Pagsusuri ng Reduksiyon ng Methylene Blue sa Likido ng Rumen

Tumawag mula sa isang bukid ang isang bagong nagtapos habang hawak ang isang tubong may asul na laman. Nagdagdag siya ng methylene blue sa likido ng rumen sampung minuto na ang nakalilipas, at naroon pa rin ang asul na kulay. Itinanong niya kung dapat ba niyang bigyan ang baka ng mas maraming pangkulay.

Ipinapakita ng tanong na iyon ang maling pagkaunawa sa pagsusuri. Sa pagsusuri ng reduksiyon ng methylene blue sa likido ng rumen, sa tubo inilalagay ang pangkulay, hindi kailanman sa hayop. Sa tubo lamang isinasagawa ang buong pagsusuri. Ang pagsukat kung gaano kabilis mawala ang asul na kulay ay nagbibigay ng impormasyon tungkol sa mga mikrobyo sa sampol na iyon, hindi tungkol sa paggamot na kailangan ng hayop.

Mauunawaan ang pagkalito dahil ginagamit ang methylene blue sa tatlong magkahiwalay na konteksto sa beterinarya. Pinaghihiwalay ng artikulong ito ang mga iyon at ipinapakita kung paano unawain ang tagal ng reduksiyon kasabay ng pH, protozoa, kalidad ng pagkuha ng sampol, at mga klinikal na palatandaan.

Ano talaga ang sinusukat ng pagsusuri

Asul ang methylene blue kapag naoksida at halos walang kulay kapag sumailalim sa reduksiyon. Malakas ang kakayahang magdulot ng reduksiyon ng sariwang likido ng rumen mula sa isang malusog na hayop dahil aktibong nagpepermenta ng pakain ang mga anaerobic na bakterya. Kapag naghalo ka ng kaunting pangkulay sa ganitong likido, inaalis ng metabolismo ng mga bakterya ang kulay sa loob ng ilang minuto.

Kaya simple ang prinsipyo ng pagsusuri: mabilis na pinapawala ng aktibong anaerobic na mikroflora ang asul na kulay, at mabagal naman itong pinapawala ng hindi aktibo o napinsalang mikroflora. Ang maikling tagal ay nangangahulugan ng mas malaking kakayahang magdulot ng reduksiyon sa sampol na iyon. Ang matagal na oras ay nagpapahiwatig ng mahinang aktibidad ng mga mikrobyo, kung maayos ang pagkakakuha at paghawak sa sampol.

Hindi nito direktang sinusukat ang potensiyal na redox ng rumen. Sa isang pag-aaral ng mga pamamaraan para sa mga baka na naghambing sa pagsusuri ng reduksiyon at direktang pagsukat sa millivolt, walang nakitang linear na korelasyon sa pagitan ng tagal ng reduksiyon at nasukat na potensiyal na redox. Napagpasyahan nitong hindi dapat ituring ang dalawa bilang mapagpapalit na sukat ng iisang baryabol. Nakabuod ang buong paghahambing sa PubMed. Isipin ang pagsusuri ng reduksiyon bilang pagsusuri sa paggana ng populasyon ng mga mikrobyo, hindi bilang murang elektrod.

Inilalagay ng paglalarawan ng Merck/MSD sa simpleng hindi pagkatunaw ng pagkain sa mga ruminant ang matagal na reduksiyon sa parehong padron ng abnormal na pH ng rumen at nabawasang bilang ng protozoa. Walang iisang halaga na sapat para sa diyagnosis. Ang pinagsamang padron ang batayan.

Isang karaniwang pamamaraan sa tabi ng hayop

Bahagyang nagkakaiba ang mga protokol ng mga paaralan, kaya itala ang eksaktong dami at temperaturang ginagamit mo at ihambing lamang ang mga resulta sa loob ng protokol na iyon. Ito ang isang bersiyong malawak na itinuturo:

