Sino ang bumuo ng lilang pangkulay sa dugo? Methylene blue, Malachowski, Romanowsky, at Giemsa

Pula ang eosin. Asul ang methylene blue. Paghaluin ang dalawa, ipahid ang timpla sa isang pinatuyong manipis na pahid ng dugo, at magiging lila ang ilang bahagi nito.

Hindi lahat ng bahagi. Sa isang mahusay na preparasyon, nagiging mapula-lila ang mga nukleo ng puting selula ng dugo, at sa loob ng parasito ng malaria, ganoon din ang kulay ng kromatina, habang nananatiling rosas ang nakapaligid na pulang selula at abuhing-asul ang sitoplasma. Ang lilang kulay ang nagbibigay-daan upang mapag-iba ang mga uri ng selula.

Walang lila sa alinmang bote. Lumilitaw lamang ang kulay kapag nakatagpo ng eosin sa slide ang isang partikular na produktong nabubuo sa pagkasira ng methylene blue, at noong mga dekada ng 1880 at 1890, walang nakaaalam na umiiral ang produktong iyon, lalo na kung ano ito. Ang mga naghahanap sa kulay ay gumagamit ng mga pangkulay na may mga karumihan, nagtatrabaho nang mag-isa, at walang maaasahang paraan upang malaman kung ano ang laman ng isang bote matapos itong manatili sa estante nang dalawang buwan.

Kaya higit sa isa ang makatuwirang sagot sa tanong sa pamagat, at kaya nagbago ang sagot noong 2011.

Mga nakikitang resulta na nagbago kasabay ng timpla

Hindi basta naimbento ang pangkulay. Unti-unti itong nabuo. Bawat pagbabago sa timpla ay nagbigay ng eksaktong isang bagong impormasyong nakikita, at ang pagkakasunod-sunod ng mga impormasyong iyon ang pinakamalinaw na paraan upang unawain ang kasaysayan.

Ang padron sa huling kolum ang mahalaga. Bawat pagsulong ay nagpalawak sa hanay ng mga kulay, at bawat paglawak ay nagpatingkad sa isa pang estruktura. Hindi palamuti lamang sa pamamaraan ang lila; ito ang pagkakaiba sa pagitan ng pagkakitang may parasito at pagkakita sa mga bumubuo rito. Ang paglalakbay ng pangkulay mismo mula sa isang pabrika ng pangkulay ng BASF patungo sa medisina ay isang mas mahabang kasaysayan na may sarili nitong mga dokumento. Ang buong pagkakasunod-sunod sa itaas, kasama ang sanggunian sa likod ng bawat tala, ay nakatala sa isang kronolohiya ng mga nag-ambag na may mga kawing sa sanggunian.

Larawan: ang parehong anim na timpla, na iginuhit upang ipakita kung ano ang nasa lalagyan at ano ang naging resulta nito. Nasa mga bilog ang mga pangkulay; nasa mga bloke sa ilalim ang mga kulay na maaaring malikha ng mga iyon sa isang pahid ng dugo. Walang mapula-lilang bloke bago ang 1890, at mayroon nito sa lahat ng kasunod.

Ang lalaking sadyang gumamit ng borax

Si Ernst Malachowski ay isang manggagamot sa Breslau, na Wrocław na ngayon. Ginugol niya ang kanyang karera sa pribadong panggagamot at sa isang maliit na klinikang pinatakbo niya kasama ang isang kasamahan, habang gumagawa ng pananaliksik sa laboratoryo sa sarili niyang oras. Ipinanganak siya sa Strzelno noong 12 Marso 1857, nag-aral ng medisina sa Unibersidad ng Breslau, at nagtrabaho mula 1882 hanggang 1887 bilang katulong sa panloob na medisina sa All Saints Hospital, na noon ay ikalawang pinakamalaking ospital sa Germany.

Nagsimula siya noong 1888 sa dobleng pangkulay nina Chęciński at Plehn. Sa isang preparasyong ginawa noong 1889, nakita niyang iba ang pagkakulay ng kromatina sa nukleo ng plasmodium kaysa sa sitoplasma, ngunit hindi niya ito maulit. Sinubukan niyang gawing mas asido ang methylene blue, na lalo lamang nagpalala sa resulta. Sinubukan niyang gawing alkalino ito gamit ang borax, na gumana sa bawat pagkakataon. Ipinakita niya ang pamamaraan sa publiko noong 15 Hunyo 1890 at naglathala ng mas buong paglalarawan noong Agosto 1891, kasama ang tagubilin sa paggamit ng borax. Binanggit niyang tumagal nang dalawampu't apat na oras ang pagkukulay at madaling maulit ang mga resulta.

