ئۈچۈن ئوپتىكىنى ئۆزگەرتىشنى ئويلىشىڭ

ئەگەر ھۈجەيرىلەرنىڭ ھەرىكەت قىلىشى ياكى بۆلۈنۈشىنى كۆرمەكچى بولسىڭىز، يەنە بىر بوياق قوشۇش كۆزىتىشنى مۇرەككەپلەشتۈرۈشى مۇمكىن. Nikon نىڭ سۈزۈك ئەۋرىشكىلەردىكى كونتراست قوللانمىسىدا چۈشەندۈرۈلگەندەك، فازا كونتراستى ۋە دىففېرېنسىيال ئارىلىشىش كونتراستى، يەنى DIC، ئەۋرىشكىلەرنى ئۇلارنىڭ ئوپتىكىلىق خۇسۇسىيەتلىرىدىكى پەرقلەر ئارقىلىق كۆرۈنەرلىك قىلىدۇ. مىكروسكوپتا زۆرۈر زاپچاسلار بولسا، بۇ ئۇسۇللار تىرىك، بوياقسىز ھۈجەيرىلەرنى كۆرسىتەلەيدۇ.

بۇ تاللاش تەييارلىمىنى بوياقسىز ساقلايدۇ، ئەمما ئېرىشكىلى بولىدىغان ئۇچۇرنى ئۆزگەرتىدۇ. قايسى مولېكۇلانىڭ كونتراستنى پەيدا قىلغانلىقىنى بىلمەي تۇرۇپ، چېگرا ياكى ھەرىكەتنى ئىز قوغلىيالايسىز. ئەگەر سوئال مولېكۇلانىڭ ئورۇنلىشىشىغا مۇناسىۋەتلىك بولسا، ئۇنىڭ ئورنىغا ماس كېلىدىغان بەلگە قويۇش ئۇسۇلىنى تاللاڭ.

يادرو DNA سى ئۈچۈن، Invitrogen نىڭ DAPI بىلەن Hoechst بوياقلىرىنى سېلىشتۇرۇشى DAPI نىڭ مۇقىملاشتۇرۇلغان ھۈجەيرىلەردە كۆپ ئىشلىتىلىشى بىلەن ھۈجەيرىگە تېخىمۇ ئاسان كىرىدىغان، تىرىك ھۈجەيرىلەرنى بەلگىلەشتە ئەۋزەل كۆرۈلىدىغان Hoechst 33342 نى پەرقلەندۈرىدۇ. ھەر ئىككىسى فلۇئورېسسېنسىيە ئۈسكۈنىسىنى تەلەپ قىلىدۇ. ھېچقايسىسى رەڭلىك يورۇق مەيدان بوياقىنىڭ بىۋاسىتە ئورنىنى باسمايدۇ.

بوياققا ئۇچراش ۋە يورۇتۇشنى تەجرىبە شارائىتى دەپ قاراڭ. ئەگەر ھۈجەيرىلەرنىڭ ھەرىكىتى سىز ئۆلچەيدىغان نەرسە بولسا، بوياقلىق ۋە بوياقسىز تەييارلىمىلارنى سېلىشتۇرۇڭ.

قىزىل ھۈجەيرە ئاپتوماتىك ھالدا ئۆلۈك ھۈجەيرە دېگەنلىك ئەمەس

SYTO 9 بىلەن propidium iodide دائىم جۈپلەپ ئىشلىتىلىپ باكتېرىيە پەردىسىنىڭ پۈتۈنلۈكى باھالىنىدۇ. BacLight قوللانمىسى پۈتۈن پەردىلەرنى يېشىل بوياش، بۇزۇلغان پەردىلەرنى قىزىل بوياش بىلەن باغلايدۇ. بۇ چۈشەندۈرۈشنى شۇ ئەۋرىشكە ئۈچۈن دەلىللەش كېرەك.

Rosenberg ۋە خىزمەتداشلىرىنىڭ 2019 تەتقىقاتى بۇ مەسىلىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. فوسفات بىلەن بۇفېرلانغان تۇز ئېرىتمىسى ئىچىدە ئەينەك ئۈستىدە ئۆستۈرۈلگەن 24-hour E. coli بىيوفىلملاردا، ھۈجەيرىلەرنىڭ تەخمىنەن 96% ى جايىدا propidium-iodide مۇسبەت كۆرۈنگەن. ئەمما ئاپتورلار يىغىۋېلىنغاندىن كېيىن 82% نى ئۆستۈرگىلى بولىدۇ دەپ مۆلچەرلىگەن. كونفوكال سۈرەتلەردە قىزىلغا بويالغان ماددىنىڭ ئاستىدا يېشىل ئىچكى قىسمى بار ھۈجەيرىلەر كۆرۈلۈپ، خاتا سىگنالغا ھۈجەيرە سىرتىدىكى يادرو كىسلاتالىرىنىڭ سەۋەب بولغانلىقىنى كۆرسەتكەن.