Kumuha ng hindi bababa sa 10 hanggang 20 mL ng sariwang likido ng rumen, na may pinakamaliit na posibleng halong laway, pagkakalantad sa hangin, at paglamig. Suriin agad.
Maghanda ng 0.03 percent na methylene blue, na katumbas ng 0.3 mg bawat mL.
Magdagdag ng pangkulay na katumbas ng 5 percent ng dami ng likido. Ibig sabihin, 1.0 mL na pangkulay sa 20 mL na likido, o 0.5 mL na pangkulay sa 10 mL na likido. Pareho silang nagbibigay ng proporsiyong 20 sa 1 ng likido sa pangkulay.
Magtabi ng pangalawang tubo ng likido mula sa parehong sampol na walang idinagdag na pangkulay bilang kontrol sa kulay.
Dahan-dahang haluin, simulan agad ang panukat ng oras, at panatilihin ang tubo sa temperaturang malapit sa temperatura ng katawan, humigit-kumulang 37 hanggang 39 degrees Celsius depende sa lokal na protokol.
Itala ang oras hanggang maging katulad ng kontrol ang kulay sa tubong sinusuri. Maaaring manatili ang isang manipis na asul na singsing sa ibabaw na nakadikit sa hangin dahil muling ino-oksida ng oxygen ang pangkulay roon. Huwag hintaying mawala ang singsing na iyon.

Ipinapaliwanag ng kimikang redox ng methylene blue kung bakit mahalaga rito ang oxygen. Ang malakas na pag-alog, malawak na bukas na tubo, o mahabang pagkaantala ay nagpapapasok ng oxygen at nagpapanatiling asul sa pangkulay nang mas matagal kaysa kung nasa rumen mismo ito. Mahalaga rin sa parehong dahilan ang mga detalye ng malinis na pamamaraan ng pagkuha ng likido ng rumen. Pinapalabnaw ng laway ang sampol at pinatataas ang pH, kaya kapag gumagamit ng tubong ipinapasok sa sikmura, itinatapon ng maraming klinisyan ang unang bahaging nakuha kung sapat ang dami.

Ano ang sinusukat ng iba't ibang obserbasyon

Iisang tanong lamang ang sinasagot ng tagal ng reduksiyon. Ipinapakita ng pagtatasa ng rumen sa ibaba ang naiaambag ng bawat obserbasyon sa tabi ng hayop. Gamitin ang buong hanay, hindi isang selda lamang.

Obserbasyon	Ano ang sinusukat nito	Karaniwang nakikita sa tabi ng hayop	Karaniwang mga salik na nakalilito sa interpretasyon
Tagal ng reduksiyon ng methylene blue	Aktuwal na kakayahang magdulot ng reduksiyon ng mga anaerobic na bakterya sa sampol	Sa mga baka, madalas ay 2 hanggang 6 minuto; sa mga tupa at kambing, madalas ay mas mabilis, at ginagamit ang 6 minuto bilang praktikal na hangganan para sa sapat na aktibidad, habang lubhang abnormal ang mga oras na lampas sa 10 minuto	Malamig, naantalang suriin, nalantad sa hangin, o nalabnawan ng laway na sampol; kakaunting substrato matapos ang matagal na kawalan ng gana sa pagkain; mga antimikrobyal na ibinigay sa bibig; paghahambing ng magkakaibang proporsiyon ng pangkulay o temperatura
pH ng rumen	Kemikal na kapaligiran, dami ng asido o alkali	Sa mga bakang pinapakain ng magaspang na pakain, madalas ay malapit sa 6.0 hanggang 7.2; madalas banggitin sa mga aklat tungkol sa maliliit na ruminant ang humigit-kumulang 6.5 hanggang 7.5; nagbabago ang halaga ayon sa diyeta at tagal mula nang pakainin	Pinatataas ng kontaminasyon ng laway ang pH ng mga sampol na kinuha gamit ang tubong ipinapasok sa sikmura; pagkawala ng carbon dioxide matapos kunin ang sampol; pinabababa ng pagpapakain ng butil ang pH
Bilang at pagkilos ng protozoa	Kalagayan ng populasyon ng mga ciliate, lalo na ng malalaking anyong sensitibo sa mga pagbabago	Maraming organismo na may iba't ibang laki at masiglang gumagalaw sa tiyak na direksiyon sa isang mainit at sariwang patak	Pinababagal ng paglamig ang paggalaw; maaaring maubos ang protozoa dahil sa malubhang asidosis; dahil sa pagkaantala, maaaring magmukhang matamlay ang normal na sampol
Amoy, kulay, at lapot	Katangian ng permentasyon at kontaminasyon	Bahagyang mabango, maberdeng kayumanggi, at medyo malapot na likido	Bulok o maasim na amoy kapag may malubhang dysbiosis; matubig o maraming halong laway na likido matapos ang hindi maayos na pagkuha
Mga pag-urong ng rumen at gana sa pagkain	Paggana ng mga naunang bahagi ng sikmura at dami ng kinakain ng buong hayop	Regular na pag-urong at tuloy-tuloy na muling pagnguya sa isang alistong hayop	Kamakailang pagbabago ng rasyon, pananakit, dehidrasyon, sakit na nakaaapekto sa buong katawan