Mahabang panahon ang dalawampu't apat na oras sa isang laboratoryong pang-diyagnostiko, at hindi niya gaanong tinalakay sa kanyang papel ang lila-pulang kulay ng nukleo ng parasito. Anuman ang dahilan, walang gumamit ng sadyang pagpapaging alkalino sa methylene blue hanggang sa gawin itong muli ni Nocht noong 1898. Hindi na muling sumulat si Malachowski tungkol sa pagkukulay ng dugo.

Ang dahilan kung bakit napakakaunti ang nalalaman tungkol sa kanya hanggang kamakailan ay nasa mga arkibo, hindi sa isang misteryo. Halos walang bakas ng kanyang buhay ang nanatili sa literatura ng medisina, at ang natira ay dumaan sa iisang pinagmulan. Umalis ang kanyang anak na si Marie sa Germany patungong London noong 1939, naglingkod sa Hukbong Britaniko, at nanirahan sa Canada, at napunta ang kanyang koleksiyon ng mga papeles ng pamilya sa Leo Baeck Institute sa New York. Napatay ang kanyang kapatid na si Leo sa Unang Digmaang Pandaigdig. Ang kanyang kapatid na si Eva ay ipinatapon mula Breslau patungo sa kampong pansamantalang hintuan sa Izbica noong Abril 1942 at hindi na bumalik. Nagpakamatay ang kanyang ina na si Hedwig noong 22 Abril 1942 sa halip na hintayin ang kaparehong pagpapatapon. Namatay si Malachowski noong 1934, bago mangyari ang lahat ng iyon.

Ang kasaysayan ng pamilyang nagtatapos sa ganoong paraan ay isang kasaysayang hindi na nababanggit. Ang dalawang papel na muling naglagay kay Malachowski sa kasaysayan ng pagbuo ng pangkulay, na parehong inilathala noong 2011, ay binuo mula sa mga dokumento sa mga arkibo sa Poznań at Wrocław at mula sa mga papeles ni Marie sa New York.

Isang boteng may amag at isang Rusong sinuwerte

Nag-aral ng medisina si Dmitri Romanowsky sa Military Medical Academy sa St Petersburg at nagtrabaho sa pag-aaral ng malaria sa halos buong karera niya. Noong 1890, naglathala siya ng isang pamamaraan na, sa pagkakasulat, ay halos kapareho ng kay Chęciński: hindi binagong methylene blue at eosin, na may bahagyang mas maraming eosin.

Noong Setyembre 1891, inilathala niya ang pamamaraang nagpasikat sa kanya, at nakabaon sa mga tagubilin ang mahalagang detalye. Nakuha niya ang pinakamahuhusay na resulta mula sa nakaimbak na solusyon ng methylene blue, isang nakahandang solusyon na mahigit dalawang buwan nang nakatengga at tinutubuan ng amag. Bahagyang naalis ng amag at ng tagal ng pagkakatengga ang mga methyl group ng pangkulay. Hindi ito alam ni Romanowsky at hindi niya ito makontrol, at hindi makuha ng ibang sumubok sa kanyang pamamaraan ang lilang kulay. Naisumite na ang kanyang tesis sa St Petersburg noong Hunyo 1891, kaya itinuturing ng karaniwang salaysay ang 1891 bilang taon ng pagkakatuklas.

Naganap ang demonstrasyon ni Malachowski noong Hunyo 1890, mahigit isang taon bago iyon, at gumana ang kanyang pamamaraan dahil sa sinadyang pagbabago.

Bakit ipinangalan ito sa maling tao

Binuo nina Kristine Krafts, Ernst Hempelmann at Barbara Oleksyn ang argumento para kay Malachowski, at nakabatay ito sa apat na bagay. Ang petsa ng pampublikong demonstrasyon, Hunyo 1890 kumpara sa Setyembre 1891. Ang salitang sinadya kumpara sa salitang nagkataon. Ang katotohanang inilathala ni Malachowski ang kanyang pamamaraan, kasama ang borax at lahat ng detalye, samantalang nakasalalay ang kay Romanowsky sa isang salik na hindi nakokontrol. At ang obserbasyong halos naglaho sa literatura sa loob ng pitong taon ang paglalarawan sa nukleo ng plasmodium, pati ang lilang kulay na nagpatingkad dito, dahil walang makaulit sa aksidenteng bersiyon.