بۇ پىرسەنتلەر ئومۇميۈزلۈك تۈزىتىش كوئېففىتسېنتى ئەمەس، بەلكى تەتقىقاتتىكى تەييارلىمىلاردا ئېلىپ بېرىلغان ئوخشىمىغان ئۆلچەشلەرنى تەسۋىرلەيدۇ. مۇھىم نۇقتا سىگنالنى نېمىنىڭ پەيدا قىلغانلىقىنى تەكشۈرۈشتۇر. بىيوفىلمدا، يادرو كىسلاتاسى بوياقى بۇزۇلغان ھۈجەيرىلەرنىڭ ئىچىدىكى ماددىدىن باشقا، ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماددىنىمۇ بايقىيالايدۇ. ھاياتچانلىق ھەققىدە يەكۈن چىقىرىش ئۈچۈن، تەتقىقاتچىلار ھەر بىر ئۇسۇلنىڭ ئۆزىگە خاس چەكلىمىسى بارلىقىنى ئېتىراپ قىلغان ھالدا، ئۆستۈرۈش ياكى مېتابولىك پائالىيەت قاتارلىق تولۇقلىما ئۆلچەشلەرنى تەۋسىيە قىلىدۇ.

تاللاش ئۇسۇلىنىڭ ئەمەلىيەتتە نېمىلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالىدىغانلىقىنى تەكشۈرۈڭ

ئورنىنى باسىدىغان بوياش ئۇسۇلىنىڭ تەركىبىدە يەنىلا مېتىلېن كۆكى بولۇشى مۇمكىن. Giemsa بۇنىڭ بىر مىسالى: Merck ئۆزىنىڭ مەھسۇلاتىنى قان ۋە سۆڭەك يىلىكى سۈرتۈلمىلىرىنىمۇ ئۆز ئىچىگە ئالغان ئىشلىتىش ساھەلىرى ئۈچۈن azure-eosin-methylene-blue ئېرىتمىسى دەپ تەسۋىرلەيدۇ. ئۇ باشقا بىر ئەۋرىشكە ئۈچۈن باشقا ئۇسۇل بولالايدۇ، ئەمما مېتىلېن كۆكىنى چىقىرىۋېتىش تەلىپىنى قاندۇرمايدۇ.

ئەگەر مەلۇم بىر بىرىكمىنى چىقىرىۋېتىش تەجرىبىنىڭ بىر قىسمى بولسا، سۈرەتلەرنى سېلىشتۇرۇشتىن بۇرۇن رېئاگېنتنىڭ كىملىكى ۋە فورمۇلاسىنى تەكشۈرۈڭ. methyl blue، methylene blue ۋە نامى ئوخشىشىپ كېتىدىغان بوياقلار ھەققىدىكى قوللانما نام پەرقلىرىنى چۈشەندۈرىدۇ.

نەتىجىنى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئالماشتۇرۇشنى دەلىللەڭ

يېڭى بىر ئۇسۇل ئۈچۈن، ۋەكىللىك خاراكتېرگە ئىگە ئەۋرىشكىلەر ۋە ماس كېلىدىغان كونترول ئارقىلىق كىچىك بىر سېلىشتۇرۇش ئېلىپ بېرىڭ. ئىمكانقەدەر مىكروسكوپ تەڭشەكلىرىنى سېلىشتۇرغىلى بولىدىغان ھالەتتە ساقلاڭ. رېئاگېنت فورمۇلاسى، ئەۋرىشكە تەييارلاش، ئۇچراش ۋاقتى ۋە تەسۋىرلەش شارائىتىنى خاتىرىلەڭ؛ شۇنداق قىلغاندا، كۆرۈنۈشى تېخىمۇ ياخشى بولغان سۈرەتنى پەقەت ياقتۇرۇپ تاللاشنىڭ ئورنىغا نېمە ئۈچۈن ياخشى ئىكەنلىكىنى تەكشۈرگىلى بولىدۇ.

مۇۋەپپەقىيەتنى دەسلەپكى سوئالغا سېلىشتۇرۇپ باھالاڭ. مورفولوگىيە ئۈچۈن، ھۈجەيرە چېگرىلىرى ۋە ئورۇنلىشىشىنىڭ يەنىلا چۈشىنىشلىك ياكى ئەمەسلىكىنى باھالاڭ. يادرو بەلگىلەش ئۈچۈن، سىگنالنىڭ ئورنى ۋە تەگلىك سىگنالىنى باھالاڭ. ھاياتچانلىق ئۈچۈن، كۆزگە يېقىشلىق رەڭ ئايرىلىشىدىن باشقا دەلىل تەلەپ قىلىڭ. مېتىلېن كۆكى بىلەن بوياش ۋە تەجرىبىخانا قوللىنىشلىرى ھەققىدىكى تېخىمۇ كەڭ قوللانما كۆزىتىش بىلەن تەييارلاشنىڭ قانداق ماسلىشىدىغانلىقىنى چۈشەندۈرىدۇ.

سىزگە كېرەكلىك ئۆلچەشنى ساقلاپ قالىدىغان تاللاشنى تاللاڭ. رەڭ ھاسىل بولغان سۈرەتنىڭ پەقەت بىر خۇسۇسىيىتىدۇر.