Ang talahanayan ang pangunahing punto. Ang matagal na reduksiyon, kasama ng matamlay na protozoa, abnormal na pH, at mahihinang pag-urong, ay nagpapahiwatig ng tunay na paghina ng aktibidad ng mga mikrobyo. Kung matagal lamang ang reduksiyon ngunit alisto at muling ngumunguya ang hayop at masigla ang protozoa, mas malamang na ang sampol ang problema, hindi ang rumen. Ulitin ang pagkuha bago kumilos.

Pag-unawa sa oras kasabay ng pH at kasaysayan

Ang diyeta ang nagtatakda ng panimulang batayan. Mabilis magpermenta ang mga rasyong mayaman sa konsentradong pakain at maaaring magpawala ng kulay sa loob ng humigit-kumulang isang minuto, samantalang maaaring abutin ng ilang minuto ang mga diyetang tuyong damo, kahit sa malulusog na hayop. Kaya ang mabilis na oras lamang ay hindi patunay ng mas mabuting kalusugan. Patunay ito na mas maraming substratong maaaring mafermenta ang nakatagpo ng aktibong mga mikrobyo.

Sinisira ng matinding sobrang pagkain ng butil ang simpleng kalakarang iyon. Maaaring matindi ang permentasyon ng karbohidrato sa simula, pagkatapos ay pinahihina ng pinsalang dulot ng asido ang normal na mikroflora at protozoa, at humahaba ang tagal ng reduksiyon. Kaya sinasabi ng isang tuntuning itinuturo na hindi balido ang pagsusuri kapag mas mababa sa humigit-kumulang 5.5 ang pH ng rumen. Sa puntong iyon, nagbago na ang mikroflorang sinusuri.

Isang praktikal na gabay sa mga padron:

Ang normal na pH na may reduksiyon sa loob ng humigit-kumulang 6 minuto ay nagpapahiwatig ng aktibong paggana ng mikroflora.
Ang normal na pH na may lubhang matagal na reduksiyon ay nagpapahiwatig ng kawalan ng aktibidad dahil sa kawalan ng gana sa pagkain, epekto ng antimikrobyal, o sampol na hindi maayos ang kalidad.
Ang mataas na pH na may matagal na reduksiyon ay madalas kasunod ng matagal na kawalan ng gana sa pagkain at kakaunting substrato, ngunit isaalang-alang ang kontaminasyon ng laway mula sa tubo.
Ang mababang pH na may nabawasang aktibidad ng protozoa ay nagpapataas ng pag-aalala tungkol sa dysbiosis na may kaugnayan sa karbohidrato. Nakatutulong dito ang gabay sa interpretasyon ng pH ng rumen. Ang mga halagang mas mababa sa 5.5 na may panghihina ng buong katawan ay mas nagpapahiwatig ng sobrang pagkain ng butil at malubhang asidosis kaysa sa simpleng hindi pagkatunaw ng pagkain.

Palaging itala ang kamakailang pagbibigay ng tetracycline sa bibig, mga ionophore sa pakain, matagal na paggamit ng sistemikong antimikrobyal, biglaang pagbabago ng rasyon, tagal ng kawalan ng gana sa pagkain, at dami ng iniinom na tubig. Partikular na nagbabala ang manwal ng MSD na maaaring lubhang pahinain ng mga tetracycline na ibinibigay sa bibig ang mikroflora ng rumen. Sadyang binabago ng mga ionophore ang mga populasyon ng bakterya. Kung wala ang kasaysayang iyon, hindi maipapakahulugan ang matagal na oras.