Tahas sila sa kanilang konklusyon. Sa papel na biyograpikal, tinawag nilang "isang paglapastangan sa katotohanan" ang pagkilala sa maling tao, at sinipi nila si Ralph Lillie, na sumulat noong 1978 na "marahil ay dapat nating tawaging mga pangkulay ni Malachowski ang pamilyang ito ng mga pangkulay".

Pinagtatalunan ang pag-aangkin, gaya ng karaniwan sa mga pag-aangkin kung sino ang nauna, at mahalagang ipaliwanag ang anyo ng pagtatalo sa halip na magpasya kung sino ang tama. Kailangang tukuyin ng argumento tungkol sa pagkauna kung ano ang natuklasan. Kung ang natuklasan ay ang lilang kulay, kay Malachowski ang mas maagang dokumentadong demonstrasyon. Kung ang natuklasan ay ang inilathalang pamamaraan, parehong naglathala ang dalawang lalaki noong 1891 at kay Romanowsky ipinangalan ito. Kung ang natuklasan ay ang paliwanag, walang batayan ang alinman sa kanila, dahil walang nakaaalam sa kanilang dalawa na ang pagpapahinog ay pag-aalis ng mga methyl group, at walang makapagsabi kung bakit lumitaw ang kulay. Ang huling puntong iyon ang nilalaktawan ng mga salaysay para sa pangkalahatang mambabasa. Ang aktibong sangkap ay isang karumihang wala pang nakatukoy, at ang unang taong sadyang lumikha ng kulay ay nagawa iyon gamit ang isang timplang batay sa pagsubok na nauulit ang resulta, hindi dahil nauunawaan niya kung ano ang ginagawa ng timpla.

Ang dalawang papel noong 2011 ang pinakakompletong inilathalang paglalahad ng argumento para kay Malachowski, at parehong malayang mababasa sa PubMed: ang mahabang pagsusuri sa PMID 21235291 at ang papel na biyograpikal sa PMID 21660627. Nakalista rin sa tala ng PubMed para sa pagsusuri ang isang komentaryo tungkol dito, na inilathala sa parehong journal sa bandang huli ng taong iyon sa 86(5):366. Makatuwirang paalala ito na pinagtalunan na sa mga publikasyon ang argumento sa sandaling lumabas ito.

Hindi tungkol sa kimika ang pagtatalo. Sumasang-ayon ang lahat ng kasangkot kung ano ang lila at kung aling mga sangkap ang lumilikha nito. Ang hindi nila pinagkakasunduan ay kung sino ang unang nakarating doon, at kung maituturing bang nakarating doon ang isang aksidenteng walang makaulit.

Ano ang naidagdag ng mga sumunod na pangalan

Kung si Malachowski ang unang lumikha ng lila, bakit taglay ng pangkulay ang mga pangalan nina Romanowsky, Wright at Giemsa?

Dahil ang pangkulay na minsan lamang gumana sa kamay ng imbentor nito ay hindi pa isang reahente. Ginawang maaasahang materyal ng sumunod na gawain ang isang timplang pabago-bago ang paggana, upang magamit ito ng isang teknisyan sa ibang bansa sa isang Martes.

Nakarating doon si Nocht sa pamamagitan ng pangangatwiran. Matapos mabigong makakuha ng maaasahang resulta mula sa isang simpleng neutral na pangkulay, napagpasyahan niyang ang lila ay tiyak na nagmumula sa isang bagay sa methylene blue na hindi mismong methylene blue, at hinanap niya ito. Napansin na ni Unna na kinukulayan ng mga lumang solusyon ng methylene blue ang mga granula ng mast cell nang pula, at iminungkahi niyang may bagong substansiyang nabubuo habang nahihinog ang pangkulay. Ipinakita ni Bernthsen noong 1885 na inaalis ng mga alkalinong kondisyon ang mga methyl group sa methylene blue, at ang mga produktong ito ang tinatawag natin ngayong mga azure. Inekstrak ni Nocht ang aktibong bahagi gamit ang chloroform at ang naitawag lamang niya rito ay pula mula sa methylene blue; pinangalanan ito ni Michaelis na azure I noong 1901. Nilutas ni Jenner ang mga usapin sa paghahanda at paggamit. Sa muling pagtunaw ng namuong latak ng methylene blue at eosin sa purong methanol, nakagawa siya ng iisang matatag na solusyon na nagpepreserba sa pahid habang kinukulayan ito at nag-alis ng pangangailangang ipreserba ito gamit ang init. Pinagsama nina Leishman at Reuter ang polychromed na pangkulay at isang solvent na alkohol, at nakamit nang sabay ang katatagan at lilang kulay. Pinalitan ni Wright ang labindalawang oras na inkubasyon sa 65 °C at sampung araw na pagpapahinga ng isang oras sa dumadaloy na singaw. Tuluyan nang itinigil ni Giemsa ang pag-asa sa solusyong basta na lamang nahinog, at gumamit ng mga sinukat na dami ng kilalang pangkulay na may glycerol sa methanol upang makayanan ng produkto ang init ng tropiko. Hindi niya kailanman inilathala kung paano niya ginawa ang purong methylene azure. Ibinenta niya ito sa laboratoryo ni Dr Grübler sa Leipzig, na nagbenta rito bilang azure I at nag-angking ang bersiyon lamang nito ang tunay na pangkulay ni Giemsa.