Dapat bigyan ng kapantay na halaga ang kalidad ng pagkuha ng sampol. Natuklasan sa kontroladong pag-aaral na mas mataas ang pH at mas mababa ang mga volatile fatty acid sa mga sampol na kinuha gamit ang tubong ipinapasok sa sikmura kaysa sa mga sampol na kinuha gamit ang cannula mula sa parehong mga hayop, pangunahin dahil sa laway. Makabuluhang humaba ang tagal ng reduksiyon pagsapit ng 60 minuto matapos kunin ang sampol sa bawat daming sinubukan, at pinakamalaki ang epekto sa maliliit na sampol. Kumuha ng hindi bababa sa 10 mL, suriin sa loob ng 30 minuto, unahin ang pagsusuri ng reduksiyon, panatilihing mainit ang sampol, at bawasan hangga't maaari ang pagkakadikit nito sa hangin.

Tatlong paggamit na hindi dapat paghaluin

Iisang pangkulay, tatlong magkaibang sistema.

Una, ang pagsusuri sa likido ng rumen na inilalarawan dito. Ang ispesimen ay nakuhang likido ng rumen. Idinaragdag ang pangkulay sa labas ng katawan, o in vitro, sa 0.03 percent. Ang sinusukat na puntong pagtatapos ay ang oras hanggang mawala ang kulay. Ang layunin ay tasahin ang kakayahan ng mga mikrobyo na magdulot ng reduksiyon.

Ikalawa, ang methylene blue na ibinibigay sa isang buhay na ruminant. Ang kinikilalang halimbawa ay paggamot sa ugat para sa pagkalason sa nitrate o nitrite na may methemoglobinemia, kung saan ibinabalik ng gamot ang gumaganang hemoglobin. May mga tuntuning dapat sundin tungkol sa dosis, pormulasyon, nalalabing gamot, at panahon ng paghihintay bago magamit ang mga produktong mula sa hayop. Walang kaugnayan ang desisyong iyon sa pagsukat ng oras sa isang tubo. Kung ginagamit ang pangkulay bilang pananda sa loob ng katawan, o in vivo, sa isang partikular na pamamaraan, ang prinsipyo ay kung saan dumaraan ang pangkulay, hindi kung gaano kabilis itong sumailalim sa reduksiyon dahil sa mga mikrobyo ng rumen.

Ikatlo, ang pagsusuri ng reduksiyon sa gatas. Gatas ang ispesimen. Idinaragdag ang pangkulay sa sampol ng gatas. Ang mabilis na pagkawala ng asul na kulay ay karaniwang nagpapahiwatig ng mas mataas na aktibidad ng mga mikrobyo at mas mahinang kakayahang mapanatili ang kalidad habang nakaimbak, samantalang ang mabagal na reduksiyon ay nagpapahiwatig ng mas mabuting kalidad. Bahagi ito ng mikrobiyolohiya ng pagkain at pagsusuri sa kalidad ng gatas, hindi ng medisina ng rumen, at hindi ito pagbibilang ng bakterya.

Nakaiiwas sa pagkakamali ang malinaw na pagtukoy sa mga pangalan: tagal ng reduksiyon sa likido ng rumen, sistemikong paggamot gamit ang methylene blue o paggamit nito bilang pananda, at pagsusuri ng reduksiyon sa gatas. Maibubuod sa isang pangungusap ang tuntunin sa kaligtasan. Ang pangkulay para sa pagsusuri ng rumen ay nananatili sa tubo sa laboratoryo at itinatapon ang tubong iyon. Hindi ito kailanman ibinibigay sa hayop upang isagawa ang pagsusuri.

Isang maikling tuntunin para sa tawag mula sa bukid

Gawing pamantayan ang pangkulay sa 0.03 percent at 1 bahagi ng pangkulay sa 20 bahagi ng likido, suriin ang sariwang likido sa temperaturang malapit sa temperatura ng katawan gamit ang kontrol na walang idinagdag na pangkulay, at unawain ang bilang ng minuto kasabay ng pH, pagkilos ng protozoa, kalidad ng pagkuha, diyeta, mga gamot, mga pag-urong, gana sa pagkain, dumi, at kalagayan ng hidrasyon. Hindi kailanman sapat ang isang hiwalay na numero upang matukoy ang hindi pagkatunaw ng pagkain. Ang magkakatugmang padron ang batayan.