Pinagtatalunan pa rin ang pagkakakilanlan ng azure na iyon. May nagsasabing polychromed methylene blue lamang ito, at may nagsasabing marami itong azure B. Nagmula sa isang digmaan ang sagot. Nang hindi na makuha ang mga pangkulay mula sa Germany, natuklasan ng isang pangkat ng United States Public Health Service, sina Ralph Lillie kasama sina Maurice Roe at Aimee Wilcox, na ang pinakamahusay na pagkukulay ay nagmumula sa tatlong pinaghiwalay na sangkap: hindi binagong methylene blue, ang produktong nabubuo mula rito matapos maalis ang mga methyl group na azure B, at eosin. Pinalitan ng Azure B ang hindi makuhang azure I, at ang tatlong sangkap na iyon pa rin ang batayan ng pangkulay na ginagamit sa diyagnosis ng malaria ngayon.

Hiwalay na tanong at ibang pahina ang kimika ng interaksiyon ng tatlong sangkap na iyon sa isang slide. Tinatalakay ng mga papel ng pangkulay at kimika ng mga pangkulay na uri ng Romanowsky kung ano ang ginagawa ng azure B at eosin at kung bakit lumilikha ang pares ng isang kulay na hindi kayang likhain ng alinman nang mag-isa. Ang pahina tungkol sa mikroskopiya at mga paggamit sa laboratoryo naman ay tumatalakay sa praktikal na bahagi: kung ano ang ipinapakita ng isang preparasyon, at kung paano hahatulan kung ang isang partikular na produkto ay angkop sa pamamaraang balak mong gamitin.

Ang bahagi ng kasaysayan na may kabuluhan pa rin ngayon

May isang detalye sa kuwentong ito na hindi nawala ang katotohanan pagsapit ng 1902. Sa loob ng humigit-kumulang limampung taon, ang pinakamahalagang sangkap ng pamantayang pangkulay para sa malaria sa buong mundo ay isang karumihang walang pangalan. Naroon ito nang hindi sinasadya, iba-iba ang dami nito sa bawat bote, naging lihim sa kalakalan ang pagkakakilanlan nito sa bahagi ng panahong iyon, at pinagtalunan ang proporsiyon nito hanggang sa dekada ng 1940. Hindi pabaya ang mga taong gumagamit ng pangkulay. Wala silang paraan upang malaman kung ano ang nasa bote.

Ang makabagong bersiyon ng parehong problema ay isang espesipikasyong bahagi lamang ng materyal ang inilalarawan. Ang pagsunod sa USP ang daan patungo sa pinakamataas na kadalisayang iniaalok ng merkado, dahil isa itong kumpletong inilathalang pamantayan sa halip na isang pagsukat lamang: pagkakakilanlan, kadalisayan, mga organikong karumihan kabilang ang mga pangkulay na azure, mga natitirang solvent, mga karumihang elemento, nalalabi matapos sunugin, mga limitasyon sa mikrobyo at mga endotoxin ng bakterya. Kinukuha ng Blupreme ang methylene blue nito mula sa isang tagagawa ng mga produktong parmasyutiko at inilalathala ang buong sertipiko ng pagsusuri, upang masuri ang bawat linya sa listahang iyon sa halip na basta igiit lamang. Ang sertipikong nag-uulat ng resulta para sa mabibigat na metal at tinatawag itong pagsunod sa USP ay katumbas sa kasalukuyan ng isang boteng may etiketa na "pinahinog na methylene blue": maaaring mahusay na reahente, ngunit hindi sinasabi ng etiketa kung ano ang nasa loob nito.